Name: Zebra balıklarında düşük eksprese edilen proteinleri görselleştirmek için floresan etiketleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Öğrenin, Danio rerio larvalarında düşük eksprese edilen proteinleri floresan etiketleme ile görselleştirme yöntemini. Bu protokol, bağışçı yapılandırma sürecini basitleştirerek protein araştırmalarında değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>CRISPR/Cas9 Knock-In Kullanılarak Zebra Balığı Larvalarında Floresan Protein Etiketleme

<ol><li>Brittijn, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+development+and+regeneration%3A+new+tools+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish development and regeneration: new tools for biomedical research.</a> Int J Dev Biol. 53 (5-6), 835-850 (2009).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends Genet. 29 (11), 611-620 (2013).</li>
<li>Haraoka, Y., Miyake, M., Ishitani, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+imaging+reveals+hidden+oncogenic-normal+cell+communication+during+primary+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Zebrafish imaging reveals hidden oncogenic-normal cell communication during primary tumorigenesis.</a> Cell Struct Funct. 48 (1), 113-121 (2023).</li>
<li>Gomes, M. C., Mostowy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+modeling+human+infection+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The case for modeling human infection in zebrafish.</a> Trends Microbiol. 28 (1), 10-18 (2020).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Karlsson, J., von Hofsten, J., Olsson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+transparent+zebrafish%3A+a+refined+method+to+improve+detection+of+gene+expression+during+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mar+Biotechnol+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Generating transparent zebrafish: a refined method to improve detection of gene expression during embryonic development.</a> Mar Biotechnol (NY). 3 (6), 522-527 (2001).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Antinucci, P., Hindges, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+crystal-clear+zebrafish+for+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A crystal-clear zebrafish for in vivo imaging.</a> Sci Rep. 6, 29490(2016).</li>
<li>He, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+ligase+3-dependent+microhomology-mediated+end+joining+repair+of+DNA+double-strand+breaks+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient ligase 3-dependent microhomology-mediated end joining repair of DNA double-strand breaks in zebrafish embryos.</a> Mutat Res. 780, 86-96 (2015).</li>
<li>Hisano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+in-frame+integration+of+exogenous+DNA+mediated+by+CRISPR%2FCas9+system+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Precise in-frame integration of exogenous DNA mediated by CRISPR/Cas9 system in zebrafish.</a> Sci Rep. 5, 8841(2015).</li>
<li>Luo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9-based+genome+engineering+of+zebrafish+using+a+seamless+integration+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9-based genome engineering of zebrafish using a seamless integration strategy.</a> FASEB J. 32 (9), 5132-5142 (2018).</li>
<li>Wierson, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeted+integration+directed+by+short+homology+in+zebrafish+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Efficient targeted integration directed by short homology in zebrafish and mammalian cells.</a> Elife. 9, e53968(2020).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+tagging+strategies+for+illuminating+expression+profiles+of+genes+with+different+abundance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimal tagging strategies for illuminating expression profiles of genes with different abundance in zebrafish.</a> Commun Biol. 6 (1), 1300(2023).</li>
<li>Li, C., Evans, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligation+independent+cloning+irrespective+of+restriction+site+compatibility%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Ligation independent cloning irrespective of restriction site compatibility.</a> Nucleic Acids Res. 25 (20), 4165-4166 (1997).</li>
<li>Yu, C., Zhang, Y., Yao, S., Wei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PCR+based+protocol+for+detecting+indel+mutations+induced+by+TALENs+and+CRISPR%2FCas9+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A PCR based protocol for detecting indel mutations induced by TALENs and CRISPR/Cas9 in zebrafish.</a> PLoS One. 9 (6), e98282(2014).</li>
<li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin+39.9+protein+is+necessary+for+coordinated+activation+of+slow-twitch+muscle+and+normal+behavior+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Connexin 39.9 protein is necessary for coordinated activation of slow-twitch muscle and normal behavior in zebrafish.</a> J Biol Chem. 287 (2), 1080-1089 (2012).</li>
<li>Cason, N., White, T. W., Cheng, S., Goodenough, D. A., Valdimarsson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning%2C+expression+analysis%2C+and+functional+characterization+of+connexin44.1%3A+a+zebrafish+lens+gap+junction+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning, expression analysis, and functional characterization of connexin44.1: a zebrafish lens gap junction protein.</a> Dev Dyn. 221 (2), 238-247 (2001).</li>
<li>Urushibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+developmental+speed+in+zebrafish+embryos+using+different+incubation+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Control of developmental speed in zebrafish embryos using different incubation temperatures.</a> Zebrafish. 18 (5), 316-325 (2021).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+digestion+and+ligation-mediated+PCR+used+for+flanking+sequence+walking%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cyclic digestion and ligation-mediated PCR used for flanking sequence walking.</a> Sci Rep. 10 (1), 3434(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 ve mikro; L&nbsp; ipuçları</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Tüm manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>1,5 mL tüpler</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Çeşitli solüsyonların depolanması ve santrifüjlenmesi için</td></tr><tr><td>1,5 mL tüpler (RNase içermez)</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>RNaz içermeyen solüsyonların depolanması ve santrifüjlenmesi için</td></tr><tr><td>10 & mikro; L ipuçları</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Tüm manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>10 & L uçlar (RNaz içermez)</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>RNaz içermeyen manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>1000 ve mikro; L&nbsp; ipuçları (RNaz içermez)</td> <td>Herhangi bir marka</td><td>N / A</td><td>RNaz içermeyen manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>1-fenil 2-tiyoüre (PTU)</td> <td>Sigma</td><td>P7629</td><td>Melanogenezi inhibe etmek ve larvaları şeffaf</td></tr><tr><td>tutmak için 200 & L ipuçları</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Tüm manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>200 & L ipuçları (RNaz içermez)</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>RNaz içermeyen manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>2x Taq Plus Master Mix II (Boya Artı)</td><td>Vazyme</td><td>P213-03</td><td>sgRNA verimlilik testleri için PCR</td></tr><tr><td>35 mm tabaklar</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plakaları</td> görüntülemek için <td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Zebra balığı tek tek ve geçici olarak yetiştirmek için</td></tr><tr><td>Acc65I</td><td>NEB</td><td>R0599S</td><td>İçin enzimatik sindirim</td></tr><tr><td>ASETIK asit</td><td>Sigma</td><td>695092</td><td>TAE tampon hazırlama için</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Biofroxx</td><td>8211GR500</td><td>LB plakaları için</td></tr><tr><td>Ampisilin, sodyum tuzu</td><td>Sangon A610028</td><td></td><td>LB plakaları için</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>C5080</td><td>Embriyo tamponu hazırlama için</td></tr><tr><td>Kılcal tüpler</td><td>Harvard Aparatı</td><td>30-0016</td><td>Enjeksiyon için iğneler için Kılcal</td></tr><tr><td>borular</td><td>Herhangi bir marka</td><td>kimliği (iç çap) = 0,1 mm</td><td>1 nL'lik bir damlacık miktarını belirlemek için</td></tr><tr><td>CRISPRscan</td><td>CRISPRscan</td><td>&nbsp; http://www.crisprscan.org/</td> <td>sgRNA tasarımı</td></tr><tr><td>DH5 ve alfa için;</td><td>TIANGEN</td><td>CB101</td><td>Dönüşüm için</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E6758</td><td>Lizis tamponu ve TAE tamponu hazırlama için</td></tr><tr><td>Ensembl</td><td>Ensembl &</td><td>nbsp; https://asia.ensembl.org/Danio_rerio/Info/Index</td><td>Gen bilgisini bulmak için</td></tr><tr><td>DNA</td><td>saflaştırma ve ekstraksiyon için</td>Etanol <td>HUSHI</td><td>64-17-5</td></tr><tr><td>Eksonükleaz III</td><td>Takara</td><td>2170A</td><td>LIC</td></tr><tr><td>Gazla çalışan mikro enjektör</td><td>Warner Instruments</td><td>PLI-100A</td><td>Mikroenjeksiyon</td></tr><tr><td>için Jel elektroforez sistemi</td><td>WIX</td><td>WIX-EP3000</td><td>Jel için elektroforez</td></tr><tr><td>Eldivenler</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Tüm manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>sgdbio</td><td>10010518</td><td>LB plakaları için</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sangon</td><td>A501745</td><td>LB plakaları için</td></tr><tr><td>gRNA-pMD19-T</td><td>Çin Zebra Balığı Kaynak Merkezi (CZRC)</td><td>CZP3</td><td>sgRNA plazmidi içeren sgRNA iskelesi</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>Embriyo için Tampon hazırlama</td></tr><tr><td>Lityum klorür çökeltme çözeltisi</td><td>Thermofisher</td><td>AM9480</td><td>sgRNA'ların çökelmesi, RNaz içermez</td></tr><tr><td>Düşük erime noktalı agaroz</td><td>Sangon</td><td>A600015</td><td>%4 agaroz jellerinin hazırlanması için</td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat</td><td>sgdbio</td><td>20025118</td><td>LB plakalar için</td></tr><tr><td>Metal banyosu</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Sabit sıcaklıkta inkübasyon için</td></tr><tr><td>Metilen mavisi</td><td>Sigma</td><td>M9140</td><td>Embriyo tamponu hazırlama için</td></tr><tr><td>Microinection kalıbı</td><td>Ev yapımı</td><td>N/A Mikroenjeksiyon</td><td>sırasında embriyoları tutmak için oluklar oluşturmak için</td></tr><tr><td>Mikroyükleyici, Femtotips ve diğer cam mikrokılcal damarları doldurmak için uç, steril, 0.5 &ndash; 20 &mikro; U, 100 mm, açık gri, 192 adet. (2 raf ve kez; 96 adet)</td><td>Eppendorf</td><td>5242956003</td><td>Mikroenjeksiyon solüsyonunu enjeksiyon iğnesine yüklemek için, RNaz içermeyen</td></tr><tr><td>Mikropipet çektirme Sutter</td><td>Aleti</td><td>P-97</td><td>Enjeksiyon için iğne oluşturmak için</td></tr><tr><td>Mikropipetler</td><td>Eppendorf</td><td>N/A</td><td>Tüm manipülasyonlar için</td></tr><tr><td>Mikrodalga</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A Enjeksiyon</td><td>plakası ve agaroz jelleri dökümü için</td></tr><tr><td>MinElute PCR Saflaştırma Kiti (50)</td><td>QIAGEN</td><td>28004</td><td>PCR ürünlerini ve sindirim ürünlerini saflaştırmak için, RNaz içermeyen</td></tr><tr><td>mMESSAGE mMACHINE T3 Transkripsiyon Kiti</td><td>Invitrogen</td><td>AM1348</td><td>Cas9 mRNA'nın in-vitro transkripsiyonu, RNaz içermeyen</td></tr><tr><td>N2</td> <td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Mikroenjeksiyon için</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>Embriyo tamponu ve lizis tamponu hazırlığı için</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td>Embriyo tampon hazırlama için</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sangon</td><td>A100173</td><td>TAE tampon hazırlama için</td></tr><tr><td>Nükleaz içermeyen su</td><td>Thermofisher</td><td>R0581</td><td>RNA ile ilgili manipülasyonlar, RNaz içermeyen</td></tr><tr><td>PciI</td><td>NEB</td><td>R0655S</td><td>Enzimatik sindirim</td></tr><tr><td>için PCR makinesi</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>PCR amplifikasyonu</td></tr><tr><td>PCR şerit tüpleri</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>PCR PCR</td></tr><tr><td>tüpleri</td> için <td>FEITONGKANG</td><td>blp-200</td><td>PCR</td></tr><tr><td>Petri kabı</td> için <td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Zebra balığı larvaları vb. yetiştirmek için.</td></tr><tr><td>Fenol kırmızısı</td><td>Sigma</td><td>P0290</td><td>Mikroenjeksiyon için, RNaz içermeyen</td></tr><tr><td>Pipet tutucu</td><td>Warner Instruments</td><td>PLI-PH1</td><td>Mikroenjeksiyon için</td></tr><tr><td>PrimeStar (Premix)</td><td>Takara</td><td>DR040A</td><td>Moleküler klonlama için</td></tr><tr><td>Proteinaz K Merck</td><td></td><td>539480</td><td>Genomik DNA ekstraksiyonu için</td></tr><tr><td>pT3TS (T3:zCas9-UTRglobin)</td><td>Çin Zebra Balığı Kaynak Merkezi (CZRC)</td><td>CZP11</td><td>Cas9 plazmit şablonu</td></tr><tr><td>Soğutmalı santrifüj</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>RNA ile ilgili santrifüjleme için</td></tr><tr><td>Ölçek</td><td>Sartorius</td><td>BCE124-1CCN</td><td>Enjeksiyon plakası ve agaroz jellerin dökümü için</td></tr><tr><td>Makas</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Yetişkin balık kuyruklarını kırpmak için</td></tr><tr><td>SDS</td><td>Sangon</td><td>A600485</td><td>Lizis tamponu hazırlığı için</td></tr><tr><td>Küçük fırçalar</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A Mikroenjeksiyon</td><td>plakaları üzerinde embriyoları nazikçe hareket ettirmek için</td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>Thermofisher</td><td>NanoDrop 2000</td><td>DNA/RNA konsantrasyon ölçümleri için</td></tr><tr><td>Aşama mikrometresi</td><td>Herhangi bir marka</td><td>DIV (Bölme) = 0,01 mm</td><td>1 nL damlacığı ölçmek için</td></tr><tr><td>Stereo floresan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Gen ekspresyonunun gözlemlenmesi için</td></tr><tr><td>Stereo mikroskop</td><td>Motic</td><td>SMZ-168</td><td>Gözlem ve mikroenjeksiyon için</td></tr><tr><td>T7 RiboMAX Express Büyük Ölçekli RNA Üretim Sistemi</td><td>Promega</td><td>P1320</td><td>sgRNA'ların in-vitro transkripsiyonu, RNaz içermeyen</td></tr><tr><td>Sıcaklık kontrollü inkübatör</td><td>Embriyo inkübasyonu için</td><td>herhangi bir marka</td><td>N/A</td></tr><tr><td>TIDE</td><td></td><td>https://tide.nki.nl/</td> <td>sgRNA verimlilik analizi için&nbsp;</td></tr><tr><td>Trikain metansülfonat</td><td>Sigma</td><td>A5040</td><td>Trikama çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sangon</td><td>A600194</td><td>Trikin çözeltisi, lizis tamponu ve TAE tampon hazırlama için</td></tr><tr><td>Tripton</td><td>OXOID</td><td>LP0042</td><td>LB plakaları için</td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Enjeksiyon iğnelerini kesmek için</td></tr><tr><td>XbaI</td><td>NEB</td><td>R0145S</td><td>Enzimatik için sindirim</td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>OXOID</td><td>LP0021</td><td>LB plakaları için</td></tr><tr><td>Zebra balığı akvaryum sistemi</td><td>ESEN</td><td>ESEN-AW-S1</td><td>Yetişkin balıkların yetiştirilmesi için</td></tr><tr><td>Zebra balığı çiftleşme tankları (bölücülü)</td><td>Herhangi bir marka</td><td>N/A</td><td>Balığın çiftleşmesi için</td></tr><tr><td>Zeiss LSM 900+Airyscan2</td><td>ZEISS</td><td>Zeiss LSM900</td><td>Floresan etiketli balıkların konfokal görüntülenmesi ve veri analizi için</td></tr><tr><td>ZFIN web sitesi</td><td>ZFIN</td><td>http://zfin.org/</td> <td>Gen bilgisini bulmak için</td></tr></tbody></table>

zebra balıklarında düşük eksprese edilen proteinleri görselleştirmek için floresan etiketleme

Fluorescence Labeling to Visualize Low-Expressed Proteins in Zebrafish

Konneksinler adı verilen polimerik proteinlerden oluşan boşluk bağlantıları, temas eden hücreler arasında düşük moleküler ağırlıklı metabolitlerin ve iyonların değişimi için gereklidir. Yukarıda tarif edilen floresan protein etiketleme yöntemi, sırasıyla connexin 39.9 (Şekil 5A) ve connexin 44.1'i (Şekil 5B) etiketlemek için kullanıldı. Doğru KI, bağlantı PCR'leri ile doğrulandı (Şekil 6). Yayınlanmış veriler<sup c...

Zebra balıklarında düşük eksprese edilen proteinleri görselleştirmek için floresan etiketleme

CRISPR/Cas9-mediated knock-in (KI) technology allows for easier fluorescent-protein tagging in zebrafish (Danio rerio), a preferred model organism for in ...

fluorescence-labeling-to-visualize-low-expressed-proteins-in-zebrafish

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

In situ hibridizasyon Tüm montaj, gelişim biyolojisi en yaygın olarak kullanılan teknikleri biridir. Burada, tek bir genin kesin ifadelerde desen analiz ve iki genin ifadesi etki çakışma belirlenmesi için çift floresan in situ hibridizasyon protokol yüksek çözünürlüklü sunuyoruz. Biz bir doku organizasyon vurgulamak için propidium iyodür nükleer karşı leke içerir.

Zebra balığı Tüm Dağı Yüksek Çözünürlüklü Çift Floresan Yerinde Hibridizasyon

Erken embriyo şekli morfogenetik süreçleri anlamanın anahtarı, yüksek çözünürlükte görüntü hücrelerinin yeteneği. Biz burada tüm zebrafish embriyolar membran hedefli Yeşil Floresan Protein hücrelerin tek hücreler veya küçük kümeler etiketleme için kullanılan bir tekniktir açıklar.

Zebra balığı Beyin Etiketleme ve Görüntüleme Hücreleri

Bu protokol, Uncaged floresein gelen sinyali yükseltmek için immunolabeling tüm montaj takip kafesli flöresein UV uncaging kullanarak hücrelerin zebrafish embriyoların küçük gruplar kaderi etiket ve takip etmek için bir yol çizer.

Lazer Uncagable Floresein Dextran&#39;ın Zebra balığı Hücre Lineage Etiketleme

Dying hücreler komşu hücrelerle birlikte daralma bariyer fonksiyonunu bozmadan epitel dokuların ekstrüde. Gelişmekte zebrafish optik netlik epitel yaşam ekstrüzyon görselleştirmek için mükemmel bir sistem sağlar. Burada hücresel çözünürlükte larva zebrafish epidermisin neden ve görüntü ekstrüzyon yöntemleri açıklanmaktadır.

Gelişmekte olan Zebra balığı Epidermis Hücre Ekstrüzyon Canlı Görüntüleme

Safir femtosaniye lazer osilatör: Ti bir yöntem olup, bir iki-fotonlu emme ile bir kafes floresan proteini içeren tek bir hücre photoactivate için tarif edilmiştir. Kader haritası için fotoaktive hücre, immunohistokimya kullanılır. Bu teknik, her hücre tipi için de uygulanabilir.

Zebra balığı Tek Hücre Kader Haritalama

Zebra balığı embriyolarının dokuya özel floresans yarı otomatik görüntüleme için bir protokol aşağıda tarif edilmiştir.

Zebra balığı Embriyolar Doku spesifik Floresans yarı otomatik Görüntüleme

Zebra balığı embriyo gelişim biyoloji araştırma için mükemmel bir model. Embriyogenez sırasında, zebra balığı örnek gözlem ve analiz için üç-boyutlu zorluklar sunuyor, bir yumurta sarısı kitle ile gelişir. Bu protokol situ (DİLERİZ) lekeli Zebra balığı embriyo örnekleri içinde bütün montaj iki-boyutlu düz monte hazırlıkları nasıl oluşturulacağı açıklanır.

Tüm Dağı ile Zebra balığı Embriyo örnekler Vitray gözlenmesi ve Analiz Daire Dağı Hazırlık<em&gt; In situ</em&gt; Melezleme

Hücre ve dokularda protein seviyeleri, çoğu zaman sıkı bir şekilde protein üretimi ve temizlenmesi dengesi ile düzenlenir. Fotoçevrim (FDAP) sonra floresans Bozunma kullanan proteinlerin temizlenme kinetiği deneysel in vivo olarak ölçülebilir.

Fotoçevrim sonra Floresans Bozunma kullanarak Oturma balığı Embriyolar protein stabilitesi ölçümü (FDAP)

Organellerin ve diğer hücre altı yapıların dinamik davranışlarını in vivo olarak görüntülemek, fizyolojik ve hastalık durumlarındaki işlevlerine ışık tutabilir. Burada, iki organeli, sentrozomları ve mitokondriyi genetik olarak etiketlemek ve dinamiklerini geniş alan ve konfokal mikroskopi kullanarak canlı zebra balığı embriyolarında görüntülemek için yöntemler sunuyoruz.

Yaşayan Zebra balığı Embriyo Hücre alt yapıları görüntüleme

Tek tek hücrelerde yönlendirilmiş strese veya ölüme neden olacak hedefli manipülasyonların gerçekleştirilmesi nispeten zor olmuştur. Burada, hücre kültüründe ve canlı hayvanlarda tek tek hücreleri seçici olarak strese sokmak ve öldürmek için tek hücre çözünürlüklü bir ablasyon yaklaşımı, standart bir konfokal UV lazere dayalı olarak açıklanmaktadır.

Konvansiyonel UV Lazer konfokal mikroskopi kullanılarak Tetikleme Hücre Stres ve Ölüm

Bu protokol, erken evre zebrafit embriyoları belirli hücre popülasyonlarında hassas kolokalizasyon analizlerini sağlayarak, krobölümler üzerinde sıralı immünofluoresesans ve immünhistokimyasayı gösterir.

Cryosec, zebrafish embriyo üzerinde sıralı Immünofluorescence ve Immünhistokimya

Öğrenin, Danio rerio larvalarında düşük eksprese edilen proteinleri floresan etiketleme ile görselleştirme yöntemini. Bu protokol, bağışçı yapılandırma sürecini basitleştirerek protein araştırmalarında değerli bir araç sunar.

Zebra balıklarında düşük eksprese edilen proteinleri görselleştirmek için floresan etiketleme

Daha fazla video keşfet