Name: Ko-Kültürden Büyüyen Desmoplastik Üç Boyutlu Pankreas Kanseri Spferoidleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 42 s
Description: Keşfedin, pankreas kanseri araştırmaları için hasta kaynaklı hücreler ve immün hücrelerle desmoplastik 3D sferoidlerin ko-kültür yöntemiyle üretimini. Bu model, tümör biyolojisini anlamada ve tedavi stratejilerini geliştirmede değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. 2D hücre kültürü
<ol><li>Steril koşullar altında% 10 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamında (DMEM) PANC-1 hücrelerini büyütün. Pasajlardan önce% 70 -% 80'e kadar birleşin ve 20.pasajdan sonra kullanmayın. Adım 4.2.1'de açıklanan işleme bakın. NOT: Bir referans noktası olarak, 20 mL ortamdaki 1 x 106 hücrenin% 70-80 birleşmeye ulaşması için yaklaşık 2-3 güne ihtiyacı vardır.</li>
	<li>HPaSteC hücrelerini, steril koşullar altında üretici tarafından sağlanan kiti kullanarak %2 FBS, %1 PenStrep ve %1 Yıldız Hücre Büyüme Takviyesi (SteCGS) ile desteklenmiş yıldız hücre ortamında büyütün. Poli-L-Lizin kaplı bir şişede adım 4.2.2'de gösterildiği gibi üreticinin talimatlarına göre (bazı değişikliklerle) büyütün.<ol><li>Tripsin nötralizasyon çözeltisi (TNS) kullanıldığından, üreticinin protokolünden tripsinizasyon sırasında FBS nötralizasyon adımını atlayın. Hücre süspansiyonunu, adım 4.2.2.2'de açıklandığı gibi toplam 10 mL TNS hacmi ile nötralize edin. NOT: Bir referans noktası olarak, 20 mL ortamdaki 0,5 x 106 hücre ve 1 x 106 hücrenin% 90 birleşme elde etmek için sırasıyla 3 gün ve 2 güne ihtiyacı vardır.</li>
		<li>Hücreleri% 90 birleşimde hasat edin. Pasaj 7'nin ötesindeki hücreleri kullanmayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Hücreleri 37 ° C'de,% 5 CO2 ile% 90 -% 95 bağıl nem oranına sahip steril inkübatörlerde koruyun. Tüm hücre kültürü çalışmalarını bir T-75 şişesinde gerçekleştirin.</li>
</ol>2. 96 oyuklu plaka için poli (2-hidroksietil metakrilat (poli-HEMA) çözelti kaplaması
<ol><li>37 ° C'de ısıtılmış bir karıştırıcı kullanılarak gece boyunca karıştırılmasına izin vererek% 95 etanol kullanarak 5 mg / mL'de poli-HEMA çözeltisi hazırlayın (örneğin, 500 mL çözelti 2.5 g poli-HEMA'ya ihtiyaç duyar)<ol><li>Karıştırıcıyı eklemeden önce başlangıç ses konumunu işaretleyin. Ertesi gün çözeltideki herhangi bir kaybı telafi etmek için% 95 etanol kullanın.</li>
	</ol></li>
	<li>Nihai çözeltiyi 0,22 μm'lik bir filtre kullanarak steril bir başlıkta filtreleyin ve buzdolabında 4 °C'de saklayın. NOT: Poly-HEMA, hücrelerin yapışması için caydırıcı bir rol oynayan bir yüzeyin hidrofobikliğini artırmak için kullanılır. Bu çalışma, hücrelerin kuyucuklara yapışmamasını ve tek tabaka olarak büyümesini gerektirdiğinden, poli-HEMA, plakaların doğal düşük bağlanma özelliğine ek bir caydırıcı olarak kullanılır ve böylece onları ultra düşük bağlantı plakaları haline getirir.</li>
	<li>Plakayı kaplamak için bir hücre kültürü davlumbazının içindeki 96 oyuklu yuvarlak polistiren tabanlı mikro kuyu plakasının her bir oyuğuna 50 μL soğuk çözelti ekleyin.</li>
	<li>Plakaların tamamen kuruduğundan emin olmak için kuyuları kapağı kapalı olarak 37 °C'de 3 gün sıcak hava fırınında bırakın.</li>
	<li>Hücre tohumlamadan önce plakaları hücre kültürü davlumbazında 30 dakika boyunca UV ile sterilize edin. Uzun süreli saklama için sıkıca kapalı bir kilitli kilitte saklayın ve kullanmadan önce sterilize edin.</li>
</ol>3. 2D hücre kültürü planlaması
<ol><li> </li></ol><ol><li> </li><li><ol><li><ol><li><li><li><li></li></ol></li><li><ol><li><li><li><li></li></ol></li></ol></li><li><ol><li><li><li><ol><li><li></ol></li></ol></li><li><ol><li><ol><li><li></ol></li><li></ol></li><li><ol><li></li><li></li></ol></li><li><ol><li><ol><li><ol><li></ol></li><li></li><li><li><ol><li></ol></li><li><li></ol></li></ol></li><li><ol><li> </li><li><li><ol><li></ol></li></ol></li><li><ol><li><li><li><li><li><li><ol><li></ol></li><li></ol></li><li><ol><li></ol></li></ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig02large.jpg" target="_blank"></a><ol><li><ol><li><li></ol></li><li><li> </li><li></ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Terapötik Değerlendirme için Desmoplaziyi Yakalayan 3D-PDAC Modeli

<ol><li>Hingorani, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+and+stromal+co-evolution+and+complicity+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epithelial and stromal co-evolution and complicity in pancreatic cancer.</a> Nat Rev Cancer. 23 (2), 57-77 (2023).</li>
<li>Laklai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+tunes+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+tissue+tension+to+induce+matricellular+fibrosis+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Genotype tunes pancreatic ductal adenocarcinoma tissue tension to induce matricellular fibrosis and tumor progression.</a> Nat Med. 22 (5), 497-505 (2016).</li>
<li>Binker, M. G., Binker-Cosen, M. J., Binker-Cosen, A. A., Cosen-Binker, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+factors+and+extracellular+matrix+degradation+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pancreas%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental factors and extracellular matrix degradation in pancreatic cancer.</a> J Pancreas. 15 (4), 280-285 (2014).</li>
<li>Spano, D., Zollo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+microenvironment%3A+a+main+actor+in+the+metastasis+process%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Tumor microenvironment: a main actor in the metastasis process.</a> Clin Exp Metastasis. 29 (4), 381-395 (2012).</li>
<li>Ware, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+an+in+vitro+3D+PDAC+stroma+rich+spheroid+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Generation of an in vitro 3D PDAC stroma rich spheroid model.</a> Biomaterials. 108, 129-142 (2016).</li>
<li>Sunami, Y., Häußler, J., Kleeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+heterogeneity+of+pancreatic+stellate+cells%2C+mesenchymal+stem+cells%2C+and+cancer-associated+fibroblasts+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Cellular heterogeneity of pancreatic stellate cells, mesenchymal stem cells, and cancer-associated fibroblasts in pancreatic cancer.</a> Cancers. 12 (12), 3770(2020).</li>
<li>Öhlund, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+populations+of+inflammatory+fibroblasts+and+myofibroblasts+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Distinct populations of inflammatory fibroblasts and myofibroblasts in pancreatic cancer.</a> J Exp Med. 214 (3), 579-596 (2017).</li>
<li>Pandol, S., Edderkaoui, M., Gukovsky, I., Lugea, A., Gukovskaya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmoplasia+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Desmoplasia of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7 (11), S44-S47 (2009).</li>
<li>Watanabe, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+pancreatic+ductal+cancer%3A+fibrotic+focus+and+%CE%B2-catenin+expression+correlate+with+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Advanced pancreatic ductal cancer: fibrotic focus and β-catenin expression correlate with outcome.</a> Pancreas. 26 (4), 326-333 (2003).</li>
<li>Hu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-infiltrating+podoplanin%2B+fibroblasts+predict+worse+outcome+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Tumor-infiltrating podoplanin+ fibroblasts predict worse outcome in solid tumors.</a> Cell Physiol Biochem. 51 (3), 1041-1050 (2018).</li>
<li>Kapałczyńska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2D+and+3D+cell+cultures-a+comparison+of+different+types+of+cancer+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">2D and 3D cell cultures-a comparison of different types of cancer cell cultures.</a> Arch Med Sci. 14 (4), 910-919 (2018).</li>
<li>Monberg, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occult+polyclonality+of+preclinical+pancreatic+cancer+models+drives+in+vitro+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Occult polyclonality of preclinical pancreatic cancer models drives in vitro evolution.</a> Nat Commun. 13 (1), 3652(2022).</li>
<li>Emerman, J. T., Pitelka, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+and+induction+of+morphological+differentiation+in+dissociated+mammary+epithelium+on+floating+collagen+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Maintenance and induction of morphological differentiation in dissociated mammary epithelium on floating collagen membranes.</a> In Vitro. 13 (5), 316-328 (1977).</li>
<li>Kelm, J. M., Timmins, N. E., Brown, C. J., Fussenegger, M., Nielsen, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+generation+of+homogeneous+multicellular+tumor+spheroids+applicable+to+a+wide+variety+of+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Method for generation of homogeneous multicellular tumor spheroids applicable to a wide variety of cell types.</a> Biotechnol Bioeng. 83 (2), 173-180 (2003).</li>
<li>Kikuta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+stellate+cells+promote+epithelial-mesenchymal+transition+in+pancreatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Pancreatic stellate cells promote epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 403 (3-4), 380-384 (2010).</li>
<li>Lee, J. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+co-culture+of+pancreatic+tumor+spheroids+with+stellate+cells+as+a+novel+3D+model+for+investigation+of+stroma-mediated+cell+motility+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Microfluidic co-culture of pancreatic tumor spheroids with stellate cells as a novel 3D model for investigation of stroma-mediated cell motility and drug resistance.</a> J Exp Clin Cancer Res. 37 (1), 4(2018).</li>
<li>Wong, C. -W., Han, H. -W., Tien, Y. -W., Hsu, S. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial+substrate-derived+compact+cellular+spheroids+mimicking+the+behavior+of+pancreatic+cancer+and+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biomaterial substrate-derived compact cellular spheroids mimicking the behavior of pancreatic cancer and microenvironment.</a> Biomaterials. 213, 119202(2019).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+heterospecies+spheroids+of+pancreatic+stroma+and+cancer+cells+demonstrate+key+phenotypes+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">3D heterospecies spheroids of pancreatic stroma and cancer cells demonstrate key phenotypes of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Transl Oncol. 14 (7), 101107(2021).</li>
<li>Vonlaufen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+stellate+cells%3A+partners+in+crime+with+pancreatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Pancreatic stellate cells: partners in crime with pancreatic cancer cells.</a> Cancer Res. 68 (7), 2085-2093 (2008).</li>
<li>Bachem, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+carcinoma+cells+induce+fibrosis+by+stimulating+proliferation+and+matrix+synthesis+of+stellate+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pancreatic carcinoma cells induce fibrosis by stimulating proliferation and matrix synthesis of stellate cells.</a> Gastroenterology. 128 (4), 907-921 (2005).</li>
<li>Greco, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+cells+invasiveness+is+mainly+affected+by+interleukin-1%CE%B2+not+by+transforming+growth+factor-%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Markers%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer cells invasiveness is mainly affected by interleukin-1β not by transforming growth factor-β1.</a> Int J Biol Markers. 20 (4), 235-241 (2005).</li>
<li>Arao, S., Masumoto, A., Otsuki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B21+integrins+play+an+essential+role+in+adhesion+and+invasion+of+pancreatic+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">β1 integrins play an essential role in adhesion and invasion of pancreatic carcinoma cells.</a> Pancreas. 20 (2), 129-137 (2000).</li>
<li>Sawai, H., Yamamoto, M., Okada, Y., Sato, M., Akamo, Y., Takeyama, H., Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+integrins+by+Interleukin-1alpha+in+human+pancreatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Alteration of integrins by Interleukin-1alpha in human pancreatic cancer cells.</a> Pancreas. 23 (4), 399-405 (2001).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+function+of+the+epidermal+growth+factor+receptor+in+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Expression and function of the epidermal growth factor receptor in physiology and disease.</a> Physiol Rev. 96 (3), 1025-1069 (2016).</li>
<li>Deer, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotype+and+genotype+of+pancreatic+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Phenotype and genotype of pancreatic cancer cell lines.</a> Pancreas. 39 (4), 425(2010).</li>
<li>Stahle, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+in+LPA-induced+tumor+cell+migration%3A+critical+role+of+phosphorylated+ERK%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms in LPA-induced tumor cell migration: critical role of phosphorylated ERK.</a> J Cell Sci. 116, Pt 18 3835-3846 (2003).</li>
<li>Aubert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decrease+of+human+pancreatic+cancer+cell+tumorigenicity+by+%CE%B11%2C+3galactosyltransferase+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decrease of human pancreatic cancer cell tumorigenicity by α1, 3galactosyltransferase gene transfer.</a> Int J Cancer. 107 (6), 910-918 (2003).</li>
<li>Miknyoczki, S. J., Chang, H., Klein-Szanto, A., Dionne, C. A., Ruggeri, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Trk+tyrosine+kinase+inhibitor+CEP-701+%28KT-5555%29+exhibits+significant+antitumor+efficacy+in+preclinical+xenograft+modelsof+human+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The Trk tyrosine kinase inhibitor CEP-701 (KT-5555) exhibits significant antitumor efficacy in preclinical xenograft modelsof human pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Clin Cancer Res. 5 (8), 2205-2212 (1999).</li>
<li>Fukasawa, M., Korc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor-trap+suppresses+tumorigenicity+of+multiple+pancreatic+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor-trap suppresses tumorigenicity of multiple pancreatic cancer cell lines.</a> Clin Cancer Res. 10 (10), 3327-3332 (2004).</li>
<li>Hernández-Camarero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+%28pro%29+enzymes+treatment+suppresses+BXPC-3+pancreatic+Cancer+Stem+Cell+subpopulation+and+impairs+tumour+engrafting%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Pancreatic (pro) enzymes treatment suppresses BXPC-3 pancreatic Cancer Stem Cell subpopulation and impairs tumour engrafting.</a> Sci Rep. 9 (1), 11359(2019).</li>
<li>Ware, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+homogenous+three-dimensional+pancreatic+cancer+cell+spheroids+using+an+improved+hanging+drop+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of homogenous three-dimensional pancreatic cancer cell spheroids using an improved hanging drop technique.</a> Tissue Eng Part C Methods. 22 (4), 312-321 (2016).</li>
<li>Longati, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+pancreatic+carcinoma+spheroids+induce+a+matrix-rich%2C+chemoresistant+phenotype+offering+a+better+model+for+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">3D pancreatic carcinoma spheroids induce a matrix-rich, chemoresistant phenotype offering a better model for drug testing.</a> BMC Cancer. 13, 95(2013).</li>
<li>Kpeglo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+mechanical+stiffness+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol+Plus%22%5BJournal%5D)">Modeling the mechanical stiffness of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Matrix Biol Plus. 14, 100109(2022).</li>
<li>Jang, S. -D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-cancer+activity+profiling+of+chemotherapeutic+agents+in+3D+co-cultures+of+pancreatic+tumor+spheroids+with+cancer-associated+fibroblasts+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Anti-cancer activity profiling of chemotherapeutic agents in 3D co-cultures of pancreatic tumor spheroids with cancer-associated fibroblasts and macrophages.</a> Cancers. 13 (23), 5955(2021).</li>
<li>Pednekar, K. P., Heinrich, M. A., van Baarlen, J., Prakash, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+3D+%C2%B5tissues+mimicking+the+fibrotic+stroma+in+pancreatic+cancer+to+study+cellular+interactions+and+stroma-modulating+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Novel 3D µtissues mimicking the fibrotic stroma in pancreatic cancer to study cellular interactions and stroma-modulating therapeutics.</a> Cancers. 13 (19), 5006(2021).</li>
<li>Kim, S. -K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+heterogeneity+and+plasticity+of+cancer+cell+migration+in+a+pancreatic+tumor+three-dimensional+culture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Phenotypic heterogeneity and plasticity of cancer cell migration in a pancreatic tumor three-dimensional culture model.</a> Cancers. 12 (5), 1305(2020).</li>
<li>Hwang, H. J., Oh, M. -S., Lee, D. W., Kuh, H. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+quantitative+analysis+of+stroma-mediated+cancer+cell+invasion%2C+matrix+remodeling%2C+and+drug+response+in+a+3D+co-culture+model+of+pancreatic+tumor+spheroids+and+stellate+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Multiplex quantitative analysis of stroma-mediated cancer cell invasion, matrix remodeling, and drug response in a 3D co-culture model of pancreatic tumor spheroids and stellate cells.</a> J Exp Clin Cancer Res. 38 (1), 258(2019).</li>
<li>Durymanov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+inoculation+of+3D+pancreatic+cancer+spheroids+results+in+development+of+reproducible+stroma-rich+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous inoculation of 3D pancreatic cancer spheroids results in development of reproducible stroma-rich tumors.</a> Transl Oncol. 12 (1), 180-189 (2019).</li>
<li>Giustarini, G., Teng, G., Pavesi, A., Adriani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+3D+heterocellular+spheroids+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+for+the+study+of+cell+interactions+in+the+tumor+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Characterization of 3D heterocellular spheroids of pancreatic ductal adenocarcinoma for the study of cell interactions in the tumor immune microenvironment.</a> Front Oncol. 13, 1156769(2023).</li>
<li>Alseud, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+biological+activity+of+11-oxygenated+and+heterocyclic+estrone+analogs+in+pancreatic+cancer+monolayers+and+3D+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and biological activity of 11-oxygenated and heterocyclic estrone analogs in pancreatic cancer monolayers and 3D spheroids.</a> Bioorg Med Chem. , (2024).</li>
<li>Fitzgerald, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+activation+protein+regulates+natural+killer+cell+migration%2C+extravasation+and+tumor+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Fibroblast activation protein regulates natural killer cell migration, extravasation and tumor infiltration.</a> bioRxiv. , 429622(2021).</li>
<li>Wishart, G., Gupta, P., Schettino, G., Nisbet, A., Velliou, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+tissue+models+as+tools+for+radiotherapy+screening+for+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Radiol%22%5BJournal%5D)">3D tissue models as tools for radiotherapy screening for pancreatic cancer.</a> Br J Radiol. 94 (1120), 20201397(2021).</li>
<li>Peirsman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MISpheroID%3A+a+knowledgebase+and+transparency+tool+for+minimum+information+in+spheroid+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">MISpheroID: a knowledgebase and transparency tool for minimum information in spheroid identity.</a> Nat Methods. 18 (11), 1294-1303 (2021).</li>
<li>Durymanov, M., Kroll, C., Permyakova, A., Reineke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+endocytosis+in+nanoparticle+penetration+of+3D+pancreatic+cancer+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Role of endocytosis in nanoparticle penetration of 3D pancreatic cancer spheroids.</a> Mol Pharm. 16 (3), 1074-1082 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Axio Observer ters mikroskop</td><td>Carl Zeiss</td><td>0450-354</td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Auto T4</td><td>Nexcelom Bioscience LLC</td><td>Auto-T4</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, toz, yüksek glikoz</td><td>Gibco</td><td>12100046</td><td></td></tr><tr>Alexa Fluor 568 <td>Abcam</td><td>ab175712</td><td></td>Fetal Sığır Serumu<td>ile konjuge eşek anti-koyun</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Cytiva</td><td>SH3091003HI</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488&nbsp ile etiketlenmiş keçi antirabbit IgG;</td><td>Abcam</td><td>ab150077</td><td></td></tr><tr><td>Hanks Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>14175145</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Pankreatik Yıldız Hücreleri (HPaSteC)</td><td>ScienCell</td><td>3830</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Nikon</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ts 100</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 96 Kuyulu Polistiren Yuvarlak Tabanlı Mikro Kuyu Plakaları</td><td>Thermo Scientific</td><td>12-565-331</td><td></td></tr><tr><td>Olympus Fluoview FV1200 konfokal lazer</td><td>Olympus</td><td>N/A Üretimi</td><td>durdurulan ürün</td></tr><tr><td>PANC-1</td><td>ATCC</td><td>CRL-1469</td><td></td></tr><tr><td>Poli-HEMA</td><td>Sigma</td><td>P3932</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan poliklonal anti-laminin antikorları&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab11575</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan poliklonal anti-tip I kollajen antikorları&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab34710</td><td></td></tr><tr><td>Koyun poliklonal anti-hyaluronik asit antikorları</td><td>Abcam</td><td>ab53842</td><td></td></tr><tr><td>Yıldız hücre ortamı komple kit&nbsp;</td><td>ScienCell</td><td>5301</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin&nbsp;</td><td>MP Biomedicals, LLC</td><td>153571</td><td>Üretici protokolüne göre hazırlanan ve %0,25 w&nbsp'de kullanılan tripsin solüsyonu;</td></tr><tr><td>Tripsin Nötralizasyon Çözeltisi (TNS)</td><td>ScienCell</td><td>103</td><td></td></tr></tbody></table>

ko-kültürden büyüyen desmoplastik Üç boyutlu pankreas kanseri spferoidleri

Growing Desmoplastic Three-Dimensional Pancreatic Cancer Spheroids from Co-Culture

Sferoidlerin büyümesinde yer alan en kritik adımlardan üçü, ilk hücre sayımı, sferoidleri tohumlarken karıştırma adımları ve sferoidlerin büyümesine izin vermek için zamanında ortam değişikliklerinin gerçekleştirilmesidir (Şekil 1). Ek olarak, 3. günden sonraki medya değişikliklerine ilişkin Şekil 2'ye aşina olmak, kuyu başına artan medya hacmi nedeniyle etkili medya değişikliklerine izin vermek için kritik öneme sahiptir. Tüm bu adımlar verilen talimatlara göre gerçekleştirildiğinde, sferoidlerin (Şekil 3) ortalama 0,048 ± 0,012mm3 (451 μm x 462,84 μm) hacme kadar büyüdüğü bulunmuştur (Şekil 4). Hücrelerin daha iyi büyüyebileceği durumlarla karşılaşılmıştır, bu da 14. günde 0,096 ± 0,014mm3 (611 μm x 560 μm) gibi daha büyük başlangıç ortalama hacimlerine yol açmıştır. Çeşitli nedenler, inkübatörün sıcaklığının ve neminin korunması veya daha sonraki pasajlara kıyasla biraz daha iyi bir canlılığa sahip olan daha önceki hücre pasajlarının kullanılması gibi sferoidlerin daha büyük başlangıç hacimlerine sahip olmasına neden olabilir.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig03.jpg"> Şekil 3: 14. günde görüldüğü gibi temsili bir küre (boyut: 451.59 μm x 462.84 μm). Ölçek çubuğu = 200 μm. Her sferoid, sırasıyla en uzun ve en kısa ekseni boyunca ölçülür ve hacmi hesaplamak için yöntemler bölümünde açıklanan denklem kullanılır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig04.jpg"> Şekil 4: 17 gün boyunca sferoid büyüme ilerlemesi. Plaka 1 ve 2 kopyadır. Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. Şekil, 6, 10, 14 ve 17. günlerde görülebilecek küresel hacimlerin yaklaşık bir tahmini olarak kullanılabilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ancak hücrelerin doğru sayılmadığı ya da hücre süspansiyonunun tam olarak karıştırılmadığı ya da son kültürün bakımının düzenli yapılmadığı ya da bu hataların bir kombinasyonunun meydana geldiği durumlarda, daha küçük sferoidlerin gelişmesine veya tam büyümemiş sferoidlerin gelişmesine yol açabilir. Benzer görünüme sahip sferoidler, ilk optimizasyon çalışmaları sadece 3. günde plakanın çevresi etrafındaki kuyucuklarda tüm plaka yerine ortamı desteklediğinde de görülmüştür (Şekil 5). Alternatif olarak, hücrelerin iyi karıştırılmadığı veya ilk sayım/seyreltme hatalarının oyuk başına önerilenden daha fazla hücrenin tohumlanmasına yol açtığı durumlarda, oyuk başına birden fazla sferoid görülebilir. PANC-1:HPaSteC hücreleri 240:120 oranında kullanıldığında da benzer bir bulgu görülmüştür (Şekil 6). Bu, bazen sferoidler yöne göre büyütüldüğünde de görülebilir, ancak bu tür sferoidlerin sayısı daha azdır (örneğin, 4/96 kuyucuk, kuyu başına bir yerine iki sferoid içerebilir). Birden fazla sferoid ile karşılaşıldığı durumlarda, ya kuyucukları birden fazla sferoid ile kullanmaktan kaçının ya da bu sferoidler tedavi edilirken hacimlerdeki değişiklikleri not edin. Pipet ucunun halenin altına düştüğü durumlarda (Şekil 1) uygun olmayan ortam değişiklikleri de sferoidlerin kazara kaybolmasına neden olabilir.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig05.jpg"> Şekil 5: 14. günde zayıf büyümüş bir sferoidin temsili bir görüntüsü. Ölçek çubuğu = 200 μm. Burada, hücreler iyi bir şekilde toplanmamıştır, bu nedenle sferoidin uzunluğunu ve genişliğini ölçmek zorlaşır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig06.jpg"> Şekil 6: 14. günde görüldüğü gibi iki zayıf büyümüş sferoid içeren bir kuyunun temsili bir görüntüsü. Ölçek çubuğu = 200 μm. Burada sferoidlerden biri 246.61 μm x 178.31 μm ve diğeri 289.13 μm x 252.35 μm boyutlarındadır. Bu, ilk seyreltmeler veya deneyi başlatmak için kullanılan hücrelerin kalitesi ile ilgili bir sorun olduğu bir örnektir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Sferoidler ayrıca dört ana ECM bileşeninden oluşan bir ECM geliştirir: kollajen-I, laminin, hyaluronik asit ve fibronektin. Laboratuvarın daha önce yayınladığı çalışmalarda, ko-kültürün tek başına PANC-1'e göre avantajı, yaygın kollajen, fibronektin içermeyen ve daha az hyaluronik asit birikimi gösteren homo PANC-1 sferoidleri açısından gösterilmiştir.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig07.jpg"> Şekil 7: Tedavi edilmemiş sferoidlerde 17. günde görüldüğü gibi dört ana ECM bileşeninin temsili görüntüsü: Kollajen I, laminin, hyaluronik asit ve fibronektin. Bu görüntüler, sferoidin immün boyamalı kriyokesitlerinden sonra elde edilir. Bu görüntülerin parlaklığı, görünümdeki farklılıkları vurgulamaya yardımcı olmak için eşit şekilde artırılmıştır. Yoğunluk ölçümleri yapılırken dokunun hasar gördüğü veya eksik olduğu alanlar ayarlanmalıdır. Ölçek çubukları = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig07large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Ko-Kültürden Büyüyen Desmoplastik Üç Boyutlu Pankreas Kanseri Spferoidleri

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is one of the deadliest cancers with a 5-year survival rate of &#60;12%. The biggest barrier to therapy is the ...

growing-desmoplastic-three-dimensional-pancreatic-cancer-spheroids

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Basit bir metodu ile ilişkili epitel hücreleri üzerindeki doku fibroblastlann etkileri analiz etmek için tarif edilmiştir. Bu yöntem, üç boyutlu bir doku kültürü kombinasyonu 3D izole sonra hücrelerin analizi kolaylaştırabilir. Tekniği tümör hücreleri üzerindeki tümör-stroma etkileri ile ilişkili sistematik çalışma izin veren, habis potansiyeli değişen hücreleri için de geçerlidir.

Üç boyutlu Karışık-hücre Sfero Co-kültürden Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu

Bu video, birlikte kültürlenmiş pankreas kanseri hücrelerinin ve fibroblastların 3D manyetik biyo-baskısını açıklamaktadır. Pankreas kanseri hücreleri ve aktive edilmiş pankreas fibroblast hücreleri, manyetik kuvvetlerin etkisi altında sferoidler oluşturmak için biyouyumlu bir nanopartikül düzeneği kullanılarak birlikte kültürlenir ve manyetize edilir.

Manyetik Olarak Biyobaskılı 3D Sferoid Ko-kültürler: Kanserli Hücrelerin ve Fibroblastların Birlikte Kültürlenmesi İçin Bir Yöntem

Bu videoda, üç boyutlu bir tümör sferoidi ve T hücresi ko-kültürü oluşturmak için bir yöntem gösterilmektedir. Tümör sferoidleri içeren mikrokuyucuklara sahip bir agaroz dökümü hazırlanır, ardından T hücrelerinin eklenmesi takip edilir. İnkübasyondan sonra, bu kurulum, kontrollü bir üç boyutlu ortamda T hücrelerinin tümör sferoidleri ile etkileşiminin incelenmesine izin verir.

Tümör Sferoidlerinde Sızan T Hücrelerinin Üç Boyutlu Ko-Kültür Modeli

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Burada, pankreas kanseri hücreleri ve metabolik fonksiyonların bir hücre dışı akı çözümleyicisini kullanarak ölçüm tarafından takip fibroblastlar, 3 boyutlu (3D) küresel ortak kültür hazırlanması için bir yöntemi açıklanmıştır.

Hazırlık ve pankreas kanseri hücreleri ve fibroblastlar 3 boyutlu küresel ortak kültürlerin metabolik tahlil

Sunulan yaklaşım aynı anda 3D spheroid tahliller ve T-hücre sitotoksisite kanser hücresi invazyonu değerlendirir. Spheroids bir iskele-free agarose multi-microwell döküm oluşturulur. Eş-kültür ve tip I kollajen matris gömme kanser hücresi invazyonu ve T-hücre aracılı sitotoksisite izlemek için izin veren aynı cihaz içinde gerçekleştirilir.

3D Kültürde Kanser Hücre İstilası ve T-Hücre Sitotoksisitesi İzleme

Bu protokol, Caco2 kolon adenokarsinom hücrelerinden üç boyutlu küreseller üretmek ve yetiştirmek için yeni, sağlam ve tekrarlanabilir bir kültür sistemi sunar. Sonuçlar, kemoterapiye yanıt da dahil olmak üzere kanser kök hücre biyolojisini incelemek için bu yaklaşımın uygunluğu için ilk kavram kanıtını sağlar.

Kolon Kanseri Kök Hücrelerini İncelemek İçin Üç Boyutlu Bir Küresel Model

İlgili insan hastalığını sadakatle nükseden kapsamlı in vitro modeller eksiktir. Mevcut çalışma, insan hepatosellüler karsinomunda tümör-stromal etkileşimi incelemek için güvenilir bir in vitro araç olan üç boyutlu (3D) tümör sferoid oluşturma ve kültürü ssunuyor.

Hepatosellüler Karsinomdaki Tümör-Stromal Etkileşimi Araştırmak İçin Üç Boyutlu Sferoid Modeli

Bu protokol, primer kanser hücrelerinden 3D tümör kültürü modelleri oluşturmayı ve hücre canlılık testleri ve mikroskobik incelemeler kullanarak ilaçlara duyarlılıklarını değerlendirmeyi açıklamaktadır.

Hasta Kaynaklı Tümör Örneklerinden 3 Boyutlu Sferoidlerin Oluşturulması ve İlaçlara Duyarlılıklarının Değerlendirilmesi

Bu çalışma, agaroz kalıplarında mikro kuyular oluşturmak için damga tabanlı bir sistem kullanarak 3D hücre yapıları oluşturmak için uygun maliyetli ve verimli bir metodoloji sunmaktadır. Sistem, tek tip sferoidlerin/organoidlerin oluşumunu teşvik eder, böylece hücre etkileşimlerini iyileştirir. Bu yaklaşım deneysel değişkenliği azaltır ve ilaç testi ve doku mühendisliğindeki uygulamaları destekler.

Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi

Keşfedin, pankreas kanseri araştırmaları için hasta kaynaklı hücreler ve immün hücrelerle desmoplastik 3D sferoidlerin ko-kültür yöntemiyle üretimini. Bu model, tümör biyolojisini anlamada ve tedavi stratejilerini geliştirmede değerlidir.

Ko-Kültürden Büyüyen Desmoplastik Üç Boyutlu Pankreas Kanseri Spferoidleri

Daha fazla video keşfet