Isolation and Cryopreservation of Highly Viable Human Peripheral Blood Mononuclear Cells From Whole Blood: A Guide for Beginners

Brian Dinh; Marten A. Hoeksema; Nathanael J. Spann; Jacob Rendler; Isidoro Cobo; Christopher K. Glass; Calvin Yeang

doi:10.3791/66794

Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondu...

JoVE Journal
Medicine
Author Produced

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Medicine

Isolation and Cryopreservation of Highly Viable Human Peripheral Blood Mononuclear Cells From Whole Blood: A Guide for Beginners

Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondurularak Saklanması: Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz

Full Text

6,098 Views

10:48 min

October 25, 2024

DOI: 10.3791/66794-v

Brian Dinh¹, Marten A. Hoeksema², Nathanael J. Spann³, Jacob Rendler¹, Isidoro Cobo^4,5, Christopher K. Glass^3,6, Calvin Yeang¹

¹Division of Cardiology, Department of Medicine,University of California San Diego, ²Department of Medical Biochemistry, Amsterdam Immunity and Infection: Inflammatory diseases; Amsterdam Cardiovascular Sciences: Atherosclerosis and Ischemic Syndrome,Amsterdam UMC location University of Amsterdam, ³Department of Cellular and Molecular Medicine,University of California San Diego, ⁴Division of Clinical Immunology & Rheumatology, Department of Medicine, Heersink School of Medicine,University of Alabama at Birmingham, ⁵Comprehensive Arthritis, Musculoskeletal, Bone and Autoimmunity Center, Heersink School of Medicine,University of Alabama at Birmingham, ⁶Department of Medicine,University of California San Diego

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Bu protokol, aşağı akış analizleri ve akış sitometrisi ve RNA dizilimi gibi iş akışları için uygun periferik kan mononükleer hücrelerinin toplanması, saklanması ve çözülmesi için erişilebilir bir kılavuz sunar. Plazma ve buffy coat koleksiyonları da sergilenmektedir.

Bu protokolde, tam kandan yüksek canlılığa sahip periferik kan ve mononükleer hücrelerin veya PBMC'lerin nasıl toplanacağı ve saklanacağı hakkında takip etmesi kolay, adım adım bir eğitim sağlamayı amaçlıyoruz. PBMC'ler lenfositleri, dendritik hücreleri ve monositleri içerir. Toplu PBMC'ler, tek tek hücre tiplerini izole etmek için işlenebilir ve RNA dizilimi ve akış sitometrisi dahil olmak üzere çok çeşitli deney ve tahlillerde yaygın olarak kullanılır.

PBMC'lere ek olarak, EDTA plazmasının ve bütün buffy kaplamanın nasıl toplanacağını da gösteriyoruz. Bu protokole başlamadan önce lütfen Tablo 2'de listelenen malzemeleri ve reaktifleri hazırlayın. Bu protokolün, her biri yaklaşık 12 milyon hücre veren altı yoğunluk gradyanlı santrifüj tüpünden PBMC'lerin toplanması için tasarlandığını unutmayın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos