Pulmoner Fibrozis ile İlişkili Pulmoner Arteriyel Hipertansiyonun Bir Sıçan Modelinin Oluşturulması ve Doğrulanması

Bu araştırma, pulmoner fibrozis ile ilişkili olguda moleküler mekanizmalara odaklanarak üçüncü grup pulmoner hipertansiyonun patogenezini araştırmaktadır. Pulmoner arteriyel hipertansiyonun aksine, interstisyel akciğer hastalığı ile ilişkili pulmoner hipertansiyonun altında yatan mekanizmalar hala tam olarak anlaşılamamıştır. Bu alandaki son gelişmeler, vasküler yeniden şekillenmeyi tersine çevirmede etkinliği içerir. Pulmoner hipertansiyon patogenezi ile kanser benzeri endotel fenotiplerinin ve metabolik bulgularının keşfi, amino asitler ve lipid disregülasyonu arasında bağlantı kurulması. Toplu ve tek hücreli I-A dizileme metabolimikleri ve rahatsız edici durum direnci testi gibi fonksiyonel tahliller, pulmoner hipertansiyonu, heterojenliği haritalamak ve terapötik hedefleri belirlemek için çok önemli teknolojilerdir.

[Öğretim Görevlisi] Başlamak için, sıçanın trakeasını bir PE-50 tüpü kullanarak, glottis ile tüpün ucuna kadar olan mesafe olan üç santimetre derinliğe yerleştirilmiş bir tüp kullanarak entübe edin. 26 gauge iğne ile bir mililitrelik bir şırınga kullanarak, 0.2 mililitre bleomisin çekin ve tek bir doz olarak bir kanül yoluyla hava yoluna enjekte edin. Bleomisinin eşit dağılımını sağlamak için fareyi sırtüstü pozisyona getirin. Fareyi yavaşça tutun ve yavaşça döndürün, kenarları 30 derece ila 45 derece arasında bir açıyla değiştirin. Her dönüşü 10 ila 15 saniye koruyun ve üç ila dört kez tekrarlayın. PFT yazılımını açın ve cihazın tanınıp tanınmadığını kontrol edin. Şimdi ana kontrol aleti anahtarını açın ve her bir sinyalin olduğundan emin olun. Hava akışını ayarlamak için, emme hava akışı düzenleyici somununu açın ve ilhamı beşe ayarlayın. Ardından ekspiratuar hava akışı düzenleyici somunu açın ve yavaş ekspirasyonu eksi dörde ayarlayın. Basınç değerini 60 olarak ayarlayın. Cihazı FRC akışı, akış, yüksek akış ve akciğer basıncı sırasına göre %5'ten daha az bir hatayla kalibre edin. Fareyi uyuşturduktan sonra, cildi boynun ortası boyunca kesin. Servikal trakeanın üst kısmını ortaya çıkarmak için kasları katman katman ayırın. Trakeal kıkırdak halkaları arasında yatay bir kesi yapın. Metal kanülü hızlı bir şekilde trakeal insizyona yerleştirin, doğru konumlandırmayı sağlayın ve dört adet sıfır ipek iplikli sütürle sabitleyin. Fareyi PFT hayvan bölmesine yerleştirin ve trakeal kanülü cihazın dışındaki hava akış kanalı arayüzüne bağlayın. Başlat düğmesine tıklayın ve zorlanmış vital kapasiteyi veya FVC ve dinamik akciğer uyumunu inceleyin. Sağ ventrikül sistolik basıncının veya RVSP'nin tespiti için, anestezi uygulanan sıçanın karnını deney tezgahında yukarı doğru sabitleyin. Cerrahi makas kullanarak boynun sağ tarafında yaklaşık dört santimetre uzunluğunda bir kesi yapın. Dış juguler veni mikrocerrahi forseps ile nazikçe ayırın ve yaklaşık bir santimetrelik bir uzunluğun izole edilmesini sağlayın. Ayrılan damarın distal ve proksimal uçlarına iki cerrahi çizgi yerleştirin. Dış juguler venin distal ucunu dört sıfır ipek iplik kullanarak bağlayın. Proksimal cerrahi çizgiyi nazikçe kaldırın ve distal ven duvarına yerleştirin. Küçük bir makasla yaklaşık 0,3 milimetrelik küçük bir kesi yapın. PE-50 tüpünü dış juguler ven içine yerleştirdikten sonra, kan sızıntısını önlemek için PE-50 tüpünü ve damarı dört sıfır ipek iplik kullanarak birbirine bağlayın. Kayıt cihazındaki venöz basınç dalga biçimini gözlemleyin. Sağ ventrikül basınç dalga formunu görüntülemek için kateteri yavaşça sağ atriyuma itin ve sağ ventriküle doğru ilerletin. Basınç sabit olduğunda, sağ ventrikül basıncını bir dakika boyunca kaydedin ve verileri analiz için kaydedin. Torakotomiden sonra, cımbız kullanarak sıçanın sağlam kalbini çıkarın. Kahini ve kalbin yakınındaki bağ dokusunu makasla kesin. Sağ ventrikülün serbest duvarını pulmoner arter boyunca kesin. Bu doku sağ ventriküldür ve geri kalan dokular sol ventrikül artı intraventriküler septumdur. Ayrıldıktan sonra, sağ ventrikülün ve sol ventrikülün yüzeyini ve intraventriküler septumu filtre kağıdı kullanarak boşaltın. Ağırlık oranlarını hesaplamadan önce sağ ventrikül ve sol ventrikül artı ventriküler septumu analitik bir terazi ile ayrı ayrı tartın. Bu şekil, bleomisin kaynaklı PF PH sıçan modelinde gözlenen hemodinamik değişiklikleri, pulmoner vasküler yeniden şekillenmeyi ve bozulmuş akciğer fonksiyonunu göstermektedir. Sağ ventrikül sistolik basıncı ve sağ ventrikül ile sol ventrikül artı septum oranı model grubunda kontrol grubuna göre anlamlı olarak artmıştır. Histolojik boyama, model grubunda pulmoner arterlerin çevresinde daha fazla mavi lekeli alan ortaya çıkardı ve bu da daha fazla kollajen birikimine işaret etti. Zorlanmış vital kapasite ve dinamik akciğer kompliyansı model grubunda kontrol grubuna göre anlamlı olarak azalmıştır. Pulmoner arter hızlanma süresinin ejeksiyon süresine, triküspit anüler düzlem sistolik gezisi, sağ ventrikül fraksiyonel alan değişikliği ve kardiyak debi oranları model grubunda anlamlı olarak azalmıştır. Hidroksiprolin konsantrasyonu model grubunda anlamlı olarak daha yüksekti ve bu da akciğer dokusunda kollajen içeriğinin arttığını gösteriyordu. Karaciğer ve böbrek ağırlıkları kontrol ve model grupları arasında anlamlı olarak farklı değildi.