Name: Farklı Doku Mikroortamlarında GPCR Aracılı T Hücresi Lokalizasyonunu Araştırmak için Verimli Retroviral Transdüksiyon ve Rekabetçi Hedef Arama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: Öğrenin, retroviral transdüksiyon ve rekabetçi hedef arama yöntemleriyle T hücresi lokalizasyonunu inceleyin. Bu protokoller, immün hücre trafik mekanizmalarını anlamak için temel ve terapötik araştırmalarda uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure%2C+function+and+drug+discovery+of+GPCR+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22MolBiomed%22%5BJournal%5D)">Structure, function and drug discovery of GPCR signaling.</a> MolBiomed. 4 (1), 46(2023).</li>
<li>Lammermann, T., Kastenmuller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+GPCR-controlled+navigation+in+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Concepts of GPCR-controlled navigation in the immune system.</a> Immunol Rev. 289 (1), 205-231 (2019).</li>
<li>Fu, H., Ward, E. J., Marelli-Berg, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+t+cell+organotropism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of t cell organotropism.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (16), 3009-3033 (2016).</li>
<li>Cinalli, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+homeostasis+requires+g+protein-coupled+receptor-mediated+access+to+trophic+signals+that+promote+growth+and+inhibit+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">T cell homeostasis requires g protein-coupled receptor-mediated access to trophic signals that promote growth and inhibit chemotaxis.</a> Eur J Immunol. 35 (3), 786-795 (2005).</li>
<li>Wu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+onco-GPCRome%3A+Novel+g+protein-coupled+receptor-driven+oncocrine+networks+and+targets+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Illuminating the onco-GPCRome: Novel g protein-coupled receptor-driven oncocrine networks and targets for cancer immunotherapy.</a> J Biol Chem. 294 (29), 11062-11086 (2019).</li>
<li>Wu, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GPCR-alpha%28s%29-pka+signaling+axis+promotes+T-cell+dysfunction+and+cancer+immunotherapy+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The GPCR-alpha(s)-pka signaling axis promotes T-cell dysfunction and cancer immunotherapy failure.</a> Nat Immunol. 24 (8), 1318-1330 (2023).</li>
<li>Ramezani, A., Hawley, T. S., Hawley, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+gammaretroviral+vector+expression+during+embryonic+stem+cell-derived+in+vitro+hematopoietic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Stable gammaretroviral vector expression during embryonic stem cell-derived in vitro hematopoietic development.</a> Mol Ther. 14 (2), 245-254 (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plat-E+retroviral+packaging+cells+%28RV-101%29+user+manual%22">Plat-E retroviral packaging cells (RV-101) user manual</a>. , Cell Biolabs. https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/RV-101-plat-e-retroviral-packaging-cells.pdf (2024).</li>
<li>Anderson, J., Hope, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+of+retroviral+vectors%3A+obstacles+and+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking of retroviral vectors: obstacles and advances.</a> Gene Ther. 12, 1667-1678 (2005).</li>
<li>Kim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+analyses+of+lamina+propria+lymphocytes+from+mouse+intestines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and analyses of lamina propria lymphocytes from mouse intestines.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101366(2022).</li>
<li>Steinert, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Memory+CD8+T+Cells+Reveals+Regionalization+of+Immunosurveillance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Quantifying Memory CD8 T Cells Reveals Regionalization of Immunosurveillance.</a> Cell. 161 (4), 737-749 (2015).</li>
<li>Miltenyi Biotec. CD90.1 MicroBeads mouse and rat. , https://static.miltenyibiotec.com/asset/150655405641/document_3ea1u0fdf5423ci3qg8mc8rl4c?content-disposition=inline accessed (2024).</li>
<li>Ocón, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lymphocyte+chemoaffinity+axis+for+lung%2C+non-intestinal+mucosae+and+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A lymphocyte chemoaffinity axis for lung, non-intestinal mucosae and CNS.</a> Nature. 635, 736-745 (2024).</li>
<li>Sumida, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gpr55+regulates+intraepithelial+lymphocyte+migration+dynamics+and+susceptibility+to+intestinal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gpr55 regulates intraepithelial lymphocyte migration dynamics and susceptibility to intestinal damage.</a> Sci Immunol. 2 (18), eaao1135(2017).</li>
<li>Foxman, E. F., Campbell, J. J., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multistep+navigation+and+the+combinatorial+control+of+leukocyte+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multistep navigation and the combinatorial control of leukocyte chemotaxis.</a> J. Cell Biol. 139 (5), 1349-1360 (1997).</li>
<li>Alawar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+solution+for+highly+efficient+electroporation+of+primary+cytotoxic+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A solution for highly efficient electroporation of primary cytotoxic T lymphocytes.</a> BMC Biotechnol. 24 (1), 16(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>AF647 anti fare CD90.1-Thy1.1 (OX-7)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>202507</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD31 (DyLight 633, klon 390)</td><td>InvivoMab&nbsp;</td><td>BE0377</td><td></td></tr><tr><td>fare önleyici CD28 37.51</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>fare önleyici CD3 145-2c11</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>APCCy7 anti fare CD3 (145-2c11)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100329</td><td></td></tr><tr><td>BV421 anti mouse CD8b&nbsp; (Ly-3)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>126629</td><td></td></tr><tr><td>BV711 anti mouse CD4 (RM4-5)&nbsp;</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>100549</td><td></td></tr><tr><td>CD90.1 mikro boncuklar&nbsp;</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>130-121-273</td><td></td></tr><tr><td>CFSE&nbsp;</td><td>Termobilimsel&nbsp;</td><td>C34554 (İngilizce)</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti fare CD45.2 (104)</td><td>BD</td><td>AB_395041</td><td></td></tr><tr><td>fare IL2&nbsp;</td><td>Peprotech&nbsp;</td><td>200-02-50UG</td><td></td></tr><tr><td>fare IL7&nbsp;</td><td>Peprotech&nbsp;</td><td>&nbsp; 217-17-10UG</td><td></td></tr><tr><td>Mouse T CD4 izolasyon kiti&nbsp;</td><td>STEMCELL teknolojileri&nbsp;</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>MSCV-IRES- Thy1.1 GPR25</td><td>Vectorbuilder&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MSCV-IRES- Thy1.1 Doldurucu</td><td>Vectorbuilder&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45 (30-F11) antikoru&nbsp;</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>103105</td><td></td></tr><tr><td>PECy7 anti mouse TCRb&nbsp; (H57-597)</td><td>Tonbo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PercpCy5.5 anti fare CD45.1 (A20)</td><td>eBiosciences&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Platinum-E (Plat-E)&nbsp;</td><td>hücre Biyolaboratuvarları. Inc&nbsp;</td><td>Karavan-101</td><td></td></tr><tr><td>Sarı floresan boya&nbsp;</td><td>Termobilimsel&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

farklı doku mikroortamlarında gpcr aracılı t hücresi lokalizasyonunu araştırmak için verimli retroviral transdüksiyon ve rekabetçi hedef arama

Efficient Retroviral Transduction and Competitive Homing for Investigating GPCR-Mediated T-Cell Localization in Diverse Tissue Microenvironments

Bu çalışmada, spesifik reseptörlerin in vivo olarak T hücresi lokalizasyonunu yönlendirme yeteneğini araştırmak için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu protokolün bir gösterimi olarak GPR2513 kullandık. Akış sitometrisi ile Thy1.1 boyama ile değerlendirildiği gibi, bu protokolü kullanarak% 30 -% 40 transdüksiyon verimliliği elde edebiliyoruz. Doldurucu kontrollerinin yanı sıra GPR25 ile dönüştürülmüş hücreleri kullanarak in vitro transwell tabanlı kemotaksis testleri gerçekleştirdik ve ...

Farklı Doku Mikroortamlarında GPCR Aracılı T Hücresi Lokalizasyonunu Araştırmak için Verimli Retroviral Transdüksiyon ve Rekabetçi Hedef Arama

Understanding how G-protein coupled receptor (GPCR) expression affects cell positioning within diverse tissue microenvironments is essential for ...

Araştırmamız, GPCR'lerin çeşitli doku mikro ortamlarında bağışıklık hücresi kaçakçılığını ve konumlandırmasını nasıl etkilediğini araştırıyor. Laboratuvarımız, bu protokolü ve diğer tamamlayıcı protokolleri kullanarak, bağırsak dışı mukozal dokularda organa özgü bir kemoatraktan eksen tanımlamıştır. Artık mide, akciğer, soluk borusu ve GU kanalına ev sahipliği yapan lenfositlerin nasıl çalıştığını öğrendik. Bireysel GPCR'lerin in vivo T hücresi hareketini nasıl etkilediğini test etmek için etkili ve geliştirilmiş bir yöntem sunuyorum. Bu reseptörleri T hücrelerine sokmak için güvenilir bir yol geliştirdik, bu da artık rekabetçi hedef arama deneylerinde doğrudan yan yana karşılaştırmaya izin veriyor. Artık GPCR'lerin T hücresini in vivo olarak nasıl yönlendirdiğini bildiğimize göre, araştırmacılar reseptör ekspresyonunu bağışıklık fonksiyonuna daha iyi bağlayabilirler. Bu, temel immünoloji ve terapötik araştırmalardaki araştırmacılara yardımcı olacaktır. Bu yaklaşımla, artık daha az bilinen veya karakterize edilmemiş GPCR'lerin T hücresini belirli dokulara yönlendirmede nasıl rol oynadığını sorabiliriz. GPCR sinyallemesinin kanseri veya otoimmüniteyi tedavi etmek için nasıl ince ayar yapılabileceğini öğrenebiliriz. Terapötik yaklaşımlar için T hücrelerinin doğru zamanda doğru yere ulaşmasına yardımcı olabiliriz.[Anlatıcı] Başlamak için, birinci gün, 10 santimetrelik doku kültürü plakalarını steril suda hazırlanan mililitre başına beş mililitre 50 mikrogram Poli-D-Lizin çözeltisi ile kaplayın. Plakaları oda sıcaklığında 45 dakika inkübe edin, ardından kalıntı kalmadığından emin olmak için plakaları kalsiyum ve magnezyum içermeyen steril PBS ile iki kez yıkayın. Daha sonra, üç dakika boyunca 37 santigrat derecede iki mililitre% 0.05 tripsin ve 0.5 milimolar EDTA kullanarak Plat-E hücrelerini ayırın. Tripan mavisi dışlama testini kullanarak hücre canlılığını sağlamak için, eşit hacimde hücre süspansiyonunu tripan mavisi çözeltisi ile karıştırın. Daha sonra, antibiyotik içermeyen Plat-E ortamı ile 10 santimetrelik bir doku kültürü Petri kabına 3 milyon canlı hücre tohumlayın. İkinci günde, Plat-E hücre kültürlerindeki ortamı 6.5 mililitre indirgenmiş serum ortamı ile değiştirin. Transfeksiyon karışımını üreticinin talimatlarına göre hazırlayın. Her plaka için, bir tüpte 45 mikrolitre Lipofectamine 2000 ile 210 mikrolitre indirgenmiş serum ortamı ve başka bir tüpte 15 mikrogram DNA'yı 235 mikrolitre indirgenmiş serum ortamı ile karıştırın. Tüplerin içeriğini üç ila dört kez pipetleyerek birleştirin ve karmaşık oluşumu kolaylaştırmak için oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin. Şimdi karışımı damla damla plakalara ekleyin ve 37 santigrat derecede 16 saat inkübe edin. Daha sonra, PBS kuyucuğu başına 375 mikrolitrede anti-fare CD28 ve CD3 ile T hücresi aktivasyonu için 24 oyuklu plakaları kaplayın. Plakaları gece boyunca dört santigrat derecede veya dört santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatörde üç ila dört saat inkübe edin. Üçüncü günde, izole edilmiş fare dalaklarını, RPMI ortamı içeren altı oyuklu bir plakaya yerleştirilmiş 100 mikrometrelik bir naylon ağ hücre süzgeci üzerinde nazikçe ezmek için bir şırınga pistonu kullanın. Tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için hücre süspansiyonunu 40 mikrometrelik bir naylon ağ hücre süzgecinden 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Çözeltiyi 450 g'da dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin. Ardından hücreleri kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. Ardından, üreticinin talimatlarına göre fare T hücresi CD4 izolasyon kitini kullanarak manyetik negatif seçim yapın. Bir hücre sayacı kullanarak izole edilmiş T hücresini sayın. Kaplanmış T hücresi aktivasyon kuyucuklarındaki T hücrelerini, bir mililitre RPMI 10 ortamında kuyu başına bir ila 1,5 milyon hücre yoğunluğunda kaplayın. Hücreleri 37 santigrat derecede, nemlendirilmiş bir inkübatörde %5 karbondioksit ile 24 ila 48 saat inkübe edin. Dördüncü günde, 10 santimetrelik plakalardan yaklaşık 12 mililitre viral süpernatantı konik bir tüpe toplayın. Ertesi gün ikinci bir transdüksiyon için daha fazla viral süpernatan üretmek için Plat-E kültür plakalarındaki ortamı 10 mililitre antibiyotik içermeyen Plat-E ortamı ile değiştirin. Toplanan viral süpernatanı filtrelemek için 0,45 mikrometrelik bir şırınga filtresinden geçirin. Filtrelenmiş süpernatanta mililitre başına sekiz mikrogram Polybrene ve bir ila 100 seyreltme HEPES tamponu ekleyin. 24 oyuklu T hücresi plakasını 950 g'da yedi dakika döndürün. Ardından, T hücrelerini yerinden çıkarmadan süpernatanı dikkatlice toplayın ve saklayın. Spinfection yapmak için her kuyucuğa bir mililitre viral süpernatan ekleyin. Plakaları plastik sargıyla kapatın ve plakaları 1,150 santigrat derecede dört saat boyunca 32 g'da döndürün. Spenfeksiyondan sonra, her bir oyuktaki ortamı önceden kaydedilmiş T hücresi süpernatantı ile dikkatlice değiştirin. Altıncı günde, T hücrelerini plakadan konik bir tüpe toplayın ve santrifüjleyin. Peleti kalsiyum ve magnezyum içeren PBS ile yıkayın. Hücreleri, mililitre başına 130 birim fare interlökin-2 ve mililitre fare interlökin-7 başına 10 nanogram içeren yeni bir kültür plakasına aktarın. Hücreleri en az iki gün veya enjeksiyon için gereken hücre sayısına bağlı olarak istenen genişleme seviyesine ulaşana kadar inkübe edin. Sekizinci günde, hücreleri peletlemek için 450 g'da dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin. 15 mililitrelik bir tüpe beş mililitre Histopaque-1077 ekleyin. T hücresi peletini kalsiyum ve magnezyum içeren beş mililitre PBS içinde yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu, santrifüj tüpündeki beş mililitre Histopaque-1077'nin üzerine dikkatlice yerleştirin. Numuneyi oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 400 ila 500 g'da santrifüjleyin ve santrifüj kırılmasının veya ivmesinin 0'a ayarlandığından emin olun. Santrifüjlemeden sonra, farklı hücre katmanlarının oluşumunu gözlemleyin. İstenilen hücreleri içeren arayüz katmanını bir pipet kullanarak dikkatlice toplayın ve diğer katmanlarla kontaminasyonu önleyin. GPR25 transdüksiyonlu T hücreleri, fonksiyonel reseptör ekspresyonunu doğrulayarak, doldurucu transdüksiyonlu kontrollere göre hCXCL17 ve mCXCL17'ye doğru gelişmiş göç sergiledi. GPR25, tercihen genitoüriner yol, mide ve trakea gibi bağırsak dışı mukozal dokulara lokalize edilmiş hücreleri dönüştürdü ve yedi haftada önemli bir zenginleşme gözlendi, ancak enjeksiyondan bir hafta sonra gözlenmedi. Kısa süreli hedef arama deneyleri, GPR25'in tercihen trakea, mide, dil, safra kesesi ve uterus mukozası gibi Cxcl17 açısından zengin organlara ev sahipliği yapan T hücresini dönüştürdüğünü, Cxcl17 eksikliği olan farelerde birikmediğini gösterdi. GPR25, ağırlıklı olarak bronşlara lokalize hücreleri transdüksiyona tabi tutarken, kontrol hücreleri daha sık damarların yakınında bulundu.

efficient-retroviral-transduction-competitive-homing-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz retroviral transdüksiyon kullanarak fare antijen spesifik T-hücrelerinin üretmek için bir protokol...

Fare T-hücrelerinin, T-hücre reseptörleri retroviral İletimi

Rekabetçi homing deneyler, doğrudan tek bir fare iki farklı hücre popülasyonlarının göçmen özelliklerinin değerlendirilmesi için izin verir. Burada oluşturulan ex vivo gut-tropik karşı-gut olmayan tropik T hücreleri göç karşılaştırarak bu yordamı göstermektedir.

Gut-tropik T Hücre Göç Eğitim Rekabetçi Homing Tahliller

Naif CD4 Coxsackie adenovirüs reseptör transgenik ekspresyonu ile T-hücreleri içine adenoviral gen transferi düzenleyici T hücre farklılaşmasının moleküler analiz...

Naif CD4 adenoviral İletimi Treg Farklılaşma Eğitim Hücreler T

Bir hücre sedimantasyon manifoldu/slayt aparatı kullanarak yapışık olmayan bağışıklık hücrelerinin radyal hareketliliğini in vitro olarak izlemek için bir protokol açıklıyoruz. Hücre göçü, tümör hücrelerinin tek katmanlarında veya hücre dışı matriks proteinlerinde izlenir. Işık ve floresan mikroskobu ile inceleme, hücre hareketliliğinin ve sitotoksik işlevselliğin gözlemlenmesine izin verir.

Radyal Hareket ve retroviral replike olan bir vektör transduse, Yapışmayan Alloresponsive T lenfositlerinin sitotoksik işlev

Tek bir T hücre reseptörü (TCR) retroviral tabanlı in vivo ekspresyon sistemi için hızlı ve esnek bir protokol sunuyoruz.  Retroviral vektörler, TCR transgenik farelere alternatif olarak in vivo olarak tek bir TCR'nin T hücresi gelişimini ve işlevini incelemek için kemik iliği progenitör hücrelerini dönüştürmek için kullanılır.

Kemik iliği projenitör hücrelerinin retroviral İletimi T-hücre reseptör Retrogenic fareler üretmek için

Bir çok deney sistemleri, bir immün yanıt olarak T hücresi gelişimini ve fonksiyonunu düzenlemek mekanizmaları anlamak için kullanılmıştır. İşte retroviral transdüksiyon kullanarak genetik yaklaşım düzenleyici yolları belirlenmesinde, ekonomik zaman verimli ve en önemlisi, son derece bilgilendirici olan tarif edilmektedir.

Eğitim için bir genetik Yaklaşım olarak yardımcı T hücrelerinin retroviral İletimi Mekanizmaları kendi Farklılaşma ve Kontrol Fonksiyonunun

Geçerli protokol birleştiren tek hücre insan TCR alpha ve beta zinciri sıralama ile eşleştirilmiş retroviral vektörler vitro ve in vivo TCR ifade ile uyumlu nesil aerodinamik.

Tek hücre TCR yalıtım ve üretme-in Vitro için Retroviral Vektörler ve In Vivo ifade insan TCRs aerodinamik

Bu protokol, memeli hücrelerinde G-protein kenetli reseptör (GPCR) içselleştirmenin konfokal mikroskopi bağlanmasını anlatır. Temel hücre kültürü, transfeksiyon, ve konfokal mikroskopi prosedürü içeren füzyon ifade GPCR hücre içi lokalizasyonu ve içselleşmesini tespit etmek için etkin ve kolay yorumlanabilir bir yöntem sağlar.

Aynı odaklı mikroskopi ile ligand-aktif G protein-eşli reseptör özümseme tespiti

Burada in vivo B-1a hücre göçve lokalizasyonu incelemek için retroviral aşırı ekspresyon ve murine B-1a hücrelerinin benimsenen transferi için bir yöntem açıklıyoruz. Bu protokol, donör B-1a hücre lokalizasyonunun niceliği veya donör hücre kaynaklı salgılanan faktörlerin benimsenme sonrası salgılanan faktörlerin analizi de dahil olmak üzere çeşitli downstream fonksiyonel tahliller için uzatılabilir.

Murine B-1a Hücrelerinde CXCR4'ün Retroviral Aşırı Ekspresyonu ve Hedeflenen B-1a Hücre Nakliiçin Kemik İliği ve IgM Üretimine Geçişinde Benimsenmiş Transfer

Th17 farklılaşmasının incelenmesinde gen düzenleme için etkili bir alternatif sağlayan, Cas9 transgenik farelerden alınan birincil T hücrelerine kılavuz RNA'nın retroviral transdüksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

İn vitro Th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral CRISPR/Cas9 aracılı gen hedeflemesi

Öğrenin, retroviral transdüksiyon ve rekabetçi hedef arama yöntemleriyle T hücresi lokalizasyonunu inceleyin. Bu protokoller, immün hücre trafik mekanizmalarını anlamak için temel ve terapötik araştırmalarda uygulanabilir.

Farklı Doku Mikroortamlarında GPCR Aracılı T Hücresi Lokalizasyonunu Araştırmak için Verimli Retroviral Transdüksiyon ve Rekabetçi Hedef Arama (Video) | JoVE Journal

Farklı Doku Mikroortamlarında GPCR Aracılı T Hücresi Lokalizasyonunu Araştırmak için Verimli Retroviral Transdüksiyon ve Rekabetçi Hedef Arama

Daha fazla video keşfet