Name: Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondurularak Saklanması: Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Öğrenin, tam kandan yüksek canlılıkta periferik kan mononükleer hücrelerin izolasyonunu ve dondurularak saklanmasını. Bu yöntem immünoloji ve hücre biyolojisi araştırmaları için yüksek kaliteli örnekler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mathew, J., Sankar, P., Varacallo, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMathew%2C+J+%22Physiology%2C+Blood+Plasma%22">Physiology, Blood Plasma</a>. , StatPearls Pubs. Treasure Island, Florida. (2018).</li>
<li>Van Oost, B., Van Hien-Hagg, I. H., Timmermans, A. P., Sixma, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+thrombin+on+the+density+distribution+of+blood+platelets%3A+Detection+of+activated+platelets+in+the+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The effect of thrombin on the density distribution of blood platelets: Detection of activated platelets in the circulation.</a> Blood. 62 (2), 433-438 (1983).</li>
<li>Hassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+low-density+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">On the origin of low-density neutrophils.</a> Journal of Leukocyte Biology. 107 (5), 809-818 (2020).</li>
<li>Norouzi, N., Bhakta, H. C., Grover, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+cells+by+their+density%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Sorting cells by their density.</a> PLOS ONE. 12 (7), e0180520(2017).</li>
<li>Manzone, T. A., Dam, H. Q., Soltis, D., Sagar, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+volume+analysis%3A+A+new+technique+and+new+clinical+interest+reinvigorate+a+classic+study%5BTitle%5D)+AND+%22JNMT%22%5BJournal%5D)">Blood volume analysis: A new technique and new clinical interest reinvigorate a classic study.</a> JNMT. 35 (2), 55-63 (2007).</li>
<li>Kleiveland, C. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKleiveland%2C+CR+%22The+impact+of+food+bioactives+on+health%3A+In+vitro+and+ex+vivo+models%22">The impact of food bioactives on health: In vitro and ex vivo models</a>. , Springer. Cham. 161-167 (2015).</li>
<li>Rosado, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+biomarker+detection%3A+Alternative+approaches+for+blood-based+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Advances in biomarker detection: Alternative approaches for blood-based biomarker detection.</a> Adv Clin Chem. 92, 141-199 (2019).</li>
<li>Riedhammer, C., Halbritter, D., Weissert, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRiedhammer%2C+C+%22Multiple+sclerosis%3A+Methods+and+Protocols%22">Multiple sclerosis: Methods and Protocols</a>. 1304, Humana Press. New York, NY. 53-61 (2016).</li>
<li>Panda, S. K., Ravindran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Culture+of+Human+PBMCs%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro Culture of Human PBMCs.</a> Bio Protoc. 3 (3), e322(2013).</li>
<li>He, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+blood+vs+PBMC%3A+Compartmental+differences+in+gene+expression+profiling+exemplified+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy+Asthma+Clinic+Immol%22%5BJournal%5D)">Whole blood vs PBMC: Compartmental differences in gene expression profiling exemplified in asthma.</a> Allergy Asthma Clinic Immol. 15, 67(2019).</li>
<li>Pelák, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+enrichment+using+CD81-targeted+immunoaffinity+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte enrichment using CD81-targeted immunoaffinity matrix.</a> Cytometry Part A. 91 (1), 62-72 (2017).</li>
<li>Higdon, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+on+in-depth+immunophenotyping+of+delay+to+peripheral+blood+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact on in-depth immunophenotyping of delay to peripheral blood processing.</a> Clin Exp Immunol. 217 (2), 119-132 (2024).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoactivatable+aptamer-CRISPR+nanodevice+enables+precise+profiling+of+interferon-gamma+release+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Photoactivatable aptamer-CRISPR nanodevice enables precise profiling of interferon-gamma release in humanized mice.</a> ACS Nano. 18 (4), 3826-3838 (2024).</li>
<li>Ren, Z., Li, C., Wang, J., Sui, J., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptome+revealed+dysregulated+RNA-binding+protein+expression+patterns+and+functions+in+human+ankylosing+spondylitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptome revealed dysregulated RNA-binding protein expression patterns and functions in human ankylosing spondylitis.</a> Front Med. 11, 1369341(2024).</li>
<li>Honardoost, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+immune+cell+dysregulation+and+molecular+subtypes+revealed+by+single-cell-RNA-seq+of+subjects+with+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Systematic immune cell dysregulation and molecular subtypes revealed by single-cell-RNA-seq of subjects with type 1 diabetes.</a> Genome Med. 16, 45(2024).</li>
<li>Amini, A., Esmaeili, F., Golpich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+lncRNAs+in+amelioration+of+Parkinson%27s+disease+symptoms+by+transplantation+of+dopaminergic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">Possible role of lncRNAs in amelioration of Parkinson's disease symptoms by transplantation of dopaminergic cells.</a> NPJ Parkinsons Dis. 10, 56(2024).</li>
<li>Luo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sars-Cov-2+spike+induces+intestinal+barrier+dysfunction+through+the+interaction+between+CEACAM5+and+Galectin-9%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Sars-Cov-2 spike induces intestinal barrier dysfunction through the interaction between CEACAM5 and Galectin-9.</a> Front Immunol. 15, e1303356(2024).</li>
<li>Zhang, X., Wu, G., Ma, X., Cheng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+alterations+and+PI3k-PKB+pathway+suppression+in+patients+with+allergic+rhinitis+undergoing+sublingual+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Ther%22%5BJournal%5D)">Immune cell alterations and PI3k-PKB pathway suppression in patients with allergic rhinitis undergoing sublingual immunotherapy.</a> Adv Ther. 41 (2), 777-791 (2024).</li>
<li>Rucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+mitochondrial+DNA+copy+number+in+circulating+cell-free+DNA+and+extracellular+vesicles+across+cardiovascular+health+status%3A+A+prospective+case-control+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Exploring mitochondrial DNA copy number in circulating cell-free DNA and extracellular vesicles across cardiovascular health status: A prospective case-control pilot study.</a> FASEB J. 38 (10), e23672(2024).</li>
<li>Ghamrawi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buffy+coat+DNA+Methylation+Profile+is+Representative+of+Methylation+Patterns+in+White+Blood+Cell+Types+in+Normal+Pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Buffy coat DNA Methylation Profile is Representative of Methylation Patterns in White Blood Cell Types in Normal Pregnancy.</a> Front Bioeng Biotechnol. 9, e782843(2022).</li>
<li>Johansson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+biomarker+profiles+in+autosomal+dominant+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Plasma biomarker profiles in autosomal dominant Alzheimer's disease.</a> Brain. 146 (3), 1132-1140 (2023).</li>
<li>Bonaterra-Pastra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+plasma+lipoprotein+composition+and+function+in+cerebral+amyloid+angiopathy+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Comparison of plasma lipoprotein composition and function in cerebral amyloid angiopathy and Alzheimer's disease.</a> Biomedicines. 9 (1), 72(2021).</li>
<li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+cell+number+by+hemocytometry+counting%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Estimation of cell number by hemocytometry counting.</a> Cold Spring Harb Protoc. (11), prot097980(2019).</li>
<li>Cobo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosodium+urate+crystals+regulate+a+unique+JNK-dependent+macrophage+metabolic+and+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Monosodium urate crystals regulate a unique JNK-dependent macrophage metabolic and inflammatory response.</a> Cell Rep. 38 (10), e110489(2022).</li>
<li>Andrews, S. Fastqc: A quality control tool for high throughput sequence data. , 
 <a target="_blank" href=" http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/"> http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/</a> (2015).</li>
<li>Corkum, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+subsets+and+their+gene+expression+profiles+from+human+PBMC+isolated+by+Vacutainer+Cell+Preparation+Tube+%28CPT%E2%84%A2%29+and+standard+density+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immune cell subsets and their gene expression profiles from human PBMC isolated by Vacutainer Cell Preparation Tube (CPT™) and standard density gradient.</a> BMC Immunology. 16, 48(2015).</li>
<li>Golke, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delays+during+PBMC+isolation+have+a+moderate+effect+on+yield+but+severely+compromise+cell+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Delays during PBMC isolation have a moderate effect on yield but severely compromise cell viability.</a> Clin Chem Lab Med. 60 (5), 701-706 (2022).</li>
<li>Fuss, I. J., Kanof, M. E., Smith, P. D., Zola, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+whole+mononuclear+cells+from+peripheral+blood+and+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Isolation of whole mononuclear cells from peripheral blood and cord blood.</a> Curr Protoc Immunol. 85 (1), 7.1.1-7.1.8 (2009).</li>
<li>Faass, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+heptose+metabolites+and+the+cag+pathogenicity+island+to+the+activation+of+monocytes%2Fmacrophages+by+Helicobacter+Pylori%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Contribution of heptose metabolites and the cag pathogenicity island to the activation of monocytes/macrophages by Helicobacter Pylori.</a> Front Immunol. 12, e632154(2021).</li>
<li>Preobrazhensky, S. N., Bahler, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomagnetic+bead+separation+of+mononuclear+cells+from+contaminating+granulocytes+in+cryopreserved+blood+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Immunomagnetic bead separation of mononuclear cells from contaminating granulocytes in cryopreserved blood samples.</a> Cryobiology. 59 (3), 366-368 (2009).</li>
<li>Schenz, J., Obermaier, M., Uhle, S., Weigand, M. A., Uhle, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocyte+contamination+from+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+patients+with+sepsis+and+how+to+remove+it+-+A+technical+report%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocyte contamination from peripheral blood mononuclear cells of patients with sepsis and how to remove it - A technical report.</a> Front Immunol. 12, e684119(2021).</li>
<li>Tessema, B., Riemer, J., Sack, U., König, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+stress+assay+in+peripheral+blood+mononuclear+cells%3A+factors+influencing+its+results%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cellular stress assay in peripheral blood mononuclear cells: factors influencing its results.</a> Int J Mol Sci. 23 (21), 13118(2022).</li>
<li>abc. Chen, X., Thibeault, S. 2013 35th Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society (EMBC), , IEEE. 6228-6231 (2013).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+storage+temperature+on+PBMC+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">The effects of storage temperature on PBMC gene expression.</a> BMC Immunol. 17, 6(2016).</li>
<li>Ticha, O., Moos, L., Bekeredjian-Ding, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+long-term+cryopreservation+of+PBMC+on+recovery+of+B+cell+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Effects of long-term cryopreservation of PBMC on recovery of B cell subpopulations.</a> J Immunol Methods. 495, e113081(2021).</li>
<li>Chao, S. -H., Price, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavopiridol+inactivates+P-TEFb+and+blocks+most+RNA+polymerase+II+transcription+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Flavopiridol inactivates P-TEFb and blocks most RNA polymerase II transcription in vivo.</a> J of Biol Chem. 276 (34), 31793-31799 (2001).</li>
<li>Banfi, G., Salvagno, G. L., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ethylenediamine+tetraacetic+acid+%28EDTA%29+as+in+vitro+anticoagulant+for+diagnostic+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">The role of ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) as in vitro anticoagulant for diagnostic purposes.</a> Clin Chem Lab Med. 45 (5), 565-576 (2007).</li>
<li>Mohri, M., Rezapoor, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+heparin%2C+citrate%2C+and+EDTA+on+plasma+biochemistry+of+sheep%3A+Comparison+with+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of heparin, citrate, and EDTA on plasma biochemistry of sheep: Comparison with serum.</a> Res Vet Sci. 86 (1), 111-114 (2009).</li>
<li>Edwards, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparin-mediated+PCR+interference+in+SARS-CoV-2+assays+and+subsequent+reversal+with+heparinase+I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Heparin-mediated PCR interference in SARS-CoV-2 assays and subsequent reversal with heparinase I.</a> J Virol Methods. 327, 114944(2024).</li>
<li>Yokota, M., Tatsumi, N., Nathalang, O., Yamada, T., Tsuda, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+heparin+on+polymerase+chain+reaction+for+blood+white+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Lab+Anal%22%5BJournal%5D)">Effects of heparin on polymerase chain reaction for blood white cells.</a> J Clin Lab Anal. 13 (3), 133-140 (1999).</li>
<li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+long-term+cryopreservation+of+pluripotent+stem+cells+at+-80+%C2%A0%C2%B0C%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient long-term cryopreservation of pluripotent stem cells at -80  °C.</a> Sci Rep. 6 (1), 34476(2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 ve mikro; L İpuçları</td><td>Gilson</td><td>F174501</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta/tedavi koşulu başına yaklaşık 3 uç</td></tr><tr><td>gerekir 15 mL tüp</td><td>Biopioneeer</td><td>CNT-15</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta/tedavi koşulu başına 2/3 2</td></tr><tr><td>gerekir 2 mL Cryovials</td><td>Globe Scientific</td><td>3012</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Collection 20 &micro için hasta/tedavi koşulu başına yaklaşık 40 kriyovial gerekir</td></tr><tr><td>; L İpuçları</td><td>Gilson</td><td>F174201</td><td>Hücre sayımında kullanım için; İhtiyaç duyulan hacim, kullanılan hücre sayımı yöntemine bağlıdır. Çözülecek 1 mL havuzlanmamış donmuş PBMC için 1 uç gereklidir</td></tr><tr><td>50 mL Konik Tüp</td><td>CEM Corporation</td><td>50-187-7683</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta/tedavi koşulu başına 2 adet gereklidir Çözülecek 1 mL havuzlanmamış donmuş PBMC başına 3 adet gerekir</td></tr><tr><td>CD14 Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>325621</td><td></td></tr><tr><td>CD16 Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>360723</td><td></td></tr><tr><td>CD19 Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>363007</td><td></td></tr><tr><td>CD3 Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>300405</td><td></td></tr><tr><td>CD56 Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>318303</td><td></td></tr><tr><td>CD66b Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>305103</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci</td><td>Biopioneeer</td><td>DGN258367</td><td>Buzunun çözülmesi için 1 mL havuzlanmamış donmuş PBMC başına 1 adet gerekir</td></tr><tr><td>CPT Mononükleer Hücre Hazırlama Tüpü</td><td>BD Biosciences</td><td>362753</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta/tedavi koşulu başına 6 tüp gerekir</td></tr><tr><td>Cryo Dondurucu Kutusu Southern</td><td>Labware</td><td>SB2CC-81</td><td>81 tüp tutar PBMC/Plazma/Buffy Coat Collection Cryotube</td>Rack Fisherbrand için hasta/tedavi koşulu başına 1 tüp</tr> gereklidir <tr><td></td><td></td><td>05-669-45</td><td>50 kriyoviyal'e kadar</td></tr><tr><td>tutar DMSO</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Collection için hasta/tedavi koşulu başına yaklaşık 2,5 mL gerekir</td></tr><tr><td>DNase/RNaz İçermeyen Damıtılmış Su</td><td>İnvitrojen</td><td>10977015</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Collection için hasta/tedavi durumu başına yaklaşık 2 mL gerekir Çözülecek</td></tr> <tr><td>1 mL donmuş PBMC başına yaklaşık 9 mL gerekirEDTA Tüpleri</td><td>BD Biosciences</td><td>366643</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta/tedavi koşulu başına 1 tüp gerekir</td></tr><tr><td>Flavopiridol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3055-5MG</td><td></td></tr><tr><td>HLA-DR Antikor</td><td>Biyoefsanesi</td><td>307609</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Serumu Albümini</td><td>GeminiBio</td><td>800-120</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta veya tedavi durumu başına yaklaşık 25 mL gerekir</td></tr><tr><td>İnsan Güveni FcX</td><td>Biolegend</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W292912-1KG-K</td><td>Mr. Frosty Etiket Yazıcısında kullanım için</td></tr><tr><td></td><td>Phomemo</td><td>M110-WH</td><td></td></tr><tr><td>Canlı Ölü Leke</td><td>Biyoefsanesi</td><td>423105</td><td></td></tr><tr><td>Bay Frosty</td><td>Thermo Scientific</td><td>5100-0001</td><td>18 tüpe kadar tutar. PBMC/Plazma/Buffy Coat Collection Multidispense Pipet için hasta/tedavi durumu başına 2 Mr. Frostys gerekir</td></tr><tr><td></td><td>Brandtech</td><td>705110</td><td></td></tr><tr><td>Çok Dağıtımlı Pipet Uçları</td><td>Brandtech</td><td>705744</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu</td>P1000 Pipet Gilson F144059M</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>için hasta/tedavi durumu başına yaklaşık 3 uç gerekirP20 Pipet</td><td>Gilson</td><td>F144056M</td><td>Hücre sayımında kullanım için; ihtiyaç duyulan hacim, kullanılan hücre sayımı yöntemine bağlıdır.</td></tr><tr><td>Yazıcı Etiketleri</td><td>Phomemo</td><td>PM-M110-3020</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Koleksiyonu için hasta/tedavi koşulu başına yaklaşık 45 etiket gerekir Çözülecek 1 mL havuzlanmamış donmuş PBMC başına yaklaşık 5 etiket gerekir</td></tr><tr><td>RNaz İçermeyen EDTA (0,5 M)</td><td>İnvitrojen</td><td>AM9260G</td><td>Yaklaşık 40 &mikro; Çözülecek 1 mL donmuş PBMC başına L gerekir</td></tr><tr><td>RNaz İçermeyen PBS (10X)</td><td>Invitrogen</td><td>AM9625</td><td>Çözülecek 1 mL donmuş PBMC başına yaklaşık 1 mL gerekir</td></tr><tr><td>RNasin</td><td>Promega</td><td>N2111</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Toplama Transfer Pipetleri için hasta veya tedavi koşulu başına yaklaşık 80 mL gerekir</td></tr><tr><td></td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-7M</td><td>PBMC/Plazma/Buffy Coat Toplama Tüpü Tutucu Endicott-Seymour için hasta/tedavi koşulu başına yaklaşık 5 gereklidir</td></tr><tr><td></td><td></td><td>14-781-15</td><td>80 CPT/EDTA Tüpüne kadar</td></tr></tbody></table> tutar

tam kandan yüksek derecede canlı İnsan periferik kan mononükleer hücrelerinin İzolasyonu ve dondurularak saklanması: yeni başlayanlar İçin bir kılavuz

Isolation and Cryopreservation of Highly Viable Human Peripheral Blood Mononuclear Cells From Whole Blood: A Guide for Beginners

PBMC toplama ve kriyoprezervasyonun ardından, 56 benzersiz numuneden çözülmüş PBMC'lerin, monositlerin ve lenfositlerin canlılığı, üreticilerin talimatlarına göre Tablo 4'te listelenen reaktifler kullanılarak akış sitometrisi ile değerlendirildi (Şekil 2A-F<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>&lt;&gt;</td><td></td></tr><tr><td></td><td>&lt;</td><td></td></tr><tr><td></td><td>&lt;</td><td></td></tr><tr><td></td><td>&gt;</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"></td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"> </td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"> </td><td colspan="3"></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="5"> </td><td colspan="3"></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="2"> </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table><img alt="Yoğunluk gradyan santrifüj diyagramında kan bileşeni ayrımı; plazma, PBMC'ler, buffy kaplama katmanları." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66794/66794fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66794/66794fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Akış sitometrisi dağılım grafikleri; PBMC'ler, monositler, lenfositler; canlılık analizi, hücre tipi grafiği." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66794/66794fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66794/66794fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="FastQC veri analizi grafikleri; Milyon Dizi ve Hizalanabilir, GC İçerik Dağıtımı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66794/66794fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66794/66794fig03large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66794/66794_R1.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66794/66794_R2.zip" target="_blank"></a>

Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondurularak Saklanması: Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz

Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are commonly used in biomedical research on the immune system and its response to disease and pathogens. This ...

isolation-cryopreservation-highly-viable-human-peripheral-blood

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, monositlerin tam insan kanından immünmanyetik negatif ayırma ile izolasyonunu gösteriyoruz. İzole edilmiş monositler, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Monositlerin Tam Kandan İmmünomanyetik Negatif Seleksiyon ile İzolasyonu

Bu videoda, monositler ve lenfositler içeren periferik kan mononükleer hücrelerinin, PBMC'lerin yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile bir insan buffy tabakasından izolasyonunu gösteriyoruz. İzole edilmiş PBMC'ler daha fazla analiz için kullanılabilir.

İnsan Buffy Paltolarından Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu

Daha fazla analiz için çeşitli bileşenler elde etmek üzere tam kanın işlenmesi için bir metodolojinin ana hatlarını çiziyoruz. Klinik olmayan bir ortamda tam kan örneklerinin hızlı, yüksek verimli eş zamanlı işlenmesini sağlayan kolaylaştırılmış bir protokolü optimize ettik.

Topluluk tabanlı Ayar Elde Edilen Örneklerin hızlı Fraksiyonlama ve Tam Kan Bileşenlerinin İzolasyonu

Uyarılmış pluripotent kök hücreler (iPSCs), klinik uygulamalar ve temel araştırma için hastaya özgü dokuların bir kaynağı temsil eder. Burada, non-entegre epizomal plasmidleri kullanılarak viral içermeyen iPSCs içine donmuş buffy kat elde edilen insan periferal kan mononükleer hücreleri (PBMNCs) yeniden programlamak için detaylı bir protokol mevcut.

Bütünleşmeyen episomal plasmidler kullanılarak dondurulmuş Buffy tüylerdeki uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Burada, insan anti-pıhtılaşmış kanının yoğunluk gradyanlı santrifüjlenmesinden sonra periferik kan mononükleer hücrelerinden manyetik boncuk ayrılması ile monositlerin nasıl izole edildiğini gösteriyoruz. 5 günlük inkübasyonun ardından, insan monositleri olgunlaşmamış dendritik hücrelere ayrılır ve klinik olmayan bir ortamda deneysel prosedürler için hazır hale gelir.

Tüm kan İnsan monosit türevli dendritik hücrelerin oluşumu

Bu protokol, çevirisel biyobelirteç analizi için kullanılabilecek klinik çalışma alanında yüksek kaliteli PBMC ve plazma biyosampllerinin klinik olarak uygulanabilir hazırlanmasını detaylandırır.

Biyobelirteç Analizi için Klinik Çalışma Alanlarında Tek Bir Kan Çekiminden Periferik Kan Mononükleer Hücre Peletleri ve Plazma Hazırlanması

Periferik kan mononükleer hücrelerinin Sézary Sendromu tanısı alan hastalardan elde edilen tam kandan izole edilmesi, ardından CD4 + T hücrelerinin seçimi, forbol12-miristat13-asetat ve A23187 iyonofor ile uyarılmaları ve transkriptomik profilleme için RNA'nın hazırlanması için basit bir protokol sunuyoruz.

Transkriptomik Profilleme için İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin ve CD4 + T hücrelerinin Sézary Sendromu Hastalarından İzole Edilmesi

İzole edilmiş periferik kan mononükleer hücreleri, bağışıklık fonksiyonlarının ve bozukluklarının, metabolik hastalıkların veya mitokondriyal fonksiyonların analizi için kullanılabilir. Bu çalışmada, PBMC'lerin tam kandan hazırlanması ve ardından kriyoprezervasyon için standartlaştırılmış bir yöntem tanımlanmıştır. Kriyoprezervasyon bu zaman ve mekandan bağımsız hale getirir.

İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin Kriyoprezervasyonu ve Biyoenerjetik Değerlendirmesi

Burada, dondurularak saklanmış tam kan örneklerinde sitokinez-blok mikronükleus testi için optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz. Mikronükleus analizi için tam kanın bu optimize edilmiş dondurularak saklanması yöntemi, büyük ölçekli örnekleme ve çok merkezli çalışmalar için güvenilir bir tekniktir ve kanla ilgili diğer testler için de kullanılabilir.

Dondurularak Saklanmış Tam Kan Üzerinde Mikronükleus Testi

Bu protokol, biyobankacılık ve diğer amaçlar için insan periferik kan mononükleer hücrelerini izole etmek için yüksek verimli otomasyonla uyumlu bir yöntemi detaylandırır.

İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin Buffy Coats'tan Yüksek Verimli İmmünomanyetik Boncuk Ayırma ile İzole Edilmesi

Öğrenin, tam kandan yüksek canlılıkta periferik kan mononükleer hücrelerin izolasyonunu ve dondurularak saklanmasını. Bu yöntem immünoloji ve hücre biyolojisi araştırmaları için yüksek kaliteli örnekler sağlar.

Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondurularak Saklanması: Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz (Video) | JoVE Journal

Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondurularak Saklanması: Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz

Daha fazla video keşfet