Name: Canlı FRET mikroskobu ve immünofloresan ile erken zebra balığı Noonan sendromu modellerinde ERK aktivite modülasyonunu değerlendirmek için etkili bir protokol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Keşfedin canlı FRET mikroskobisi ve immünofloresan yöntemleriyle zebra balığı embriyolarında ERK aktivite modülasyonunu değerlendirme tekniğini. Bu protokol RASopati ilişkili varyant doğrulama ve farmakolojik testler için güçlü bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Iroegbu, J. D., Ijomone, O. K., Femi-Akinlosotu, O. M., Ijomone, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK%2FMAPK+signalling+in+the+developing+brain%3A+Perturbations+and+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">ERK/MAPK signalling in the developing brain: Perturbations and consequences.</a> Neurosci Biobehav Rev. 131, 792-805 (2021).</li>
<li>Tartaglia, M., Aoki, Y., Gelb, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+genetics+of+RASopathies%3A+An+update+on+novel+disease+genes+and+new+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Genet+C+Semin+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">The molecular genetics of RASopathies: An update on novel disease genes and new disorders.</a> Am J Med Genet C Semin Med Genet. 190 (4), 425-439 (2022).</li>
<li>Tate, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COSMIC%3A+the+catalogue+of+somatic+mutations+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">COSMIC: the catalogue of somatic mutations in cancer.</a> Nucleic Acids Res. 47 (D1), D941-D947 (2019).</li>
<li>Tartaglia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+PTPN11%2C+encoding+the+protein+tyrosine+phosphatase+SHP-2%2C+cause+Noonan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in PTPN11, encoding the protein tyrosine phosphatase SHP-2, cause Noonan syndrome.</a> Nat Genet. 29 (4), 465-468 (2001).</li>
<li>Jopling, C., van Geemen, D., den Hertog, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shp2+knockdown+and+Noonan%2FLEOPARD+mutant+Shp2-induced+gastrulation+defects%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Shp2 knockdown and Noonan/LEOPARD mutant Shp2-induced gastrulation defects.</a> PLoS Genet. 3 (12), e225(2007).</li>
<li>Wong, K. -L., Akiyama, R., Bessho, Y., Matsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK+activity+dynamics+during+zebrafish+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">ERK activity dynamics during zebrafish embryonic development.</a> Int J Mol Sci. 20 (1), 109(2019).</li>
<li>Fasano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+FRET-based+Teen+sensor+to+monitor+ERK+activation+changes+preceding+morphological+defects+in+a+RASopathy+zebrafish+model+and+phenotypic+rescue+by+MEK+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Assessment of the FRET-based Teen sensor to monitor ERK activation changes preceding morphological defects in a RASopathy zebrafish model and phenotypic rescue by MEK inhibitor.</a> Mol Med. 30 (1), 47(2024).</li>
<li>Zimmermann, T., Rietdorf, J., Girod, A., Georget, V., Pepperkok, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+imaging+and+linear+un-mixing+enables+improved+FRET+efficiency+with+a+novel+GFP2-YFP+FRET+pair%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Spectral imaging and linear un-mixing enables improved FRET efficiency with a novel GFP2-YFP FRET pair.</a> FEBS Lett. 531 (2), 245-249 (2002).</li>
<li>Sari, D. W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+observation+of+stepwise+regression+of+Erk+activity+in+zebrafish+presomitic+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Time-lapse observation of stepwise regression of Erk activity in zebrafish presomitic mesoderm.</a> Sci Rep. 8 (1), 4335(2018).</li>
<li>Wang, H., Li, J., Xue, T., Cheng, N., Du, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+a+series+of+pCS2%2B+backbone-based+Gateway+vectors+for+overexpressing+various+tagged+proteins+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Biophys+Sin+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">Construction of a series of pCS2+ backbone-based Gateway vectors for overexpressing various tagged proteins in vertebrates.</a> Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 48 (12), 1128-1134 (2016).</li>
<li>Abdelrahman, D., Hasan, W., Da'as, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+quality+control+in+zebrafish+model+for+genetic+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Microinjection quality control in zebrafish model for genetic manipulations.</a> MethodsX. 8, 101418(2021).</li>
<li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (27), e1113(2009).</li>
<li>Rossant, J., Nutter, L. M. J., Gertsenstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Engineering the embryo.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (19), 7659-7660 (2011).</li>
<li>Jindal, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+severity+ranking+of+Ras+pathway+mutations+associated+with+developmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">In vivo severity ranking of Ras pathway mutations associated with developmental disorders.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 114 (3), 510-515 (2017).</li>
<li>Leavesley, S. J., Rich, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+lmitations+of+FRET+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Overcoming lmitations of FRET measurements.</a> Cytometry A. 89 (4), 325-327 (2016).</li>
<li>Mascha, E., Vetter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance%2C+errors%2C+power%2C+and+sample+size%3A+Theblocking+and+tackling+of+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Significance, errors, power, and sample size: Theblocking and tackling of statistics.</a> Anesth Analg. 126 (2), 691-698 (2018).</li>
<li>Faul, F., Erdfelder, E., Lang, A. -G., Buchner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G%2APower+3%3A+a+flexible+statistical+power+analysis+program+for+the+social%2C+behavioral%2C+and+biomedical+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Res+Methods%22%5BJournal%5D)">G*Power 3: a flexible statistical power analysis program for the social, behavioral, and biomedical sciences.</a> Behav Res Methods. 39 (2), 175-191 (2007).</li>
<li>Cohen, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohen%2C+J+%22Statistical+power+analysis+for+the+behavioral+sciences%22">Statistical power analysis for the behavioral sciences</a>. , Routledge. New York. (1988).</li>
<li>Anastasaki, C., Rauen, K. A., Patton, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continual+low-level+MEK+inhibition+ameliorates+cardio-facio-cutaneous+phenotypes+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Continual low-level MEK inhibition ameliorates cardio-facio-cutaneous phenotypes in zebrafish.</a> Dis Model Mech. 5 (4), 546-552 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><Güçlü>Plastik Eşyalar</Güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.7 L Yetiştirme Tankı - Plaj Tarzı Tasarım</td><td>Tecniplast</td><td>1.7L EĞIMLI</td><td>Üreme tankı</td></tr><tr><td>Hiller GC100F-10</td><td>Harvard cihazı</td><td>30-0019</td><td>Tek hücreli embriyo mikroenjeksiyonu</td></tr><tr><td>Hücre ve Doku Kültür Plakaları - 12 kuyu</td><td>BIOFIL</td><td>TCP011012</td><td>Embriyo toplama ve tedavi</td></tr><tr><td>Hücre ve Doku Kültür Plakaları - 6 kuyu</td><td>BIOFIL</td><td>TCP011006</td><td>Embriyo toplama ve tedavi</td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Çanakı</td><td>SPL Yaşam Bilimleri</td><td>20100</td><td>Embriyo koleksiyonu&nbsp;</td></tr><tr><td>Nunc Cam Çanaklar 12mm</td><td>Thermo Fisher</td><td>150680</td><td>Embriyo FRET spektral görüntüleme</td></tr><tr><td>Pipette Pasteur</td><td>Corning</td><td>357524</td><td>Embriyo transferi</td></tr><tr><td>Protein Lobind Tüpleri 2ml</td><td>Eppendorf</td><td>30108450</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td><güçlü>reaktifler ve diğerleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Caviar 500-800 & micro; m</td><td>Rettenmaier Italia</td><td>BE2269 (500-800)</td><td>Kuru balık maması</td></tr><tr><td>Büyük Tuz Gölü Mavi Artemia Kistleri</td><td>Sanders</td><td>00004727</td><td>Canlı balık yemi</td></tr><tr><td>Anında Okyanus tuzu</td><td>Tecniplast</td><td>XPSIO25R</td><td>Canlı gıda hazırlamak için kurutulmuş deniz tuzu</td></tr><tr><td>Tg(EF1a:ERK Biosensor-nes) (Teenç)</td><td>Sipariş için iletişim bilgileri*: Ulusal BiyoKaynak Projesi Zebrafish, Hayvan Kaynakları Geliştirme Destek Birimi, RRD, RIKEN Beyin Bilimi Merkezi, Japonya. https://shigen.nig.ac.jp/zebra/index_en.html *MTA imzası üzerine.&nbsp; </td><td>-</td><td>ERK Reporter zebrafish hattının tedarikçisi. Balık embriyoları, Japonya Zebrafish için Ulusal Biyokaynak Projesi'nden (RIKEN, Japonya) MTA imzası ile elde edilebilir. Zebrafish hattı, Nara Bilim ve Teknoloji Enstitüsü (Takaaki Matsui) ve Ulusal Genetik Enstitüsü (NIG/ROIS) (Koichi Kawakami, Tol2 sistemi patenti) tarafından yatırılır (Wong ve ark., 2018; Urasaki ve ark., 2006, Okamoto ve Ishioka, 2010).</td></tr><tr><td>6x yükleme boyası</td><td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>B7024S</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>100 bp DNA merdiveni</td><td>NEB</td><td>N3231S</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1,01,236</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>Agarose, düşük jelleşme sıcaklığı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9414-10G</td><td>FRET spektral görüntüleme ve IHC testi için embriyo montajı</td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8022</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506</td><td>E3 ortam bileşeni</td></tr><tr><td>Kalsiyum nitrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>237124</td><td>Danieau stok çözelti bileşeni</td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418-100ML</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884</td><td>Jel hazırlamak için TBE tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Etanol 99%+</td><td>Fisher Scientific</td><td>10048291</td><td>In vitro RNA arıtma</td></tr><tr><td>Formaldeide %16</td><td>Thermo Fisher</td><td>28908</td><td>Embriyo fiksasyonu</td></tr><tr><td>Formamide&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9037</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>Jel Yükleme Tamponu II (SAYFAYI Denaturing)</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM8546G</td><td>In vitro RNA transkripsiyonu</td></tr><tr><td>Buzul Asetik Asidi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>695092</td><td>Jel hazırlamak için TBE tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Gliserol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6279-1L</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>Keçi fare karşıtı Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher</td><td>A11001</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>Keçi karşıtı tavşan Alexa Fluor 633</td><td>Thermo Fisher</td><td>A21070</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td>Danieau stok çözelti bileşeni</td></tr><tr><td>KpnI - HF (Enzim + rCutSmart Buffer)</td><td>NEB</td><td>R3142</td><td>Plazmid linearizasyonu&nbsp;</td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230391</td><td>E3 orta bileşeni/Danieau stok çözeltisi bileşeni</td></tr><tr><td>Milenyum RNA Belirteçleri</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM7150</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>Monarch Genomik DNA Arıtma Kiti</td><td>NEB</td><td>T3010L</td><td>Plazmid linearizasyonu&nbsp;</td></tr><tr><td>Fare monoklonal p44/42 MAPK</td><td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>4696S</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>mMACHINE SP6 Transkripsiyon Kiti&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM1340</td><td>In vitro RNA transkripsiyonu</td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu (NGS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9023</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>Nükleazsız su Ambionu</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM9937</td><td>In vitro RNA transkripsiyonu</td></tr><tr><td>PD0325901</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PZ0162</td><td>MEK inhibitörü</td></tr><tr><td>Fenol Kırmızı çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290</td><td>Mikroenjeksiyon karışımı bileşeni&nbsp;</td></tr><tr><td>Poly A Kuyruk Kiti</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM1350</td><td>In vitro RNA transkripsiyonu</td></tr><tr><td>Potasyum klorür bioxtra&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td>E3 orta bileşeni/Danieau stok çözeltisi bileşeni/PBS stok çözeltisi bileşeni</td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>PBS stok çözeltisi bileşeni</td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2308</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>Tavşan poliklonal fosfo-p44/42 MAPK&nbsp;</td><td>Hücre Sinyalizasyonu</td><td>4695S</td><td>IHC testi</td></tr><tr><td>SYBR güvenli DNA jel boyama</td><td>Thermo Fisher</td><td>S33102</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31434-M</td><td>E3 orta bileşeni/Danieau stok çözeltisi bileşeni/PBS stok çözeltisi bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71643</td><td>PBS stok çözeltisi bileşeni</td></tr><tr><td>Trizma üssü</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>Jel hazırlamak için TBE tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>PBSTr tampon bileşeni</td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alliance Mini HD9&nbsp;</td><td>Uvitec</td><td>-</td><td>Görüntüleme sistemi</td></tr><tr><td>Santrifüj 5430 R</td><td>Eppendorf</td><td>5428000205</td><td>Mikrosantrifüj</td></tr><tr><td>Eppendorf TermoMikser C</td><td>Eppendorf</td><td>-</td><td>Embriyo montajı&nbsp;</td></tr><tr><td>FemtoJet 4x</td><td>Eppendorf</td><td>-</td><td>Mikroenjeksiyon sistemi</td></tr><tr><td>Sonsuz M Plex&nbsp;</td><td>Tecan</td><td>-</td><td>Çok modlu plaka okuyucu</td></tr><tr><td>Leica M205FA</td><td>Leica Microsystems</td><td>-</td><td>Floresans stereo mikroskobu</td></tr><tr><td>Kuluçka makinesiyle donatılmış Leica TCS-SP8X (OkoLab)</td><td>Leica Microsystems</td><td>-</td><td>Konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>Mini-alt Hücre GT Horiziontal Elektroforez Sistemi&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1704406</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>PC-100 Dikey çekici</td><td>Narishige</td><td>-</td><td>İğne çekici</td></tr><tr><td>PowerPac Evrensel Güç Kaynağı</td><td>Bio-Rad</td><td>1645070</td><td>Jel Elecrophoresis</td></tr><tr><td>Stellaris 5&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>-</td><td>Konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>Vortex MiniStar gümüş hattı</td><td>VWR</td><td>-</td><td>Plazmid hazırlığı</td></tr><tr><td>Softwares</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biyorender</td><td>Biyorender</td><td>CC-BY 4.0 lisansı</td><td>Figürler için karikatür açıklaması</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft Office Professional Plus 2019</td><td>-</td><td>Veri analizleri</td></tr><tr><td>Fiji yazılımı</td><td>ImageJ</td><td>15.3t</td><td>Görüntüleme renderı ve nicel analizler (FRET sinyal ölçümleri, IHC testinde ERK floresans yoğunluğu, embriyo eksenleri uzunluğu)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism&nbsp;</td><td>GraphPad Software LLC</td><td>v. 9</td><td>İstatistiksel veri analizleri</td></tr><tr><td>iControl spektrofotometre yazılımı</td><td>Tecan</td><td>v. 2.0</td><td>RNA niceliklendirmesi</td></tr><tr><td>İllüstratör</td><td>Adobe</td><td>26.0.3 (64-bit)</td><td>Figür montajı</td></tr><tr><td>LASX yazılımı</td><td>Leica Microsystems</td><td>v. 4.5 (Stellaris 5), v. 3.0 (M205FA), v. 3.5 (TCS-SP8X)</td><td>Spektral FRET deneyleri için görüntüleme ve eksen uzunluğu ölçümleri için embriyo görüntüleme</td></tr><tr><td>Q9 Mini 18.02-SN yazılımı</td><td>Uvitec</td><td>-</td><td>Jel görüntü alımı</td></tr></tbody></table>

canlı fret mikroskobu ve immünofloresan ile erken zebra balığı noonan sendromu modellerinde erk aktivite modülasyonunu değerlendirmek için etkili bir protokol

An Efficient Protocol to Assess ERK Activity Modulation in Early Zebrafish Noonan Syndrome Models via Live FRET Microscopy and Immunofluorescence

Canlı FRET mikroskobu ve immünofloresan ile erken zebra balığı Noonan sendromu modellerinde ERK aktivite modülasyonunu değerlendirmek için etkili bir protokol

RASopathies are genetic syndromes caused by ERK hyperactivation and resulting in multisystemic diseases that can also lead to cancer predisposition. ...

an-efficient-protocol-to-assess-erk-activity-modulation-early

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu video, zebra balığı embriyolarında motor nöronların elektrofizyolojisini incelemek için invaziv olmayan bir testi göstermektedir. Omurilik motor nöronlarının spontan depolarizasyonu sonucu embriyolarda kuyruk koilinin ölçümü yapıldıktan sonra, koilleme frekansını azaltmak için bir sodyum kanal blokeri uygulanır. Daha sonra, embriyolar agaroz içinde hareketsiz hale getirilir ve bir floresan mikroskobu altına yerleştirilir. Genetik olarak tasarlanmış motor nöronlar, bir donör ve bir alıcı...

Zebra Balığı Embriyolarında Motor Nöronların Elektrofizyolojisini İncelemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Yaklaşım

Zebra balığı artık kas distrofilerini, konjenital miyopatileri ve ilgili nöromüsküler hastalıkları modellemek için yerleşik ve güçlü bir araçtır. Çift kırılma ve dokunma ile uyarılmış kaçış davranışı, zebra balığı embriyolarının erken gelişim sırasında kas düzensizliği ve lokomotif bozukluğunun derecesini belirlemek için kullanılan iki yaygın noninvaziv testtir.

Larva Zebra Balıklarında İskelet Kası Defektlerinin Bikırılma ve Dokunma-Uyandırma Kaçış Yanıtı Deneyleri ile Analizi

Zebra balığı embriyolarının dokuya özel floresans yarı otomatik görüntüleme için bir protokol aşağıda tarif edilmiştir.

Zebra balığı Embriyolar Doku spesifik Floresans yarı otomatik Görüntüleme

Zebra balığı larvalarının mikromanipülasyon ve elektroretinografi tekniklerini kullanarak elektroretinografik (ERG) analizi için bir yöntem sunuyoruz. Bu, zebra balığı larvalarının in vivo görsel işlevini test etmek için basit ve anlaşılır bir yöntemdir.

Zebra balığı Larva Görsel Tepki Elektroetinogram Analizi

Burada açıklanan protokoller, zebra balığı embriyolarını in vivo bir sistemde kullanarak, ilgilenilen hücre tipinde seçici olarak ifade edilen bir floresan rezonans enerji transferi (FRET) tabanlı genetik olarak kodlanmış voltaj göstergesi (GEVI) ile birlikte uyarılabilir hücrelerin elektriksel özelliklerinin incelenmesine izin verir.

Canlı Zebra balığı Embriyolarında Biosense Motor Nöron Membranı Potansiyeli

Burada, DEPDC5 geninin geçici inhibisyonundan kaynaklanan bir zebra balığı epilepsi modelinin geliştirilmesi ve karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Zebra balığı epilepsi modelinde davranışsal ve fizyolojik analiz

Bu yazıda yetişkin zebrafish stres davranışsal ölçmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, stresli bir durumda, zebra balığı bir tankın alt yarısını tercih ettiği doğuştan gelen eğilimin avantajlarından yararlanır. Biz de Farmakoloji ile tahlil bağlantı için yöntemleri tarif.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Optik berraklık, zebra balıklarında hücre biyolojik ve fizyolojik çalışmaları için önemli bir avantajdır. Bireysel hayvanlarda hücre büyümesinin ölçülmesi için sağlam yöntemler, iskelet kasının ve komşu dokuların büyümesinin tüm vücut büyümesiyle nasıl bütünleştiğine dair yeni bilgiler sağlayan tanımlanmıştır.

Değiştirilmiş elektriksel aktiviteye maruz kalan bireysel canlı zebra balıklarında iskelet kası büyümesinin gerçek zamanlı ve tekrarlanan ölçümü

Reaktif elektrofilleri ve oksidanları (Z-REX) hedefleyen zebra balığı, reaktif küçük moleküllü sinyalizasyonun araştırılması için kimyasal biyoloji tabanlı bir yöntemdir. Bu teknik, farklı gelişim aşamalarındaki canlı balıklara uygulanabilir. Burada, zebra balığındaki standart tahlilleri sinyal yolu analizi için Z-REX ile birleştiriyoruz.

Larva Zebra Balıklarında Hedef Sinyalizasyon Yanıtlarının İzlenmesi - Z-REX Elektrofilik İlaçların ve Metabolitlerin Hassas Mekanizmalarının Maskesini Çıkarır

Sinyal yollarının optogenetik manipülasyonu, gelişim, rejenerasyon, homeostaz ve hastalıkta sinyalleşmenin nasıl çözüldüğünü araştırmak için güçlü bir strateji olabilir. Bu protokol, erken zebra balığı embriyosunda ışık-oksijen-voltaj algılama alanı tabanlı Nodal ve kemik morfojenik protein (BMP) sinyal aktivatörlerinin kullanılması için pratik yönergeler sağlar.

Zebra Balığı Embriyolarında Optogenetik Sinyal Aktivasyonu

Burada, konfokal mikroskopi kullanarak GCaMP kalsiyum göstergelerini eksprese eden transgenik zebra balıklarının beyin bölgelerindeki nöral aktiviteyi incelemek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

In vivo (İn canlı) Kısmen Kısıtlanmış Larva Zebra Balıklarında Duyusal Stimülasyonla İndüklenen Nöral Aktivitenin Konfokal Floresan Görüntülemesi

Keşfedin canlı FRET mikroskobisi ve immünofloresan yöntemleriyle zebra balığı embriyolarında ERK aktivite modülasyonunu değerlendirme tekniğini. Bu protokol RASopati ilişkili varyant doğrulama ve farmakolojik testler için güçlü bir çerçeve sunar.

Canlı FRET mikroskobu ve immünofloresan ile erken zebra balığı Noonan sendromu modellerinde ERK aktivite modülasyonunu değerlendirmek için etkili bir protokol (Video) | JoVE Journal

Canlı FRET mikroskobu ve immünofloresan ile erken zebra balığı Noonan sendromu modellerinde ERK aktivite modülasyonunu değerlendirmek için etkili bir protokol

Daha fazla video keşfet