Name: Tek Hücreli Analizler için İnsan Fallop Tüpü Epitelinin Çıkarılması İçin Etkili Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Keşfedin insan fallop tüpü epitel hücrelerinin izolasyon yöntemini, tek hücreli RNA dizileme ve akış sitometri analizleri için. Bu protokol over kanseri araştırmalarında hastalık başlangıcını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Crow, J., Amso, N. N., Lewin, J., Shaw, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+ultrastructure+of+fallopian+tube+epithelium+at+different+stages+of+the+menstrual+cycle+and+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Morphology and ultrastructure of fallopian tube epithelium at different stages of the menstrual cycle and menopause.</a> Hum Reprod. 9 (12), 2224-2233 (1994).</li>
<li>Patek, E., Nilsson, L., Johannisson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+electron+microscopic+study+of+the+human+fallopian+tube.+Report+II.+Fetal+life%2C+reproductive+life%2C+and+postmenopause%5BTitle%5D)+AND+%22Fert+Steril%22%5BJournal%5D)">Scanning electron microscopic study of the human fallopian tube. Report II. Fetal life, reproductive life, and postmenopause.</a> Fert Steril. 23 (10), 719-733 (1972).</li>
<li>Coan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+role+of+fallopian+ciliated+cells+in+the+pathogenesis+of+high-grade+serous+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Exploring the role of fallopian ciliated cells in the pathogenesis of high-grade serous ovarian cancer.</a> Int J Mol Sci. 19 (9), 2512(2018).</li>
<li>Leese, H., Tay, J., Reischl, J., Downing, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+fallopian+tubal+fluid%3A+role+of+a+neglected+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Formation of fallopian tubal fluid: role of a neglected epithelium.</a> Reproduction. 121 (3), 339-346 (2001).</li>
<li>Donnez, J., Casanas-Roux, F., Ferin, J., Thomas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+ciliation+and+cell+height+in+human+tubal+epithelium+in+the+fertile+and+post-fertile+years%5BTitle%5D)+AND+%22Maturitas%22%5BJournal%5D)">Changes in ciliation and cell height in human tubal epithelium in the fertile and post-fertile years.</a> Maturitas. 5 (1), 39-45 (1983).</li>
<li>Lengyel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+atlas+of+the+human+postmenopausal+fallopian+tube+and+ovary+from+single-cell+RNA+and+ATAC+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A molecular atlas of the human postmenopausal fallopian tube and ovary from single-cell RNA and ATAC sequencing.</a> Cell Rep. 41 (12), 111838-111838 (2022).</li>
<li>Tao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+tubal+ciliated+cells+as+a+risk+for+%26%2334%3Bovarian%26%2334%3B+or+pelvic+serous+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Loss of tubal ciliated cells as a risk for &#34;ovarian&#34; or pelvic serous carcinoma.</a> Am J Cancer Res. 10 (11), 3815(2020).</li>
<li>Li, J., Fadare, O., Xiang, L., Kong, B., Zheng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+serous+carcinoma%3A+recent+concepts+on+its+origin+and+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Ovarian serous carcinoma: recent concepts on its origin and carcinogenesis.</a> J Hematol Oncol. 5 (1), 8(2012).</li>
<li>Hu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repertoire+of+serous+ovarian+cancer+non-genetic+heterogeneity+revealed+by+single-cell+sequencing+of+normal+fallopian+tube+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The repertoire of serous ovarian cancer non-genetic heterogeneity revealed by single-cell sequencing of normal fallopian tube epithelial cells.</a> Cancer Cell. 37 (2), 226-242.e7 (2020).</li>
<li>Dinh, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+identifies+gene+expression+networks+driving+differentiation+and+tumorigenesis+in+the+human+fallopian+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics identifies gene expression networks driving differentiation and tumorigenesis in the human fallopian tube.</a> Cell Rep. 35 (2), 108978(2021).</li>
<li>Ulrich, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+heterogeneity+of+human+fallopian+tubes+in+normal+and+hydrosalpinx+disease+states+identified+using+scRNA-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular heterogeneity of human fallopian tubes in normal and hydrosalpinx disease states identified using scRNA-seq.</a> Dev Cell. 57 (7), 914-929.e7 (2022).</li>
<li>Brand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fallopian+tube+single+cell+analysis+reveals+myeloid+cell+alterations+in+high-grade+serous+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Fallopian tube single cell analysis reveals myeloid cell alterations in high-grade serous ovarian cancer.</a> iScience. 27 (3), 108990-108990 (2024).</li>
<li>Memarzadeh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-autonomous+activation+of+the+PI3-kinase+pathway+initiates+endometrial+cancer+from+adult+uterine+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Cell-autonomous activation of the PI3-kinase pathway initiates endometrial cancer from adult uterine epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (40), 17298-17303 (2010).</li>
<li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+induction+and+specification+of+morphogenesis+and+cytodifferentiation+of+the+epithelia+of+the+mullerian+ducts+and+urogenital+sinus+during+development+of+the+uterus+and+vagina+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Stromal induction and specification of morphogenesis and cytodifferentiation of the epithelia of the mullerian ducts and urogenital sinus during development of the uterus and vagina in mice.</a> J Exp Zool. 196 (3), 361-369 (1976).</li>
<li>Xie, Y., Park, E. -S., Xiang, D., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organoid+culture+reveals+enrichment+of+organoid-forming+epithelial+cells+in+the+fimbrial+portion+of+mouse+fallopian+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Long-term organoid culture reveals enrichment of organoid-forming epithelial cells in the fimbrial portion of mouse fallopian tube.</a> Stem Cell Res. 32 (1873-5061), 51-60 (2018).</li>
<li>Karst, A. M., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+and+immortalization+of+human+fallopian+tube+secretory+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Primary culture and immortalization of human fallopian tube secretory epithelial cells.</a> Nat Protoc. 7 (9), 1755-1764 (2012).</li>
<li>Ford, M. J., Harwalkar, K., Yamanaka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+generate+mouse+oviduct+epithelial+organoids+for+viral+transduction+and+whole-mount+3D+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol to generate mouse oviduct epithelial organoids for viral transduction and whole-mount 3D imaging.</a> STAR Protocols. 3 (1), 101164(2022).</li>
<li>Radecki, K. C., Lorenson, M. Y., Carter, D. G., Walker, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdissection+and+dissociation+of+the+murine+oviduct%3A+Individual+segment+identification+and+single+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microdissection and dissociation of the murine oviduct: Individual segment identification and single cell isolation.</a> J Vis Exp. (177), e63168(2021).</li>
<li>Feng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+detection+of+organoid-initiating+cell+activity+in+patient-derived+single+fallopian+tube+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Protocol for the detection of organoid-initiating cell activity in patient-derived single fallopian tube epithelial cells.</a> Methods Mol Bio. 2429, 445-454 (2022).</li>
<li>Kessler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Notch+and+Wnt+pathways+regulate+stemness+and+differentiation+in+human+fallopian+tube+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The Notch and Wnt pathways regulate stemness and differentiation in human fallopian tube organoids.</a> Nat Commun. 6 (1), 8989(2015).</li>
<li>Fotheringham, S., Levanon, K., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+culture+of+primary+human+fallopian+tube+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ex vivo culture of primary human fallopian tube epithelial cells.</a> J Vis Exp. (51), e2728(2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>% 1 Tripsin&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>J63993.09</td><td></td></tr><tr><td>100 ve mikro; m Hücre Süzgeci</td><td>Corning</td><td>431752 %</td><td></td></tr><tr><td>4 Paraformaldehit</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>5 mL yuvarlak tabanlı tüpler</td><td>Corning</td><td>352008</td><td></td></tr><tr><td>60 mm hücre kültürü plakası</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CLS430589-500EA</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu Hücre Kültürü Plakası</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD10</td><td>BioLegend</td><td>312212</td> Anti-CD326 (Ep-CAM) BioLegend 324218 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45 ve nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>304026</td><td></td></tr><tr><td>Anti-EpCAM</td><td>Abcam</td><td>ab223582</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG2a PerCP&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>400250</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAX8</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>363M-15</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Vimentin</td><td>Agilent Technologies</td><td>M072501-2</td><td></td></tr><tr><td>Odacıklı Kızak Sistemi</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>154917PK</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td></td><td></td>17100017</tr><tr><td>DMEM</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>10569-010</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>3690</td><td></td></tr><tr><td>eFluor 506</td><td>Invitrogen</td><td>65-0866-14</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>İnce nokta forseps&nbsp;</td><td>VWR</td><td>102091-526</td><td>Seçtiğiniz herhangi bir ince nokta forseps çalışacaktır</td></tr><tr><td>Düzeltilebilir Canlılık Boyası eFluor 506</td><td>Invitrogen</td><td>65-0866-14</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo yazılım sürümü 9&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Veri analiz yazılımı</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>MACSQuant Analiz Cihazı 10 akış sitometresi&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MACSQuant Kalibrasyon Boncukları</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-607</td><td></td></tr><tr><td>Mammocult&nbsp;</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>5620</td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu</td><td>Fisher Scientific</td><td>PI31873</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomyosin&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PerCP Konjuge CD45</td><td>BioLegend</td><td>304026</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı Kan Hücresi lizis tamponu&nbsp;</td><td>Tonbo Biyolojik Bilimler</td><td>TNB-4300-L100 &</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>BP151-100</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tübingen Yaylı Makas&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr>DAPI <td>Fisher Scientific NC9524612</td><td></td><td></td> <td>ile VECTASHIELD</td></tr></tbody></table>

tek hücreli analizler için İnsan fallop tüpü epitelinin Çıkarılması İçin etkili bir yöntem

An Efficient Method for Extracting Human Fallopian Tube Epithelia for Single-cell Analyses

Zenginleştirilmiş bir epitel hücre popülasyonunu izole ettiğimiz yedi fallop tüpü koleksiyonunu dahil ettik (Şekil 2A ve Ek Şekil S1A). Bu tek hücreli süspansiyon yönteminin canlılığını ve epitel hücre zenginleştirmesini değerlendirmek için akış sitometrisi yapıldı. Hücre canlılığını ölçmek için, hücreler canlılık belirteci e506 ile boyandı. Bu aynı zamanda analiz edildiğinde tüm kalıntıların ve ölü hücrelerin dışarı çıkarılmasına da izin verdi.
Bu yöntemle izole edilen hücrelerin bileşimini belirlemek için, numuneler bir epitel hücre markörü (EpCAM), bir stromal hücre markörü (CD10) ve bir bağışıklık hücresi markörü (CD45) ile boyandı. Şekil 2B'de<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67753/67753fig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/67753fig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67753/67753fig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/67753fig2large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/67753_Supplemental%20Figure%201%20(2).pdf" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67753/Supplemental%20Video%201%20FT4.mp4" target="_blank"></a>

Tek Hücreli Analizler için İnsan Fallop Tüpü Epitelinin Çıkarılması İçin Etkili Bir Yöntem

Human fallopian tubes are intrinsic to reproduction. The purpose of the fallopian tubes is to allow for the transit of sperm, the ovum, and if ...

an-efficient-method-for-extracting-human-fallopian-tube-epithelia-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Fallop tüpü (FT), seröz over kanseri (SOC) kökenli bir alternatif site olarak ortaya çıkmaktadır. Bu protokol izolasyon için yeni bir yöntem açıklanır...

Ex Vivo Kültür İlköğretim İnsan Fallop Tüp Epitel Hücreleri

Bu videoda, tubal sitolojiyi incelemek için Papanicolaou boyamanın değiştirilmiş bir protokolünü gösteriyoruz. Bu teknik, malign ve malign olmayan fallop tüpü epitel hücrelerinin sitolojik özelliklerini görselleştirmek için kullanılabilir.

Papanicolaou boyama: tubal hücrelerin sitolojik özelliklerini görselleştirmek için bir teknik

Yumurtalık kanseri erken teşhisinin bir aracı olarak fallop tüpünü direkt olarak cerrahi sonrası eksizyonu örnekleyerek bir tubal sitolojik yöntem araştırdık. Burada, yeni alınan cerrahi örneklerden fallop tüp hücreleri toplamak için bir protokol sunuyoruz.

Yumurtalık Kanseri Erken Teşhisi İçin Umut Verici Bir Araç Olarak Fallop Tüpünün Tubal Sitolojisi

Bu makalede, insan akciğerinin proksimal ve distal bölgelerinden canlı epitel hücrelerinin zenginleştirilmesine izin veren doku dissosiyasyonu ve hücresel fraksiyonasyon yaklaşımları için ayrıntılı bir metodoloji sunulmaktadır. Bu yaklaşımlar, akciğer epitel progenitör hücrelerinin fonksiyonel analizi için 3D organoid kültür modelleri kullanılarak uygulanmaktadır.

Organoid Kültür için İnsan Akciğer Epitel Progenitör Hücrelerinin İzolasyonu ve Zenginleştirilmesi

RNA bütünlüğünü korurken tek tek segmentlerin toplanmasına izin veren fare yumurta kanalının mikro dezenfeksiyonu için bir yöntem sunulmuştur. Ayrıca enzymatik olmayan ovidüktal hücre ayrışması prosedürü açıklanmıştır. Yöntemler fonksiyonel olarak farklı ovidüktal segmentlerin ve ayrışmış ovidüktal hücrelerin sonraki gen ve protein analizi için uygundur.

Murine Oviduct'un Mikroseksiyonu ve Ayrışması: Bireysel Segment Tanımlama ve Tek Hücre İzolasyonu

Burada, yumurtalık hücrelerinin antral foliküllerden tanımlanması ve saflaştırılması için protokoller sunuyoruz. Kortikal şeritlerin kriyoprezervasyonu için tüm yumurtalıkların işlenmesi için yöntemler üzerinde dururken, aynı zamanda granüloza, teka, endotelyal, hematopoetik ve stromal hücreler de dahil olmak üzere çoklu folikül yerleşik hücre tiplerini serbest bırakmak için enzimatik olarak muamele edilen bozulmamış antral folikülleri hasat ediyoruz.

İnsan Antral Foliküllerinden Soya Özgü Hücrelerin Ekstraksiyonu, Etiketlenmesi ve Saflaştırılması

Bu protokol, in vitro ve in vivo olarak yüksek dereceli seröz yumurtalık karsinomu (HGSOC) fare modellerinin geliştirilmesini detaylandırır. Murin fallop tüpü organoidlerinin türetilmesinden, insan HGSOC genetiğini özetlemek için genetik modifikasyonlarından ve in vivo tümörlerin gelişimi için sinjeneik farelerin yumurtalık bursasına sokulmasından.

Yüksek Dereceli Seröz Over Karsinomu Modellemesi için Fallop Tüpü Epitel Hücrelerinden Fare Kaynaklı Organoid Hatların Geliştirilmesi

Bu protokol, foliküler sıvıyı, somatik hücreleri ve olgunlaşmamış oositleri IVF prosedürlerinden izole etmek ve işlemek için standartlaştırılmış yöntemleri özetlemekte ve yüksek kaliteli moleküler ve hücresel analizlere olanak sağlamaktadır. Bu yaklaşımlar, tipik olarak klinik bakımda atılan materyalleri kullanarak doğurganlık, üreme yaşlanması ve yumurtalık disfonksiyonuna ilişkin translasyonel araştırmaları destekler.

İn Vitro Fertilizasyon Uygulanan Bireylerden İnsan Foliküler Sıvısı, Folikül Somatik Hücreleri ve Olgunlaşmamış Oositlerin Toplanması

Bu protokol, akım sitometrisi, immünboyama ve organoid kültür dahil olmak üzere aşağı akış analizleri için yetişkin dişi fare üretrasının epitel tabakasının izole edilmesi için optimize edilmiş bir yöntem sunar. Yöntemler, akış sitometrisi analizi, tam montaj görüntüleme ve verimli organoid oluşumu ile zenginleştirilmiş ve canlı üretral epitel hücreleri elde etmiştir.

Tek Hücreli ve İmmünoflüoresans Analizi İçin Dişi Fare Üretral Epitelini İzole Etmek İçin Optimize Edilmiş Bir Yöntem

Bu el yazması, deneysel kemik metastazları oluşturmak için kanser hücrelerini özellikle kemikler de dahil olmak üzere arka bacak dokularına iletmek için bir teknik olan intra-iliak arter (IIA) enjeksiyonunun ayrıntılı prosedürünü sağlar. Başlangıçta meme tümörü modelleri ile oluşturulmuş olsa da, bu protokol diğer kanser türlerine de kolayca genişletilebilir.

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Keşfedin insan fallop tüpü epitel hücrelerinin izolasyon yöntemini, tek hücreli RNA dizileme ve akış sitometri analizleri için. Bu protokol over kanseri araştırmalarında hastalık başlangıcını anlamaya yardımcı olur.

Tek Hücreli Analizler için İnsan Fallop Tüpü Epitelinin Çıkarılması İçin Etkili Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet