Name: Transmisyon elektron mikroskobu için retinal organoid örneklerinin hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: Öğrenin, retinal organoidler için transmisyon elektron mikroskobu örnek hazırlama yöntemini. Bu protokol, sinaptik yapıların nanometre ölçeğinde incelenmesini sağlayarak fonksiyonel araştırmalar için temel oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>TEM için Retinal Organoid Örnek Hazırlama için Optimize Edilmiş Protokol

<ol><li>Andreazzoli, M., Barravecchia, I., De Cesari, C., Angeloni, D., Demontis, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+pluripotent+stem+cells+to+model+and+treat+inherited+degenerative+diseases+of+the+outer+retina%3A+3d-organoids+limitations+and+bioengineering+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Inducible pluripotent stem cells to model and treat inherited degenerative diseases of the outer retina: 3d-organoids limitations and bioengineering solutions.</a> Cells. 10 (9), 2489(2021).</li>
<li>Moser, T., Grabner, C. P., Schmitz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+processing+at+ribbon+synapses+in+the+retina+and+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Sensory processing at ribbon synapses in the retina and the cochlea.</a> Physiol Rev. 100 (1), 103-144 (2020).</li>
<li>Tom Dieck, S., Brandstätter, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribbon+synapses+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Ribbon synapses of the retina.</a> Cell Tissue Res. 326 (2), 339-346 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Webvision%3A+The+organization+of+the+retina+and+visual%22">Webvision: The organization of the retina and visual</a>. Kolb, H., Fernandez, E., Nelson, R. , University of Utah Health Sciences Center, Webvision. Salt Lake City (UT). (1995).</li>
<li>Soto, F., Zhao, L., Kerschensteiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapse+maintenance+and+restoration+in+the+retina+by+ngl2%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Synapse maintenance and restoration in the retina by ngl2.</a> Elife. 7, e30388(2018).</li>
<li>Kruczek, K., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+stem+cell-derived+retinal+organoids+for+disease+modeling+and+development+of+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Pluripotent stem cell-derived retinal organoids for disease modeling and development of therapies.</a> Stem Cells. 38 (10), 1206-1215 (2020).</li>
<li>O'Hara-Wright, M., Gonzalez-Cordero, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+organoids%3A+A+window+into+human+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Retinal organoids: A window into human retinal development.</a> Development. 147 (24), dev189746 (2020).</li>
<li>Norrie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoblastoma+from+human+stem+cell-derived+retinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Retinoblastoma from human stem cell-derived retinal organoids.</a> Nat Commun. 12 (1), 4535(2021).</li>
<li>Luni, C., Serena, E., Elvassore, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-on-chip+for+therapy+development+and+fundamental+science%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Human-on-chip for therapy development and fundamental science.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 45-50 (2014).</li>
<li>Chahine Karam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ipsc-derived+retinal+organoids+and+retinal+pigment+epithelium+for+novel+intronic+rpgr+variant+assessment+for+therapy+suitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pers+Med%22%5BJournal%5D)">Human ipsc-derived retinal organoids and retinal pigment epithelium for novel intronic rpgr variant assessment for therapy suitability.</a> J Pers Med. 12 (3), 502(2022).</li>
<li>Lo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+strategies+for+glaucoma+and+optic+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Therapeutic strategies for glaucoma and optic neuropathies.</a> Mol Aspects Med. 94, 101219(2023).</li>
<li>Capowski, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+and+staging+of+3d+human+retinal+organoids+across+multiple+pluripotent+stem+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Reproducibility and staging of 3d human retinal organoids across multiple pluripotent stem cell lines.</a> Development. 146 (1), 171686(2019).</li>
<li>Cowan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+types+of+the+human+retina+and+its+organoids+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell types of the human retina and its organoids at single-cell resolution.</a> Cell. 182 (6), e1634 1623-1640 (2020).</li>
<li>Cora, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cleared+view+on+retinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">A cleared view on retinal organoids.</a> Cells. 8 (5), 391(2019).</li>
<li>Żak, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+in+situ+transmission+electron+microscopy%E2%94%80development%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Light-induced in situ transmission electron microscopy─development, challenges, and perspectives.</a> Nano Lett. 22 (23), 9219-9226 (2022).</li>
<li>Tschulakow, A. V., Oltrup, T., Bende, T., Schmelzle, S., Schraermeyer, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy+of+the+foveola+reinvestigated%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">The anatomy of the foveola reinvestigated.</a> PeerJ. 6, e4482(2018).</li>
<li>Syrbe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%C3%BCller+glial+cells+of+the+primate+foveola%3A+An+electron+microscopical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Müller glial cells of the primate foveola: An electron microscopical study.</a> Exp Eye Res. 167, 110-117 (2018).</li>
<li>Xiao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+bipolar+cells+receive+cone+photoreceptor+inputs+through+both+invaginating+synapses+and+flat+contacts+in+the+mouse+and+guinea+pig+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rod bipolar cells receive cone photoreceptor inputs through both invaginating synapses and flat contacts in the mouse and guinea pig retinas.</a> J Comp Neurol. 531 (11), 1184-1197 (2023).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+rpgra+mutant+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in rpgra mutant zebrafish.</a> Front Cell Dev Biol. 11, 1169941(2023).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+%CE%B1-synuclein+in+the+mouse+retina+is+confined+to+inhibitory+presynaptic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of α-synuclein in the mouse retina is confined to inhibitory presynaptic elements.</a> J Comp Neurol. 531 (10), 1057-1079 (2023).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+degeneration+of+photoreceptor+synapse+in+ccl2%2Fcx3cr1-deficient+mice+on+crb1%28rd8%29+background%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Early degeneration of photoreceptor synapse in ccl2/cx3cr1-deficient mice on crb1(rd8) background.</a> Synapse. 67 (8), 515-531 (2013).</li>
<li>De Robertis, E., Franchi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscope+observations+on+synaptic+vesicles+in+synapses+of+the+retinal+rods+and+cones%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Electron microscope observations on synaptic vesicles in synapses of the retinal rods and cones.</a> J Biophys Biochem Cytol. 2 (3), 307-318 (1956).</li>
<li>Frey, T. G., Mannella, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+structure+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">The internal structure of mitochondria.</a> Trends Biochem Sci. 25 (7), 319-324 (2000).</li>
<li>Gonzalez-Cordero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recapitulation+of+human+retinal+development+from+human+pluripotent+stem+cells+generates+transplantable+populations+of+cone+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Recapitulation of human retinal development from human pluripotent stem cells generates transplantable populations of cone photoreceptors.</a> Stem Cell Reports. 9 (3), 820-837 (2017).</li>
<li>Gao, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+retinal+organoids+recapitulate+disease+features+of+late-onset+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Patient-specific retinal organoids recapitulate disease features of late-onset retinitis pigmentosa.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 128(2020).</li>
<li>Afanasyeva, T. aV., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+look+into+retinal+organoids%3A+Methods%2C+analytical+techniques%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A look into retinal organoids: Methods, analytical techniques, and applications.</a> Cell Mol Life Sci. 78 (19-20), 6505-6532 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 mm Petri kabı</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Aseton Elektron</td><td>Mikroskobu Bilim</td><td>10000</td><td></td></tr><tr><td>B27 takviyesi</td><td>Gibco</td><td>A3582801</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kaldırıcı</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-395251</td><td></td></tr><tr><td>Bakır ızgaralar</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>AZH400HH</tr><tr><td>DigitalMicrograph Yazılımı</td><td>Gatan, Inc.</td><td></td><td>Yazılım</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>StemCell Technologies</td> <td># 07913</td><td>Bakteriyel proteaz</td></tr><tr><td>DMEM / F12 orta</td><td>Gibco</td> <td># 11320033</td><td></td></tr><tr><td>Gömme kalıp</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>GZ10592</tr><tr><td>Epon-812 reçine</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi</td> <td># 14900</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Biyolojik Endüstriler</td> <td># 04-0021A</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi</td><td>16020</td><td></td></tr><tr><td>hiPSC</td><td>Shownin Biotechnology Co., Ltd.</td><td>RC01001-A</td><td></td></tr><tr><td>Kurşun sitrat</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>GZ02618</tr><tr><td>L-GlutaMax</td><td>Yaşam Teknolojileri</td> <td>#35050061</td><td>L-glutamin ikamesi</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaydı</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>N2 takviyesi</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Sigma</td><td>71650</td><td>PB/PBS NaH'nin bir bileşeni</td></tr><tr><td>2PO4&middot; H2O</td><td>Sigma</td><td>71507</td><td>PB/PBS'nin bir bileşeni</td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan amino asitler</td><td>Sigma</td><td>#M7145</td><td></td></tr><tr><td>Optik mikroskop</td><td>Laboratuvar Binoküler Biyolojik Mikroskop</td><td>Xsz-107bnii</td><td></td></tr><tr><td>OsO4</td><td>TED PELLA</td><td>4008-160501</td><td></td></tr><tr><td>Fırın</td><td>Bluepard</td><td>BPG9040A</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimi</td><td>157-8</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Yarı / ultra ince mikrotom</td><td>Reichert-Jung</td><td>396649</td><td></td></tr><tr><td>Taurin</td><td>Sigma</td><td>#T0625</td><td></td></tr><tr><td>Toluidin mavisi</td><td>Sangon Biotech</td><td>E670105-0100</td><td></td></tr><tr><td>Transmisyon Elektron Mikroskopları</td><td>HITACHI</td><td>H-7500</td><td></td></tr><tr><td>Uranil asetat</td><td>TED PELLA</td><td>CA96049</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-merkaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

transmisyon elektron mikroskobu için retinal organoid örneklerinin hazırlanması

Preparing Retinal Organoid Samples for Transmission Electron Microscopy

iPSC farklılaşması yoluyla 3D RO'ların oluşturulması, retina hastalığı mekanizmalarını ve kök hücre replasman tedavisini incelemek için güçlü bir araç sağlar. Diğerleri RO'lardaki sinaptik bağlantıları fonksiyonel ve immünositokimyasal olarak göstermiş olsa da, konvansiyonel ve şerit sinapsların doğrudan kanıtları çok sınırlıdır. Burada, RO'larda TEM ile iki tip sinapsın üst yapısını araştırmak için bir yöntem sunuyoruz. 180 günlük kültürden sonra, RO'lar sabitlendi, boyandı, gömüldü ve ultra ince dilimlendi. TEM gözlemi, OPL'de dağıtılan fotoreseptörlerin aksonal terminallerinde (Şekil 1 ve Şekil 2) şerit sinapslarını ortaya çıkardı. TEM altında, çubuk şeritleri sinaptik istilanın etrafına yayılır ve yatay hücrelerle at nalı şeklinde bir profil oluşturur (Şekil 1). Çubuklar tipik olarak yalnızca tek bir şeride sahiptir, ancak konilerin birden fazla şeridi vardır (Şekil 2). Ek olarak, IPL'deki amakrin hücreleri arasındaki klasik kimyasal sinapslar gözlenmiştir (Şekil 3). TEM altında, kimyasal sinaps üç bölümden oluşur: presinaptik, sinaptik yarık ve postsinaptik. Presinaptik ve postsinaptik kısımlara karşılık gelen hücre zarları, diğer parçalardan biraz daha kalındır ve iki zar arasındaki dar boşluğa sinaptik yarık denir. Presinaptik membran bölgesinin sitoplazmasında birçok sinaptik vezikül vardır. Bu çalışma, iPSC'den türetilen 3D RO'larda tam sinaptik bağlantıların varlığını doğrulamaktadır. Bununla birlikte, adımlar arasındaki eksik durulamanın, numune hazırlama işlemi sırasında siyah parçacıkların çökelmesine yol açacağına dikkat edilmelidir (Şekil 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig01.jpg"> Şekil 1: RO'lardaki çubuk şerit sinapslarının TEM görüntüleri. (A,B) Çubuk ve yatay hücreler at nalı şeklinde bir profil oluşturur. RO'ların OPL'sindeki her çubuk küresinde, çok sayıda vezikül ile çevrili tek bir şerit (ok uçları) gözlendi. Ölçek çubukları = 0,2 μm. Kısaltmalar: RO'lar = retinal organoidler; HC = yatay hücre; OPL = dış pleksiform tabaka. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig02.jpg"> Şekil 2: RO'lardaki koni şerit sinapslarının TEM görüntüleri. RO'ların OPL'sindeki bir koni pedikülünde üç şerit sinaps (ok ucu) belirgindi. Ölçek çubuğu = 0,2 μm. Kısaltmalar: TEM = transmisyon elektron mikroskobu; RO'lar = retinal organoidler; OPL = dış pleksiform tabaka. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig03.jpg"> Şekil 3: RO'lardaki kimyasal sinapsların TEM görüntüsü. RO'ların IPL tabakasındaki amakrin hücreler arasında geleneksel bir kimyasal sinaps gözlendi. Kimyasal sinaps üç bölümden oluşur: presinaptik, sinaptik yarık ve postsinaptik. Presinaptik membran bölgesinin sitoplazmasında birçok sinaptik vezikül vardır. Bir ok, sinaptik iletimin yönünü gösterir ve çok sayıda vezikülün bir AC1 işleminden başka bir AC2 profiline transferini gösterir. Ölçek çubuğu = 0,2 μm. Kısaltmalar: TEM = transmisyon elektron mikroskobu; RO'lar = retinal organoidler; IPL = iç pleksiform tabaka; AC'ler = amakrin hücreleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66590/66590fig04.jpg"> Şekil 4: Numune hazırlama işlemi sırasında meydana gelebilecek bir sorun örneği. Adımlar arasındaki eksik durulama nedeniyle koni pedikülünde çok sayıda siyah parçacık (daire) vardır. Oklar: şerit sinaps. Ölçek çubuğu = 0,2 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66590/66590fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Transmisyon elektron mikroskobu için retinal organoid örneklerinin hazırlanması

Retinal organoids (ROs) are a three-dimensional culture system mimicking human retinal features that have differentiated from induced pluripotent stem ...

preparing-retinal-organoid-samples-for-transmission-electron

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Insan dışı primat gelişimi ve yaşlanma anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Primat retinanın anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler verebilir.

Beyin Ağ Geçidi: Primate Göz Diseksiyon

Bu video makale Organotipik retina wholemount kültürler ve eksojen kaynaklı etkileri analizi için bir sitospin prosedürü kurulması göstermektedir. Organotipik retina wholemount kültürleri...

Organotipik murin Retina Wholemount Kültür in vivo

Burada açıklanan protokol, tam montajlı bir retinal preparatın yapısal değerlendirmesi içindir. Bu, doku diseksiyonunun tanımlarını, hidrofilize politetrafloroetilen (PTFE) membran ekine montajı, floresan işaretleyicilerle bolus yüklemesini ve hücresel ve sinaptik bileşenlerin immünohistokimyasal analizi için karbodiimid ve paraformaldehit ile fiksasyonun karşılaştırılmasını içerir.

Görüntüleme ve İmmünhistokimyanın için Retina Wholemount Hazırlık için optimize edilmiş Protokolü

Genetik modifikasyondan sonra tüm hücrelerde mitokondri ve endoplazmik retiplinin dağılımını incelemek için bir protokol sunuyoruz, askorbat peroksidaz 2 ve horserpu peroksidaz boyama da dahil olmak üzere bağıntılı ışık ve hacim Elektron Mikroskopisi kullanılarak aynı bölümde hedef geni olan ve olmayan hücrelerin seri bölümlemesi ve elektron mikroskobu ile seri görüntüleme.

Göreli ışık ve hacim elektron mikroskobu ile mitokondri ve endoplazmik reticulum görüntüleme

Bu çalışma, eksplant kullanımı sırasında retina bütünlüğünü tehlikeye atmayı önleyen yeni bir insan organotipik retina kültürü (HORC) modeli geliştirmeyi amaçlamaktadır. Bu, retinanın aşırı vitreus ve alttaki retina pigment epitel-koroid (RPE-choroid) ve sklera ile kültleşmesi ile elde edilir.

Yeni bir İnsan Organotipik Retina Kültürü Tekniğinin Karakterizasyonu

Burada, olgun insan retinal organoidleri üretmek ve bunları yaşa bağlı retinal dejeneratif hastalık maküler telanjiektazi tip 2 (MacTel) için farmasötik adayları tanımlamak için bir fotoreseptör toksisite testinde kullanmak için adım adım bir protokol sunuyoruz.

Farmasötik Keşif için İnsan Retinal Organoidlerinde Toksisite Taramaları

Bu protokol, hiPSC'leri göz alanı kümelerine ayırmanın ve hem yapışkan hem de süspansiyon kültür sistemlerini içeren basitleştirilmiş kültür koşullarını kullanarak nöro-retinal organoidler üretmenin etkili bir yöntemini açıklamaktadır. RPE ve kornea epiteli gibi diğer oküler hücre tipleri de retina kültürlerinde olgun göz alanlarından izole edilebilir.

Sağlıklı ve Retina Hastalığına Özgü İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Retinal Organoidlerin Üretimi

Bu protokol, hızlı ve tekrarlanabilir endodermal hepatik organoidlerin (eHEPO'lar) oluşumunu tanımlar. Bu protokol ile eHEPO'lar 2 hafta içinde üretilebilmekte ve farklılaşma ve işlevselliklerini kaybetmeden uzun vadede (1 yıldan fazla) genişleyebilmektedir.

Fonksiyonel Endodermal Hepatik Organoidlerin Üretimi

Bu protokol, retinadaki sinaptik devreleri ve protein lokalizasyonunu keşfetmeye odaklanarak, önceden gömülü immünoelektron mikroskobunun ayrıntılı adımlarını ana hatlarıyla belirtir.

İmmünoelektron Mikroskobunun Önceden Gömülmesi ile Retina Devrelerinin ve Moleküler Lokalizasyonun İncelenmesi

Bu protokol, retinal fotoreseptör terminallerinin yapısal özelliklerine odaklanarak, hacim elektron mikroskobu için retina örneklerinin hazırlanması için ayrıntılı adımları açıklar.

Hacim elektron mikroskobu için retina örneklerinin hazırlanması

Bu protokol, tam montajlı retinal organoidlerin tam hacimli konfokal görüntülemesi için optik temizleme ve immün etiketlemeyi birleştirir. 3D yapıyı koruyarak, temel nöronal yolların ayrıntılı görselleştirilmesini sağlar, retina olgunlaşması, mekansal organizasyon ve hastalık modellemesi ve kişiselleştirilmiş tıptaki potansiyel uygulamalarının incelenmesini geliştirir.

Hücresel Çözünürlük ile Tam Montajlı Retinal Organoid Görselleştirme

Öğrenin, retinal organoidler için transmisyon elektron mikroskobu örnek hazırlama yöntemini. Bu protokol, sinaptik yapıların nanometre ölçeğinde incelenmesini sağlayarak fonksiyonel araştırmalar için temel oluşturur.

Transmisyon elektron mikroskobu için retinal organoid örneklerinin hazırlanması

Daha fazla video keşfet