Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem

Serebral vaskülatürü görüntüleme ve canlı kemirgenlerin sağlam beynindeki kan akış dinamiklerini kaydetme yeteneği, serebral iskemi veya normal beyin fizyolojisi çalışmalarına uygulanabilecek güçlü bir tekniktir. Burada, kuyruk damarına enjekte edilen floresan boyaları kullanarak canlı farelerin neokorteksindeki kan akış dinamiklerini görüntülemek için iki foto mikroskobun nasıl kullanılacağını göstereceğiz. Bu teknik ilk olarak David Kleinfeld tarafından Winfred Dank'ta geliştirilmiştir.

Merhaba, ben California Los Angeles Üniversitesi Nöroloji Bölümü'ndeki Carlos Porter Cayo Laboratuvarı'ndan Ricardo Mota. Önceki bir videoda, in vivo kronik görüntüleme deneyleri için bir kraniyal pencere implante etme yöntemini gösterdik. Bugün size serebral korteksteki kan akış dinamiklerini bir kraniyal pencereden görüntüleme prosedürünü göstereceğiz.

Bu hazırlık çok faydalıdır çünkü foton lazer mikroskobu kullanarak beynin derinliklerinde görüntü elde edilmesini sağlar. Öyleyse başlayalım. Serebral vaskülatürü görüntülemek için, Hayvanlara floresan bir boya ile intravenöz olarak enjekte edilmelidir.

Dexter konjuge boyalarını kullanıyoruz çünkü dekstron moty, boyanın kan-beyin bariyerini geçmesini ve kan damarlarından dışarı sızmasını engelliyor. Fareler, indüksiyon için% 4 ve% 1.5 ila% 2 oranında flor ile anestezi altına alınır. Daha sonra, kuyruk, 26 gauge iğne ile% 70'lik üç çubukla dezenfekte edilir, tuzlu su içinde çözülmüş% 5'lik bir R domin Dekstran çözeltisinin 75 ila yüz mikrolitresi kuyruk damarından enjekte edilir.

Kuyruk hayvanlarının şaftının ortasında, kuyruk damarı enjeksiyonundan hemen sonra, kalıp idrarla atılana kadar görüntülenebilir, bu da ERO domin boyası kullanılırsa pembeye dönecektir Floresan Dexter boya enjeksiyonunu takiben yaklaşık iki saat içinde, Fare flor isofi ile uyuşturulur. Yine, indüksiyon için %4, görüntüleme için bir ila %1.5. Fare, hayvanı sıcak tutmak için termal ayarlı bir ısıtma yastığı içeren mikroskop aşamasına titanyum çubuk kullanılarak sıkıca tutturulur.

Gözleri nemli tutmak için bir miktar göz merhemi sürülür. Kafatası penceresinin kapak camı %70 alkol ile temizlenir. Pencere, odak düzlemine paralel olarak konumlandırılır ve görüş alanında ortalanır.

Dört x objektif altında, bir dijital kamera ile beyin yüzeyi damarlarının fotoğrafını çekmek en iyisidir. Bu resim, görüntü bölgesini günden güne tekrar tekrar bulmak için sonraki görüntüleme oturumlarında referans görüntü olarak kullanılacaktır. Dört x objektif daha sonra suya daldırma 40 x objektif ile değiştirilir.

Sahneyi hareket ettirmeden, görüntünün dijital resmi çekilir. Yine, sahne manipülatörünün koordinatları sıfır olarak ayarlanmıştır. Görüntü elde etme yazılımı olarak tarama görüntüsünü kullanıyoruz.

Bu, Carls Voto'nun laboratuvarında Tom Paul Rudo ve Bernardo Sabatini tarafından MATLAB'da yazılmıştır. Daha sonra diğer tüm ekipmanları, lazeri, güç ölçeri, foto çarpan tüplerini, amplifikatörleri vb. açıyoruz. Pencerenin görüntülenmeye uygun alanı, en iyi bölgeleri bulmak için düşük büyütmede kısa bir süre taranır.

Bunlar tanımlandıktan sonra, görüntü için seçilen bölgenin düşük büyütme yığını alınır ve XY koordinatları, küçük damarlarda veya kılcal damarlarda kan akış dinamiklerini kaydetmek için açıklanır. İlgilenilen geminin en az 40 mikronu boyunca çizgi taramaları kullanıyoruz. Bir saniye süren bu tek taramalar, mümkün olduğunca az lazer gücü kullanılarak yapılır ve taramanın koordinatları ve açısı yazılır.

Görüntüleme seansı sona erdiğinde, hayvan anesteziden kurtulabileceği sıcak bir odaya taşınır. Burada, kuyruk damarından r Domine dekstran enjekte edilen beş aylık bir farenin somatosensoriyel korteksi üzerine yerleştirilmiş bir kraniyal pencereden iki foton mikroskobumuzla çekilen yüz görüntüden oluşan bir yığını gösteriyoruz. Bu görüntü dizisi, Kılcal damarlar da dahil olmak üzere büyük ve küçük kan damarlarının karmaşık ağını göstermektedir.

Az önce size bir kraniyal pencereden in vivo olarak kan akış dinamiklerini görselleştirmek için bir yöntem gösterdik. Bu, örneğin inme sonrası kan akışındaki değişiklikleri araştırmak için kortikal vaskülatürdeki serebral kan akış dinamiklerini görüntülemek için son derece güçlü bir yöntemdir. Floresan boyanın tekrarlanan kuyruk damar enjeksiyonları kullanılarak BUL'lerde çeşitli zamanlarda çoklu hayal gücü yapılabilir.

Bu prosedürü yaparken, mümkün olan en temiz ve daha steril koşullarda çalışmayı ve çok sağlam bir elin olmasını unutmamak önemlidir. Tamam, bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneyinizde iyi şanslar.