Name: Adeno-ilişkili virüs serotip 8 (AAV8) ile verilen küçük firkete RNAsının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde etkili gen yıkımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: Öğrenin, AAV8 ile verilen küçük firkete RNA'sının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde gen yıkımı için etkili bir yöntemdir. Bu teknik portal ven enjeksiyonuna göre daha basit ve daha az komplikasyonludur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Etkili ve Güvenli Karaciğer Geni Yıkımı için İntrasplenik AAV8-shRNA Enjeksiyonu

<ol><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenome-wide+analysis+of+aging+effects+on+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Epigenome-wide analysis of aging effects on liver regeneration.</a> BMC Biol. 21 (1), 30(2023).</li>
<li>Jindal, A., Jagdish, R. K., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+regeneration+in+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Exp+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatic regeneration in cirrhosis.</a> J Clin Exp Hepatol. 12 (2), 603-616 (2022).</li>
<li>Meng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+deletion+reveals+an+essential+mechanism+that+maintains+the+genomic+stability+of+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin deletion reveals an essential mechanism that maintains the genomic stability of stem and progenitor cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (28), 11415-11420 (2013).</li>
<li>Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aav-mediated+liver-directed+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Aav-mediated liver-directed gene therapy.</a> Methods Mol Biol. 807, 141-157 (2011).</li>
<li>Tenney, R. M., Bell, C. L., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV8+capsid+variable+regions+at+the+two-fold+symmetry+axis+contribute+to+high+liver+transduction+by+mediating+nuclear+entry+and+capsid+uncoating%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">AAV8 capsid variable regions at the two-fold symmetry axis contribute to high liver transduction by mediating nuclear entry and capsid uncoating.</a> Virology. 454-455, 227-236 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y., Mckay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nucleolar+mechanism+controlling+cell+proliferation+in+stem+cells+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A nucleolar mechanism controlling cell proliferation in stem cells and cancer cells.</a> Genes Dev. 16 (23), 2991-3003 (2002).</li>
<li>Tsai, R. Y., Meng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin%3A+A+latecomer+with+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin: A latecomer with new tricks.</a> Int J Biochem Cell Biol. 41 (11), 2122-2124 (2009).</li>
<li>Zhu, Q., Yasumoto, H., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+delays+cellular+senescence+and+negatively+regulates+trf1+protein+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin delays cellular senescence and negatively regulates trf1 protein stability.</a> Mol Cell Biol. 26 (24), 9279-9290 (2006).</li>
<li>Qu, J., Bishop, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+maintains+self-renewal+of+embryonic+stem+cells+and+promotes+reprogramming+of+somatic+cells+to+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin maintains self-renewal of embryonic stem cells and promotes reprogramming of somatic cells to pluripotency.</a> J Cell Biol. 197 (6), 731-745 (2012).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Li, Y., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-initiating+function+of+nucleostemin-enriched+mammary+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor-initiating function of nucleostemin-enriched mammary tumor cells.</a> Cancer Res. 70 (22), 9444-9452 (2010).</li>
<li>Maki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+accumulation+of+nucleostemin+in+nucleolus+during+newt+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Rapid accumulation of nucleostemin in nucleolus during newt regeneration.</a> Dev Dyn. 236 (4), 941-950 (2007).</li>
<li>Siddiqi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+induction+of+nucleostemin+in+response+to+postnatal+growth+and+pathological+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Myocardial induction of nucleostemin in response to postnatal growth and pathological challenge.</a> Circ Res. 103 (1), 89-97 (2008).</li>
<li>Lin, T., Ibrahim, W., Peng, C. -Y., Finegold, M. J., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+of+nucleostemin+in+maintaining+the+genome+integrity+of+dividing+hepatocytes+during+mouse+liver+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A novel role of nucleostemin in maintaining the genome integrity of dividing hepatocytes during mouse liver development and regeneration.</a> Hepatology. 58 (6), 2176-2187 (2013).</li>
<li>Shugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+in+injury-induced+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin in injury-induced liver regeneration.</a> Stem Cells Dev. 21 (16), 3044-3054 (2012).</li>
<li>Lin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+reveals+a+dichotomous+nature+of+genome+maintenance+in+mammary+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin reveals a dichotomous nature of genome maintenance in mammary tumor progression.</a> Oncogene. 38 (20), 3919-3931 (2019).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+modulates+outcomes+of+hepatocellular+carcinoma+via+a+tumor+adaptive+mechanism+to+genomic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin modulates outcomes of hepatocellular carcinoma via a tumor adaptive mechanism to genomic stress.</a> Mol Cancer Res. 18 (5), 723-734 (2020).</li>
<li>Crawford, M., Liu, X., Cheng, Y. L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+upregulation+and+stat3+activation+as+early+events+in+oral+epithelial+dysplasia+progression+to+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin upregulation and stat3 activation as early events in oral epithelial dysplasia progression to squamous cell carcinoma.</a> Neoplasia. 23 (12), 1289-1299 (2021).</li>
<li>Lin, T., Meng, L., Wu, L. J., Pederson, T., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleostemin+and+gnl3l+exercise+distinct+functions+in+genome+protection+and+ribosome+synthesis%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Nucleostemin and gnl3l exercise distinct functions in genome protection and ribosome synthesis, respectively.</a> J Cell Sci. 127 (10), 2302-2312 (2014).</li>
<li>Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+self-renewal+against+genome+preservation+in+stem+cells%3A+How+do+they+manage+to+have+the+cake+and+eat+it+too%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Balancing self-renewal against genome preservation in stem cells: How do they manage to have the cake and eat it too.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (9), 1803-1823 (2016).</li>
<li>Meng, L., Hsu, J. K., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gnl3l+depletion+destabilizes+mdm2+and+induces+p53-dependent+G2%2Fm+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gnl3l depletion destabilizes mdm2 and induces p53-dependent G2/m arrest.</a> Oncogene. 30 (14), 1716-1726 (2011).</li>
<li>Huang, G., Meng, L., Tsai, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+configures+the+G2%2Fm+arrest+response+of+nucleostemin-deficient+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">P53 configures the G2/m arrest response of nucleostemin-deficient cells.</a> Cell Death Discov. 1, e15060(2015).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Wu, L. J., Trinh, B., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IMPDH+inhibition+decreases+TERT+expression+and+synergizes+the+cytotoxic+effect+of+chemotherapeutic+agents+in+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">IMPDH inhibition decreases TERT expression and synergizes the cytotoxic effect of chemotherapeutic agents in glioblastoma cells.</a> Int J Mol Sci. 25 (11), 5992(2024).</li>
<li>Liu, X., Wang, J., Li, F., Timchenko, N., Tsai, R. Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+a+stem+cell+factor+nucleostemin+in+liver+regeneration+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of a stem cell factor nucleostemin in liver regeneration and aging.</a> PLoS One. 19 (9), e0310219(2024).</li>
<li>Mayra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+AAV9-shRNA+inhibits+target+expression+in+neonatal+skeletal+and+cardiac+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal AAV9-shRNA inhibits target expression in neonatal skeletal and cardiac muscles.</a> Biochem Biophys Res Commun. 405 (2), 204-209 (2011).</li>
<li>Cohen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus-mediated+shRNA+knockdown+of+prodynorphin+in+the+rat+nucleus+accumbens+attenuates+depression-like+behavior+and+cocaine+locomotor+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Virus-mediated shRNA knockdown of prodynorphin in the rat nucleus accumbens attenuates depression-like behavior and cocaine locomotor sensitization.</a> PLoS One. 9 (5), e97216(2014).</li>
<li>Jeon, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topbp1+deficiency+causes+early+embryonic+lethality+and+induces+cellular+senescence+in+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Topbp1 deficiency causes early embryonic lethality and induces cellular senescence in primary cells.</a> J Biol Chem. 286 (7), 5414-5422 (2011).</li>
<li>Smith, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+expression+of+therapeutic+plasma+levels+of+human+factor+IX+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated expression of therapeutic plasma levels of human factor IX in mice.</a> Nat Genet. 5 (4), 397-402 (1993).</li>
<li>Nakai, H., Iwaki, Y., Kay, M. A., Couto, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+recombinant+adeno-associated+virus+vector-cellular+DNA+junctions+from+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of recombinant adeno-associated virus vector-cellular DNA junctions from mouse liver.</a> J Virol. 73 (7), 5438-5447 (1999).</li>
<li>Jung, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viral+vector-mediated+gene+transfer+results+in+long-term+enzymatic+and+functional+correction+in+multiple+organs+of+Fabry+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viral vector-mediated gene transfer results in long-term enzymatic and functional correction in multiple organs of Fabry mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (5), 2676-2681 (2001).</li>
<li>Hurford, R. K., Dranoff, G., Mulligan, R. C., Tepper, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+metastatic+cancer+by+in+vivo+retroviral+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of metastatic cancer by in vivo retroviral gene targeting.</a> Nat Genet. 10 (4), 430-435 (1995).</li>
<li>Sarkar, R., Xiao, W., Kazazian, H. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+adeno-associated+virus+%28AAV%29-murine+factor+viii+vector+partially+corrects+the+hemophilia+a+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">A single adeno-associated virus (AAV)-murine factor viii vector partially corrects the hemophilia a phenotype.</a> J Thromb Haemost. 1 (2), 220-226 (2003).</li>
<li>Czekaj, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+intrasplenic+administration+of+human+amniotic+epithelial+cells+in+order+to+perform+safe+and+effective+cell-based+therapy+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for intrasplenic administration of human amniotic epithelial cells in order to perform safe and effective cell-based therapy for liver diseases.</a> Stem Cell Rev Rep. 20 (6), 1599-1617 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amicon filtre santrifüj üniteleri</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC9100</td><td>Hızlı ultrafiltrasyon</td></tr><tr><td>AV5-siRNA-GFP&nbsp;</td><td>Ekle&nbsp;</td><td>#124972</td><td>Plazmid</td></tr><tr><td>Yetkin DH5 & alfa; bakteri & nbsp;</td><td>Invitrogen</td> <td># 18265-017</td><td>Klonlama için kimyasal olarak yetkin suş &nbsp;</td></tr><tr><td>HpaI&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>R0105</td><td>Restriksiyon enzimi</td></tr><tr><td>iMFectin transfeksiyon reaktifi&nbsp;</td><td>GenDepot</td><td>I7100-101</td><td></td></tr><tr><td>M-MLV ters transkriptaz&nbsp;</td><td>Promega</td><td>M1708</td><td>RNA'ya bağımlı DNA polimeraz&nbsp;</td></tr><tr><td>MyiQ tek renkli gerçek zamanlı PCR tespit sistemi&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>BUN9740RAD</td><td>qRT-PCR</td></tr><tr><td>Omega endotoksin içermeyen kit&nbsp;</td><td>Bioteck</td><td>D6915-03</td><td>Plazmid DNA midi hazırlığı;</td></tr><tr><td>Rastgele heksamerler&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>48190-011</td><td></td></tr><tr><td>Supermix SYBR yeşil reaktifi&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1708882</td><td>Gerçek zamanlı PCR uygulamaları</td></tr><tr><td>T4 DNA Ligaz</td><td>Promega</td><td>M1801</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reaktifi&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15596-018</td><td>Yüksek kaliteli toplam RNA'nın izolasyonu</td></tr><tr><td>XhoI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0146</td><td>Kısıtlama enzimi</td></tr></tbody></table>

adeno-ilişkili virüs serotip 8 (aav8) ile verilen küçük firkete rna'sının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde etkili gen yıkımı

Efficient Gene Knockdown in the Liver via Intrasplenic Injection of Adeno-Associated Virus Serotype 8 (AAV8)-Delivered Small Hairpin RNA

Karaciğerde KD geninin intrasplenik vs. AAV8-shRNA'nın portal ven enjeksiyonu AAV8 viral stokları, mililitre başına (gc/mL) 2E+12 genom kopyası (gc) çalışma konsantrasyonuna seyreltildi. Bireysel farelere intrasplenik veya portal ven enjeksiyonu yoluyla 1E+11 gc AAV8-shNS1 veya AAV8-shScr (50 μL) enjekte edildi. Enjeksiyondan iki hafta sonra, RNA izolasyonu, 1st iplikli cDNA sentezi ve qPCR analizi için karaciğer dokuları toplandı. Sonuçlar, intrasplenik enjeksiyon yönteminin, iç referans olarak Rsp3 ± Rplp0 kullanılarak portal ven enjeksiyon yöntemiyle (.3 ± %3.6) istatistiksel olarak aynı NSKD verimliliğine ( .8 %4.4) ulaştığını gösterdi (Şekil 2). Daha da önemlisi, intrasplenik enjeksiyon prosedürü 15 dakika içinde tamamlanabilir ve prosedürden neredeyse hiç ölüm olmazken, portal ven enjeksiyon yöntemi normalde çok fazla pratikle 25-30 dakika gerektirir ve daha yüksek bir mortalite oranı ile ilişkilendirilmiştir (~% 25 -% 30 mortalite oranı).
Doku inflamatuar yanıtı Karaciğer dokuları, portal ven enjeksiyonu veya intrasplenik AAV8-shScr (Şekil 3A) veya AAV8-shNS1 (Şekil 3B) enjeksiyonu alan farelerden toplandı ve kontrol farelerininkiyle karşılaştırıldı (Şekil 3C). İnflamatuar reaksiyonlar H&amp;E boyama4 ile incelendi. Sonuçlar, ne AAV8-shScr ne de AAV8-shNS1'in, intrasplenik enjeksiyon (Spl) veya portal ven enjeksiyonu (PV) yöntemi ile enjekte edilen PBS'ye kıyasla karaciğer parankiminde kayda değer inflamatuar reaksiyonlar ortaya çıkarmadığını gösterdi (Şekil 3A-C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig01.jpg"> 
Şekil 1: AAV8-shRNA tasarımı ve intrasplenik enjeksiyon prosedürünün çizimleri. (A) (Üst) İn vivo knockdown deneyleri için adeno ilişkili virüs serotip 8 (AAV8) yapmak üzere tasarlanmış AV5-siRNA-GFP plazmitinin diyagramı. AV5-siRNA-GFP, bir CMV promotörü güdümlü shRNA dizisi ve EGFP içerir. (Altta) Fare NS'sinde (shNS1) 21 nükleotid dizilerini veya şifreli 21 nükleotid dizisini (Scr) hedeflemek için tasarlanmış küçük firkete RNAi yapıları. (B) İntrasplenik AAV8 enjeksiyon prosedüründe şematik bir iş akışı diyagramı. (C) Cerrahi prosedürün adım adım görünümleri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig02.jpg"> 
Şekil 2: İntrasplenik ve portal ven enjeksiyonu yoluyla karaciğerdeki nükleosteminin (NS) AAV8-shRNA aracılı yıkımının verimlilikleri. AAV8-shScr veya AAV8-shNS1'in intrasplenik (Spl) veya portal ven (PV) enjeksiyonunu aldıktan 2 hafta sonra farelerden toplanan karaciğer örneklerinde NS ekspresyonunun qRT-PCR testleri11 gc. Grafikler, Rps3 (A) ve Rplp0 (B) olmak üzere iki dahili kontrole atıfta bulunan sonuçları gösterir. Çubuklar, her biri üç PCR teknik tekrarına sahip dört biyolojik replikanın ortalama ± SEM'ini gösterir; *p &lt; 0.01; **p &lt; 0,001; p &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67376/67376fig03.jpg"> 
Şekil 3: PBS, AAV8-shScr veya AAV8-shNS1'in intrasplenik enjeksiyonu veya portal ven enjeksiyonu sonrası karaciğer dokularının histolojisi. AAV8-shScr (A) veya AAV8-shNS1 (B)'nin intrasplenik enjeksiyonu (Spl) veya portal ven enjeksiyonundan (PV) 2 hafta sonra, kontrol AAV8 enjeksiyonu yapılmamış numunelere (C) kıyasla karaciğer dokularının H&amp;E boyanması. Ölçek çubukları: 100 μm. Sağ paneller, sol panellerdeki iç kısımların büyütülmüş görünümlerini gösterir. Ölçek çubukları: 50 μm. Her grupta iki farklı hayvandan altı ila dokuz kesit incelendi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67376/67376fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Adeno-ilişkili virüs serotip 8 (AAV8) ile verilen küçük firkete RNA'sının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde etkili gen yıkımı

The liver is a major organ that performs essential metabolic functions. Developing an efficient and safe method to knock down gene expression in the liver ...

efficient-gene-knockdown-liver-via-intrasplenic-injection-adeno

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu makalede, insan karaciğer kanser hücrelerini hedef için en verimli bir vektör olarak adeno-ilişkili virüs serotip 3 (AAV3) tanımlanması için.

Rekombinant Adeno Associated Virus serotip 3 Vektörler Karaciğer Kanseri Hücreleri Yüksek Verimlilik İletimi

Biz, moleküler DNA aile karıştırma yoluyla sentetik Adeno ilişkili viral (AAV) gen tedavisi vektörleri mühendisi ve gelişmeye temel tekniği göstermek. Ayrıca, biz seçimi ve kültür veya farelerde hedef hücreler üzerinde gelişmiş özellikleri ile bireysel kimerik capsids analizi için genel kurallar ve temsili örnekler sunuyor.

DNA Aile karıştırma ile Mühendislik ve Sentetik adeno-ilişkili virüs Evrimi (AAV) Gen Terapisi Vektörler

RNA müdahalesi (RNAi) gen nakavt üzerinden pek çok avantajı sahip ve geniş gen işlevsel çalışmalarda bir araç olarak kullanılmıştır. DNA vektör tabanlı RNAi teknolojisi buluşu uzun vadeli ve olası indüklenebilir gen Knockdown yaptı, hem de gen susturulması fizibilite...

Kanser gen Fonksiyon Eğitim için DNA vektör tabanlı RNA Girişim

Bu videoda, ölümsüzleştirilmiş hematopoietik kök ve progenitör hücrelerde (iHSPC'ler) stabil knockdown hücre hatları elde etmek için shRNA lentiviral vektörlerinin transdüksiyonunu gerçekleştirmek için bir yöntem gösteriyoruz.

İn Vitro iHSPC'lerde Kısa Saç Tokası RNA Aracılı Gen Yıkımı: Spesifik Gen Ekspresyonunun Yıkılması için iHSPC'lere Lentivirus Tabanlı Bir shRNA Ekspresyon Sistemi Teslimatı

Bu videoda, fare yavrusunda rekombinant adeno ilişkili virüs bazlı gen iletimini gösteriyoruz. Bu yöntem, hedeflenen hücrelerde gen ekspresyonunun incelenmesine yardımcı olur.

Rekombinant Adeno İlişkili Virüs Temelli Gen Dağıtımı: Kemirgen Modelinde Transgen Teslimi ve Kardiyak Spesifik İfade İçin Bir Teknik

Bu makalede, fare kalbindeki gen ekspresyonunu manipüle etmek için rekombinant adeno-ilişkili virüs 9 (rAAV9) vektörlerini hazırlamak için bir yöntem açıklanmaktadır.

Fare Kalpler eksprese rAAV9 hazırlanması veya demonte Genler

Burada bir rekombinant adeno ilişkili virüs serotip 9 nöromuskuler hastalık bir fare model kullanma mikroRNA teslimini açıklayın. Sürekli miRNA overexpression kas ve motor nöronlar, bir fırsat çalışma miRNA işlevi ve tedavi edici potansiyel içinde vivosağlayan bir tek çevresel yönetim farelerde sonuçlandı.

Kemirgen nöromusküler hastalıkları tedavi etmek için rekombinant Adeno ilişkili virüs serotip 9 kullanarak mikroRNA sistemik teslim

Kolorektal kanser (KRK) organoidlerinin portal ven enjeksiyonu stroma bakımından zengin karaciğer metastazı oluşturur. CRC hepatik metastazının bu fare modeli, tümör-stroma etkileşimlerini incelemek ve adeno ilişkili virüs aracılı gen terapileri gibi yeni stroma yönelimli terapötikler geliştirmek için yararlı bir araçtır.

Karaciğer Metastazı Stromasını İncelemek için Kolorektal Kanser Organoidlerinin Portal Ven Enjeksiyonu

Burada, yetişkin farelerde adeno-ilişkili virüsü (AAV) sistemik olarak uygulamak için fare lateral kuyruk veni enjeksiyonu için optimize edilmiş bir protokolü detaylandırıyoruz. Ek olarak, AAV transdüksiyonunu değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan tahlillerin protokollerini açıklıyoruz.

Yetişkin farelerde lateral kuyruk veni enjeksiyonu yoluyla adeno ilişkili virüsün tutarlı bir şekilde verilmesi

Bu rapor, fare böbreğine etkili ve güvenli gen transferi için renal pelvis yoluyla AAV vektörlerinin lokalize enjeksiyon yöntemini detaylandırmaktadır.

Adeno ilişkili virüs vektörlerinin yavaş retrograd renal pelvis enjeksiyonu yoluyla fare böbreğine etkili ve güvenli gen iletimi

Öğrenin, AAV8 ile verilen küçük firkete RNA'sının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde gen yıkımı için etkili bir yöntemdir. Bu teknik portal ven enjeksiyonuna göre daha basit ve daha az komplikasyonludur.

Adeno-ilişkili virüs serotip 8 (AAV8) ile verilen küçük firkete RNAsının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde etkili gen yıkımı (Video) | JoVE Journal

Adeno-ilişkili virüs serotip 8 (AAV8) ile verilen küçük firkete RNA'sının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde etkili gen yıkımı

Daha fazla video keşfet