Name: İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Keşfedin iskelesiz 3D hücre kültürü yöntemleriyle epitelial kanser hücrelerinde heteromultihücreli stromal etkileşimleri. Bu protokol metastaz ve tedavi direnci mekanizmalarını incelemek için yenilikçi bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>de Visser, K. E., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolving+tumor+microenvironment%3A+From+cancer+initiation+to+metastatic+outgrowth%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The evolving tumor microenvironment: From cancer initiation to metastatic outgrowth.</a> Cancer Cell. 41 (3), 374-403 (2023).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+The+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: The next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li>
<li>Anderson, N. M., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment.</a> Curr Biol. 30 (16), R921-R925 (2020).</li>
<li>Baghban, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+microenvironment+complexity+and+therapeutic+implications+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Tumor microenvironment complexity and therapeutic implications at a glance.</a> Cell Commun Signal. 18 (1), 59(2020).</li>
<li>Sahai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+advancing+our+understanding+of+cancer-associated+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">A framework for advancing our understanding of cancer-associated fibroblasts.</a> Nat Rev Cancer. 20 (3), 174-186 (2020).</li>
<li>Erdogan, B., Webb, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts+modulate+growth+factor+signaling+and+extracellular+matrix+remodeling+to+regulate+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts modulate growth factor signaling and extracellular matrix remodeling to regulate tumor metastasis.</a> Biochem Soc Trans. 45 (1), 229-236 (2017).</li>
<li>Iozzo, R. V., Sanderson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteoglycans+in+cancer+biology%2C+tumour+microenvironment+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Proteoglycans in cancer biology, tumour microenvironment and angiogenesis.</a> J Cell Mol Med. 15 (5), 1013-1031 (2011).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Balani, S., Nguyen, L. V., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+process+of+human+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Modeling the process of human tumorigenesis.</a> Nat Commun. 8 (1), 15422(2017).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Wang, E., Xiang, K., Zhang, Y., Wang, X. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+%28PDOs%29+and+PDO-derived+xenografts+%28PDOXs%29%3A+New+opportunities+in+establishing+faithful+pre-clinical+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Cent%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids (PDOs) and PDO-derived xenografts (PDOXs): New opportunities in establishing faithful pre-clinical cancer models.</a> J Natl Cancer Cent. 2 (4), 263-276 (2022).</li>
<li>Kamb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+wrong+with+our+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">What's wrong with our cancer models.</a> Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).</li>
<li>Tuveson, D., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+modeling+meets+human+organoid+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer modeling meets human organoid technology.</a> Science. 364 (6444), 952-955 (2019).</li>
<li>Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillère, R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+in+oncoimmunology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models in oncoimmunology.</a> Nat Rev Cancer. 16 (12), 759-773 (2016).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models+in+cancer+therapy%3A+technologies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models in cancer therapy: technologies and applications.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 160(2023).</li>
<li>Ben-David, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+undergo+mouse-specific+tumor+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts undergo mouse-specific tumor evolution.</a> Nat Genet. 49 (11), 1567-1575 (2017).</li>
<li>Byrne, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrogating+open+issues+in+cancer+precision+medicine+with+patient-derived+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 17 (4), 254-268 (2017).</li>
<li>Ivanics, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+cryopreservation+and+reanimation+outcomes+are+dependent+on+cryoprotectant+type%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft cryopreservation and reanimation outcomes are dependent on cryoprotectant type.</a> Lab Invest. 98 (7), 947-956 (2018).</li>
<li>Biju, T. S., Priya, V. V., Francis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+three-dimensional+cell+culture+in+therapeutics+and+diagnostics%3A+an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv+and+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Role of three-dimensional cell culture in therapeutics and diagnostics: an updated review.</a> Drug Deliv and Transl Res. 13 (9), 2239-2253 (2023).</li>
<li>Urzì, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+cultures%3A+The+bridge+between+in+vitro+and+in+vivo+models%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell cultures: The bridge between in vitro and in vivo models.</a> Int J Mol Sci. 24 (15), 12046(2023).</li>
<li>Cacciamali, A., Villa, R., Dotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+cell+cultures%3A+Evolution+of+an+ancient+tool+for+new+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">3D cell cultures: Evolution of an ancient tool for new applications.</a> Front Physiol. 13, 836480(2022).</li>
<li>Abuwatfa, W. H., Pitt, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-based+3D+cell+culture+models+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Scaffold-based 3D cell culture models in cancer research.</a> J Biomed Sci. 31 (1), 7(2024).</li>
<li>Yakavets, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+co-culture+3D+breast+cancer+model+for+investigation+of+fibrosis+induced+by+external+stimuli%3A+optimization+study%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Advanced co-culture 3D breast cancer model for investigation of fibrosis induced by external stimuli: optimization study.</a> Sci Rep. 10 (1), 21273(2020).</li>
<li>Mohammadrezaei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+and+elucidating+the+post-printing+behavior+of+3D+printed+cancer+cells+in+hydrogel+structures+by+integrating+in-vitro+and+in-silico+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Predicting and elucidating the post-printing behavior of 3D printed cancer cells in hydrogel structures by integrating in-vitro and in-silico experiments.</a> Sci Rep. 13 (1), 1211(2023).</li>
<li>Kuen, J., Darowski, D., Kluge, T., Majety, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+cell%2Ffibroblast+co-culture+induces+M2+like+macrophages+that+influence+therapeutic+response+in+a+3D+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer cell/fibroblast co-culture induces M2 like macrophages that influence therapeutic response in a 3D model.</a> PLOS ONE. 12 (7), e0182039(2017).</li>
<li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2022%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).</li>
<li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> J Clin Oncol. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li>
<li>Neve, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+collection+of+breast+cancer+cell+lines+for+the+study+of+functionally+distinct+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A collection of breast cancer cell lines for the study of functionally distinct cancer subtypes.</a> Cancer Cell. 10 (6), 515-527 (2006).</li>
<li>Pingitore, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+multilineage+3D+spheroids+as+a+model+of+liver+steatosis+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Human multilineage 3D spheroids as a model of liver steatosis and fibrosis.</a> Int J Mol Sci. 20 (7), 1629(2019).</li>
<li>Bar-Ephraim, Y. E., Kretzschmar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+immunological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Organoids in immunological research.</a> Nat Rev Immunol. 20 (5), 279-293 (2020).</li>
<li>Beerkens, A. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+OXPHOS+inhibitor-mediated+alleviation+of+hypoxia+using+high-throughput+live+cell-imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metab%22%5BJournal%5D)">Characterizing OXPHOS inhibitor-mediated alleviation of hypoxia using high-throughput live cell-imaging.</a> Cancer Metab. 12 (1), 13(2024).</li>
<li>Feaster, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel+mattress%5BTitle%5D)+AND+%22Cir+Res%22%5BJournal%5D)">Matrigel mattress.</a> Cir Res. 117 (12), 995-1000 (2015).</li>
<li>Huang, Z., Yu, P., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+triple-negative+breast+cancer+MDA-MB-231+cell+spheroid+model%5BTitle%5D)+AND+%22Onco+Targets+Ther%22%5BJournal%5D)">Characterization of triple-negative breast cancer MDA-MB-231 cell spheroid model.</a> Onco Targets Ther. 13, 5395-5405 (2020).</li>
<li>Nam, S., Khawar, I. A., Park, J. K., Chang, S., Kuh, H. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+context-dependent+interaction+between+cancer+and+stellate+cells+in+hetero-type+multicellular+spheroids+of+pancreatic+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Cellular context-dependent interaction between cancer and stellate cells in hetero-type multicellular spheroids of pancreatic tumor.</a> Biochem Biophys Res Commun. 515 (1), 183-189 (2019).</li>
<li>Monteiro, M. V., Gaspar, V. M., Ferreira, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+3D+in+vitro+tumor+models+for+screening+cell+aggregation+mediated+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Hydrogel 3D in vitro tumor models for screening cell aggregation mediated drug response.</a> Biomater Sci. 8 (7), 1855-1864 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 mL Polipropilen Santrifüj Tüpleri&nbsp; &nbsp;</td><td>Şahin&nbsp;</td><td>14-959-53A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>96-Kuyulu, tedavi edilmiş, U şeklinde tabanlı mikroplaka&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>12566432&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Çanak Hücre Kültürü İşlem Görmüş Yüzey&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>130182&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>170 L CO2 İnkübatörleri&nbsp;</td><td>VWR</td><td>VWR51014991(10810902)</td><td></td></tr><tr><td>200 Kendinden Sızdırmaz Bariyer Pipet Uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-255</td><td></td></tr><tr><td>500 mL DMEM/Hams F-12, [+] L-glutamin</td><td>Corning</td><td>10-090-CV</td><td></td></tr><tr><td>1000 Kendinden Sızdırmaz Bariyer Pipet Uçları</td><td>Moleküler Biyoloji Ürünleri A.Ş.</td><td>2179HR</td><td></td></tr><tr><td>Hayvansız Rekombinant İnsan EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Pipet Tekrarlayıcı E3x</td><td>Eppendorf</td><td>4987000410</td><td></td></tr><tr><td>Bazal membran çözümü</td><td>Huntsman Cancer Institute&nbsp;</td><td>https://healthcare.utah.edu/huntsmancancerinstitute/</td><td></td></tr> <tr><td>Boncuk Banyosu Laboratuvar</td><td>Zırhı&nbsp;</td><td></td><td></td>74300706</tr><tr><td>Biorender&nbsp;</td><td>Biorender</td><td>Biorender.com&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Biyogüvenlik Laminer Akış Kabinleri&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>300590389</td><td></td></tr><tr><td>BioSpa 8 Otomatik İnkübatör&nbsp;</td><td>Agilent&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td>23082120</tr><tr><td>Hücre Sayacı&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>AMQAF2000</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Sayma Odası Slaytları</td><td>Thermo Scientific</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Koyu Kırmızı&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>C34565 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td></td><td></td>13100675</tr><tr><td>Kolera Toksin B alt birimi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9903-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Combitips gelişmiş, Steril, 5.0 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-683-714</td><td></td></tr><tr><td>Sitasyon 10&nbsp; Okuyucu Görüntüleyici</td><td>Agilent&nbsp;</td><td></td><td></td>2105245</tr><tr><td>Tanımlanmış Tripsin İnhibitörü&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>R007100&nbsp;</td><td>1x PBS'de soya fasulyesi tripsin inhibitörü</td></tr><tr><td>Donör At Serumu, 500 mL, Amerika Birleşik Devletleri Menşeli</td><td>Corning</td><td>35-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle's Medium&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>10-013-CV&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Excel yazılımı&nbsp;</td><td>Microsoft Office 365&nbsp;</td><td></td><td></td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel&nbsp;</td><td>26140079&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, nitelikli, ABD menşeili</td><td>Thermo Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin Sülfat, Sıvı</td><td>Corning</td><td>30-005-CR</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prizma</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hidrokortizon solüsyonu, 50 & M, steril filtreli, BioXtra</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6909-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Image J Software&nbsp;</td><td>Fiji&nbsp;</td><td>https://imagej.net/ij/</td><td></td></tr> <tr><td>İnsülin çözeltisi insan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Büyüteç&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>01-182-392&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj Tüpü&nbsp;</td><td>Costar&nbsp;</td><td>3621&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>CKX53SF</td><td></td></tr><tr><td>Mini Işık Kutusu&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>361044708&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Problar CellTracker Mavi CMAC Boya&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>C2110&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Problar CellTracker Turuncu CMRA Boya&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>C34551&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin Çözeltisi</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin Çözeltisi&nbsp;</td><td>Cytiva&nbsp;</td><td>SV30010&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Faz-Kontrast Mikroskobu&nbsp;</td><td>Yankı&nbsp;</td><td></td><td></td>RVSF1000</tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Sağan&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel&nbsp;</td><td>SH3025601&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Kontrol Cihazı</td><td>Corning</td><td>4099</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 100 &ndash; 1.000 & mikro; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 20 &ndash; 200 &mikro; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Prizma&nbsp;</td><td>GraphPad Yazılımı</td><td>https://www.graphpad.com/features</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamin ve 25 mM HEPES ile RPMI 1640</td><td>Corning</td><td>10-041-CV</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik Pipet, 10 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>170356N</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik Pipet, 25 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>170357N</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik Pipet, 5 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>170355N</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi Çözeltisi, %0.4&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>25900CI&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA,% 0.25 & nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>25053CI&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

İstilayı yönlendirmek İçin epitelyal kanser hücrelerinin İskelesiz 3d kültürlerinde heteromultihücreli stromal hücreler

Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion

Bu çalışmada, organoid benzeri morfolojiye sahip epitelyal ve stromal hücrelerden oluşan heteromultiselüler 3D sferoidler oluşturmak için bir hücre kültürü sistemi geliştirdik. Spheroidler, monokültür koşullarında 2.000 epitel hücresinin kaplanmasıyla oluşturulmuştur. İki hücre tipinin ko-kültür koşullarında, 1.000 epitel hücresi ve 1.000 stromal hücre kaplanarak sferoidler oluşturuldu. Üç hücre tipinin ko-kültür koşullarında, 1.000 epitel hücresi ve her hücre tipinden 500 hücreden oluşan iki farklı stromal hücre tipi kaplanarak sferoidler oluşturuldu. Küresel oluşumun yukarı akışında, hücreler, hücresel mekansal organizasyonun izlenmesine izin veren floresan hücre izleyici boyalarla boyanabilir. İlk sferoid oluşumundan 24 saat sonra, aşağı akış uygulamaları farmakolojik bozulmaları, görüntülemeyi ve numune toplamayı içerir. Hızlandırılmış görüntüleme, alan ve dairesellik dahil olmak üzere küresel davranış ve morfolojideki değişiklikleri değerlendirmek için kullanışlıdır (Şekil 1A). Kaplamadan 24 saat sonra, sferoidler bir iskele ortamına gömülebilir ve sferoidden invaziv yapıların başlangıcını değerlendirmek için hızlandırılmış görüntüleme kullanılabilir (Şekil 1B). Heteroçok hücreli sferoid örneklerinin toplanması, RNA dizilimi, tek hücreli RNA dizilimi, proteomik dizileme ve döngüsel immünofloresan gibi deneysel teknikler yoluyla küresel ve tek hücre seviyelerinde genomik ve proteomik profilleme dahil olmak üzere birçok uygulamaya sahiptir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig01.jpg"> 
Şekil 1: 3D hücre kültürü sürecinin şematik gösterimi ve potansiyel uygulamalar. (A) Epitel hücrelerinin epitel olmayan stromal hücrelere sahip hücre süspansiyonu, sferoidler oluşturmak için 3D ultra düşük bağlantı plakalarına pipetlenir. Sferoidler, 96 saat boyunca her 24 saatte bir parlak alan mikroskobu ile görüntülenir. Hücre hatları, sferoid oluşumunu indüklemeden önce aşağı akış geniş alan mikroskobu için floresan hücre izleyici boyalarla boyanabilir veya sferoid oluşumundan sonra farmakolojik olarak bozulabilir. Morfoloji, alan, dairesellik ve organizasyon gibi küresel parametreler analiz edilebilir. (B) Stromal hücreli epitel ve epitel hücrelerinin sferoidleri, A'nın protokolü kullanılarak oluşturulur. Spheroidler, monokültür koşullarında 2.000 epitel hücresinin kaplanmasıyla oluşturulmuştur. İki hücre tipinin ko-kültür koşullarında, 1.000 epitel hücresi ve 1.000 stromal hücre kaplanarak sferoidler oluşturuldu. Üç hücre tipinin ko-kültür koşullarında, 1.000 epitel hücresi ve her hücre tipinden 500 hücreden oluşan iki farklı stromal hücre tipi kaplanarak sferoidler oluşturuldu. 24 saat sonra, iskele benzeri bir bazal membran ekstrakt çözeltisi üzerine yerleştirilir ve görüntüler, 120 saat boyunca her 24 saatte bir parlak alan mikroskobunda yakalanır. (C) Yerleşik iskelesiz ve iskele tabanlı hetero-çok hücreli 3D kültürler, döngüsel immünofloresan, tek hücreli RNA dizilimi ve tek hücreli proteomik gibi çeşitli aşağı akış uygulamaları için kullanılabilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
MCF10A, MCF10Ca1h ve BT-474 monokültür sferoidleri, kaplama sonrası 96 saate kadar kompakt bir küresel fenotipi korur. EA.hy926 mikrovasküler endotel hücreleri, BJ-5ta fibroblastlar ve / veya THP-1 monosit benzeri hücreler ile birlikte kültürlendiğinde, sferoidler periferde hücresel çıkıntılar geliştirdi ve bu da 96 saatte daha belirgin hale geldi (Şekil 2A-C). Daha da önemlisi, sferoidlerin bu çıkıntıları, tomurcuklanma ve sıkışma fenomenleri, kanser sferoidinin hücresel organizasyonunun varyasyonlarını ve Matrigel gibi bir bazal membran bazlı hidrojelin eklenmesini takiben 3D invazivliği ile ilişkili olan ko-kültürlenmiş stromal hücreleri temsil eder. Tomurcuklanan morfoloji, organoid morfolojiye benzeyen katıdan gevşek hücre agregatlarına kadar değişiyordu. Buna karşılık, MDA-MB-468 monokültür sferoidleri büyük, gevşek hücre agregatları olarak ortaya çıktı. Bununla birlikte, MDA-MB-468 hücreleri EA.hy926, BJ-5ta ve / veya THP-1 ile birlikte kültürlendiğinde, kompakt sferoidler oluşturdular (Şekil 2D).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig02.jpg"> 
Şekil 2: Yapı iskelesi içermeyen 3D kültürlerde epitelyal tümör/tümör olmayan hücrelerle kombine edildiğinde epitelyal olmayan stromal hücrelerin kombinasyonları tarafından benimsenen mimari ve morfoloji yelpazesi. (A) MCF10A, (B) MCF10Ca1h, (C) BT-474, (D) MDA-MB-468 sferoidlerinin monokültürde veya stromal BJ-5ta fibroblastlar/Ea.hy926 mikrovasküler endotel hücreleri veya Ea.hy926/THP-1 monosit benzeri cella veya BJ-5ta/THP-1 hücreleri ile 96 saat boyunca ko-kültür koşullarında temsili parlak alan görüntüleri. Her sferoid, 2.000 hücrenin kaplanmasıyla oluşturuldu. Monokültür koşullarındaki sferoidler, 2.000 epitel hücresi kullanılarak oluşturuldu. Ko-kültür koşullarındaki sferoidler, 1.000 epitel hücresi ve 500 hücreli iki farklı stromal hücre tipi kullanılarak oluşturuldu. Tomurcuklanan veya agrega organoid benzeri yapıların oluşumu, MCF10A, MCF10Ca1h ve BT-474 epitel hücrelerinde kaplamadan 24 saat sonra sferoid ko-kültür koşullarında başlatıldı. MDA-MB-468 hücrelerinin sıkıştırılması, kaplamadan 25 saat sonra sferoid ko-kültür koşullarında gözlendi. Ölçek çubukları = 100 μm. Kısaltma: hpp = kaplama sonrası saat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Kaplamadan 72 saat sonra, EA.hy926 ve THP-1 veya BJ-5ta ve THP-1 ile birlikte kültürlenen MCF10A, MCF10Ca1h ve BT-474 hücreleri, monokültür epitel sferoidlerine kıyasla sferoid alanında önemli bir artış gösterdi. MCF10Ca1h ayrıca EA.hy926 ve BJ-5ta ile birlikte kültürlendiğinde sferoid alanda önemli bir artış gösterdi. Birlikte kültürlenmiş sferoidlerde tomurcuklanan yapıların başlangıcı, EA.hy926 ve THP-1 veya BJ-5ta ve THP-1 ile birlikte kültürlenmiş MCF10A, MCF10Ca1h ve BT-474 için küresel dairesellikte önemli bir azalmaya yol açtı. Hem EA.hy926 hem de BJ-5ta ile birlikte kültürlenmiş BT-474 için benzer etkiler gözlenmiştir (Şekil 3A, B). Buna karşılık, EA.hy926 ve BJ-5ta, EA.hy926 ve THP-1 veya BJ-5ta ve THP-1 ile birlikte kültürlenen MDA-MB-468 hücreleri, monokültür MDA-MB-468 sferoidlerine kıyasla sferoid alanında önemli bir azalma gösterdi; ancak döngüsellik üzerinde herhangi bir etkisi olmamıştır (Şekil 3A,B).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig03.jpg"> 
Şekil 3: Kaplamadan 72 saat sonra tek kültürlü ve heteroçok hücreli stromal 3D iskelesiz kültürlerin alan ve dairesellik analizi grafikleri. (A) Tek kültürlü ve heteromultiselüler stromal sferoid kültürlerde MCF10A, MCF10Ca1h, BT-474 ve MDA-MB-468'in ortalama alanı (cm2) ve (B) kaplamadan 72 saat sonra. Rapor edilen veriler en az üç bağımsız biyolojik kopyayı temsil eder ve aksi belirtilmedikçe SEM ± teknik kopya ortalamaları olarak rapor edilir. *, **, *** veya ***, aksi belirtilmedikçe sırasıyla 0,05, 0,01, 0,001 veya 0,0001 &lt; p değerlerini temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Hücre izleyici boyasının sferoid oluşumundan önce BT-474 tümörjenik epitel hücrelerine ve stromal hücrelere uygulanması, EA.hy926 ve BJ-5ta dahil olmak üzere stromal hücrelerin, merkezi BT474 sferoidlerinin çevresinde tomurcuklanan yapıları oluşturduğunu gösterdi (Şekil 4, Ek Video S1, Ek Video S2, Ek Video S3 ve Ek Video S4). Kaplamadan 48 saat sonra, fibroblastlarla birlikte kültürlenen sferoidlerin bireysel geniş alan floresan görüntüleri, fibroblast sferoidlerinin endotel hücreleri ile birlikte lokalize olduğunu, ancak BT-474 sferoidleri ile ko-lokalize olmadığını ortaya koymaktadır. Endotel hücrelerinin bir azınlığının da ko-kültür koşullarında BT-474 sferoidleri ile birlikte lokalize olduğu bulundu. Bu, sferoid içindeki stromal hücrelerin düzenlenmesinin organoid benzeri bir morfoloji ile ilişkili olduğunu göstermektedir.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig04.jpg"> 
Şekil 4: Kaplamadan 48 saat sonra heteroçok hücreli 3D kültürlerde diferansiyel olarak boyanmış stromal ve BT-474 hücrelerinin geniş alanlı floresan hareketsiz görüntüleri. BT-474 sferoidleri mavi hücre izleyici floresan boya ile boyanır. BJ-5ta fibroblastları, kırmızı renkle temsil edilen turuncu hücre izleyici boya ile boyanır. Ea.hy926 endotel hücreleri, yeşil renkle temsil edilen koyu kırmızı hücre izleyici boyası ile boyanır. Her sferoid, 2.000 hücrenin kaplanmasıyla oluşturuldu. Monokültür koşullarındaki sferoidler, 2.000 epitel hücresi kullanılarak oluşturuldu. Ko-kültür koşullarındaki sferoidler (BT-474 / BJ-5ta, BT-474 / Ea.hy926) 1.000 epitel hücresi ve 1.000 stromal hücre kullanılarak oluşturuldu. Çift ko-kültür koşullarında (BT-474 / BJ-5ta / Ea.hy926) sferoidler, 1.000 epitel hücresi ve her stromal hücre tipinden 500 hücre kullanılarak oluşturuldu. Rakamlar en az üç biyolojik kopyayı temsil etmektedir. Ölçek çubuğu = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Organoid sferoid modelimizin biyolojik uygunluğunu değerlendirmek için, sferoidler, kaplamadan 24 saat sonra bazal membran özü çözeltisi ile kaplandı. Monokültür BT-474 sferoidleri, kaplamadan 120 saat sonra hiçbir invaziv özellik göstermedi. Bununla birlikte, BJ-5ta veya EA.hy926 ile birlikte kültürlenen BT-474 sferoidleri, sferoidin çevresinde, iskele bazal membran ekstrakt çözeltisi ortamını istila eden yapılar geliştirdi. Bu çıkıntıların sayısı ve uzunluğu, hem BJ-5ta hem de EA.hy926 ile birlikte kültürlenen BT-474 sferoidlerinde, kaplamadan 48 saat ila 120 saat sonra önemli ölçüde artmıştır (Şekil 5, Ek Video S5, Ek Video S6, Ek Video S7 ve Ek Video S8).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67902/67902fig05.jpg"> 
Şekil 5: Kaplamadan 5 gün sonra bazal membran ekstrakt çözeltisi kaplaması ile heteroçok hücreli 3D kültürlerde BT-474 hücrelerinin parlak alan hareketsiz görüntüleri. Her sferoid, 2.000 hücrenin kaplanmasıyla oluşturuldu. Bazal membran ekstrakt çözeltisi, kaplamadan 24 saat sonra sferoidlerin üzerine kaplandı. Monokültür koşullarındaki sferoidler, 2.000 epitel hücresi kullanılarak oluşturuldu. Ko-kültür koşullarında (BT-474 / BJ-5ta ve BT-474 / Ea.hy926) sferoidler, 1.000 epitel hücresi ve 1.000 stromal hücre kullanılarak oluşturuldu. Çift ko-kültür koşullarında (BT-474 / BJ-5ta / Ea.hy926) sferoidler, 1.000 epitel hücresi ve her stromal hücre tipinden 500 hücre kullanılarak oluşturuldu. (A) Bazal membran ekstrakt çözeltisine gömülü kanser sferoidinden çıkıntı yapan istilacı yapılar, ko-kültür koşullarında gözlemlenebilir. (B) 48 hpp zamanındaki invaziv çıkıntı sayısının kalifikasyonu. (C) Zaman itibariyle invaziv çıkıntı uzunluğunun kalifikasyonu 48 hpp. Rakamlar en az üç biyolojik kopyayı temsil etmektedir. Ölçek çubuğu = 200 μm. Kısaltma: hpp = kaplama sonrası saat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/67902fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S1: Hücre izleyici mavi boya ile BT-474 monokültür sferoidi. BT-474 (2.000) hücreleri, sferoidler oluşturmak için U şeklinde tabanlı, ultra düşük bağlantılı 96 oyuklu bir mikroplaka içinde yeniden süspanse edildi. Parlak alan ve geniş alan floresan görüntülerinin örtüşmesi 48 saat boyunca yakalandı. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.1.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S2: BT-474 sferoidleri, BJ-5ta fibroblastları ile birlikte kültürlenmiştir. BT-474 (1.000) ve 1.000 BJ-5ta fibroblastları, sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi. BT-474 hücreleri hücre izleyici mavi boya ile ve BJ-5ta fibroblastlar hücre izleyici turuncu boya ile inkübe edildi. Parlak alan ve geniş alan floresan (mavi = BT-474, kırmızı = BJ-5ta) görüntülerinin örtüşmesi 48 saat boyunca yakalandı. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.2.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S3: BT-474 sferoidleri, Ea.hy926 endotel hücreleri ile birlikte kültürlenmiştir. BT-474 (1.000) ve 1.000 Ea.hy926 endotel hücresi, sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi. BT-474 hücreleri hücre izleyici mavi boya ile ve Ea.hy926 endotel hücreleri hücre izleyici koyu kırmızı boya ile inkübe edildi. Parlak alan ve geniş alan floresan (mavi = BT-474, yeşil = Ea.hy926) görüntülerin örtüşmesi 48 saat boyunca yakalandı. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.3.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S4: BT-474 sferoidleri, BJ-5ta fibroblastları ve Ea.hy926 endotel hücreleri ile birlikte kültürlenmiştir. BT-474 (1.000), 500 BJ-5ta fibroblast ve 500 Ea.hy926 endotel hücresi, sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi. BT-474 hücreleri, hücre izleyici mavi boya ile inkübe edildi. BJ-5ta fibroblastlar ve Ea.hy926 endotel hücreleri sırasıyla hücre izleyici turuncu boya ve koyu kırmızı boya ile inkübe edildi. Parlak alan ve geniş alan floresan (mavi = BT-474, kırmızı = BJ-5ta, yeşil = Ea.hy926) görüntülerinin örtüşmesi 48 saat boyunca yakalandı. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%201.4.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S5: Bazal membran ekstrakt çözeltisinde BT-474 monokültür sferoidi. BT-474 hücreleri (2.000), sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi ve sferoidler, kaplamadan 24 saat sonra bir bazal membran çözeltisine gömüldü. Brightfield görüntüleri 60 saat boyunca çekildi. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.1.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S6: BT-474 sferoidleri, bazal membran ekstrakt çözeltisinde BJ-5ta fibroblastları ile birlikte kültürlenmiştir. BT-474 (1.000) ve 1.000 BJ-5ta fibroblastları, sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi ve sferoidler, kaplamadan 24 saat sonra bir bazal membran ekstrakt çözeltisine gömüldü. Brightfield görüntüleri 60 saat boyunca çekildi. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.2.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S7: BT-474 sferoidleri, bazal membran ekstrakt çözeltisinde Ea.hy926 endotel hücreleri ile birlikte kültürlenmiştir. BT-474 (1.000) ve 1.000 Ea.hy926 endotel hücreleri, sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi ve sferoidler, kaplamadan 24 saat sonra bir bazal membran ekstrakt çözeltisine gömüldü. Brightfield görüntüleri 60 saat boyunca çekildi. Kısaltma: ULA = ultra düşük bağlantı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.3.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Video S8: BT-474 sferoidleri, bazal membran ekstrakt çözeltisinde BJ-5ta fibroblastları ve Ea.hy926 endotel hücreleri ile birlikte kültürlenmiştir. BT-474 (1.000), 500 BJ-5ta fibroblast ve 500 Ea.hy926 endotel hücresi, sferoidler oluşturmak için ULA plakalarında yeniden süspanse edildi ve sferoidler, kaplamadan 24 saat sonra bir bazal membran ekstrakt çözeltisine gömüldü. Brightfield görüntüleri 60 saat boyunca çekildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67902/Supplementary%20Video%202.4.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully ...

heteromulticellular-stromal-cells-scaffold-free-3d-cultures

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Basit bir metodu ile ilişkili epitel hücreleri üzerindeki doku fibroblastlann etkileri analiz etmek için tarif edilmiştir. Bu yöntem, üç boyutlu bir doku kültürü kombinasyonu 3D izole sonra hücrelerin analizi kolaylaştırabilir. Tekniği tümör hücreleri üzerindeki tümör-stroma etkileri ile ilişkili sistematik çalışma izin veren, habis potansiyeli değişen hücreleri için de geçerlidir.

Üç boyutlu Karışık-hücre Sfero Co-kültürden Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri&gt; Modelleme

Bu videoda, tümör hücresi istilasını incelemek için doğal bir matris kullanma tekniği açıklanmaktadır. Bu tahlilde kullanılan teknik, epitelyal-mezenkimal hücre etkileşimlerini sentetik veya yabancı bir matrise ihtiyaç duymadan 3 boyutlu bir ortamda değerlendirme yeteneği sağlar.

Tümör Hücresi İnvazyon Testi: Epitelyal-mezenkimal Hücre Etkileşimlerini Değerlendirmek için 3D İn Vitro Native Matris Tabanlı Bir Yöntem

Doku mühendisliği fibroblast türevli doğal matris epitel hücre çoğalmasını ve farklılaşmasını destekleyen bir stromal alt-tabakayı üretmek için gelişmekte olan bir araçtır. Burada tümör hücre biyolojisi farklı stromal hücre tiplerinin etkisini değerlendirmek için bu yöntemi uygulayarak bir protokol sunulmuştur.

Kanser Hücre Invasion Uygulama ile Tümör Stromal mikroçevresinin Doku Mühendisliği

Bu makalede, meme kanseri hücre istilasını ölçmek için üç boyutlu (3D) tahlillerin kullanımı için ayrıntılı yöntemler sağlar. Özellikle, biz hücreleri istila oluşur membran bütünlüğünün kaybı incelemek için bu tür deneyleri kurmak için gerekli prosedürleri, ölçümlerini ve veri analizi gibi yöntemleri tartışmak.

Üç boyutlu (3D) Modeli Kullanılarak Meme Kanseri Hücre invazivliğinin Kantitasyonu

Burada, kanser hücresi davranışının çok hücreli etkileşimlerini ve hücre dışı matrise bağlı modülasyonunu araştırmak için yararlı olan üç boyutlu ko-kültür için bir protokol sunuyoruz. Bu deneysel modelde, kanser hücreleri, insan kanseriyle ilişkili fibroblastlarla gömülü kollajen jelleri üzerinde kültürlenir.

Tümör-stromal Etkileşim için üç boyutlu Co-kültür Modeli

Bu yöntem, kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki bir 3B matrise invazyonunu değerlendirir.  Sferoidler, asılı damla kültürü yöntemi ile üretilir ve daha sonra bazal membran malzemeleri ve tip I kollajenden oluşan bir matrise gömülür.  Spheroidlerin istilası daha sonra izlenir.

Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için

Kanser hücreleri bir kollajen jele gömülür ve daha sonra uydu tümörlerinin invazivliği ve oluşumunun izlenebileceği bir 3D kültür sistemi oluşturmak için bir aselüler fibrin jeli içine sıkıştırılır.

Kanser hücre istilası ve Uydu Tümör oluşumu keşfedin Kültür Testi Üç Boyutlu

Tümör hücreleri ve stromal fibroblastların heterotipik etkileşimine dayanan üç boyutlu yeni bir küresel model oluşturulmuştur. Burada, spheroidlerin oluşumunu görselleştirmek için tümör hücreleri ve stromal fibroblastlar, hızlandırılmış görüntüleme ve konfokal mikroskopi ortak kültürünü satıyoruz. Bu üç boyutlu model tümör-stroma etkileşimleri ve test kanser terapötik çalışma için ilgili bir platform sunuyor.

Tümör-Stroma Etkileşimi ve İlaç Keşfini İncelemek İçin Yeni Bir Stromal Fibroblast-Modüle 3D Tümör Küresel Modeli

Sunulan yaklaşım aynı anda 3D spheroid tahliller ve T-hücre sitotoksisite kanser hücresi invazyonu değerlendirir. Spheroids bir iskele-free agarose multi-microwell döküm oluşturulur. Eş-kültür ve tip I kollajen matris gömme kanser hücresi invazyonu ve T-hücre aracılı sitotoksisite izlemek için izin veren aynı cihaz içinde gerçekleştirilir.

3D Kültürde Kanser Hücre İstilası ve T-Hücre Sitotoksisitesi İzleme

İstila, kanserin gelişiminde ve ilerlemesinde önemli bir biyolojik olgudur. Bu süreç, neoplastik olmayan hücreler ve tümör mikroçevresinin bileşenleri tarafından etkilenir. Bu çalışmanın amacı, üç boyutlu (3D) kültürler kullanarak in vitro olarak tümör hücresi istilasını analiz etmek için alternatif bir yöntemi tanımlamaktır.

3D Kültürlerin İn Vitro Hücre İnvazyonunu Analiz Etmek İçin Alternatif Strateji

Keşfedin iskelesiz 3D hücre kültürü yöntemleriyle epitelial kanser hücrelerinde heteromultihücreli stromal etkileşimleri. Bu protokol metastaz ve tedavi direnci mekanizmalarını incelemek için yenilikçi bir araç sunar.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Daha fazla video keşfet