Name: Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fare Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Öğrenin, hafif travmatik beyin hasarında kan-beyin bariyeri bozulmasını fare modelinde değerlendirin. Çift boya enjeksiyonu ve floresan mikroskopi ile BBB bütünlüğünü zamana bağlı olarak inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Farelerde Kan-Beyin Bariyeri Parçalanmasının Floresan Boya Bazlı Görselleştirilmesi

<ol><li>Sweeney, M. D., Zhao, Z., Montagne, A., Nelson, A. R., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier%3A+From+physiology+to+disease+and+back%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier: From physiology to disease and back.</a> Physiol Rev. 99 (1), 21-78 (2019).</li>
<li>Kabu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast-associated+shock+waves+result+in+increased+brain+vascular+leakage+and+elevated+ros+levels+in+a+rat+model+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blast-associated shock waves result in increased brain vascular leakage and elevated ros levels in a rat model of traumatic brain injury.</a> PLoS One. 10 (5), e0127971(2015).</li>
<li>Kuriakose, M., Rama Rao, K. V., Younger, D., Chandra, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+and+spatial+effects+of+blast+overpressure+on+blood-brain+barrier+permeability+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Temporal and spatial effects of blast overpressure on blood-brain barrier permeability in traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 8 (1), 8681(2018).</li>
<li>Yeoh, S., Bell, E. D., Monson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+blood-brain+barrier+disruption+in+primary+blast+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Distribution of blood-brain barrier disruption in primary blast injury.</a> Ann Biomed Eng. 41 (10), 2206-2214 (2013).</li>
<li>Readnower, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+blood-brain+barrier+permeability%2C+oxidative+stress%2C+and+activated+microglia+in+a+rat+model+of+blast-induced+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in blood-brain barrier permeability, oxidative stress, and activated microglia in a rat model of blast-induced traumatic brain injury.</a> J Neurosci Res. 88 (16), 3530-3539 (2010).</li>
<li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Front Cell Neurosci. 8, 232(2014).</li>
<li>Nishii, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+and+fluorescein+isothiocyanate-dextran+double+labeling+reveals+the+precise+sequence+of+vascular+leakage+and+glial+responses+after+exposure+to+mild-level+blast-associated+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Evans blue and fluorescein isothiocyanate-dextran double labeling reveals the precise sequence of vascular leakage and glial responses after exposure to mild-level blast-associated shock waves.</a> J Neurotrauma. 40 (11-12), 1228-1242 (2023).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+molecular+weight+fluorescein+isothiocyanate+%28FITC%29-dextrans+to+assess+blood-brain+barrier+disruption%3A+Technical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">High and low molecular weight fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextrans to assess blood-brain barrier disruption: Technical considerations.</a> Transl Stroke Res. 2 (1), 106-111 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Dziegielewska, K. M., Møllgård, K., Habgood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+blood-brain+barrier+integrity%3A+How+appropriate+is+Evans+blue+in+the+twenty-first+century+and+what+are+the+alternatives%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Markers for blood-brain barrier integrity: How appropriate is Evans blue in the twenty-first century and what are the alternatives.</a> Front Neurosci. 9, 385(2015).</li>
<li>Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+Evans+blue+injection+routes%3A+Intravenous+versus+intraperitoneal%2C+for+measurement+of+blood-brain+barrier+in+a+mice+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison Evans blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model.</a> J Neurosci Methods. 195 (2), 206-210 (2011).</li>
<li>Yen, L. F., Wei, V. C., Kuo, E. Y., Lai, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+cerebral+extravasation+by+Evans+blue+and+sodium+fluorescein+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of cerebral extravasation by Evans blue and sodium fluorescein in rats.</a> PLoS One. 8 (7), e68595(2013).</li>
<li>Kawai, S., Takagi, Y., Kaneko, S., Kurosawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+three+types+of+mixed+anesthetic+agents+alternate+to+ketamine+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Effect of three types of mixed anesthetic agents alternate to ketamine in mice.</a> Exp Anim. 60 (5), 481-487 (2011).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> J Vis Exp. 67, e2771(2012).</li>
<li>Satoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+hydrogen+prevents+social+deficits+and+depression-like+behaviors+induced+by+low-intensity+blast+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Molecular hydrogen prevents social deficits and depression-like behaviors induced by low-intensity blast in mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 77 (9), 827-836 (2018).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. 65, e3564(2012).</li>
<li>Selever, J., Kong, J. Q., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+approach+to+high-resolution+fluorescence+imaging+in+semi-thick+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rapid approach to high-resolution fluorescence imaging in semi-thick brain slices.</a> J Vis Exp. 53, e2807(2011).</li>
<li>Jiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+sensitive+antigen+retrieval+method+for+free-floating+and+slide-mounted+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple and sensitive antigen retrieval method for free-floating and slide-mounted tissue sections.</a> J Neurosci Methods. 93 (2), 149-162 (1999).</li>
<li>Nagaraja, T. N., Keenan, K. A., Fenstermacher, J. D., Knight, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+leakage+patterns+of+fluorescent+plasma+flow+markers+after+transient+focal+cerebral+ischemia+suggest+large+openings+in+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Acute leakage patterns of fluorescent plasma flow markers after transient focal cerebral ischemia suggest large openings in blood-brain barrier.</a> Microcirculation. 15 (1), 1-14 (2010).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+blood-brain-barrier+leakage+using+a+combination+of+Evans+blue+and+high+molecular+weight+fitc-dextran%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying blood-brain-barrier leakage using a combination of Evans blue and high molecular weight fitc-dextran.</a> J Neurosci Methods. 325, 108349(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>% 10 Formalin Nötr Tampon Çözeltisi</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>062-01661</td><td></td></tr><tr><td>Anti GFAP, Tavşan</td><td>DAKO-Agilent</td><td>IR524</td><td></td></tr><tr><td>Anti Iba1, Tavşan</td><td>FUJIFILM Wako Kimyasalları</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>Tavuk Anti-Fare IgG (H + L) Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21200</td><td></td></tr><tr><td>Kriyo Dağı</td><td>Muto Saf Kimyasallar</td><td>33351</td><td>doku dondurma ortamı</td></tr><tr><td>Domitor</td><td>Orion Corporation</td><td></td><td>medetomidin</td></tr><tr><td>Eşek anti-Tavşan IgG (H + L) Yüksek Çapraz Adsorbe İkincil Antikor, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10040</td><td></td></tr><tr><td>Evans Mavi</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 kuyulu Polistiren Şeffaf Düz Tabanlı İşlem Görmemiş Hücre Kültürü Plakası, Kapaklı, Ayrı Ayrı Sarılmış, Steril, 50/Kutu</td><td>CORNING</td><td>351147</td><td></td></tr><tr><td>Floresein izotiyosiyanat&ndash; dekstran ortalama mol ağırlık 40.000</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>FD40S</td><td>FITC-dextran</td></tr><tr><td>Cam Taban Kabı 27mm (No.1 Cam)</td><td>AGC TECHNO GLASS</td><td>3910-035</td><td>35 mm cam alt çanak</td></tr><tr><td>IX83 Ters Mikroskop</td><td>OLYMPUS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MAS Hidrofilik Yapışma Mikroskobu Slaytları</td><td>Matsunami Cam</td><td>MAS-04</td><td></td></tr><tr><td>Matsunami&nbsp; Kapak Camı (No.1)&nbsp; 18 x 18mm</td><td>Matsunami Cam</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam Enjeksiyonu 10mg [SANDOZ]</td><td>Sandoz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit EMPROVE ESSENTIAL DAC</td><td>Merck Millipore</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompa</td><td>ATTO</td><td>SJ-1211 II-H</td><td></td></tr><tr><td>KEMIRGEN BEYİN MATRİSİ Yetişkin Fare, 30 g, Koronal</td><td>ASI INSTRUMENTS</td><td>RBM-2000C</td><td>beyin dilimleyici</td></tr><tr><td>Vetorphale</td><td>Meiji Hayvan Sağlığı</td><td>VETLI5</td><td>butorphanol</td></tr></tbody></table>

hafif travmatik beyin hasarı olan bir fare modelinde kan-beyin bariyeri bozulmasının değerlendirilmesi

Evaluation of Blood-Brain Barrier Breakdown in a Mouse Model of Mild Traumatic Brain Injury

Şekil 1A , 25 kPa'lık bir tepe aşırı basıncı ile BSW'nin başlangıcına göre boya enjeksiyonunun zaman seyrini göstermektedir. 'Post' protokolünde, Evans blue solüsyonu, BSW maruziyetinden 6 saat, 1 gün, 3 gün ve 7 gün sonra gerçekleştirilen FITC-dekstran perfüzyonundan 2 saat önce intravasküler olarak uygulandı. 'Ön' protokolde, BSW maruziyetinden hemen önce Evans mavisi çözeltisi enjekte edildi. 'Post' protokolünde, Evans mavisi konsantrasyonunun perfüzyon fiksasyonundan yaklaşık 2 saat önce maksimuma ulaşması beklenirken, 'Pre' protokolünde, BSW'ye maruz kalma süresi boyunca maksimuma ulaşması beklenir (Şekil 1B). Beyin-kan damarlarındaki FITC-dekstran konsantrasyonu, perfüzyon sırasında 2 dakika boyunca sabit tutuldu.
Evans mavi etiketlemesi, BBB bozulmasının 6 saat içinde başladığını ve BSW maruziyetinden 7 gün sonrasına kadar devam ettiğini gösterdi (Şekil 2A). Özellikle, 'Pre' protokolünde 3 saatte Evans mavi boya ekstravazasyonu olmadığından, BSW maruziyetinden hemen sonra BBB arızası meydana gelmedi (Şekil 2B). Şaşırtıcı bir şekilde, Evans mavisi ile uzun vadeli etiketleme, 'Ön' protokolündeki kümülatif doğasını gösterdi (Şekil 2B)7.
Her biri 2 saat veya daha uzun aralıklarla sokulan iki farklı boyanın kullanılması, dağılımlarını karşılaştırarak BBB bütünlüğündeki zamansal değişikliklerin incelenmesine izin verdi. Şekil 3 , Evans mavisi ve FITC-dekstran dağılımında önemli bir fark sergileyen dilimlerin floresan görüntülerini göstermektedir.
Çeşitli boyutlarda çok sayıda floresan sıcak noktası gözlendi. Bazı sıcak noktalar piksellerin ilk %0,1'i arasında yer alacak kadar parlak olsa da, birçoğu çevredeki dokulardan yalnızca biraz daha parlaktı. Boyalar arasındaki tutarsızlık, değişikliklerin bu aralıkta meydana geldiğini göstermektedir. Yalnızca Evans mavisi floresansını gösteren sıcak noktalar, Evans mavisi enjeksiyonu sırasında devam eden BBB bozulmasını gösterdi ve bu daha sonra FITC-dekstran enjeksiyonu ile onarıldı. Buna karşılık, sadece FITC-dekstran floresan gösteren sıcak noktalar, iki boya enjeksiyonu arasında BBB bozulmasının meydana geldiğini düşündürdü. Son olarak, her iki boyadan floresan sergileyen sıcak noktalar, tüm enjeksiyon süresi boyunca sürekli BBB bozulmasını gösterdi.
Şekil 4A , Evans mavisi (hem yalnızca Evans mavisi hem de Evans mavisi/FITC-dekstran çift pozitif sıcak noktalar dahil), FITC-dekstran (hem FITC-dekstran hem de Evans mavisi/FITC-dekstran çift pozitif sıcak noktalar dahil) veya her iki boya (yalnızca Evans mavisi/FITC-dekstran çift pozitif sıcak noktalar) için pozitif sıcak noktaların sayısını sunar. 3 saatteki 'Ön' protokolde, yalnızca FITC-dekstran içeren çok sayıda sıcak nokta gözlendi. 'Post' protokolünde 6 saat ve 1 günde, hem Evans'ın yalnızca mavi hem de yalnızca FITC-dekstran sıcak noktaları tespit edildi. Bununla birlikte, 'Post' protokolünde 3 gün ve 7 günde, sıcak noktalar her iki boya için de ağırlıklı olarak pozitifti. Bu bulgular, BBB bozulmasının 3 saatte meydana geldiğini, 1 gün yeniden şekillendiğini ve BSW maruziyetinden 7 gün sonrasına kadar devam ettiğini göstermektedir (Şekil 4B). Daha da önemlisi, BBB dökümünün kapsamı, daha önce de belirtildiği gibi 7 gün azalma eğilimindeydi.
Boya ekstravazasyon deneylerinin tamamlanmasını takiben, dilimlerin immünohistokimyasal boyanması gerçekleştirildi7. İmmünohistokimyasal görüntü taramaları, boya ekstravazasyonlarınınkilerle tutarlı bir şekilde karşılaştırıldı ve floresan maddelerin taşınma etkisinin pratik olarak ihmal edilebilir olduğunu doğruladı7. Şekil 5'te gösterildiği gibi, reaktif astrosit kümeleri BBB parçalanma bölgeleri ile yakından ilişkiliydi. Daha ileri gözlemler, BSW maruziyetinden 3 gün sonra reaktif astrositlerin yanı sıra aktive ve amip mikrogliasının mevcut olduğunu ortaya koydu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig01.jpg"> 
Şekil 1: Deney tasarımı. (A) Deneyin zaman seyri. Evans mavisi solüsyonu, BSW maruziyetinden sonra ('Post' protokol) veya hemen önce ('Pre' protokol) intravenöz olarak enjekte edilirken, FITC-dekstran fiksasyondan 2 dakika önce transkardiyal olarak perfüze edildi. (B) Sırasıyla 'Post' ve 'Pre' protokollerinde kan damarlarında beklenen Evans blue ve FITC-dekstran konsantrasyonları. BSW, patlama kaynaklı şok dalgaları; FITC, floresein izotiyosiyanat. Bu rakam Nishii ve ark.7'den uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig02.jpg"> 
Şekil 2: Beyin dilimlerindeki floresan yoğunluğunun karşılaştırılması. Beyindeki piksellerin en parlak %0,1'inin floresan yoğunluğu 12 dilimin tamamında değerlendirildi ve 'Post' (A) ve 'Pre' (B) koşulları arasında karşılaştırıldı. Farklılıkların değişkenliği ve önemi belirtilmiştir. xxx, p &lt; 0.001'i gösterir; xxxx, p &lt; 0.0001'i gösterir (F-testinden p değerleri). *p &lt; 0.05; p &lt; 0.0001 (Dunnett'in çoklu karşılaştırmaları post hoc testi ile varyans analizi). Bu rakam Nishii ve ark.7'den uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig03.jpg"> 
Şekil 3: Evans blue ve FITC-dextran ile çift etiketleme kullanılarak çeşitli zaman noktalarında gözlemlenen BBB dökümü. Evans mavisi (macenta), FITC-dekstran (yeşil) ve birleştirilmiş görüntüler gösterilir. Boya enjeksiyon protokolleri sol tarafta sunulmuştur. Bazı sıcak noktalar, Evans mavisi (ok) veya FITC-dekstran (ok uçları) baskın floresan gösterdi. Yıldız işaretleri koroid pleksus ve ilgili damarları gösterir. BBB, kan-beyin bariyeri; FITC, floresein izotiyosiyanat; CVO, üçüncü ventrikülün çevresel organları. Ölçek çubuğu: 1 mm. Bu rakam Nishii ve ark.7'den uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig04.jpg"> 
Şekil 4: Floresan sıcak noktalarının miktarının belirlenmesi. (A) Evans mavisi (macenta), FITC-dekstran (yeşil) ve her iki boya (gri) için pozitif sıcak noktaların sayısı. 'Pre' protokolünde 3. saatte elde edilen görüntülerden ve 'Post' protokolünde 6. saat, 1 gün, 3 gün ve 7 günde elde edilen görüntülerden toplanmıştır. 3 saatten 1 güne kadar, floresan sıcak noktalarının önemli bir kısmı boyalar arası bir uyumsuzluk gösterirken, 3 günden 7 güne kadar bu tür bir uyumsuzluk neredeyse hiç gözlenmedi. (B) BBB dağılımının zaman seyrini özetleyen şema. Dikey eksen kavramsal olarak BBB bozulmasından kaynaklanan boya sızıntısının yoğunluğunu temsil eder. 3 saatten 1 güne kadar olan zikzak deseni, bu süre zarfında boya sızıntısının yerinin ve yoğunluğunun kararsız olduğunu gösterir. FITC, floresein izotiyosiyanat; BBB, kan-beyin bariyeri; BSW, patlama kaynaklı şok dalgaları. Bu rakam Nishii ve ark.7'den uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig05.jpg"> 
Şekil 5: Sırasıyla astrositler ve mikroglia için belirteçler olarak GFAP ve Iba1'in ekspresyonu. Şeklin her bir sütunu, GFAP veya Iba1 immünohistokimyasal görüntülerin yanı sıra Evans mavisi veya FITC-dekstran ile boya ekstravazasyonunun floresan görüntülerini içerir. Renk çubuğu, GRN içindekileri kullanarak Evans mavisi ve FITC-dekstran'ın normalleştirilmiş floresan yoğunluklarını gösterir. Boya enjeksiyon protokolleri sol tarafta sunulmuştur. 'Pre' protokolündeki 1 günlük dilim hem Evans mavisi hem de FITC-dekstran'ın floresansını gösterirken, 'Pre' protokolündeki 3 günlük dilim sadece Evans mavisinin floresansını (oklar) gösterir. Boya ekstravazasyon görüntülerinde oklarla gösterilen bölgeler immünohistokimyasal görüntülerle aynı hizadadır. Ok uçları reaktif astrosit kümelerini gösterir. Poliklonal GFAP antikoru, beyaz cevherin içinde ve çevresinde ve ayrıca pia materyaline bitişik sinir dokusunda astrositleri işaretledi. Sonuç olarak, dcw içindeki ve yakınındaki astrositler bu şekilde etiketlenmiştir. Iba1 sütunundaki çerçeveye veya oka karşılık gelen büyütülmüş görüntüler iç kısımlarda gösterilir. Ölçek çubukları: Boya ekstravazasyonu ve immünohistokimyasal görüntüler için sırasıyla 1 mm ve 200 μm. GFAP, glial fibriler asidik protein; Iba1, iyonize kalsiyum bağlayıcı adaptör molekülü 1; FITC, floresein izotiyosiyanat; BSW, patlama kaynaklı şok dalgaları; DCW, derin serebral beyaz madde. Bu rakam Nishii ve ark.7'den uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fare Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Değerlendirilmesi

Fluorescent dyes are used to determine the extent of dye extravasation that occurs due to blood-brain barrier (BBB) breakdown. Labeling with these dyes is ...

evaluation-blood-brain-barrier-breakdown-mouse-model-mild-traumatic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Macheda, T., et. al. Farelerde Hafif Travmatik Beyin Hasarının Elektromanyetik Kontrollü Kapalı Kafa Modeli. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, stereotaksik çerçeve kullanan bir fare modelinde kapalı kafa yaralanmasına neden olma prosedürünü göstermektedir. Kontrollü etki, hafif travmatik beyin hasarını taklit ederek, araştırmacıların yaralanma sonrası refleksleri ve davranışları ölçerek nörolojik etkileri ve iyileşmeyi incelemelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Hafif Travmatik Beyin Hasarının İndüksiyonu

Kaynak: Kuts, R.  et al. Sıçanların Motor Korteksinde Lazere Bağlı Beyin Hasarı. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, sıçanlarda lazerin neden olduğu beyin hasarını takiben kan-beyin bariyeri (BBB) bütünlüğünün değerlendirilmesini göstermektedir. Kuyruk damarına bir izleme boyası enjekte edilir, bu da beyne dolaşmasına ve hasarlı BBB yoluyla dokuya sızmasına izin verir. Beyin daha sonra boyayı serbest bırakmak için çıkarılır ve işlenir. Boyanın floresan yoğunluğu, lazerin neden olduğu BBB hasarının...

Lazer Kaynaklı Beyin Hasarı Sıçan Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bütünlüğünün Değerlendirilmesi 

Bu protokol, farelerde geçici orta serebral arter tıkanıklığını takiben enfarktüs hacimlerini ve kan-beyin bariyeri bozulmasını azaltan tekrarlayan hipoksik ön koşullandırmayı veya sistemik hipoksiye kısa süreli maruziyetleri tanımlar. Ayrıca, nörovasküler korumanın etkinliğini değerlendirmek için inme sonrası enfarktüs hacminin ve kan-beyin bariyeri bozulmasının ikili miktar tayinini detaylandırır.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Sporcular, her yıl birkaç yüz hafif travmatik beyin yaralanması (mTBI) / sarsıntıyı emerler; Bununla birlikte, bunların beynin üzerindeki sonuçları tam olarak anlaşılamamıştır. Bu nedenle, klinik olarak ilgili semptomları sürekli olarak çoğaltan tek ve tekrarlayan bir mTBI'nin bir hayvan modeli mTBI ve sarsıntı çalışmalarını ilerletmenin yollarını sağlar.

Tek ve Tekrarlayan Hafif Travmatik Beyin Hasarı İçin Bir Fare Modeli

Bu çalışmada, biz kan - beyin bariyerini nörodejeneratif koşullar altında çalışmasının değerlendirilmesi için kolay ve etkin bir yordam mevcut. Bizim hedefe ulaşmak için biz yüksek molekül ağırlıklı floresein isothiocyanate (FITC) etiketli infüzyon-albümin içine fare juguler ven ve onun kaçak beyin parankimi Floresans mikroskobu tarafından değerlendirilir.

Kan - beyin bariyerini geçirgenliği FITC etiketli albümin nörodejeneratif hastalık, bir fare modeli intravenöz infüzyonu tarafından değerlendirilmesi

Burada, hafif ila orta dereceli travmatik beyin hasarının nörobiyolojik ve patofizyolojik etkilerini araştırmak için kemirgenler için bir patlama dalgası modeli protokolü sunuyoruz. Patlamaya bağlı hafif ila orta dereceli travmatik beyin hasarının güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde üretilmesini sağlayan basınç sensörleriyle donatılmış, gazla çalışan, tezgah üstü bir kurulum kurduk.

Kemirgenlerde Kapalı Başlı Hafif Travmatik Beyin Hasarının Preklinik Değerlendirmesi için Düşük Yoğunluklu Patlama Dalgası Modeli

Bu protokol, hafif travmatik beyin hasarına nöroinflamatuar ve hemodinamik yanıtı karakterize etmek ve bu verileri kısmi en küçük kareler regresyonunu kullanarak çok değişkenli bir sistem analizinin bir parçası olarak entegre etmek için yöntemler sunmaktadır.

Travmatik Beyin Hasarına Nöroinflamatuar ve Hemodinamik Yanıtın Sistem Analizi

Protokol, bir fare modelinde hafif travmatik beyin hasarını tanımlar. Özellikle, hafif bir orta hat kapalı kafa travmasını indüklemek için adım adım bir protokol ve hayvan modelinin karakterizasyonu tam olarak açıklanmaktadır.

Farelerde Hafif Travmatik Beyin Hasarının Elektromanyetik Kontrollü Kapalı Kafa Modeli

Bu protokol, kapalı kafa travması (CHI) yöntemiyle indüklenen tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının (rmTBI) modifiye edilmiş bir fare modelini sunar. Yaklaşım, meninkslere maruz kalmanın yaygın olarak neden olduğu iltihabı azaltmak için inceltilmiş bir kafatası penceresi ve sıvı perküsyonunun yanı sıra kemirgenlerde rmTBI modellemesinde gelişmiş tekrarlanabilirlik ve doğruluk içerir.

İnceltilmiş kafatası penceresi ve sıvı perküsyonu içeren tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının modifiye edilmiş fare modeli

Basitleştirilmiş travmatik beyin hasarı (TBH) modelleri terapötik yaklaşımların geliştirilmesini kolaylaştırmıştır. Bu protokol, iğneler kullanılarak bıçak yarası olan bir fare korteksinin oluşturulmasını ana hatlarıyla belirtir ve kanama ve iltihabın analizini sağlar. Bıçak yaralı TBI fare modeli, özel ekipman gerektirmeden gerçekleştirilebilme avantajı sunar.

Travmatik Beyin Hasarında Kanama ve Enflamasyonu İncelemek için Bıçak Yaralı Fare Modeli

Öğrenin, hafif travmatik beyin hasarında kan-beyin bariyeri bozulmasını fare modelinde değerlendirin. Çift boya enjeksiyonu ve floresan mikroskopi ile BBB bütünlüğünü zamana bağlı olarak inceleyin.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fare Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet