Name: Kanser İmmünoterapisi için mRNA Kullanarak Geçici Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Oluşturmak İçin Viral Olmayan Bir Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Öğrenin, kanser immünoterapisi için viral olmayan mRNA yöntemiyle geçici kimerik antijen reseptörü T hücreleri nasıl üretilir ve sitotoksik fonksiyonları nasıl değerlendirilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>7-AAD canlılık boyası&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Novocyte akış sitometresi</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V ortamı</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC keçi anti-insan IgG F (ab') 2 antikoru</td><td>Jackson İmmünoAraştırma Laboratuvarları</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>BglII Kısıtlama Enzimi</td><td>New England BioLabs (NEB)</td> <td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3 akut, -O-Me-m7G (5 ') ppp (5 ') G RNA Kapak Yapısı Analog</td><td>NEB</td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads İnsan T-Aktivatör CD3 / CD28 boncuk</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plaka 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe SP6 RNA Sentez Kiti</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>İnsan IL-2 Rekombinant Protein</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Milenyum RNA İşaretleyicileri</td><td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Monarch RNA Temizleme Kiti (500 &mu; g)</td> <td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Metilpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfeksiyon Aleti</td><td>İnvitrojen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>Neon Transfeksiyon Sistemi 100-&mu; L Kit</td><td>İnvitrojen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (%0,05), fenol kırmızısı</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Fenol:Kloroform:İzoamil Alkol (25:24:1, h/h)</td><td>Canlandırıcı</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigence Gerçek Zamanlı Hücre Analizi (RTCA) cihazı</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II Plazmid Midiprep Kiti</td><td>Zymo Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

kanser İmmünoterapisi için mrna kullanarak geçici kimerik antijen reseptörü t hücreleri oluşturmak İçin viral olmayan bir yaklaşım

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

İnsanlaştırılmış anti-HER2 fare monoklonal antikoru (mAb) 4D547'den türetilen bir scFv, bir transmembran bölgesi ve hücre içi bir 4-1BB kostimülatör alanı ve ardından CD3ζ aktivasyon alanı içeren ikinci nesil HER2 hedefli bir CAR oluşturduk (Şekil 1A). CAR'ı kodlayan DNA dizisi, CAR mRNA'nın in vitro transkripsiyonunu sürmek için bir 5' SP6 promotörü içeriyordu (Şekil 1B). CAR mRNA'nın uzunluğu yaklaşık 2 kb idi ve bu jel elektro...

Kanser İmmünoterapisi için mRNA Kullanarak Geçici Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Oluşturmak İçin Viral Olmayan Bir Yaklaşım

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

a-nonviral-approach-to-generate-transient-chimeric-antigen-receptor-t

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretilmesi için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. İnsan T hücreleri, anti-CD3 ve anti-CD28 antikorları ile kaplanmış manyetik boncuklar ve interlökin-2 (IL-2) ile takviye edilmiş bir ortam ile inkübe edilir ve bu da T hücresi aktivasyonuna ve çoğalmasına yol açar. Transgenik RNA'nın konakçı genomuna entegre olmasına ve transgeni eksprese etmesine izin veren transgenik lentiviral vektörler tanıtılır. Bu, transdüksiyona...

Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Üretmek için Ex Vivo Bir Teknik

Bu videoda, tümör antijenine özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretimi için bir teknik gösterilmektedir. Transgenik RNA taşıyan retroviral vektörler, T hücresi sağkalımını ve proliferasyonunu teşvik etmek için interlökin-2 ile takviye edilmiş bir ortamda dalak hücreleri ile karıştırılır. Karışım daha sonra rekombinant insan fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir plakaya aktarılır ve virüsün hücre ile füzyonunu kolaylaştırmak için santrifüjlenir, bu da RNA'nın...

Tümöre özgü kimerik antijen reseptör T hücreleri oluşturmak için bir ex vivo teknik

Bu video, retroviral transdüksiyon yoluyla antijene özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri oluşturmak için bir tekniği göstermektedir. Aktive edilmiş murin CD8 + T hücreleri, rekombinant fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir mikrokuyu plakasına eklenir. Antijene özgü bir kimerik antijen reseptörünü (CAR) kodlayan transgenik RNA içeren retroviral vektörler daha sonra sokulur ve transdüksiyonu kolaylaştırmak için plaka santrifüjlenir. İnkübasyondan sonra, transdüksiyon hücreleri...

Antijene Özgü CAR T Hücrelerinin Üretilmesi için Bir Teknik

Geçerli protokol birleştiren tek hücre insan TCR alpha ve beta zinciri sıralama ile eşleştirilmiş retroviral vektörler vitro ve in vivo TCR ifade ile uyumlu nesil aerodinamik.

Tek hücre TCR yalıtım ve üretme-in Vitro için Retroviral Vektörler ve In Vivo ifade insan TCRs aerodinamik

Biz güvenilir şemerik antijen reseptörü oluşturmak için bir yaklaşım tarif (CAR) T hücreleri ve in vitro ve in vivo onların farklılaşma ve fonksiyon test.

İmal İmmünoterapi için İmkanerik Antijen Reseptör (CAR) T Hücreleri

Bu protokol, klinik olarak mevcut bir platformla kimerik antijen reseptörlerini in vivo olarak eksprese etmek için genetik olarak tasarlanmış T hücrelerini invaziv olmayan bir şekilde izleme metodolojisini açıklamaktadır.

Kimerik Antijen Reseptör T Hücrelerinin [18F]Tetrafloroborat Pozitron Emisyon Tomografisi/Bilgisayarlı Tomografi ile Dinamik Görüntülenmesi

Bu makale, klinik kullanım için kimerik antijen reseptörü T hücreleri için, özellikle viral transdüksiyon ve T hücrelerinin kültivasyonunu gerçekleştirebilen otomatik bir hücre işlemcisi kullanarak üretim sürecini detaylandırmaktadır. Erken aşama bir klinik araştırmanın süreç geliştirme ve uygulaması sırasında göz önünde bulundurulması gereken önerilerde bulunuyor ve tuzakları açıklıyoruz.

Otomatik Hücre İşlemcisinde Kimerik Antijen Reseptörü T Hücresi Üretimi

Bu protokol, retroviral vektör üretimini ve murin T hücresi transdüksiyonunu kolaylaştırarak fare CAR-T hücrelerinin verimli bir şekilde üretilmesini kolaylaştırır.

Murin kimerik antijen reseptörü (CAR)-T hücrelerinin verimli üretimi

Bu protokol, insan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücreleri (CAR Treg'ler) oluşturmak ve test etmek için kolaylaştırılmış bir iş akışı sağlar.

İnsan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücrelerinin üretimi

Homoloji aracılı uç birleştirme (HMEJ) DNA onarım yolu yoluyla birincil insan T hücrelerinde büyük, multisistronik yapıların yüksek verimli hedefli knock-in'ini elde etmek için CRISPR / Cas9 teknolojisini kullanmak için ayrıntılı bir protokol sağlanmıştır. Bu cGMP'ye uyarlanabilir protokolle tasarlanan T hücreleri, mükemmel hücre genişlemesi, sitotoksisite ve sitokin üretimini korur.

Büyük DNA Şablonlarının Homoloji Aracılı Uç Birleştirme Hedefli Entegrasyonu Yoluyla Birincil İnsan T Hücrelerinin Viral Olmayan Mühendisliği

Bu protokol, birincil T hücrelerinin yetiştirilmesi için temel adımları tanımlar; bunların izolasyonu, aktivasyonu, genişlemesi ve mRNA elektroporasyonu ile geçici transfeksiyonu dahildir. Ayrıca, fenotip, aktivasyon belirteçleri, canlılık ve kimerik antijen reseptörü (CAR) ekspresyonunun akış sitometrik analizi için bir iş akışı ve antikor paneli önerilmektedir.

Birincil insan T hücrelerinin izolasyonu, yetiştirilmesi ve geçici transfeksiyonu için kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri üretmek

Öğrenin, kanser immünoterapisi için viral olmayan mRNA yöntemiyle geçici kimerik antijen reseptörü T hücreleri nasıl üretilir ve sitotoksik fonksiyonları nasıl değerlendirilir.

Kanser İmmünoterapisi için mRNA Kullanarak Geçici Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Oluşturmak İçin Viral Olmayan Bir Yaklaşım (Video) | JoVE Journal

Kanser İmmünoterapisi için mRNA Kullanarak Geçici Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Oluşturmak İçin Viral Olmayan Bir Yaklaşım

Daha fazla video keşfet