Name: Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-25T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Keşfedin farelerde neokorteks kan akışını iki foton mikroskobisi ve kranial pencere kullanarak canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik serebral iskemi ve beyin fizyolojisi araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Kuyruk ven enjeksiyonları floresan dextrans boyalar <ol><li> Görüntü serebral vasküler amacıyla, hayvanların bir floresan boya ile intravenöz olarak enjekte edilmelidir. Dekstran benzer parçaları beyin kan bariyerini geçen ve kan damarlarının dışarı sızdıran boya engeller çünkü dekstran-konjuge boyaları kullanabilirsiniz. </li><li> Fareler izofluran (% 4, indüksiyon için enjeksiyon sırasında% 1.5-2) ile anestezi. </li><li> Kuyruk% 70 alkol ile dezenfekte edilir. </li><li> 26 gauge iğne ile, 75-100 ul, tuzlu su içinde çözünmüş rodamin dekstran% 5 v / v çözümü, kuyruk mili boyunca kuyruk ven yarıda ile enjekte edilir. </li><li> Boya, yaklaşık 2 saat içinde rodamin boya kullanılarak, pembe dönecek idrar atılır kadar hayvanların hemen kuyruk ven enjeksiyondan sonra görüntülü olabilir. </li></ol> Iki foton mikroskopi kullanılarak kan akışı Görüntüleme (görüntülü damarların sayısına bağlı olarak toplam süresi 30-60 dakika, seans başına) <ol><li> Floresan dekstran boya enjeksiyonu takiben, fare (indüksiyon için% 4,% 1-1.5 görüntüleme) izofluran anestezisi. </li><li> Fare sıkıca hayvan sıcak tutmak için bir termo-ayarlı ısıtma yastığı içeren mikroskop sahne, titanyum çubuğunu kullanarak eklenir. Bazı göz merhemi, gözleri nemli tutmak için uygulanır. </li><li> Kraniyal pencere cam kapak,% 70 alkol ile temizlenir. </li><li> Pencere odak düzlemli paralel olarak konumlandırılmış ve 4X objektif altında görüş alanı merkezli. </li><li> Beyin yüzey damarlarının dijital bir kamera ile bir fotoğraf çekmek için en iyisidir. Bu resim görüntüleme oturumları her geçen gün art arda görüntülü bölgeyi bulmak için aşağıdaki referans görüntü olarak kullanılır. </li><li> 4X objektif sahne hareket ettirmeden suya daldırma 40X hedefi ile değiştirilir. Görüş alanında dijital resim tekrar alınır. Sahne manipülatör koordinatları sıfır ayarlanır. </li><li> Biz görüntü elde etme yazılımı olarak ScanImage kullanın. Bu laboratuvar Karel Svoboda (Pologruto ve ark, 2003) Tom Pologruto ve Bernardo Sabatini tarafından MatLab yazılmıştır. Lazer, güç ölçer, fotoğraf çarpanları tüpler, yükselteçler, vb: Önümüzdeki tüm diğer ekipman açmak </li><li> Yansıması uygun pencere alanı kısa bir süre için en iyi bölgeyi bulmak için, düşük büyütmede taranır. Bir kere bu, düşük bir büyütme yığını görüntünün çekildiği için seçilen bölgenin tespit ve onun XY koordinatlarını açıklamalı. </li><li> Küçük damarlar ve kılcal kan akış dinamikleri kaydetmek için ilgi geminin en az 40 mikron hat boyunca taraması kullanın. Bu tek bir &quot;tarama&quot; kalıcı bir saniye, mümkün olduğunca az lazer güç ve tarama koordinatları ve açı yazılı olarak kullanarak yapılır. </li><li> Görüntüleme oturumu bittikten sonra, hayvanın anestezi kurtarmak sıcak bir odaya taşınır. </li></ol>

<ol><li>Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+and+stimulus-induced+changes+in+blood+flow+observed+in+individual+capillaries+in+layers+2+through+4+of+rat+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex.</a> Proc Nat Acad Sci. 95, 15741-15746 (1998).</li>
<li>Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ScanImage%3A+flexible+software+for+operating+laser+scanning+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Eng.+Online%22%5BJournal%5D)">ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes.</a> Biomed. Eng. Online. 17, 2-13 (2003).</li>
<li>Zhang, S., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+impact+of+cortical+microcirculation+on+synaptic+structure+and+sensory-evoked+hemodynamic+responses+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Imaging the impact of cortical microcirculation on synaptic structure and sensory-evoked hemodynamic responses in vivo.</a> 5, (2007).</li>
<li>Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetrating+arterioles+are+a+bottleneck+in+the+perfusion+of+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nat+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex.</a> Proc Nat Acad Sci. 104, 365-370 (2007).</li>
</ol>

Kortikal kan akımı dinamikleri görüntüleme floresan dekstran boyalar iki foton mikroskobu ile kemirgen kuyruk damar içine enjekte in vivo olarak incelenebilir. Bu video görüntü kan akışını dinamikleri ile farelerin bir cam kaplı kafatası pencere hazırlama neokorteks nasıl bir yöntem gösterdi.

<table><tbody><tr><td>Fluorescein izotiyosiyanat-dekstran</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD500S</td><td>mol ag 500,000</td></tr><tr><td>Rodamin B izotiyosiyanat-dekstran</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R9379</td><td>mol ag ~70,000</td></tr></tbody></table>

kranial pencere üzerinden neokorteks kan akış 2-foton görüntüleme bir yöntem

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

Yaşayan kemirgenler bozulmamış beyin beyin damarsal (kılcal büyük damarları) ve kan akışını dinamikleri kaydetmek için resim yeteneği güçlü bir tekniktir. Kafatası bir pencereden in vivo olarak 2 foton mikroskopi kullanılarak damar içine enjekte görüntü floresan boyalar mümkün. Bu kan akışı ölçümleri elde etmek için de görüntü kortikal damarsal bir izin ve. Bu teknik aslında David Kleinfeld ve Winfried Denk tarafından geliştirilmiştir. Bu yöntem, nörodejeneratif hastalıklar, beyin tümörleri, ya da normal beyin fizyolojisi, serebral iskemi sırasında veya sonrasında kan akış dinamiklerini incelemek için kullanılabilir. Örneğin, kırmızı kan hücre hız veya akı infarkt ve çevresinde ne kadar inme nedenleri kan akış yönü vardiya ve değişiklikleri incelemek için kullanılır olmuştur. Burada kuyruk damar içine enjekte floresan boyalar kullanarak yaşayan farelerin neokorteks görüntü kan akışını dinamikleri 2-foton mikroskopi nasıl kullanılacağını göstermektedir.

Kortikal kan akımı dinamikleri 2-foton mikroskobu ile kemirgen kuyruk damar içine enjekte görüntüleme floresan dekstran boyalar in vivo olarak incelenebilir. Bu video görüntü kan akışını dinamikleri ile farelerin bir cam kaplı kafatası pencere hazırlama neokorteks nasıl gösterir.

Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem

Canlı kemirgenlerin sağlam beyninde serebral vaskülatürü (büyük damarlardan kılcal damarlara kadar) görüntüleme ve kan akış dinamiklerini kaydetme yeteneği ...

Yaşayan kemirgenlerin sağlam beyninde serebral vaskülatürün görüntülenmesi ve kan akış dinamiklerinin kaydedilmesi yeteneği, serebral iskemi veya normal beyin fizyolojisinin incelenmesinde uygulanabilecek güçlü bir tekniktir. Burada, kuyruk venine enjekte edilen floresan boyalar kullanarak yaşayan farelerin neokorteksindeki kan akış dinamiklerini görüntülemek için iki foton mikroskopisinin nasıl kullanılacağını göstereceğiz. Bu teknik orijinal olarak David Kleinfeld ve Winfred Dank tarafından geliştirilmiştir.Merhaba, ben California Üniversitesi Los Angeles Nöroloji Bölümü'ndeki Carlos Porter Cayo Laboratuvarı'ndan Ricardo Mota. Önceki bir videoda, in vivo kronik görüntüleme deneyleri için kraniyal pencere implantasyon yöntemini göstermiştik. Bugün size, kraniyal pencere aracılığıyla serebral korteksteki kan akış dinamiklerinin görüntüleme prosedürünü göstereceğiz.Bu hazırlık, iki foton lazer mikroskopisi kullanarak beynin derinliklerinin görüntülenmesine olanak tanıdığı için oldukça kullanışlıdır. Öyleyse başlayalım. Serebral vaskülatürü görüntülemek için hayvanlara intravenöz olarak floresan bir boya enjekte edilmelidir.Dekstran motifi boyanın kan-beyin bariyerini geçmesini ve ka

a-method-for-2-photon-imaging-blood-flow-neocortex-through-cranial

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video ve protokol kemirgenlerde bir cam kaplı kafatası pencere nasıl implant göstermektedir. Bu hazırlıklar, kronik in vivo iki ay zaman ölçekleri üzerinde neokorteks foton görüntüleme için kullanılabilir. Optik içsel sinyal görüntüleme gibi diğer görüntüleme türleri için de kullanılıyor olabilir.

Kronik Beyin Görüntüleme Kraniyotomi Cerrahi Prosedür

Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik bir...

Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme

Biz milimetre yayılan ve beyin iltihabı olmadan ay dayanır farenin kafatasında bir görüntüleme penceresi oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem de iki foton mikroskopi kullanılarak kan akımı, hücresel dinamiği ve hücre / vasküler yapının uzunlamasına çalışmalar için uygundur.

Fare Beyin Uzun vadeli Görüntüleme için Parlak ve Takviyeli inceltilmiş-kafatası Pencere

Kaynak: Bisht, K.,  et al. Farelerde nöro-immün dinamiklerin tekrarlayan in vivo görüntülemesini gerçekleştirmek için hassas beyin haritalaması. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, kafatası implantı olan transgenik bir farede nöro-immün dinamiklerin floresan görüntülemesini göstermektedir. Vasküler ve nöronal stabilite, nöronal aktiviteye karşı immün yanıtları yansıtan dinamik mikroglial değişikliklerle birlikte görüntülenir.

Kafatası İmplantı Kullanılarak Nöro-İmmün Dinamiklerin Floresan Görüntülemesi

Bir yöntem olup, önceden belirlenmiş neokorteks fonksiyonel mikro etki floresan boyalar ile nöronlar etiketleme için açıklanmıştır. İlk olarak, iç sinyal optik görüntüleme fonksiyonel bir harita elde etmek için kullanılır. Sonra iki foton mikroskopi haritanın bir mikro-etki alanı içindeki etiket ve resim nöronlar için kullanılır.

Belirli Fonksiyonel İçsel Sinyal birleştiren tarafından neokorteks Mikro-etki ve İki foton Görüntüleme nöronlar Hedefli Etiketleme

Nöronlarda deneyim-bağımlı moleküler değişiklikler davranışsal sorunlara yanıt olarak adapte beyin yeteneği için gereklidir.

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

Biz yukarıda ikili birincil somatosensor corticies (S1) Thy1içinde çift optik pencerelerden nöronal aktivite ölçmek için deneysel bir işlem tarif-GCaMP6s transgenik fareler 2-foton (2 P) mikroskopi vivo içindekullanma.

Sinirsel aktivite Thy1kullanarak birincil somatosensor kortekste Imaging-GCaMP6s transgenik fareler

Biz bir in vivo serebral korteks yenidoğan farelerin görüntüleme için protokol Imaging iki fotonlu mevcut. Bu yöntem kortikal nöronlar, nöronal dinamikleri ve hastalık modelleri nöronal dinamiklerini değişiklikleri kontrol moleküler mekanizmaları gelişimsel dinamiklerini analiz etmek için uygundur.

Vivo Yenidoğan farelerde kortikal nöronların iki fotonlu görüntüleme

Bu çalışma, farelere tekrarlayan bir travmatik beyin hasarının verilmesini ve iki foton mikroskobu kullanılarak nöron eksprese edilen bir EGFP'nin daha sonraki intravital görüntülemesi için bir kraniyal pencerenin eşzamanlı implantasyonunu göstermektedir.

Kapalı Kafatası Travmatik Beyin Hasarı ve Kraniyal Penceresi Olan Farelerde Floresan Protein Ekspresyonunun İki Foton Mikroskobu Kullanılarak İntravital Görüntülenmesi

Bir fare modelinde floresan etiketli demir oksit nanopartiküllerinin glioblastoma tümör iletiminin iki foton mikroskobu için yeni bir yaklaşım sunuyoruz.

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

Keşfedin farelerde neokorteks kan akışını iki foton mikroskobisi ve kranial pencere kullanarak canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik serebral iskemi ve beyin fizyolojisi araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet