Name: At Enterik Glial Kültürü ve At Kolikinde Nöral İnflamatuar Mekanizmanın Çalışmasına Uygulama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Keşfedin at bağırsaklarından enterik glial hücre izolasyonunu ve bu hücrelerin barsiyer fonksiyonu üzerindeki iltihabi etkilerini. Bu yöntem, kolik sonrası komplikasyonların önlenmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Kolik İlişkili İnflamasyonda Enterik Glial-Epitelyal Etkileşimlerin İncelenmesi

<ol><li>Tinker, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+equine+colic+incidence+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Prospective study of equine colic incidence and mortality.</a> Equine Vet J. 29 (6), 448-453 (1997).</li>
<li>Morton, A. J., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+and+postoperative+factors+influencing+short-term+survival+of+horses+following+small+intestinal+resection%3A+92+cases+%281994-2001%29%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Surgical and postoperative factors influencing short-term survival of horses following small intestinal resection: 92 cases (1994-2001).</a> Equine Vet J. 34 (5), 450-454 (2002).</li>
<li>French, N. P., Smith, J., Edwards, G. B., Proudman, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+surgical+colic%3A+risk+factors+for+postoperative+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Equine surgical colic: risk factors for postoperative complications.</a> Equine Vet J. 34 (5), 444-449 (2002).</li>
<li>Lisowski, Z. M., Lefevre, L., Mair, T. S., Clark, E. L., Hudson, N. P. H., Hume, D. A., Pirie, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+quantitative+real-time+PCR+to+determine+the+local+inflammatory+response+in+the+intestinal+mucosa+and+muscularis+of+horses+undergoing+small+intestinal+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Use of quantitative real-time PCR to determine the local inflammatory response in the intestinal mucosa and muscularis of horses undergoing small intestinal resection.</a> Equine Vet J. 54 (1), 52-62 (2022).</li>
<li>Sheats, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+review+of+equine+SIRS%2C+sepsis%2C+and+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">A comparative review of equine SIRS, sepsis, and neutrophils.</a> Front Vet Sci. 6, 69(2019).</li>
<li>Mazzotta, E., Villalobos-Hernandez, E. C., Fiorda-Diaz, J., Harzman, A., Christofi, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+and+postoperative+gastrointestinal+tract+dysfunction%3A+pathogenic+mechanisms+and+novel+treatment+strategies+beyond+colorectal+enhanced+recovery+after+surgery+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharm%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus and postoperative gastrointestinal tract dysfunction: pathogenic mechanisms and novel treatment strategies beyond colorectal enhanced recovery after surgery protocols.</a> Front Pharm. 11, 583422(2020).</li>
<li>Stoffels, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+involves+interleukin-1+receptor+signaling+in+enteric+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus involves interleukin-1 receptor signaling in enteric glia.</a> Gastroenterology. 146 (1), 176-187 (2014).</li>
<li>Yu, Y. B., Li, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cells+and+their+role+in+the+intestinal+epithelial+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cells and their role in the intestinal epithelial barrier.</a> World J Gastroenterol. 20 (32), 11273-11280 (2014).</li>
<li>Savidge, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia+regulate+intestinal+barrier+function+and+inflammation+via+release+of+S-nitrosoglutathione%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Enteric glia regulate intestinal barrier function and inflammation via release of S-nitrosoglutathione.</a> Gastroenterology. 132 (4), 1344-1358 (2007).</li>
<li>Stewart, A. S., Freund, J. M., Gonzalez, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+three-dimensional+culture+of+equine+intestinal+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Advanced three-dimensional culture of equine intestinal epithelial stem cells.</a> Equine Vet J. 50 (2), 241-248 (2018).</li>
<li>Hellman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+equine+enteroids+and+enteroid-derived+2D+monolayers+that+are+responsive+to+microbial+mimics%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Generation of equine enteroids and enteroid-derived 2D monolayers that are responsive to microbial mimics.</a> Vet Res. 52 (1), 108(2021).</li>
<li>Al-Sadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+modulation+of+intestinal+epithelial+tight+junction+permeability+is+mediated+by+JNK+pathway+activation+of+claudin-2+gene%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 modulation of intestinal epithelial tight junction permeability is mediated by JNK pathway activation of claudin-2 gene.</a> PLoS One. 9 (3), e85345(2014).</li>
<li>Ochoa-Cortes, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cells%3A+A+new+frontier+in+neurogastroenterology+and+clinical+target+for+inflammatory+bowel+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cells: A new frontier in neurogastroenterology and clinical target for inflammatory bowel diseases.</a> Inflamm Bowel Dis. 22 (2), 433-449 (2016).</li>
<li>Ziegler, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glial+cell+network+function+is+required+for+epithelial+barrier+restitution+following+intestinal+ischemic+injury+in+the+early+postnatal+period%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enteric glial cell network function is required for epithelial barrier restitution following intestinal ischemic injury in the early postnatal period.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 326 (3), G228-G246 (2024).</li>
<li>Grubišić, V., Gulbransen, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+glia%3A+the+most+alimentary+of+all+glia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enteric glia: the most alimentary of all glia.</a> J Physiol. 595 (2), 557-570 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES tampon</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>10 mM HEPES</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15630-106</td><td></td></tr><tr><td>2 mM GlutaMAX</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25050-061</td><td></td></tr><tr><td>4' 6-Diaminidino-2-Fenilindol</td><td>İnvitrojen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>İleri DMEM / F12</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Alfa düz kas aktin antikoru</td><td>Abcam</td><td>7817</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterisin B</td><td>Sigma</td><td>AA9529</td><td>4.4 g / mL stok alikotları, nihai konsantrasyon 1.1 ve mikro; g/mL</td></tr><tr><td>Anti-Antimikotik 1x</td><td>Gibco</td><td>15240-096</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Sigma</td><td>AA3311</td><td></td></tr><tr><td>BSA 50 mg/mL stok çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>A3311</td><td></td></tr><tr><td>CaCL2</td><td>ACROS Organiics</td><td>206791000</td><td>Equine Ringer'ın Bileşeni ' Stok 1: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 2 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>Kollajenaz</td><td>Sigma</td><td>9891</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12 ortamı</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Eşek anti-tavşan IgG Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>21207</td><td></td></tr><tr><td>EVOM EndOhm çift elektrot TEER-ölçüm odası</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>EVM-EL-03-01</td><td></td></tr><tr><td>TEER Ölçümü için EVOM Kılavuzu</td><td>Dünya Hassas Aletleri</td><td>EVM-MT-03-01</td><td></td></tr><tr><td>G5</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>G1272</td><td>Nihai konsantrasyon 20 & mikro; g/mL</td></tr><tr><td>GFAP antikoru</td><td>Abcam</td><td>4674</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgG Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>28175</td><td></td></tr><tr><td>IL-1 & beta; ELISA</td><td>Thermo Fisher</td><td>ESIL1B</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>P330-500</td><td>Equine Ringer' Bileşeni Stok 1: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 2 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>L-glutamin çözeltisi</td><td>Corning</td><td>25-00-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Bioscience</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Thermo Fisher</td><td>M33-500</td><td>Equine Ringer'ın Bileşeni Stok 1: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 2 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP332-1</td><td>Equine Ringer ' s Stok 2: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 1 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>S271-10</td><td>At Ringer'ın Bileşeni Stok 1: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 2 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP329-500</td><td>At Ringer'ın Bileşeni s Stok 2: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 1 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Thermo Fisher</td><td>S637-212</td><td>At Ringer'ın Bileşeni s Stok 2: diğer bileşenlerle birleştirin, ardından bu stoktan 100 mL'yi dereceli bir silindire ekleyin ve deiyonize su ile 1L'ye seyreltin. %5 CO2. ile pH'ı 7.4'e ayarlayın Equine Ringer ile birleştirin s Stok 1 tamamlamak için " Zil sesi' s Çözümü".</td></tr><tr><td>Kalem/Strep çözeltisi</td><td>Gemini</td><td>400-109</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-lizin</td><td>Sigma</td><td>P2636</td><td>1x borat tamponunda 0,5 mg/mL</td></tr><tr><td>Prizma yazılımı</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteaz</td><td>Sigma</td><td>P4630</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td>%7,5 stok çözeltisi</td></tr></tbody></table>

at enterik glial kültürü ve at kolikinde nöral İnflamatuar mekanizmanın Çalışmasına uygulama

Equine Enteric Glial Culture and Application to the Study of a Neural Inflammatory Mechanism in Equine Colic

Daha fazla enzimatik ve mekanik sindirim ile at jejunumunun submukozal tabakaya (Şekil 1) mikrodiseksiyonu, at enterik gliasının canlı hücre kültürlerini üretebilir. Hücreler, diğer türlerin enterik glia'sı ile tutarlı iğ şeklindeki hücrelerin baskınlığı ile bir pleomorfizm gösterdi (Şekil 2A). Kültürler, düşük fibroblast kontaminasyonu ile seçici glial markör, glial fibriler asidik protein (GFAP) için pozitifti (alfa SMA, Şekil 2B). Bazı durumlarda, submukozal tabakaların mikrodiseksiyonu yeterince yüksek derecede kontrol edilemedi ve kültürler, fibroblast belirteci düz kas aktininin immünofloresan yoluyla gözlenen yüksek yüzdelerde fibroblast ile kontamine oldu (Şekil 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67244/67244fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244fig04large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67244/67244_Table%201_rev.xlsx" target="_blank"></a>

At Enterik Glial Kültürü ve At Kolikinde Nöral İnflamatuar Mekanizmanın Çalışmasına Uygulama

Inflammatory postoperative conditions of equine colic (acute abdomen) contribute not only to increased client cost, patient discomfort, and ...

equine-enteric-glial-culture-application-to-study-neural-inflammatory

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

En az 24 saat boyunca çeşitli uyaranlara yanıt kültürü ve izleme insan bağırsak mukozasının korunması için yeni bir yöntem getirmektedir. Bizim yöntem ile, doku kutup apikal yolla fizyolojik bir uyarım sağlayan, korunur.

İnsan bağırsak mukozasının eksplantlar Kültür ve Polarize Uyarım için Yeni Bir Yöntem

Bu videoda, fare bağırsağının submukoza ve lamina propriasından enterik glial hücrelerin izole edilmesi için bir yöntem gösterilmektedir. Submukoza ve lamina propria dokusunun çıkarılması, enterik glial hücrelerin bunlardan izole edilmesi ve bir enterik glial hücre kültürü oluşturmak için hücrelerin kaplanmış bir kuyu plakası üzerinde kültürlenmesi ile ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Bir farenin submukoza ve lamina propriasından enterik glial hücrelerin izole edilmesi

Bu enterik sinir sisteminin nöronal ve glial bileşenlerin doğrudan çalışma için bir hücre kültür protokolü göstermektedir. Lamelleri bir nöron / glia karışık kültür, immünohistokimyasal elektrofizyoloji, bireysel nöron ve glia fonksiyonu incelemek için yeteneği sağlayan yetişkin fare myenterik pleksustan...

Bir<em&gt; In-vitro</emYetişkin Mouse myenterik Pleksus izole edilen enterik Nöronlar ve Glia bir&gt; hazırlanması

Nöronal plastisite gastrointestinal (Gİ) sistem giderek tanınan, fakat yeterince anlaşılır bir özelliktir. Burada, insan pankreas bozuklukların örnekte, morfolojik ve fonksiyonel hem düzeyinde GI nöronal plastisite çalışma için, bir in vitro deneyi nöroplastisite mevcut.

Pankreas Nöroplastisite benzetme:<em&gt; In Vitro</em&gt; Dual-nöron Plastisitesi Deneyi

Globoid hücreler, şu anda etkili bir uzun süreli tedavisi olmayan bir lökodistrofi olan Krabbe hastalığının tanımlayıcı bir patolojik özelliğidir. Aktive edilmiş mikrogliaların doğuştan gelen biyolojisini ve patojenik potansiyelini ve bunların globoid hücrelere dönüşümünü incelemek için bir hücre kültürü modeli geliştirdik.

Bir İn Vitro Globoid Hücre lökodistrofi Hücresel Patofizyoloji Çalışması Modeli

Enterik sinir sistemi (ENS), bağırsak duvarında bulunan ve bağırsak reflekslerini kontrol eden bir nöron ve glia ağıdır. Bu protokol, Ca2+ görüntüleme kullanılarak ENS'nin canlı preparatlarında enterik nöronların ve glia'nın aktivitesini kaydetme yöntemlerini açıklar.

Enterik Sinir Sistemi Yerinde Ca 2+ Görüntüleme

Enterik sinir sistemi, bağırsağı çoğaltan, göç eden ve kolonize eden nöral krest hücreleri tarafından oluşturulur. Nöral krest hücreleri, nörotransmitter fenotiplerine özgü belirteçlerle nöronlara farklılaşır. Bu protokol, enterik sinir sistemi nörotransmitter ekspresyonunu görselleştirmek için murin embriyonik gastrointestinal sistemin diseksiyonu, sabitlenmesi ve immün boyanması için bir tekniği tanımlar.

Fare Enterik Sinir Sistemi Geliştirme gözünüzde canlandırın için immün

Bu makale, yetişkin farelerde kolonik motilitenin nöral regülasyonundaki değişiklikleri tanımlamak için bir video görüntüleme tekniği ve yüksek çözünürlüklü uzay-zamansal haritalamayı açıklamaktadır. Gastrointestinal (GI) fonksiyon üzerindeki ince etkiler, GI hastalığı hakkındaki anlayışımızı ilerletmek için izole doku preparatlarında bu yaklaşım kullanılarak tespit edilebilir.

Video Görüntüleme ve Spatiotemporal Haritalar Fare Gastrointestinal Motilite Analiz

Anormal duyusal fonksiyonu altında yatan visseral ağrı ve diğer semptomlar işlevsel ve enflamatuar barsak hastalıkları. Bir ex vivo sıçan colorectum hazırlık kolon afferent sinirlerin Elektrofizyolojik kayıt için bir protokol burada sunulmaktadır.

Vitro Sıçanlarda kolon Afferent liflerinin Elektrofizyolojik özellikleri karakterizasyonu

Burada, bağırsak submukoza divalent katyonlar ve enzimatik olmayan hücre kurtarma çözümü kuluçka şelasyon yapın için sıralı EDTA incubations kullanarak gliyal enterik hücre izolasyon açıklayın. Sonuç hücre süspansiyon poli-D-lizin ve laminin kaplama submucosal Gliyal hücreler fonksiyonel analiz için zenginleştirilmiş bir kültür sonuçlanır.

Submukoza ve Lamina Propria yetişkin fare enterik gliyal hücrelerini izolasyon

Keşfedin at bağırsaklarından enterik glial hücre izolasyonunu ve bu hücrelerin barsiyer fonksiyonu üzerindeki iltihabi etkilerini. Bu yöntem, kolik sonrası komplikasyonların önlenmesine yardımcı olur.

At Enterik Glial Kültürü ve At Kolikinde Nöral İnflamatuar Mekanizmanın Çalışmasına Uygulama

Daha fazla video keşfet