Name: Yeni bileşiklerin demiri şelatlama yeteneğini doğrulamak için ölçülebilir ve ucuz hücresiz floresan yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-23T13:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 36 s
Description: Keşfedin, yeni bileşiklerin demir şelatlama yeteneğini hızlı ve uygun maliyetli floresan yöntemiyle nasıl doğrulayacağınızı. Bu assay, kanser metabolizmasını hedefleyen tedavi stratejileri geliştirmek için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Yeni Demir Şelatörlerinin Tespiti için Floresan Testi

<ol><li>Hsu, P. P., Sabatini, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cell+metabolism%3A+Warburg+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer cell metabolism: Warburg and beyond.</a> Cell. 134 (5), 703-707 (2008).</li>
<li>Hsu, M. Y., Mina, E., Roetto, A., Porporato, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron%3A+An+essential+element+of+cancer+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Iron: An essential element of cancer metabolism.</a> Cells. 9 (12), 2591(2020).</li>
<li>Torti, S. V., Torti, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+and+cancer%3A+More+ore+to+be+mined%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Iron and cancer: More ore to be mined.</a> Nat Rev Cancer. 13 (5), 342-355 (2013).</li>
<li>Zhang, C., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+homeostasis+and+tumorigenesis%3A+Molecular+mechanisms+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Iron homeostasis and tumorigenesis: Molecular mechanisms and therapeutic opportunities.</a> Protein Cell. 6 (2), 88-100 (2015).</li>
<li>Torti, S. V., Manz, D. H., Paul, B. T., Blanchette-Farra, N., Torti, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Nutr%22%5BJournal%5D)">Iron and cancer.</a> Annu Rev Nutr. 38, 97-125 (2018).</li>
<li>Welch, D. R., Hurst, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+hallmarks+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Defining the hallmarks of metastasis.</a> Cancer Res. 79 (12), 3011-3027 (2019).</li>
<li>Lehmann, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+defects+of+hepatocellular+carcinoma+are+already+found+in+non-neoplastic+liver+cells+from+patients+with+hereditary+haemochromatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Epigenetic defects of hepatocellular carcinoma are already found in non-neoplastic liver cells from patients with hereditary haemochromatosis.</a> Hum Mol Genet. 16 (11), 1335-1342 (2007).</li>
<li>Fonseca-Nunes, A., Jakszyn, P., Agudo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+and+cancer+risk--a+systematic+review+and+meta-analysis+of+the+epidemiological+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Iron and cancer risk--a systematic review and meta-analysis of the epidemiological evidence.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 23 (1), 12-31 (2014).</li>
<li>Abdelaal, G., Veuger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversing+oncogenic+transformation+with+iron+chelation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Reversing oncogenic transformation with iron chelation.</a> Oncotarget. 12 (2), 106-124 (2021).</li>
<li>Brown, R. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+iron+metabolism+and+impact+in+cancer+biology%2C+metastasis%2C+and+immunology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Altered iron metabolism and impact in cancer biology, metastasis, and immunology.</a> Front Oncol. 10, 476(2020).</li>
<li>Menyhárt, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+selection+of+functional+assays+to+evaluate+the+hallmarks+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the selection of functional assays to evaluate the hallmarks of cancer.</a> Biochim Biophys Acta. 1866 (2), 300-319 (2016).</li>
<li>Basu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+novel+and+diverse+iron-chelators+in+silico%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Inf+Model%22%5BJournal%5D)">Discovering novel and diverse iron-chelators in silico.</a> J Chem Inf Model. 56 (12), 2476-2485 (2016).</li>
<li>Prus, E., Fibach, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+measurement+of+the+labile+iron+pool+in+human+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry measurement of the labile iron pool in human hematopoietic cells.</a> Cytometry A. 73 (1), 22-27 (2008).</li>
<li>Cold Spring Harb. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Phosphate-buffered+saline+%28pbs%29%22">Phosphate-buffered saline (pbs)</a>. 2006 (1), Cold Spring Harb Prot. (2006).</li>
<li>Kontoghiorghes, G. J., Pattichis, K., Neocleous, K., Kolnagou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+and+development+of+deferiprone+%28l1%29+and+other+iron+chelators+for+clinical+use%3A+Targeting+methods+and+application+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">The design and development of deferiprone (l1) and other iron chelators for clinical use: Targeting methods and application prospects.</a> Curr Med Chem. 11 (16), 2161-2183 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amonyum demir (II) sülfat hekzahidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>215406</td><td>diğer bilge FAS</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>Deferiprone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>379409</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco &prime olarak bilinir; s Fosfat Tamponlu Tuzlu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5652</td><td>magnezyum ve kalsiyum içermeyen</td></tr><tr><td>Greiner CELLSTAR 96 kuyulu plakalar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0812</td><td>herhangi bir optik olarak şeffaf 96 kuyulu plaka çalışacaktır</td></tr></tbody></table>

yeni bileşiklerin demiri şelatlama yeteneğini doğrulamak için ölçülebilir ve ucuz hücresiz floresan yöntemi 

Quantifiable and Inexpensive Cell-Free Fluorescent Method to Confirm the Ability of Novel Compounds to Chelate Iron

Adım 2'de gösterilen yöntem için, bu ilk deney (Şekil 1), Calcein floresan emisyonlarını tespit ederken mikrotitre floresan plaka okuyucusunun doğrusal aralığını belirledi. Temsili sonuçlarımız, 0-100 μM arasında geniş bir doğrusal Calcein floresan aralığı göstermektedir. LSD post hoc analizi ile ANOVA, 0 μM Calcein kontrolü ile karşılaştırıldığında tüm Calcein konsantrasyonları için ortalama RFU'da istatistiksel olarak anlamlı bir fark olduğunu göstermektedir. Daha sonraki deneylerde, 0 μM kontrolünden istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar ürettiği ve akış sitometrisi13'te Calcein formundaki hücrelere yaygın olarak uygulandığı aralığa düştüğü için 1 μM Calcein kullanıldı (adım 3 ve 4).
Adım 3'te gösterilen yöntem için, 0-1000 μM (FAS olarak) ila 1 μM Calcein aralığında Fe2+ formundaki demir eklendiğinde, Fe2+ iyonlarının Calcein floresansında (RFU) doğrusal bir azalmaya neden olduğunu gösteriyoruz. Bu, Calcein floresansının Fe2 + bazlı söndürülmesinin gözlemlenmesine izin verir. Zayıf bir demir şelatörü olarak Calcein demiri bağlar ve bu da floresan çıkışını azaltır. Şekil 2'de, 8.9 μM FAS ve üzeri konsantrasyonlar, tek başına 1 μM Calcein ile karşılaştırıldığında, Calcein floresansında p&lt;0.001 gibi önemli bir azalma göstermiştir. 8.9 μM FAS kullanımı, Calcein floresansında (ortalama RFU) 3'lük bir azalmaya karşılık geldi. Daha fazla deney için (adım 4), Calcein'in floresan söndürme aralığına girdiği için 10 μM FAS kullanıldı.
Adım 4'te gösterilen yöntem için, Fe2+ iyonları için Calcein'in bir demir şelatör ile rekabeti Şekil 3'te gözlemlenebilir. Fe2 + formundaki demir, 1 μM kontrolünden Calcein floresansını azaltır ve demir şelatör deferipron bu floresansı bir zirveye kadar arttırır, Calcein'in demir söndürmesini serbest bırakır ve floresansı arttırır (ortalama RFU). 0.97-512 μM arasında değişen konsantrasyonlarda deferipron (örnek olarak kullanılır), ANOVA ve LSD post hoc analizinde gözlemlendiği gibi floresanda istatistiksel olarak anlamlı artışlara neden olmuştur (p&lt;0.001). En büyük kıvrım değişikliği, 1 μM kalsein ve 10 μM FAS'ın kontrolü ile karşılaştırıldığında, 62.5 μM şelatörde ortalama RFU'da 3 katlık bir değişiklikti. 512 μM'lik deferipronun üzerinde, şelatör ile 1 μM Calcein ve 10 μM FAS'ın kontrolü arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66421/66421fig01.jpg"> Şekil 1: Bir floresan mikrotitre plaka okuyucu kullanılarak belirlenen kalsein konsantrasyonları ve floresan (RFU).<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66421/66421fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66421/66421fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66421/66421fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66421/66421fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66421/66421fig03large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Yeni bileşiklerin demiri şelatlama yeteneğini doğrulamak için ölçülebilir ve ucuz hücresiz floresan yöntemi 

Cancer cells require large amounts of iron to maintain their proliferation. Iron metabolism is considered a hallmark of cancer, making iron a valid target ...

quantifiable-inexpensive-cell-free-fluorescent-method-to-confirm

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, fare karaciğer dokusundaki hem olmayan demir içeriğini belirlemek için kolorimetrik tabanlı bir yöntemi açıklıyoruz. Batofenantrolin sülfonat, ferrik demiri şelatlanabilir demirli demire dönüştüren bir indirgeyici ajanın varlığında kromojenik substrat olarak kullanılır.

Bathofenantrolin Sülfonat Bazlı Kolorimetrik Test: Fare Karaciğer Dokusunda Heme Olmayan Demirin Kantitasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Bu video, karmaşık gıda kaynaklarında demir biyoyararlanımını değerlendirmek için bir in vitro tekniği göstermektedir. Teknik, farklılaşmış Caco-2 hücreleri tarafından demir alımı ile birlikte insan sindiriminin simülasyonunu birleştirir. Hücre içi ferritin oluşumu, hücresel demir alımı için bir belirteç görevi görür.

Caco-2 Hücre Biyo-Testi: Karmaşık Gıda Kaynaklarında Demir Biyoyararlanımını Ölçmek için İn Vitro Bir Yöntem

Askorbat sadece son yıllarda ışık gelmiş, birçoğu hücre metabolizmasında çok önemli rol oynar. Burada, orta hacmi, hücre kültürü içinde hem de hücre içi ve hücre dışı askorbat belirlenmesi için özel ve pahalı olmayan bir mikro-tahlili tarif eder.

Kültür Hücrelerinin Intra-ve Ekstrasellüler Askorbat Belirlenmesi için hızlı ve spesifik bir Mikroplate Deneyi

Biz demir içeriği bitki dokularında Renkölçer Prusya Mavisi yöntemini kullanarak ölçmek için basit ve güvenilir bir iletişim kuralı mevcut.

Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

Burada, toplam hücresel reaktif oksijen türlerini (ROS) 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diasetat (DCFH-DA) kullanarak tespit etmek için bir protokol salıyoruz. Bu yöntem, bir floresan mikroskobu ile yapışık hücrelerde hücresel ROS lokalizasyon görselleştirmek ve bir floresan plaka okuyucu ile ROS yoğunluğunu ölçmek. Bu protokol basit, verimli ve uygun maliyetlidir.

2',7'-Diklorodihidrolüorescein Diasetat Boyama ile Yapışık Hücrelerde Toplam Reaktif Oksijen Türlerinin Tespiti

İmmobilize metal afinite kromatografisi kullanılarak hazırlanan numunelere tanıtılan metallerin kolay ölçülmesi için bir test salıyoruz. Yöntem, kolorimetrik metal göstergesi olarak hidroksinaphthol mavisi ve dedektör olarak UV-Vis spektrofotometresi kullanır.

Immobilize Metal Affinity Kromatografisinde Metal Yıkamanın Ölçülmesi

Bu makalede, fare gebeliğinde demir taşıma çalışmaları için transferrine bağlı radyoaktif olmayan izotopik demirin nasıl hazırlanacağı ve uygulanacağı gösterilmektedir. Fetoplasental bölmelerde izotopik demirin miktarının belirlenmesi yaklaşımı da açıklanmaktadır.

Radyoaktif Olmayan Demir İzotopları Kullanarak Fare Plasentası In Vivo Boyunca Demir Taşımacılığının Ölçülmesi

Burada, hayvan dokularındaki heme olmayan demir içeriğinin ölçümü için, çoğu laboratuvarda kolayca uygulanabilen basit, köklü bir kolorimetrik test kullanılarak bir protokol sağlanmaktadır.

Batofenantropin Bazlı Kolorimetrik Tahlil Kullanılarak Doku Non-Heme Demir İçeriğinin Ölçülmesi

Demir (Fe) biyoyararlanımı için Caco-2 hücre biyotahlili, gıdalardan, gıda ürünlerinden, takviyelerden, yemeklerden ve hatta diyet rejimlerinden Fe biyoyararlanımını değerlendirmek için uygun maliyetli ve çok yönlü bir yaklaşımı temsil eder. İnsan çalışmalarına tamamen doğrulanmış, Fe biyoyararlanımı çalışmaları için en son teknolojiyi temsil eder.

Gıda Demir Biyoyararlanımının Ölçümü için Caco-2 Hücre Biyotahlili

Bu protokol, dokularda, özellikle beyinde demir birikiminin dağılımını ve miktarını değerlendirmek için yöntemler sunar. Protokol, numune hazırlama, Perls/DAB boyama, görüntü yakalama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır.

5xFAD Farelerin Beyinlerinde Demir Birikiminin Perls/DAB Boyama ile Değerlendirilmesi

Keşfedin, yeni bileşiklerin demir şelatlama yeteneğini hızlı ve uygun maliyetli floresan yöntemiyle nasıl doğrulayacağınızı. Bu assay, kanser metabolizmasını hedefleyen tedavi stratejileri geliştirmek için değerli bir araç sunar.

Yeni bileşiklerin demiri şelatlama yeteneğini doğrulamak için ölçülebilir ve ucuz hücresiz floresan yöntemi

Daha fazla video keşfet