Name: Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerin Anormal Büyüme ile İlgili Genlerinin CRISPR/Cas9 Teknolojisi ile Hücre Sayımı ile Birleştirilerek Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Keşfedin, CRISPR/Cas9 ve CCK-8 hücre sayımı yöntemlerini birleştirerek hematopoetik kök ve progenitör hücrelerde anormal proliferasyona neden olan genleri nasıl belirleyebilirsiniz. Bu protokol lösemi patogenezinde yeni ilaç hedefleri keşfetmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo.</a> Nat Rev Genet. 21 (9), 541-554 (2020).</li>
<li>Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cells%3A+Concepts%2C+definitions%2C+and+the+new+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cells: Concepts, definitions, and the new reality.</a> Blood. 125 (17), 2605-2613 (2015).</li>
<li>Seita, J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell%3A+Self-renewal+versus+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell: Self-renewal versus differentiation.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 2 (6), 640-653 (2010).</li>
<li>Vetrie, D., Helgason, G. V., Copland, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+leukaemia+stem+cell%3A+Similarities%2C+differences+and+clinical+prospects+in+cml+and+aml%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The leukaemia stem cell: Similarities, differences and clinical prospects in cml and aml.</a> Nat Rev Cancer. 20 (3), 158-173 (2020).</li>
<li>Chopra, M., Bohlander, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+of+origin+and+the+leukemia+stem+cell+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Chromosomes+Cancer%22%5BJournal%5D)">The cell of origin and the leukemia stem cell in acute myeloid leukemia.</a> Genes Chromosomes Cancer. 58 (12), 850-858 (2019).</li>
<li>Cox, C. V., Diamanti, P., Evely, R. S., Kearns, P. R., Blair, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CD133+on+leukemia-initiating+cells+in+childhood+all%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Expression of CD133 on leukemia-initiating cells in childhood all.</a> Blood. 113 (14), 3287-3296 (2009).</li>
<li>González-García, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-7R+is+essential+for+leukemia-initiating+cell+activity+of+T-cell+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">IL-7R is essential for leukemia-initiating cell activity of T-cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 134 (24), 2171-2182 (2019).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-rna-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-rna-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Porteus, M. H., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+nucleases+stimulate+gene+targeting+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Chimeric nucleases stimulate gene targeting in human cells.</a> Science. 300 (5620), 763-763 (2003).</li>
<li>Wang, S. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+and+future+perspective+of+CRISPR%2FCas9+gene+editing+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Current applications and future perspective of CRISPR/Cas9 gene editing in cancer.</a> Mol Cancer. 21 (1), (2022).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIT-Cas9%3A+A+CRISPR%2Fcas9+genome-editing+device+under+tight+and+effective+drug+control%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">HIT-Cas9: A CRISPR/cas9 genome-editing device under tight and effective drug control.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 13, 208-219 (2018).</li>
<li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nat Protoc. 12 (4), 828-863 (2017).</li>
<li>Kühn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+gene+targeting+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Inducible gene targeting in mice.</a> Science. 269 (5229), 1427-1429 (1995).</li>
<li>Arnheiter, H., Skuntz, S., Noteborn, M., Chang, S., Meier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+with+intracellular+immunity+to+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice with intracellular immunity to influenza virus.</a> Cell. 62 (1), 51-61 (1990).</li>
<li>Randall, T. D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+changes+induced+at+the+clonal+level+in+hematopoietic+stem+cells+after+5-fluorouracil+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional changes induced at the clonal level in hematopoietic stem cells after 5-fluorouracil treatment.</a> Blood. 89 (10), 3596-3606 (1997).</li>
<li>Gavrilescu, L. C., Van Etten, R. A. Murine retroviral bone marrow transplantation models for the study of human myeloproliferative disorders. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGavrilescu%2C+LC+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 14 (Unit 14.10), (2008).</li>
<li>Pinello, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+CRISPR+genome-editing+experiments+with+CRISPResso%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Analyzing CRISPR genome-editing experiments with CRISPResso.</a> Nat Biotechnol. 34 (7), 695-697 (2016).</li>
<li>Cai, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+long+noncoding+RNA+CRISPRi+screen+identifies+PRANCR+as+a+novel+regulator+of+epidermal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">A genome-wide long noncoding RNA CRISPRi screen identifies PRANCR as a novel regulator of epidermal homeostasis.</a> Genome Res. 30 (1), 22-34 (2020).</li>
<li>Ng, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-mediated+modeling+and+functional+validation+of+candidate+tumor+suppressor+genes+in+small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">CRISPR-mediated modeling and functional validation of candidate tumor suppressor genes in small cell lung cancer.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 117 (1), 513-521 (2020).</li>
<li>Crowther, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR-Cas9+screening+reveals+ubiquitous+T+cell+cancer+targeting+via+the+monomorphic+MHC+class+i-related+protein+MR1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR-Cas9 screening reveals ubiquitous T cell cancer targeting via the monomorphic MHC class i-related protein MR1.</a> Nat Immunol. 21 (2), 178-185 (2020).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+labeling+of+genomic+loci+with+dCas9+and+engineered+sgRNAs+using+CRISPRainbow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed labeling of genomic loci with dCas9 and engineered sgRNAs using CRISPRainbow.</a> Nat Biotechnol. 34 (5), 528-530 (2016).</li>
<li>Szlachta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+knockout+screening+identifies+combinatorial+drug+targets+in+pancreatic+cancer+and+models+cellular+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">CRISPR knockout screening identifies combinatorial drug targets in pancreatic cancer and models cellular drug response.</a> Nat Commun. 9 (1), 4275(2018).</li>
<li>Baeten, J. T., Liu, W., Preddy, I. C., Zhou, N., Mcnerney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crispr+screening+in+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+reveals+an+enrichment+for+tumor+suppressor+genes+within+chromosome+7+commonly+deleted+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Crispr screening in human hematopoietic stem and progenitor cells reveals an enrichment for tumor suppressor genes within chromosome 7 commonly deleted regions.</a> Leukemia. 36 (5), 1421-1425 (2022).</li>
<li>Korkmaz, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genetic+screens+for+enhancer+elements+in+the+human+genome+using+crispr-cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Functional genetic screens for enhancer elements in the human genome using crispr-cas9.</a> Nat Biotechnol. 34 (2), 192-198 (2016).</li>
<li>Heckl, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+mouse+models+of+myeloid+malignancy+with+combinatorial+genetic+lesions+using+CRISPR-Cas9+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Generation of mouse models of myeloid malignancy with combinatorial genetic lesions using CRISPR-Cas9 genome editing.</a> Nat Biotechnol. 32 (9), 941-946 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 &mu; m mikrofiltrasyon membranı</td><td>Sartoriu</td><td>16533K-1</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL EP tüp</td><td>LABLEAD</td><td>MCT-150-CLD-1</td><td></td></tr><tr><td>10 cm çanak</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tüp</td><td>LABLEAD</td><td>LXG1500</td><td></td></tr><tr><td>1 mL steril şırınga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2x Doğru Taq Master Mix (boya artı)</td><td>Koloni</td><td></td><td>PCR için Doğru Biyoloji AG11010</td></tr><tr><td>50 mL Tüp</td><td>LABLEAD</td><td>LXG5000</td><td></td></tr><tr><td>5-Fluorourasil</td><td>Sigma</td><td>F6627-1</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plaka</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>70 & mikro; m hücreli elek</td><td>Falcon&reg;</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu plakalar</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lizis Tamponu</td><td>Leagene</td><td>CS0001</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>BIODEE</td><td>DE0010</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>Solarbio</td><td>A8180</td><td></td></tr><tr>PCR <td>Thermofisher</td><td></td><td></td>Hücre Sayma Kiti-8 Bimake B34304<td>için Uygulamalı Biyosistemler Termal Döngüleyiciler</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>eppendorf</td><td>Santrifüj 5810R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 İnkübatör</td><td>Termo BİLİMSEL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>DNA Temiz ve Yoğunlaştırıcı-5</td><td>ZYMO</td><td>D4014</td><td></td></tr><tr><td>Dneasy Kan & Tissure Kiti</td><td>Qiagen</td><td>69504</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I (BsmbI)</td> <td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>ExCell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prizma 9.3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK-293T</td><td>ATCC; Virginia, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEPE'ler</td><td>Sigma</td><td>V900477</td><td></td></tr><tr><td>KOD-Plus-Neo</td><td>TOYOBO</td><td>KOD-401</td><td></td></tr><tr><td>lentiGuide-Puro</td><td>Addgene</td><td>52963</td><td>omurga vektörü</td></tr><tr><td>LSL-Cas9 fareler</td><td>Model Hayvan Araştırma Merkezi NANJING ÜNİVERSİTESİ&nbsp;</td><td></td><td></td>T002249</tr><tr><td>mikroplaka absorbans spektrofotometresi</td><td>BIO-RAD</td><td>xMark&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Nacl</td><td>Rhawn</td><td>R019772</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>P1003</td><td></td></tr><tr><td>PEI</td><td>Proteintech</td><td>B600070</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin Çözeltisi, 100x</td><td>Solarbio</td><td>P1400</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G plazmid</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>polibren</td><td>Beyotime</td><td>C0351</td><td></td></tr><tr><td>Poliinosinik-polisitidlik asit sodyum tuzu</td><td>Sigma</td><td>P1530</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR Arıtma Kiti ve nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>RekombinantMurineIL-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13-10ug</td><td></td></tr><tr><td>RekombinantMurineIL-6</td><td>Peprotech</td><td>216-16-2ug</td><td></td></tr><tr><td>RekombinantMurineSCF</td><td>Peprotech</td><td>250-03-10ug</td><td></td></tr><tr><td>Düzenli agaroz</td><td>BIOWEST</td><td>BY-R0100</td><td></td></tr><tr><td>Karides Alkalin Fosfataz (rSAP)</td><td>NEB</td><td>M0371S</td><td></td></tr><tr><td>SpectraMax QuickDrop Ultra-Mikro Spektrofotometre</td><td>MOLEKÜLER CIHAZLAR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stbl3 Yetkili hücreler</td><td>BioMed</td><td>BC108-01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>T4 Polinükleotid Kinaz</td><td>NEB</td><td>M0201L</td><td></td></tr><tr><td>T4-Ligaz</td><td>Takara</td><td>2011B</td><td></td></tr><tr><td>TIANprep Hızlı Mini Plazmid Kiti</td><td>TIANGEN</td><td>DP105-03</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi çözeltisi</td><td>LABLEAD</td><td>C0040-100ml</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tripton</td><td>OKSOİD</td><td>LP0042</td><td></td></tr><tr><td>WEHI-CM</td><td>Nanjing Fuksai Biyoteknoloji &</td><td></td><td></td>CBP50079</tr><tr><td>MAYA ÖZÜ</td><td>OXOID</td><td>LP0021</td><td></td></tr></tbody></table>

hematopoetik kök ve progenitör hücrelerin anormal büyüme ile İlgili genlerinin crispr/cas9 teknolojisi ile hücre sayımı ile birleştirilerek değerlendirilmesi

Evaluation of Abnormal Growth-related Genes of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Combining CRISPR/Cas9 Technology with Cell Counting

Trp53 nakavtının fare HSPC'lerinin proliferatif kapasitesi üzerindeki etkisi Burada, bu protokolü göstermek için örnek olarak Trp53 knockout kullandık. Trp53 nakavtının fare HSPC'lerinin proliferatif kapasitesi üzerindeki etkisini araştırmak için, 5-FU tedavisinden sonra HSPC'ler için zenginleştirilmiş Cas9 eksprese eden kemik iliği hücrelerine Trp53 sgRNA'yı sokmak için lentiviral transfeksiyon kullandık. Eşzamanlı olarak, ilgisiz...

Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerin Anormal Büyüme ile İlgili Genlerinin CRISPR/Cas9 Teknolojisi ile Hücre Sayımı ile Birleştirilerek Değerlendirilmesi

Hematopoietic stem cells possess the ability for long-term self-renewal and the potential to differentiate into various types of mature blood cells. ...

evaluation-abnormal-growth-related-genes-hematopoietic-stem

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

CRISPR/Cas9 kullanarak hedeflenen gen düzenleme büyük ölçüde anlayış genlerin biyolojik fonksiyonların kolaylaştırdı. Burada, biz oncogenic faaliyetlerini incelemek için model calreticulin mutasyonların sitokin bağımlı hematopoetik hücreler için CRISPR/Cas9 metodoloji kullanmaktadır.

CRISPR/Cas9 kullanarak Gene sitokin bağımlı hematopoetik hücreler Mutant Calreticulin Oncogenic etkinliğini araştırmak için düzenleme

Bir iletişim kuralı için hızlı fare CRISPR/Cas9-aracılı gene bozulma ve insan birincil hematopoetik hücreler bu makalede açıklanan. Cas9-sgRNA ribonucleoproteins elektroporasyon ile vitro transkripsiyon ve ticari Cas9 ile oluşturulan sgRNAs ile tanıtılmaktadır. Yüksek Düzenleme verimliliği sınırlı zaman ve maliyet ile elde edilir.

Fare ve insan hematopoetik progenitör hücre tarafından CRISPR/Cas9 yüksek verimli Gene bozulma

Bu el yazması için basit ve ivedi soruşturma akut miyeloid lösemi (AML) hücre çoğalması içinde birden çok aday genlerin rolünün bir kümelenmiş düzenli olarak Interspaced kısa palindromik yineler (CRISPR) CRISPR-Cas9-tabanlı yöntemi açıklar paralel. Bu teknik ölçeklenebilir ve de diğer kanser hücre hatlarında uygulanabilir.

CRISPR-Cas9-tabanlı rekabet deneyleri kullanarak genetik bağımlılıkları incelenmesi

CRISPR/sgRNA Kütüphane protein kodlayıcı genlerin sorguya için uygulanmıştır. Ancak, işlev bir CTCF sınır gen düzenlemesi içinde ortaya çıkarmak için bir sgRNA kitaplığı fizibilite keşfedilmemiş kalır. Burada, CTCF sınırları içinde HOX loci fonksiyon aydınlatmak için HOX loci belirli sgRNA Kütüphane açıklayın.

HOX Loci odaklı CRISPR/sgRNA Kütüphane eleme tanımlayan kritik CTCF sınırları

Hematopoetik kök ve ata hücrelerinin (HSPC) CRISPR/Cas9 sistemi tarafından hematopoetik sisteme özgü gen modifikasyonları ile fare model sistemlerini hızla geliştirmek için yüksek verimli genom düzenlemesi için protokoller tanımlanmıştır.

Hastalık Modellerinde Hematopoetik Hücrelerin İncelemi için Lentiviral CRISPR/Cas9-Aracılı Genom Düzenleme

Önceden monte edilmiş Cas9/guide RNA ribonükleoprotein komplekslerinin doğrudan teslimi hematopoetik hücrelerde genom düzenleme için hızlı ve etkili bir araçtır. Burada, bir RUNX1 intronic susturucu silmek ve OCI-AML3 lökemik hücrelerde transkripsiyonel yanıtları incelemek için bu yaklaşımı kullanır.

Akut Miyeloid Lösemi Hücrelerinde CRISPR/Cas9 Ribonükleoprotein ile RUNX1 Intronic Susturucunun Transkripsiyonel Rolünün İncelendirin

Mevcut protokol, gen düzenlenmiş hücrelerin in vivo olarak sağlam bir şekilde aşılanması için optimize edilmiş bir hematopoetik kök ve progenitör hücre (HSPC) kültür prosedürünü tanımlamaktadır.

CRISPR/Cas9 Gen Tedavisi Uygulamaları için Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerin Gen Düzenlemesi

Hematopoetik kök hücre biyolojisini ve hematolojik maligniteleri daha iyi incelemek için hematopoetik kök ve progenitör hücrelerdeki (HSPC'ler) somatik mutasyonları sadık bir şekilde modellemek için yeni stratejiler gereklidir. Burada, CRISPR / Cas9 kullanımını ve çift rAAV donör transdüksiyonunu birleştirerek HSPC'lerde heterozigot fonksiyon kazancı mutasyonlarını modellemek için bir protokol açıklanmaktadır.

İnsan Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerinde Onkojenik Heterozigot Fonksiyon Kazancı Mutasyonlarının Mühendisliği

Sunulan yöntem, yüksek verimli bir lentiviral aracılı gen dağıtım sistemi kullanarak L2HGDH genini hedefleyen sgRNA'ları kararlı bir şekilde ifade eden insan embriyonik kök hücre (hESC) hattı H9'da CRISPR aracılı bir gen nakavtının oluşturulmasını açıklar.

Besleyicisiz Koşullar Altında Kültürlenen İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinde CRISPR-Cas9 Aracılı Gen Delesyonuna

Birincil CAR T hücreleri için optimize edilmiş bir CRISPR-Cas9 knockout tarama protokolü geliştirdik. Enzimatik sindirim ve sgRNA kaseti çekilmesiyle gDNA taşınmasını azaltarak, bu yaklaşım PCR artefaktlarını en aza indirerek doğru sgRNA tespitini ve fonksiyonel gen hedeflerinin sağlam tanımlanmasını sağlar.

CAR T Hücrelerinde CRISPR-Cas9 Ekranlarının İyileştirmesi: Kütüphane Hazırlığı için Geliştirilmiş Bir Yöntem

Keşfedin, CRISPR/Cas9 ve CCK-8 hücre sayımı yöntemlerini birleştirerek hematopoetik kök ve progenitör hücrelerde anormal proliferasyona neden olan genleri nasıl belirleyebilirsiniz. Bu protokol lösemi patogenezinde yeni ilaç hedefleri keşfetmeye yardımcı olur.

Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerin Anormal Büyüme ile İlgili Genlerinin CRISPR/Cas9 Teknolojisi ile Hücre Sayımı ile Birleştirilerek Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal

Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerin Anormal Büyüme ile İlgili Genlerinin CRISPR/Cas9 Teknolojisi ile Hücre Sayımı ile Birleştirilerek Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet