Name: Fibrinojen-Poliakrilamid Jel Elektroforezi ile Sipunculus nudusta Aktif Fibrinojenolitik Ajanların Hızlı Ayrılması ve Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Keşfedin, fibrinojen-PAGE yöntemiyle Sipunculus nudus'ta aktif fibrinojenolitik ajanların hızlı ayrılması ve görüntülenmesi. Bu basitleştirilmiş protokol, trombolitik ilaç geliştirme sürecini hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Fıstık Kurtlarında Fibrinojen-PAGE ile Fibrinojenolitik Ajanların Ortaya Çıkarılması

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
<li>Tsivgoulis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolysis+for+acute+ischaemic+stroke%3A+current+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Thrombolysis for acute ischaemic stroke: current status and future perspectives.</a> Lancet Neurol. 22 (5), 418-429 (2023).</li>
<li>Tang, M., Hu, C., Lin, H., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic+drugs+induced+hemorrhage%3A+mechanisms+and+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagul+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic drugs induced hemorrhage: mechanisms and solutions.</a> Blood Coagul Fibrinolysis. 34 (5), 263-271 (2023).</li>
<li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification%2C+characterization%2C+and+chemical+modification+of+Bacillus+velezensis+SN-14+fibrinolytic+enzyme%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">Purification, characterization, and chemical modification of Bacillus velezensis SN-14 fibrinolytic enzyme.</a> Int J Biol Macromol. 177, 601-609 (2021).</li>
<li>Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolytic+and+anticoagulant+efficiencies+of+purified+fibrinolytic+enzyme+produced+from+Cochliobolus+hawaiiensis+under+solid-state+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation.</a> Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).</li>
<li>Lin, W., Lin, H., Xin, P., Yan, H., Kang, B., Tang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+approach+to+analyze+the+cell+components+of+cerebral+blood+clots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots.</a> J Vis Exp. (197), e65791(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> J Vis Exp. (196), e65631(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Huang, Y., Xu, R., Cui, X., Yan, H. Plasmin affinity purification method based on agarose gel and plasmin and application thereof. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470">https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470</a> (2023).</li>
<li>Walton, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+fibrin+plate+method+for+the+assay+of+plasminogen+activators%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">An improved fibrin plate method for the assay of plasminogen activators.</a> Clinica Chimica Acta. 13 (5), 680-684 (1966).</li>
<li>Ngere, J. B., Ebrahimi, K. H., Williams, R., Pires, E., Walsby-Tickle, J., McCullagh, J. S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+chromatography+coupled+to+mass+spectrometry+in+life+science%2C+environmental%2C+and+medical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange chromatography coupled to mass spectrometry in life science, environmental, and medical research.</a> Anal Chem. 95 (1), 152-166 (2023).</li>
<li>Kato, S., Takeuchi, K., Iwaki, M., Miyazaki, K., Honda, K., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitin-+and+streptavidin-mediated+affinity+purification+systems%3A+A+screening+platform+for+enzyme+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Chitin- and streptavidin-mediated affinity purification systems: A screening platform for enzyme discovery.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 62 (31), e202303764(2023).</li>
<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
<li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en">https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en</a> (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1&nbsp; M Tris-HCl (pH 6.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>%30 Akrilamid/Bis-akrilamid</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum persülfat</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>Beher</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpü (1.5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Sabit Sıcaklık İnkübatörü</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Brillant Mavi Lekelenme solüsyonu</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>Elektronik Analitik Terazi</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinojen</td><td>Solarbio</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>Jel yüklemeli pipet uçları, Toplu Biosharp</td><td></td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>Homojenizatör</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>Yatay rotasyonlu osilatör</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Mili-Q Referans</td><td>Kırlangıç Z00QSV0CN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Hücresi</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N, N, N', N'-Tetrametiletilendiamin</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Ucu (1 mL)</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Ucu (10 & mikro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Ucu (200 & mikro; L)</td> <td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici (1 mL)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici (10 & mikro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici (200 & mikro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici (50 & mikro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>Soğutmalı Santrifüj</td><td>Cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum dodesil sülfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

fibrinojen-poliakrilamid jel elektroforezi ile sipunculus nudus'ta aktif fibrinojenolitik ajanların hızlı ayrılması ve görüntülenmesi

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Elektroforezden sonra, işaretleyicinin tüm bantları net bir şekilde gösterildi. 1x SDS-PAGE yükleme şeritleri yalnızca 10 kDa bantları (bromofenol mavisi) gösterdi. SFE ve fıstık kurdu örnekleri herhangi bir gözlemlenebilir bant göstermedi (Şekil 1). Numunelerin bantları görünmese de, markör ve bromofenol mavisinin performansı elektroforezin başarılı olduğunu gösterdi ve numuneler moleküler ağırlıklarına göre ayrıldı.
Lekelenme nedeniyle jelin tamamı maviye dönmesine rağmen, renk bozulması fibrinojenin fibrinojenitik ajanlar tarafından parçalandığı alanı şeffaf hale getirdi. İşaretleyici ile karşılaştırıldığında, sFE, 25 kDa'ya yakın aktif bir fibrinojenolitik bant gösterdi. Yer fıstığı kurdu homojenatı 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa ve 70 kDa'dan büyük bir dizi bant gösterdi (Şekil 2). Sonuçlar, sFE'nin sadece 25 kDa'lık bir fibrinojenolitik bileşen içerdiğini, ancak fıstık kurdu homojenatının sFE bileşenleri ve diğer fibrinojenolitik ajanlar içerdiğini gösterdi. Ek Şekil 1 , işaretleyiciyi koyu mavi renkte ve hedef numuneleri parlak bantlar olarak gösteren bir jel görüntüsü örneğidir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> Şekil 1: Elektroforez sonrası jel. M: İşaretleyici; Şerit 1: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 2: sFE; Şerit 3: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 4: fıstık kurdu homojenat; Şerit 5: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> Şekil 2: Renk gidermeden sonra jel. M: İşaretleyici; Şerit 1: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 2: sFE; Şerit 3: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 4: fıstık kurdu homojenat; Şerit 5: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 1: İşaretçiyi koyu mavi ve hedef numuneleri parlak bantlar olarak gösteren jel görüntüsü. M: İşaretleyici; Şerit 1: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 2: sFE; Şerit 3: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği; Şerit 4: fıstık kurdu homojenat; Şerit 5: 1x SDS-PAGE yükleme arabelleği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Fibrinojen-Poliakrilamid Jel Elektroforezi ile Sipunculus nudus'ta Aktif Fibrinojenolitik Ajanların Hızlı Ayrılması ve Görüntülenmesi

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu video in vitro anjiyogenez tayininde bir protokol anjiyogenez özetlediği çeşitli aşamaları olduğunu göstermektedir. Zaman atlamalı çimlenme görüntüleri, lümen oluşumu, dallanma ve anastomoz - anjiyogenez temel özellikleri gösterilmektedir.

Anjiyogenez Çalışmaları için optimize edilmiş Fibrin Jel Boncuk Testi

Bu videoda, insan fonksiyonel olmayan hipofiz adenomunun (NFPA) tümör dokularından elde edilen karmaşık bir protein karışımından tek tek proteinleri ayıran iki boyutlu bir jel elektroforezi yöntemi gösteriyoruz. Proteinler, birinci boyutta elektrik yüklerine göre ayrılır ve ikinci boyutta moleküler ağırlıklara göre daha da ayrılır.

İki Boyutlu Poliakrilamid Jel Elektroforezi: Yük ve Moleküler Ağırlığa Dayalı Kompleks Protein Karışımındaki Proteinlerin Analizi İçin Bir Ayırma Tekniği

Bu video, çözelti bulanıklığındaki değişimin bir fonksiyonu olarak çözünmeyen fibrin pıhtısı oluşumunu izlemek için UV görünür bir spektrofotometrenin kullanımını göstermektedir. UV görünür spektrofotometre, çözeltinin zaman içindeki absorbansını ölçer, bu da çözünmeyen fibrin pıhtısı oluşumundan kaynaklanan bulanıklık değişimini temsil eder.

Fibrin pıhtı oluşumunu izlemek için UV görünür spektroskopi

Amaç, sıvı fazlı izoelektrik odaklama (IEF) yöntemini çalıştırarak biyoaktif küçük molekülleri, kompleks bitki özünden peptitleri ve patojen mikroplardan proteinleri fraksiyonetmek ve izole etmektir. Ayrıca ayrılan moleküller tespit edildi ve biyoaktiviteleri doğrulandı.

Biyoaktif Küçük Moleküllerin, Peptidlerin Doğal Kaynaklardan ve Proteinlerden Preparatif İzoelektrik Odaklama (IEF) Yöntemi ile Mikroplardan Ayrılması

Bu rapor, sülfatlı glikozaminolikanları (GAG) biyolojik örneklerden izole etme ve arındırma tekniklerini ve yaklaşık boyutlarına yönelik bir poliakrilamid jel elektroforez yaklaşımını açıklar. GAG'ler proteinlerle elektrostatik etkileşim yoluyla doku yapısına ve etki sinyalizasyon süreçlerine katkıda bulunur. GAG polimer uzunluğu, konyak ligandları için bağlayıcı yakınlıklarına katkıda bulunur.

Glikozamid Jel Elektroforez ve Gümüş Boyama ile Glikozaminolikanların Tespiti

Burada, Sipunculus nudus'tan fibrinolitik bir enzimin basit, ucuz ve verimli bir afinite saflaştırma yöntemi sunuyoruz.

Sipunculus nudus'tan Bir Fibrinolitik Enzimin Afinite Saflaştırılması

Burada kullanılan deney, küçük moleküller ve protein hedefleri arasındaki etkileşimi tahmin etmek ve doğrulamak için hücresel termal kayma testi ile birleştirilmiş bir moleküler yerleştirme yöntemini göstermektedir.

Küçük moleküllü bileşiğin protein hedef tahmini ve validasyonu

Proteinazlar bakteriyel patogenez için hayati öneme sahiptir, invazyon ve immün kaçışı sağlar. Bakterilerin sitoplazmik ve membran proteinlerinin aktif formlarında tek aşamalı ekstraksiyonu üzücüdür. Bu video makalesi, jelatinazları tespit etmek ve karakterize etmek için zimografi analizi için Leptospira'nın tüm hücresel proteinlerinin ekstraksiyonunu göstermektedir.

Bakteriyel Jelatinazların Tek Adımda Ekstraksiyonu ve Zymografik Analizi

Bu çalışma, kanda trombus oluşumunu tetiklemek için kesme stresi kullanan ve trombü birden fazla boyutlu okuma ile karakterize eden bir mikrofluidik testi tanımlar. Bu test, kan örneklerinin protrombotik eğilimini ölçebilir ve bu nedenle hastalık teşhisi, ilaç keşfi ve trombozla ilgili temel mekanik çalışmalarda faydalıdır.

Trombus Profilleme Testi: Biyomekanik Trombogenezin Kapsamlı Karakterizasyonu İçin Mikrofluidik Tabanlı Bir Platform

Bu protokol, trombin ve plazmin üretiminin eşzamanlı ve zaman çözümlü ölçümünü mümkün kılan Nijmegen Hemostaz Testini tanımlar; böylece pıhtılaşma ve fibrinolizin entegre bir değerlendirmesi sağlanır. Test, geleneksel hemostatik testlerin kapsamının ötesinde araştırma ve klinik ortamlarda hemostatik dengenin karakterizasyonunu iyileştirmeyi amaçlamaktadır.

Nijmegen Hemostaz Testi: Tek bir Kuyiyada Trombin ve Plazmin Üretiminin Eşzamanlı Florojenik Ölçümü

Keşfedin, fibrinojen-PAGE yöntemiyle Sipunculus nudus'ta aktif fibrinojenolitik ajanların hızlı ayrılması ve görüntülenmesi. Bu basitleştirilmiş protokol, trombolitik ilaç geliştirme sürecini hızlandırır.

Fibrinojen-Poliakrilamid Jel Elektroforezi ile Sipunculus nudusta Aktif Fibrinojenolitik Ajanların Hızlı Ayrılması ve Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal

Fibrinojen-Poliakrilamid Jel Elektroforezi ile Sipunculus nudus'ta Aktif Fibrinojenolitik Ajanların Hızlı Ayrılması ve Görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet