Name: İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Vasküler Organoid Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-13T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: Keşfedin, insan iPSClerinden vasküler organoid üretimi için ölçeklenebilir bir yöntem. ROCK inhibitörleri ve mikro kuyu kullanımıyla tekrarlanabilirliği artırır, hastalık modellemesi için uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>İlaç Taraması ve Hastalık Modellemesi için hiPSC'den Türetilmiş Vasküler Organoidler

<ol><li>Park, S. E., Georgescu, A., Huh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids-on-a-chip.</a> Science. 364 (6444), 960-965 (2019).</li>
<li>Takebe, T., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+by+design%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids by design.</a> Science. 364 (6444), 956-959 (2019).</li>
<li>Griffith, L. G., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+complex+3d+tissue+physiology+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">Capturing complex 3d tissue physiology in vitro.</a> Nat Rev Mol Cell Bio. 7 (3), 211-224 (2006).</li>
<li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li>
<li>Pasca, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cortical+neurons+and+astrocytes+from+human+pluripotent+stem+cells+in+3d+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional cortical neurons and astrocytes from human pluripotent stem cells in 3d culture.</a> Nat Methods. 12 (7), 671-678 (2015).</li>
<li>Takasato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+organoids+from+human+iPS+cells+contain+multiple+lineages+and+model+human+nephrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Kidney organoids from human iPS cells contain multiple lineages and model human nephrogenesis.</a> Nature. 526 (7574), 564-568 (2015).</li>
<li>Koike, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+human+hepato-biliary-pancreatic+organogenesis+from+the+foregut-midgut+boundary%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modelling human hepato-biliary-pancreatic organogenesis from the foregut-midgut boundary.</a> Nature. 574 (7776), 112-116 (2019).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li>
<li>Osakada, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+the+generation+of+rod+and+cone+photoreceptors+from+mouse%2C+monkey+and+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Toward the generation of rod and cone photoreceptors from mouse, monkey and human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 26 (2), 215-224 (2008).</li>
<li>Potente, M., Gerhardt, H., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+and+therapeutic+aspects+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Basic and therapeutic aspects of angiogenesis.</a> Cell. 146 (6), 873-887 (2011).</li>
<li>Wimmer, R. A., Leopoldi, A., Aichinger, M., Kerjaschki, D., Penninger, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+blood+vessel+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of blood vessel organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (11), 3082-3100 (2019).</li>
<li>Wimmer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+blood+vessel+organoids+as+a+model+of+diabetic+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human blood vessel organoids as a model of diabetic vasculopathy.</a> Nature. 565 (7740), 505-510 (2019).</li>
<li>He, S., et al. Mapping morphological malformation to genetic dysfunction in blood vessel organoids with 22q11.2 deletion syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHe%2C+S+%22Biorxiv%22">Biorxiv</a>. , (2021).</li>
<li>He, S., et al. Human vascular organoids with a mosaic akt1 mutation recapitulate proteus syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHe%2C+S+%22Biorxiv%22">Biorxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+polypharmacology+platform+promotes+cytoprotection+and+viability+of+human+pluripotent+and+differentiated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A versatile polypharmacology platform promotes cytoprotection and viability of human pluripotent and differentiated cells.</a> Nat Methods. 18 (5), 528-541 (2021).</li>
<li>Ungrin, M. D., Joshi, C., Nica, A., Bauwens, C., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducible%2C+ultra+high-throughput+formation+of+multicellular+organization+from+single+cell+suspension-derived+human+embryonic+stem+cell+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Reproducible, ultra high-throughput formation of multicellular organization from single cell suspension-derived human embryonic stem cell aggregates.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1565(2008).</li>
<li>Hwang, Y. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microwell-mediated+control+of+embryoid+body+size+regulates+embryonic+stem+cell+fate+via+differential+expression+of+wnt5a+and+wnt11%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Microwell-mediated control of embryoid body size regulates embryonic stem cell fate via differential expression of wnt5a and wnt11.</a> Proc Natl Acad Sci. 106 (40), 16978-16983 (2009).</li>
<li>Antonchuk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+embryoid+bodies+from+human+pluripotent+stem+cells+using+aggrewell+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of embryoid bodies from human pluripotent stem cells using aggrewell plates.</a> Methods Mol Biol. 946, 523-533 (2013).</li>
<li>Lippmann, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+blood-brain+barrier+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Derivation of blood-brain barrier endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 30 (8), 783-791 (2012).</li>
<li>Nishihara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+brain+microvascular+endothelial+cell-like+cells+suitable+to+study+immune+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Star+Protoc%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human pluripotent stem cells to brain microvascular endothelial cell-like cells suitable to study immune cell interactions.</a> Star Protoc. 2 (2), 100563(2021).</li>
<li>Qian, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+blood-brain+barrier+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to blood-brain barrier endothelial cells.</a> Sci Adv. 3 (11), e1701679(2017).</li>
<li>Stebbins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem+cell-derived+brain+pericyte-like+cells+induce+blood-brain+barrier+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem cell-derived brain pericyte-like cells induce blood-brain barrier properties.</a> Sci Adv. 5 (3), eaau7375(2019).</li>
<li>Campisi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+self-organized+microvascular+model+of+the+human+blood-brain+barrier+with+endothelial+cells%2C+pericytes+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3D self-organized microvascular model of the human blood-brain barrier with endothelial cells, pericytes and astrocytes.</a> Biomaterials. 180, 117-129 (2018).</li>
<li>Osaki, T., Sivathanu, V., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+3D+vascular+and+neuronal+networks+in+a+microfluidic+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Engineered 3D vascular and neuronal networks in a microfluidic platform.</a> Sci Rep. 8 (1), 5168(2018).</li>
<li>Osaki, T., Uzel, S. G. M., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+3D+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29+from+human+iPS-derived+muscle+cells+and+optogenetic+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Microphysiological 3D model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) from human iPS-derived muscle cells and optogenetic motor neurons.</a> Sci Adv. 4 (10), eaat5847(2018).</li>
<li>Sakurai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microengineered+vascularized+bleeding+model+that+integrates+the+principal+components+of+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A microengineered vascularized bleeding model that integrates the principal components of hemostasis.</a> Nat Commun. 9 (1), 509(2018).</li>
<li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+a+biomimetic+pericyte-covered+3d+microvascular+network%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Engineering of a biomimetic pericyte-covered 3d microvascular network.</a> PLoS ONE. 10 (7), e0133880(2015).</li>
<li>Kosyakova, N., et al. Differential functional roles of fibroblasts and pericytes in the formation of tissue-engineered microvascular networks in vitro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKosyakova%2C+N+%22Biorxiv%22">Biorxiv</a>. , (2019).</li>
<li>Whisler, J. A., Chen, M. B., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+perfusable+microvascular+network+morphology+using+a+multiculture+microfluidic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Control of perfusable microvascular network morphology using a multiculture microfluidic system.</a> Tissue Eng Part C Methods. 20 (7), 543-552 (2013).</li>
<li>Haase, K., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+on-chip+vascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in on-chip vascularization.</a> Regen Med. 12 (3), 285-302 (2017).</li>
<li>Wong, K. H. K., Chan, J. M., Kamm, R. D., Tien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+models+of+vascular+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Microfluidic models of vascular functions.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14 (1), 205-230 (2012).</li>
<li>Boerckel, J. D., Uhrig, B. A., Willett, N. J., Huebsch, N., Guldberg, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+regulation+of+vascular+growth+and+tissue+regeneration+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanical regulation of vascular growth and tissue regeneration in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (37), E674-E680 (2011).</li>
<li>Homan, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-enhanced+vascularization+and+maturation+of+kidney+organoids+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Flow-enhanced vascularization and maturation of kidney organoids in vitro.</a> Nat Methods. 16 (3), 255(2019).</li>
<li>Mansour, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+functional+and+vascularized+human+brain+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of functional and vascularized human brain organoids.</a> Nat Biotechnol. 36 (5), 432-441 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Merkaptoetanol (1000x)</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 AffiniPure F(ab')2 Fragment Donkey Anti-Rabbit IgG (H + L)</td> <td>Jackson Immuno Research Labs</td><td>711-546-152</td><td>, 0.25 mL% 50 gliserol ile sulandırılır, ve nbsp; -20 °C'de saklayın; 1 yıla kadar C, kullanım için seyreltme oranı: 1:1000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab')2 Fragment Donkey Anti-Goat IgG (H + L)&nbsp;</td><td>Jackson Immuno Research Labs</td><td>705-606-147</td><td>, 0.25 mL% 50 gliserol ile sulandırılır, ve nbsp; -20 ° C'de saklanır; 1 yıla kadar C, kullanım için seyreltme oranı: 1: 1000</td></tr><tr><td>B27 takviyesi eksi A vitamini (50x)</td> <td>Gibco</td><td></td><td>12587010 4 ° C'de çözülür; C, alikot ve -20 ° C'de saklayın; C, donma-çözülme döngüsünden kaçının</td></tr><tr><td>BMP4</td><td>ProSpec</td><td>CYT-081</td>, <td>100 ng/&mikro konsantrasyonda steril ddH2O ile sulandırılır; L, aliquot ve -20 &°C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>CD31 antikoru&nbsp;</td><td>abcam</td><td>ab28364</td><td>seyreltme oranı: 1:400</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>022626001</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris Bioscience</td><td>4423/10</td>, <td>stok çözeltisini DMSO ile 12 mM'de yapar ve -20 °C'de saklar; 1 yıla kadar C.</td></tr><tr><td>Chroman 1</td><td>Tocris</td><td>7163/10</td><td>, stok çözeltisini 100 & mikro'da yapar; DMSO ile M ve -20 &°C'de saklayın; 1 yıla kadar C.</td></tr><tr><td>Kollajen I&nbsp;</td><td>Corning</td><td>40236</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>AXRMP/Ti2</td><td></td></tr><tr><td>Corning Elplasia Plakaları</td><td>Corning</td><td>4441</td><td></td></tr><tr><td>Kontes II FL otomatik hücre sayacı</td><td>Thermo Fisher</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, GlutaMAX takviyesi</td><td>Gibco</td><td>10565018</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, toz</td><td>Gibco</td><td>12500062</td><td>biograde ddH2O ile 10x stok çözeltisi yapın ve 0.2 & mikro ile sterilize edin; m filtresi. 4 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Edi042A</td><td>Cedars Sinai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Emricasan</td><td>Medchemexpress LLC</td><td>HY1039610MG</td><td>DMSO ile 1 mM'de stok çözeltisini yapabilir ve -20 ° C'de depolayabilir; 1 yıla kadar C.</td></tr><tr><td>ERG antikoru</td><td>Cell Singali Technology</td><td>97249</td><td>seyreltme oranı: 1:400</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu - Premium</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>4 ° C'de çözülme; C&nbsp; ve Aliquot, mağaza&nbsp; -20 derece & derece; Beş yıla kadar C veya 4 &°C'de saklayın; Bir aya kadar C</td></tr><tr><td>FGF2</td><td>ProSpec</td><td>CYT557</td>, <td>100 ng/&mikro konsantrasyonda steril ddH2O ile sulandırılır; L, aliquot ve -20 &°C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>Florodish Hücre Kültürü Çanak</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>FD35-100</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Tocris Bioscience</td><td>1099</td><td>, 12 mM'lik bir konsantrasyonda DMSO ile sulandırılır, alikot ve -20 °C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>Gentamisin (50 mg / mL)</td> <td>Gibco</td><td>15710064</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX takviyesi (100x)</td> <td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Heparin, 100 kU</td><td>MilliporeSigma</td><td>375095100KU</td>, <td>4 kU / mL konsantrasyonda steril ddH2O ile sulandırılır</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Thermo Scientific</td><td>13998123</td><td></td></tr><tr><td>Nakavt Serum Değiştirme</td><td>Gibco</td><td>10828028</td><td>4 ° C'de çözülür; C, aliquot ve -20&deg'de saklayın; C, donma-çözülme döngüsünden kaçının</td></tr><tr><td>Matrigel, GFR Bodrum Membran Matrisi</td><td>Corning</td><td>356230</td><td>4 ° C'de çözülme; C, aliquot ve -80 ° C'de saklayın; C, donma-çözülme döngüsünden kaçının</td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler Çözeltisi (NEAA, 100x)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı Su</td><td>Corning</td><td>46000CV</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR plus kiti</td><td>STEMCELL Teknolojileri</td><td></td><td>1001130 4 °C'de çözülme; C, aliquot ve -20&deg'de saklayın; C, donma-çözülme döngüsünden kaçının</td></tr><tr><td>N2 takviyesi (100x)</td> <td>Gibco</td><td>17502048</td><td>4 ° C'de çözülme; C, aliquot ve -20&deg'de saklayın; C, donma-çözülme döngüsünden kaçının</td></tr><tr><td>NaOH çözeltisi (1 M)</td> <td>Cytiva&nbsp; HyClone</td><td>SH31088.01</td><td></td></tr><tr><td>NeuroBasal medium</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements, ver 5.42</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum</td><td>Jackson Immuno Research Labs</td><td>17000121</td><td>10 mL steril ddH2O ile sulandırılır, 4 ° C'de saklanır; İki haftaya kadar C</td></tr><tr><td>paraformaldehit,% 20</td> <td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>15713S,</td><td>PBS</td></tr><tr><td>PBST, 20x</td><td>Thermofisher</td><td>28352</td><td></td></tr><tr><td>PDGFR ve beta ile seyreltilir; antikor</td><td>R& D</td><td>AF385</td><td>seyreltme oranı: 1:400</td></tr><tr><td>poliamin takviyesi (1000x)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P8483</td><td></td></tr><tr><td>Rapiclear temizleme reaktifi, 1.49</td><td>SUNJIN LAB</td><td>RC149001</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat (% 7.5)</td> <td>Gibco</td><td>25080094</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum deoksikolat monohidrat</td><td>Thermofisher</td><td>J6228822</td><td>%1 (ağırlıkça / h) stok çözeltisi için ddH2O ile çözülür</td></tr><tr><td>TBST, 20x</td><td>Thermofisher</td><td>28360</td><td></td></tr><tr><td>trans-ISRIB</td><td>Tocris Bioscience</td><td>5284/10</td><td>, stok çözeltisini DMSO ile 1 mM'de yapar ve -20 ° C'de saklar; 1 yıla kadar C.</td></tr><tr><td>Tritin X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi Leke (% 0.4)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7949-100ML</td><td></td></tr><tr><td>VEGF-A</td><td>ProSpec</td><td>CYT-116</td>, <td>100 ng/&mikro konsantrasyonda steril ddH2O ile sulandırılır; L, aliquot ve -20&deg'de mağaza; Ç</td></tr></tbody></table>

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden vasküler organoid Üretimi

Vascular Organoid Generation from Human-Induced Pluripotent Stem Cells

Şekil 1A, her aşamada kullanılan temel bileşenler de dahil olmak üzere bu protokolün şemasını sunar. Farklılaşma EB oluşumu ile başladı, ardından mezoderm indüksiyonu ve vasküler soy spesifikasyonu izledi (Şekil 1B-D). Agregalar zamanla büyüdü ve daha az küresel hale geldi. Organoidler 5. günde pürüzlü kenarlar göstermeye başladı. Kollajen I-bazal membran matris karışımına gömüldükten sonra, vasküler endotel hücreleri ve perisitler filizlendi ve 7. gün gibi erken bir tarihte karmaşık vasküler ağlar oluşturmak üzere büyüdü (Şekil 1E). Bu modifiye edilmiş yöntemin temel amacı, farklı üretim partileri arasındaki varyasyonları en aza indirmek olduğundan, EB boyutunu iki bağımsız partiden ölçtük ve hem boyut ölçümleri hem de istatistiksel analiz, bu yöntemle tutarlılığı ve tekdüzeliği doğruladı (Şekil 1F).
Vasküler farklılaşmayı doğrulamak için, organoidler gömülmeden önce 5. günde toplandı ve CD31, ERG1 ve PDGFRβ dahil olmak üzere vasküler belirteçlerle boyandı. Organoidler, vasküler endotel hücrelerinin ve perisitlerin varlığını gösteren CD31, ERG1 ve PDGFRβ (Şekil 2) eksprese etti.
Doku temizlendikten sonra, vasküler ağlar tam montajlı immünofloresan mikroskobu ile analiz edildi (Şekil 3A). Olgun organoidler, 17. günde (Şekil 3B, jel bloğundaki örnek) ve 28. günde (Şekil 3C, jel bloğundaki örnek) CD31, ERG1 ve PDGFRβ ile boyandı; örnek, jel bloğundan ve kültürden ayrı ayrı 96 oyuklu bir plakada alındı; kenarlardaki vasküler ağın, jel bloğundan alındıktan sonra radyal olarak genişlemek yerine sferoidleri sardığına dikkat edin).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67125/67125fig01.jpg"> Şekil 1: Vasküler organoid üretimi. (A) Vasküler organoid üretimi için adımların şeması ve zaman çizelgesi. (B-E) Farklı aşamalarda vasküler organoidlerin temsili parlak alan görüntüleri. Ölçek çubukları: 100 μm. (F) Bu çalışmada sunulan mikrokuyu yöntemi kullanılarak iki farklı EB üretim partisinden EB boyutunda istatistiksel analiz. EB üretimi için, mikrokuyu başına 1.000 hücre ve Parti 1 ve 2 için sırasıyla n = 42 ve n = 40 kullanıldı. Anlamlılık, anlamlı değil, ns olarak sunulur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67125/67125fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67125/67125fig02.jpg"> Şekil 2: Jel gömülmeden önce vasküler organoidlerin immün boyama. Sırasıyla endotel belirteçleri (A) CD31 (yeşil) ve (B) ERG1 (yeşil) ve (C) perisit belirteci PDGFRβ (yeşil) ile boyanmış organoidlerin temsili floresan görüntüleri. Çekirdekler DAPI (mavi) ile karşı boyandı. Ölçek çubukları: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67125/67125fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67125/67125fig03.jpg"> Şekil 3: Vasküler organoidlerde vasküler ağın immünofloresan karakterizasyonları. (A) Temsili bir görüntü, doku temizlendikten sonra cam tabakta jele gömülü vasküler organoidleri gösterir. Organoidler şeffaftı ancak 385 nm UV ışığı altında görülebiliyordu. (B) 17. günde vasküler organoidin temsili bir 3D tam montaj görüntüsü. Vasküler organoid DAPI (mavi), vasküler endotel hücre belirteci, CD31 (yeşil) ve perisit belirteci, PDGFRβ (macenta) ile boyandı. (C) 28. günde, endotel belirteçleri CD31 (kırmızı) ve ERG1 (yeşil) ile boyanmış, alınan bir vasküler organoidin temsili bir tam montajlı 3D görüntülemesi. Ölçek çubukları: 150 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67125/67125fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>hiPSC genişletme ortamı</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr><tr><td>mTeSR Plus bazal ortam</td>
			<td>400 mL</td>
		</tr><tr><td>mTeSR Plus takviyesi</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr><tr><td>Gentamisin (50 mg / mL)</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: hiPSC genleşme ortamının bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>hiPSC tohumlama ortamı</td>
			<td>20 mL</td>
		</tr><tr><td>PSC genleşme ortamı</td>
			<td>20 mL</td>
		</tr><tr><td>Kroman 1 (100 μM)</td>
			<td>10 μL</td>
		</tr><tr><td>Emricasan (1 mM)</td>
			<td>30 μL</td>
		</tr><tr><td>Poliamin takviyesi (1000X)</td>
			<td>20 μL</td>
		</tr><tr><td>trans-ISRIB (1 mM)</td>
			<td>14 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 2: HiPSC tohumlama ortamının bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>N2B27 orta</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr><tr><td>DMEM/F-12, GlutaMAX takviyesi</td>
			<td>48,6 mL</td>
		</tr><tr><td>Nörobazal ortam</td>
			<td>48,6 mL</td>
		</tr><tr><td>GlutaMAX takviyesi (100x)</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (NEAA, 100x)</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>2-Merkaptoetanol (1000x)</td>
			<td>0.1 mL</td>
		</tr><tr><td>Gentamisin (50 mg / mL)</td>
			<td>0.1 mL</td>
		</tr><tr><td>N2 takviyesi (100x)</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>B27 takviyesi eksi A vitamini (50x)</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr><tr><td>Heparin, 4 kU/mL</td>
			<td>0.1 mL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 3: N2B27 ortamının bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Mezoderm indüksiyon ortamı (MIM)</td>
			<td>3 mL</td>
		</tr><tr><td>N2B27 orta</td>
			<td>3 mL</td>
		</tr><tr><td>BMP4 (100 ng/μL)</td>
			<td>0,9 μL</td>
		</tr><tr><td>CHIR99021 (12 mM)</td>
			<td>3 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 4: Mezoderm indüksiyon ortamının (MIM) bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Vasküler farklılaşma ortamı 1 (VDM1)</td>
			<td>3 mL</td>
		</tr><tr><td>N2B27 orta</td>
			<td>3 mL</td>
		</tr><tr><td>Forsklin (12 mM)</td>
			<td>0,5 μL</td>
		</tr><tr><td>VEGFA (100 ng/μL)</td>
			<td>3 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 5: Vasküler farklılaşma ortamı 1'in (VDM1) bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Kollajen I karışımı</td>
			<td>5 mL</td>
		</tr><tr><td>Kollajen I (3.61g/mL)</td>
			<td>2,77 mL</td>
		</tr><tr><td>10x DMEM/F12 orta</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>Sodyum bikarbonat, %7,5</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>HEPES, 1 M</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>0.73 mL</td>
		</tr><tr><td>NaOH, 1 milyon</td>
			<td>75 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 6: Kollajen I karışımının bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Kollajen I - bazal membran matris karışımı</td>
			<td>6,5 mL</td>
		</tr><tr><td>Kolaj I karışımı</td>
			<td>5 mL</td>
		</tr><tr><td>Matrigel (10 mg / mL)</td>
			<td>1,5 mL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 7: Kollajen I-bazal membran matris karışımının bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Vasküler farklılaşma ortamı 2 (VDM2)</td>
			<td>5 mL</td>
		</tr><tr><td>DMEM/F-12, GlutaMAX™ takviyesi</td>
			<td>3,67 mL</td>
		</tr><tr><td>Gentamisin (50 mg / mL)</td>
			<td>5 μL</td>
		</tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (NEAA, 100X)</td>
			<td>50 μL</td>
		</tr><tr><td>2-Merkaptoetanol (1000x)</td>
			<td>5 μL</td>
		</tr><tr><td>Heparin, 4 kU/mL</td>
			<td>5 μL</td>
		</tr><tr><td>Nakavt Serum Değişimi</td>
			<td>0,75 mL</td>
		</tr><tr><td>FBS (FBS)</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>VEGFA (100 ng/μL)</td>
			<td>5 μL</td>
		</tr><tr><td>FGF2 (100 ng/μL)</td>
			<td>5 μL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 8: Vasküler farklılaşma ortamı 2'nin (VDM2) bileşimi.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Engelleme tamponu</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr><tr><td>Eşek serumu</td>
			<td>2,5 mL</td>
		</tr><tr><td>Ara 20</td>
			<td>0.25 mL</td>
		</tr><tr><td>Triton X-100</td>
			<td>0.25 mL</td>
		</tr><tr><td>Sodyum deoksikolat çözeltisi (%1, ağırlıkça/h)</td>
			<td>0,5 mL</td>
		</tr><tr><td>PBS</td>
			<td>46,5 mL</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 9: İmmün boyama için bloke edici tamponun bileşimi.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Vasküler Organoid Üretimi

Vascular organoids derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) recapitulate the cell type diversity and complex architecture of human ...

vascular-organoid-generation-from-human-induced-pluripotent-stem-cells

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Video, indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden insan beyni organoidleri üretmek için bir yöntemi göstermektedir. Nörosferin, diğer mikrop tabakalarının oluşumunu baskılayan bir nöroektodermal tabaka oluşturduğunu gösterir. Nöroküreler bir 3D jel matrisine gömülüdür ve nöroepitelyal tomurcuklar oluşturur. Organoid medya ile inkübe edildiğinde, bu nöroepitelyal tomurcuklar belirli beyin bölgelerine farklılaşır ve bu da olgun beyin organoidlerinin oluşumuna neden olur.

İnsan Beyni Organoidlerini Oluşturmak için İn Vitro Bir Yöntem

Bu video, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) ön beyin tipi organoidlerin oluşturulmasını ana hatlarıyla belirterek, kök hücre agregatlarından beynin korteksini taklit eden ve çeşitli nöron tiplerine farklılaşan karmaşık yapılara ilerlemeyi göstermektedir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Ön Beyin Tipi Serebral Organoidlerin Üretilmesi

Serebral organoids erken insan beyni geliştirme vitroaraştırmak için yeni bir modeli sistemi temsil eder. Bu makale verimli bir şekilde homojen dorsal ön-tipi organoids İnsan İndüklenmiş pluripotent kök hücre de dahil olmak üzere kritik karakterizasyonu ve doğrulama adımları oluşturmak için ayrıntılı yöntembilim sağlar.

Standart ve tekrarlanabilir ön türü beyin Organoids insan nesil Pluripotent kök hücreler indüklenen

Bu protokol, beyin hücresi tiplerinin çeşitliliğini ve hücresel organizasyonun birçok özelliğini korurken, dışsal büyüme faktörleri veya bazal membran matrisi olmadan basitleştirilmiş, düşük maliyetli bir şekilde beyin organoidleri üretmek için bir araç olarak oluşturulmuştur.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Beyin Organoidleri Üretmek için Statik Kendi Kendini Yöneten Bir Yöntem

Burada, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (iPSC' ler) beyin organoidleri üretmek için bir protokol açıklıyoruz. Beyin organoidlerini büyük miktarlarda ve yüksek kalitede elde etmek için ev yapımı mini biyoreaktörler kullanıyoruz.

Ev Yapımı Mini Biyoreaktörlerde İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden Beyin Organoidi Üretimi

Burada, insan pluripotent kök hücrelerini kendi kendine örgütlenerek verimli bir şekilde kullanarak gelişimsel olarak ilgili insan kalbi organoidleri (hSO'lar) oluşturmak için bir protokol açıklıyoruz. Protokol, gelişimsel ipuçlarının sıralı aktivasyonuna dayanır ve son derece karmaşık, işlevsel olarak ilgili insan kalp dokuları üretir.

Pluripotent Kök Hücrelerden Elde Edilen Kendi Kendine Monte Edilen İnsan Kalbi Organoidlerinin Üretilmesi

Bu protokol, insan pluripotent ve indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden kendi kendini organize eden kan damarlarının oluşumunu tanımlar. Bu kan damarı ağları, perisitler, düz kas aktini ve sürekli bir bazal membran ile çevrili geniş ve bağlı bir endotel ağı sergiler.

Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Kan Damarı Organoidlerinin Üretimi

Bu protokol, hızlı ve tekrarlanabilir endodermal hepatik organoidlerin (eHEPO'lar) oluşumunu tanımlar. Bu protokol ile eHEPO'lar 2 hafta içinde üretilebilmekte ve farklılaşma ve işlevselliklerini kaybetmeden uzun vadede (1 yıldan fazla) genişleyebilmektedir.

Fonksiyonel Endodermal Hepatik Organoidlerin Üretimi

Bu protokol, süspansiyon kültürü koşulları kullanılarak indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) böbrek organoidleri üretmek için kapsamlı ve etkili bir yöntem sunar. Bu çalışmanın birincil vurgusu, başlangıç hücre yoğunluğunun ve WNT agonist konsantrasyonunun belirlenmesinde yatmaktadır, böylece böbrek organoid araştırmalarıyla ilgilenen araştırmacılara fayda sağlamaktadır.

İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden Süspansiyonda Böbrek Organoidlerinin Üretilmesi

Bu protokol, geliştirme, genişleme ve hESC ve iPSCs türetilen NK hücreleri, in vivo görüntüleme açıklar.

Geliştirme, Genişleme ve<em&gt; In vivo</em&gt; İnsan Embriyonik Kök Hücreleri (hESC) den İnsan NK Hücrelerinin İzleme ve ve Bağlı Pluripotent Kök Hücre (iPSCs)

Keşfedin, insan iPSClerinden vasküler organoid üretimi için ölçeklenebilir bir yöntem. ROCK inhibitörleri ve mikro kuyu kullanımıyla tekrarlanabilirliği artırır, hastalık modellemesi için uygundur.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Vasküler Organoid Üretimi

Daha fazla video keşfet