Name: Melanom Hasta Kaynaklı Organoid Modellerle Terapötik Fırsatların Ortaya Çıkarılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-06T12:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 33 s
Description: Keşfedin, melanom hasta kaynaklı organoidlerle tümör mikroçevresini ve immünoterapi yanıtlarını incelemeyi. Bu yöntem, kişiselleştirilmiş kanser tedavileri için ilaç geliştirme stratejilerini ilerletir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Hasta Kaynaklı Melanom Organoidleri: Kanser İmmünoterapisinde Bir Sınır

<ol><li>Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Cell+Lines+Are+Useful+Model+Systems+for+Medical+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research.</a> Cancers (Basel). 11 (8), 1098(2019).</li>
<li>Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-culturing+multicellular+tumor+models%3A+Modeling+the+tumor+microenvironment+and+analysis+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques.</a> Proteomics. 21 (9), e2000103(2021).</li>
<li>Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+culture+models+in+oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro culture models in oncology research.</a> Cell Biosci. 12, 155(2022).</li>
<li>Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+prospects+of+patient-derived+xenografts+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research.</a> Cancers (Basel). 15 (17), 4352(2023).</li>
<li>Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+to+study+cancer+metabolism%3A+when+does+X+mark+the+spot%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot).</a> Cancer Res. 81 (17), 4399(2021).</li>
<li>Choi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+cancer+immunotherapy+using+patient-derived+xenografts+%28PDXs%29+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice.</a> Exp Mol Med. 50 (8), 99(2018).</li>
<li>Woo, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conservation+of+copy+number+profiles+during+engraftment+and+passaging+of+patient-derived+cancer+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts.</a> Nat Genet. 53 (1), 86(2021).</li>
<li>Somasundaram, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-infiltrating+mast+cells+are+associated+with+resistance+to+anti-PD-1+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy.</a> Nat Commun. 12 (1), 346(2021).</li>
<li>Abdolahi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models%2C+applications+and+challenges+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research.</a> J Transl Med. 20 (1), 206(2022).</li>
<li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%3A+The+current+status+and+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Comm%22%5BJournal%5D)">Organoids: The current status and biomedical applications.</a> Med Comm. 4 (3), e274(2023).</li>
<li>Minoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+cancer+organoids+as+a+functional+system+to+model+different+disease+stages+and+therapy+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response.</a> Nat Commun. 14, 2214(2023).</li>
<li>Ou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+melanoma+organoid+models+facilitate+the+assessment+of+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22eBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies.</a> eBioMedicine. 92, 104614(2023).</li>
<li>Grönholm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy.</a> Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).</li>
<li>Ou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+platforms+to+study+therapeutic+efficacy+of+human+%CE%B3%CE%B4+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells.</a> Clin Transl Med. 12 (6), e814(2022).</li>
<li>Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf">https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf</a> (2024).</li>
<li>Jee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+collagen-based+3D+matrix+for+gastrointestinal+tract-derived+organoid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture.</a> Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712(2019).</li>
<li>Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcriptional+control+of+the+perforin+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">The transcriptional control of the perforin locus.</a> Immunol Rev. 235 (1), 55(2010).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tim-3+suppresses+the+killing+effect+of+V%CE%B39V%CE%B42+cells+on+colon+cancer+cells+by+reducing+perforin+and+granzyme+B+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression.</a> Exp Cell Res. 386 (1), 111719(2020).</li>
<li>Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ki67+is+a+promising+molecular+target+in+the+diagnosis+of+cancer+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Rep%22%5BJournal%5D)">Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review).</a> Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+organoid+research+progress+and+potential+applications%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Dermatology+and+Venereology%22%5BJournal%5D)">Skin organoid research progress and potential applications.</a> International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+human+mucosal+melanoma+organoid+platform+for+modeling+tumor+heterogeneity+and+exploring+immunotherapy+combination+options%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options.</a> Sci Adv. 9 (43), eadg6686 (2023).</li>
<li>Vlachogiannis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+model+treatment+response+of+metastatic+gastrointestinal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers.</a> Science. 359 (6378), 920-926 (2018).</li>
<li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rectal+cancer+organoid+platform+to+study+individual+responses+to+chemoradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation.</a> Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).</li>
<li>Vilgelm, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine-needle+aspiration-based+patient-derived+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids.</a> iScience. 23 (8), 101408(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2 mL Kırmızı Kapaklı İçten Dişli Polipropilen Kriyojenik Flakon</td><td>Corning</td><td>431420</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Polipropilen Konik Boru</td><td>Corning</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>100 mm TC ile İşlem Görmüş Hücre Kültürü Kabı</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>105 mm Polistiren Forseps Steril</td><td>Kataplar Yaprak dökmeyen&nbsp;</td><td>222-1121-B1I</td><td></td></tr><tr><td>150 cm2 Hücre Kültürü Şişesi</td><td>Corning</td><td>CLS430825</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td></td></tr><tr><td>Gelişmiş DMEM/F12 (1x) Azaltılmış Serum Ortamı (1:1)</td><td>Gibco</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi (50x)</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 anti-insan Perforin Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>308120</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 605 anti-insan Ki-67 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>350522</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 650 anti-insan CD366 (Tim-3) Antikor</td><td>BioLegend</td><td>345028</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 711 anti-insan CD45 Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>304050</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Ekleri 0.4 ve mikro; m, 30 mm Çaplı</td><td>Millipore Sigma</td><td>PIHP03050</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Boyama Tamponu</td><td>BioLegend</td><td>420201</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci 40 & m Naylon</td><td>Corning&nbsp;</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci 70 & m Naylon</td><td>Corning&nbsp;</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz, Tip IV, toz</td><td>Gibco</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex Sıçan Kollajen I</td><td>Trevigen</td><td>3440-100-01</td><td></td></tr><tr><td>Kültür Plakası, PS, 48 kuyu, TC kapakla işlenmiş, steril</td><td>Max Scientific&nbsp;</td><td>07-6048</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO) Hybri-Max</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM - yüksek glikoz 4.5 mg / mL</td><td>Corning</td><td>MT10-0130CV</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I - Derece II</td><td>Millipore Sigma</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>DPBS,% 1 & nbsp;</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, FBS</td><td>Corning</td><td>MT35-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>FITC Annexin V Apoptoz Tespit Kiti I</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td></td><td></td>556547</tr><tr><td>Forskolin</td><td>Tocris</td><td>1099</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin Seçici Antibiyotik (G418 Sülfat) (50 mg / mL)</td> <td>ThermoFisher</td><td>10131035</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Takviyesi</td><td>ThermoFisher</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Jambonun F12 Besin Karışımı</td><td>ThermoFisher</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Higromisin B (50 mg / mL)</td> <td>ThermoFisher</td><td>10687010</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM (100x)</td> <td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>L-WRN hücresi</td><td>ATCC</td><td>CRL-3276</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Fenol İçermez & Büyüme Gerçeği. Azaltılmış</td><td>Corning</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>Millex PVDF şırınga filtresi, 0.22 & mu; M</td><td>Millipore Sigma</td><td>SLGVR33RB</td><td></td></tr><tr><td>N-Asetilsistein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-5G</td><td></td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636-100G</td><td></td></tr><tr><td>Nunc TripleFlask İşlenmiş Hücre Kültürü Şişesi</td><td>ThermoFisher</td><td>132867</td><td></td></tr><tr><td>PE / Cyanine5 anti-insan CD8a Antikoru</td><td>BioLegend</td><td>301010</td><td></td></tr><tr><td>PE-Cy 7 Fare anti-İnsan CD279 (PD-1)</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td></td><td></td>561272</tr><tr><td>Kalem Strep</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan FGF-asidik</td><td>Peprotech</td><td>100-17A</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat Çözeltisi (NaHCO3) (%7,5)</td><td>Kalite Biyolojik&nbsp;</td><td>118-085-721</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik Cerrahi Bıçaklar no. 22</td><td>Integra</td><td>4-322</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12604-021</td><td></td></tr></tbody></table>

melanom hasta kaynaklı organoid modellerle terapötik fırsatların ortaya Çıkarılması

Unveiling Therapeutic Opportunities with Melanoma Patient-derived Organoid Models

MPDO'ların şekli ve boyutu, büyüme dinamiklerini incelemek için zaman içinde izlendi. Şekil 2'de görüldüğü gibi, ilk büyüme periyodu sırasında, organoid boyutu gösterilen 7 gün boyunca önemli ölçüde artmıştır. MPDO büyüme dinamiklerinin gözlemlenmesinin ardından, dikkat, organoidlerin orijinal tümörlere sadık bir şekilde özetlenmesini doğrulamak için bağışıklık hücresi bileşiminin değerlendirilmesine çevrildi. Öncelikle αβ T hücresi bolluğuna odaklanan bu değerlendirme, organoidler ve ebeveyn tümörü arasındaki benzerlik hakkında bilgi sağladı. Görüldüğü gibi, Şekil 3, ebeveyn tümörleri ile Matrigel veya kollajen içinde kültürlenen ilgili organoidler arasında αβ T hücre oranında istatistiksel olarak anlamlı bir fark olmadığını göstermektedir. Ebeveyn tümörleri ve organoidler arasındaki benzerlikleri gösterdikten sonra, akış sitometrisi kullanarak T hücresi aktivitesini değerlendirdik. Geçit stratejisi, tek, canlı lökositlerin tanımlanması ve ardından ortak T hücresi aktivasyon belirteçlerini incelemek için CD3 + ve CD8 + T hücre popülasyonları üzerinde geçit yapılmasıyla elde edilen Şekil 4'te bulunabilir.
Sitotoksik T hücrelerinin sitokinlerin üretilmesinde ve granzim B ve perforin gibi sitotoksik moleküllerin salınmasındaki rolü göz önüne alındığında, ekspresyonları ölçüldü. Granzim B ve perforin ekspresyonu sırasıyla 5.1 ve %2.17 olarak tespit edildi17. CD8 + T hücrelerinin% 1.83'ünde T hücresi immünoglobini ve müsin alanı 3'ün (Tim3) ekspresyonu, immünosupresif TME18'in karakteristiği ile uyumludur. MPDO'lar içindeki CD8 + popülasyonunun% 49.5'inde programlanmış ölüm reseptörünün (PD-1) ekspresyonu, organoidin mikro çevresinin immünosupresif doğasını daha da vurgulamaktadır. Son olarak, proliferasyon için bir belirteç olan Kiel 67 (Ki67) ekspresyonu da CD8+ T hücrelerinde &amp;.8 oranında değerlendirildi19
MPDO'lar ayrıca γδ T hücrelerinin öldürme yeteneğini değerlendirmek için de kullanılabilir. Birden fazla 10 günlük MPDO'lar γδ T hücreleri ile tedavi edildi. 24 saatlik inkübasyondan sonra, MPDO'lar toplandı ve tek hücreli bir süspansiyona ayrıldı ve 5 μL AV-FITC ve 5 μL PI içeren 100 μL bağlayıcı tampon içinde yeniden süspanse edildi. Oda sıcaklığında karanlıkta 15 dakika inkübasyon üzerine, MPDO'lardaki hücreler üzerinde γδ T hücresinin neden olduğu sitotoksisiteyi belirlemek için akış sitometrisi yapıldı. Şekil 5 A,B'de görüldüğü gibi, γδ T-hücreleri ile tedavi üzerine, MPDO'larda daha fazla hücre apoptoz özellikleri gösterdi (% 80.5). Bu, hücrelerin sadece küçük bir azınlığının apoptoz özellikleri gösterdiği kontrol deneyi ile karşılaştırıldığında (% 19.2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66509/66509fig01.jpg"> Şekil 1: MPDO'ların kültürünü gösteren şematik. Eksize edilen taze melanom dokusu, tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için mekanik ve enzimatik olarak parçalanır. Bu süspansiyon daha sonra organoidler oluşturmak için Matrigel veya kollajen jel ile kaplanmış kuyucuklarda kültürlenir. Kısaltma: MPDO = melanom hasta kaynaklı organoid. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66509/66509fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66509/66509fig02.jpg"> Şekil 2: 2. ve 7. günlerde Matrigel içine yerleştirilmiş MPDO'ların konfokal mikroskopi görüntüleri. Taze melanom dokusundan tek hücreli süspansiyon Matrigel'de kültürlenir. Görüntüler 2. ve 7. günlerde konfokal mikroskop kullanılarak çekildi. Organoidlerin boyutu giderek artmaktadır. Ölçek çubukları = 100 μm. Kısaltma: MPDO = melanom hasta kaynaklı organoid. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66509/66509fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66509/66509fig03.jpg"> Şekil 3: Ebeveyn tümöründeki αβ T hücre bileşimini kollajen jel veya Matrigel içinde kültürlenmiş organoidlerle karşılaştıran akış sitometrisi analizi. MPDO'larda immün hücrelerin miktar tayini FACS kullanılarak gerçekleştirildi. Ebeveyn tümörlerindeki αβ T hücrelerinin, 7 gün sonra kollajen jel veya Matrigel içinde kültürlenen MPDO'ların karşılaştırılması. n = 8; ns = anlamlılık yok (parametrik olmayan çoklu test). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66509/66509fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66509/66509fig04.jpg"> Şekil 4: Matrigel'de kültürlenen 10 MPDO'daki bağışıklık hücrelerini karakterize etmek için kullanılan akış sitometrisi geçit stratejisi ve analizi. Bağışıklık hücresi alt kümelerini ayırt etmek için geçit stratejisi, ardından organoidler içinde ifade edilen çeşitli belirteçlerin nicelleştirilmesi ve profili. Kısaltmalar: MPDO = melanom hasta kaynaklı organoid; FSC-A = ileri saçılma-tepe yüksekliği; FSC-H = ileri saçılma-tepe yüksekliği; SSC-A = yan saçılma-tepe alanı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66509/66509fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66509/66509fig05.jpg"> Şekil 5: γδ T hücresi tedavisi, MPDO'larda hücre öldürmeye neden olur. MPDO'lar 24 saat boyunca γδ T-hücreleri ile inkübe edildi, daha sonra MPDO'lar toplandı ve tek hücreli bir süspansiyona ayrıldı. (A) γδ T hücresi tedavisinden sonra Matrigel'de kültürlenen organoidlerin Ek V ve PI boyaması. γδ T hücresi ile tedavi edildikten sonra nekroza kayma belirgindir. (B) γδ T hücresi tedavisinden sonra MPDO'larda apoptotik hücrelerin miktar tayini. n = 5 *p &lt; 0.05; **p &lt; 0.01 (parametrik olmayan çoklu test). Kısaltmalar: MPDO = melanom hasta kaynaklı organoid; PI = propidyum iyodür. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66509/66509fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 1: Bu protokolde kullanılan tüm ortam ve reaktiflerin bileşimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66509/66509_Table%201%20(2).xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Melanom Hasta Kaynaklı Organoid Modellerle Terapötik Fırsatların Ortaya Çıkarılması

With the development of immunotherapy, there is an ongoing need to develop models that can recapitulate the tumor microenvironment of native tumors. While ...

unveiling-therapeutic-opportunities-with-melanoma-patient-derived

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, insan kaynaklı melanom hücreleri, bağışıklığı baskılanmış bir farenin yan bölgesine deri altından implante ediliyor. PDX modeli, in vivo koşullarda gözlenen tümör heterojenliğini ve melanom agresifliğini daha iyi özetleyen melanom hücrelerinin klinik öncesi araştırmasına izin verir.

Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellemesi: Melanom Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Burada, biz mevcut her iki mimari beyannamedir bir 3D organotypic Melanom küresel Cilt modeli oluşturmak için bir protokol ve bir organ/tümör vivo içinde ama aynı zamanda çok hücreli karmaşıklık barındırır sistematik deneysel müdahale.

3D Organotypic Melanom küresel Cilt modeli

Hasta-türevi xenograft (PDX) modelleri daha sağlam özetlemek Melanom moleküler ve biyolojik özellikleri ve geleneksel plastik doku kültürü tabanlı asder karşılaştırıldığında tedavi tepkisi daha öngörü vardır. Burada, yeni PDX modellerinin kurulması ve mevcut PDX modellerinin karakterizasyonu/denemeleri için standart çalışma protokollerimizi tarif ediyoruz.

Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

İn vitro tarama için hasta kaynaklı ksinograftlar (PDX) kullanılarak organoidler oluşturmak için bir yöntem açıklanmıştır, bu da eşleşen in vivo/in vitro model çiftleri ile sonuçlanır. PDX tümörleri mekanik veya enzmatik olarak küçük parçalara ayrıldı/işlendi, ardından Clevers'in orijinal PDX'e karşı pas geçen, kriyoprezerserve edilen ve karakterize edilen tümör organoidlerini yetiştirme yöntemi izlendi.

Kanser Farmakolojisi Araştırmaları için PDX ve PDX Türevli Organoidlerin Eşleştirilmiş In vivo/In vitro Hasta Kaynaklı Model Çiftlerinin Oluşturulması

Bu protokol, NSCLC hasta kaynaklı organoid modellerde hedeflenen sinyal inhibitörlerine karşı ilaç duyarlılıklarının standartlaştırılmış bir değerlendirmesini açıklamaktadır.

EGFR-Mutant NSCLC Hasta Kaynaklı Organoidlerde Hedefe Yönelik Tedavilere Duyarlılığın Profillenmesi

Bu makalede, melanom metastazının yeni aday aracılarını ve etki mekanizmalarını test etmek için kullanılan tekniklerin bir iş akışı açıklanmaktadır.

Melanom Metastazının Yeni Arabulucularının Belirlenmesi için Sağlam Bir Keşif Platformu

Hasta kaynaklı yumurtalık kanseri organoidleri ile terapötik ilaç testi yapmak için kullanılabilecek bir protokol sunuyoruz.

Klinik Öncesi İlaç Testi için Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoid Modeller

Tümör organoidleri, kanser araştırmalarında ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımında devrim yarattı. Araştırmacıların klinikte tümörden bir adım önde olmalarını sağlayan klinik olarak ilgili bir tümör modelini temsil ederler. Bu protokol, taze pankreas tümör dokusu örneklerinden ve pankreas adenokarsinomu kökenli hasta kaynaklı ksenogreftlerden tümör organoidlerini oluşturur.

Taze dokudan pankreas kanseri kaynaklı tümör organoidlerinin ve fibroblastların oluşturulması

Hepatoselüler karsinom (HCC) organoid oluşumu için organoid kültivasyonun tüm aşamalarını kapsayan mevcut protokollere kapsamlı bir genel bakış ve iyileştirme sunuyoruz. Bu sistem, potansiyel terapötik hedeflerin belirlenmesi ve ilaç adaylarının etkinliğinin değerlendirilmesi için değerli bir model görevi görmektedir.

Potansiyel Hedef Belirleme ve İlaç Keşfi için İnsan Hepatoselüler Karsinomu Hasta Kaynaklı Organoid Modelinin Geliştirilmesi ve Optimizasyonu

Hasta tümörlerinden üretilen organoidler ortotopik olarak fare karaciğerine enjekte edilir. Tümör olmayan karaciğer dokusunun rezeksiyonu, tümörün bulunduğu karaciğer dokusunda rejeneratif bir ortama yol açar.

Karaciğer Rejenerasyonunun Tümör Büyümesi Üzerindeki Etkisini Araştırmak İçin Hepatosellüler Kanser Hastasından Elde Edilen Bir Organoid Ksenogreft Modeli

Keşfedin, melanom hasta kaynaklı organoidlerle tümör mikroçevresini ve immünoterapi yanıtlarını incelemeyi. Bu yöntem, kişiselleştirilmiş kanser tedavileri için ilaç geliştirme stratejilerini ilerletir.

Melanom Hasta Kaynaklı Organoid Modellerle Terapötik Fırsatların Ortaya Çıkarılması

Daha fazla video keşfet