Name: Yinelemeli Beyazlatma için Optimize Edilmiş İş Akışı, Yüksek Otofloresan Klinik Numunelerin Çok Yönlü Görüntülemesini Genişletir (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Öğrenin, fotoirradyasyon tekniğiyle yüksek otofloresanlı klinik doku örneklerinde çok yönlü görüntüleme ve bağışıklık hücrelerinin uzamsal analizi için optimize edilmiş iş akışı.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Global tuberculosis report 2023. , World Health Organization. 
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/373828/9789240083851-eng.pdf?sequence=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/373828/9789240083851-eng.pdf?sequence=1</a> (2023).</li>
<li>Dahl, V. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+trends+of+pulmonary+infections+with+nontuberculous+mycobacteria%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Global trends of pulmonary infections with nontuberculous mycobacteria: A systematic review.</a> Int J Infect Dis. 125, 120-131 (2022).</li>
<li>Cadena, A. M., Fortune, S. M., Flynn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in tuberculosis.</a> Nat Rev Immunol. 17 (11), 691-702 (2017).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ibex: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+An+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Ibex: An iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nat Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Hickey, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+mapping+of+protein+composition+and+tissue+organization%3A+A+primer+for+multiplexed+antibody-based+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Spatial mapping of protein composition and tissue organization: A primer for multiplexed antibody-based imaging.</a> Nat Methods. 19 (3), 284-295 (2022).</li>
<li>Duong, H., Han, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multispectral+led+array+for+the+reduction+of+background+autofluorescence+in+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A multispectral led array for the reduction of background autofluorescence in brain tissue.</a> J Neurosci Methods. 220 (1), 46-54 (2013).</li>
<li>Nolta, N. F., Liberti, A., Makol, R., Han, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gelatin+embedding+and+LED+autofluorescence+reduction+for+rodent+spinal+cord+histology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Gelatin embedding and LED autofluorescence reduction for rodent spinal cord histology.</a> J Neurosci Methods. 346, 108924(2020).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-omic+profiling+of+follicular+lymphoma+reveals+changes+in+tissue+architecture+and+enhanced+stromal+remodeling+in+high-risk+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Multi-omic profiling of follicular lymphoma reveals changes in tissue architecture and enhanced stromal remodeling in high-risk patients.</a> Cancer Cell. 42 (3), 444-463.e10 (2024).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+IBEX+knowledge-base%3A+A+central+resource+for+multiplexed+imaging+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The IBEX knowledge-base: A central resource for multiplexed imaging techniques.</a> PLoS Biol. 23 (3), e3003070(2025).</li>
<li>Yaniv, Z., et al. The IBEX imaging knowledge-base: A community resource enabling adoption and development of immunofluoresence imaging methods. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYaniv%2C+Z+%22ArXiv%22">ArXiv</a>. , (2024).</li>
<li>Quardokus, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+mapping+antibody+panels%3A+A+community+resource+for+standardized+multiplexed+tissue+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Organ mapping antibody panels: A community resource for standardized multiplexed tissue imaging.</a> Nat Methods. 20 (8), 1174-1178 (2023).</li>
<li>Mcshane, P. J., Glassroth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+disease+due+to+nontuberculous+mycobacteria%3A+Current+state+and+new+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Pulmonary disease due to nontuberculous mycobacteria: Current state and new insights.</a> Chest. 148 (6), 1517-1527 (2015).</li>
<li>Hsu, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+GATA2+are+associated+with+the+autosomal+dominant+and+sporadic+monocytopenia+and+mycobacterial+infection+%28monomac%29+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mutations in GATA2 are associated with the autosomal dominant and sporadic monocytopenia and mycobacterial infection (monomac) syndrome.</a> Blood. 118 (10), 2653-2655 (2011).</li>
<li>Vinh, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autosomal+dominant+and+sporadic+monocytopenia+with+susceptibility+to+mycobacteria%2C+fungi%2C+papillomaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Autosomal dominant and sporadic monocytopenia with susceptibility to mycobacteria, fungi, papillomaviruses.</a> Blood. 115 (8), 1519-1529 (2010).</li>
<li>Filipe-Santos, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-linked+susceptibility+to+mycobacteria+is+caused+by+mutations+in+nemo+impairing+CD40-dependent+IL-12+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">X-linked susceptibility to mycobacteria is caused by mutations in nemo impairing CD40-dependent IL-12 production.</a> J Exp Med. 203 (7), 1745-1759 (2006).</li>
<li>Galeotti, T., Van Rossum, G. D., Mayer, D. H., Chance, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+fluorescence+of+NAD%28P%29H+in+whole-cell+preparations+of+tumours+and+normal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">On the fluorescence of NAD(P)H in whole-cell preparations of tumours and normal tissues.</a> Eur J Biochem. 17 (3), 485-496 (1970).</li>
<li>Schneckenburger, H., Gessler, P., Pavenstadt-Grupp, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+mitochondrial+deficiencies+in+living+cells+by+microspectrofluorometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Measurements of mitochondrial deficiencies in living cells by microspectrofluorometry.</a> J Histochem Cytochem. 40 (10), 1573-1578 (1992).</li>
<li>Harman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin+and+ceroid+formation%3A+The+cellular+recycling+system%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin and ceroid formation: The cellular recycling system.</a> Adv Exp Med Biol. 266, 3-15 (1989).</li>
<li>Brunk, U. T., Terman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin%3A+Mechanisms+of+age-related+accumulation+and+influence+on+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin: Mechanisms of age-related accumulation and influence on cell function.</a> Free Radic Biol Med. 33 (5), 611-619 (2002).</li>
<li>Jung, T., Bader, N., Grune, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipofuscin%3A+Formation%2C+distribution%2C+and+metabolic+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Lipofuscin: Formation, distribution, and metabolic consequences.</a> Ann N Y Acad Sci. 1119, 97-111 (2007).</li>
<li>Sherratt, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+elasticity+and+the+ageing+elastic+fibre%5BTitle%5D)+AND+%22Age+%28Dordr%29%22%5BJournal%5D)">Tissue elasticity and the ageing elastic fibre.</a> Age (Dordr). 31 (4), 305-325 (2009).</li>
<li>Laurent, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+collagen%3A+More+than+scaffolding%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Lung collagen: More than scaffolding.</a> Thorax. 41 (6), 418-428 (1986).</li>
<li>Lakowicz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+frequency-domain+fluorescence+spectroscopy+and+applications+to+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Subcell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Principles of frequency-domain fluorescence spectroscopy and applications to cell membranes.</a> Subcell Biochem. 13, 89-126 (1988).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>%0,3 Triton-X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Tamponu engellemek için çözüm</td></tr><tr><td>%1 BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4503 Serisi</td><td>Tamponu engellemek için çözüm</td></tr><tr><td>%1 İnsan BD Fc Bloğu</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>564220</td><td>Engelleme arabelleği için Fc Bloğu gereklidir</td></tr><tr><td>150 W LED lamba</td><td>Amazon</td><td>B07VH3CVSF</td><td>Doku fotoirradyasyonu için LED ışık kaynağı</td></tr><tr><td>1x PBS&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td>Tampon ve yıkama adımlarını bloke etmek için çözüm</td></tr><tr><td>20 Galonluk Depolama Kabı</td><td>Amazon</td><td>B001B1C4G0</td><td>Fotoışınlama işlemi için konteyner</td></tr><tr><td>40 W RGBW sel LED lamba&nbsp;</td><td>Amazon</td><td>B08QFPJSMD</td><td>Doku fotoirışınlaması için RGB ışık kaynağı</td></tr><tr><td>Ag85B</td><td>Abcam</td><td>ab43019/NA</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Alfa-düz kas aktini DyLight 755</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-345221R/NA</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Avidin/Biotin Engelleme Kiti</td><td>Abcam</td><td>ab64212</td><td>Avidin ve biotin bloke edici solüsyon</td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>554714</td><td>Sabitleme çözümü</td></tr><tr><td>BOND Balmum Çözücü Solüsyon</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>NC0221076</td><td>Deparafinizasyon çözümü</td></tr><tr><td>BOND Epitop Alma Çözümü 1</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>NC0235529</td><td>Sitrat bazlı pH 6 epitop geri alma çözeltisi (ER1)</td></tr><tr><td>BOND Epitop Alma Çözümü 2</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>NC0235530</td><td>EDTA bazlı pH 9 epitop geri alma çözeltisi (ER2)</td></tr><tr><td>BOND Araştırma Tespit Sistemi</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>NC0396648</td><td>Otomatik araştırma boyama reaktifi</td></tr><tr><td>BOND RX Araştırma Boyası</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>NA</td><td>Otomatik araştırma boyama platformu</td></tr><tr><td>BOND Yıkama Solüsyonu</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>NC0221077</td><td>Yıkama tamponu</td></tr><tr><td>CD15</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>347420/AB_400298</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>CD20 eFlor 660</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>50-0202-82/AB_11150959</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>CD4 Alexa Flor 488</td><td>R& D Sistemleri</td><td>FAB8165G/AB_2728839</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>CD45 Fikoeritrin (PE)</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-34528PE/NA</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>CD68 iFlor 594</td><td>Caprico Biyoteknoloji</td><td>1064135/AB_2892745</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Eşek anti-keçi IgG Alexa Fluor Plus 488</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32814/AB_2762838</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Eşek anti-fare IgG Alexa Fluor Plus AF647</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32787/ AB_2762830</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Eşek anti-fare IgM Alexa Fluor 488</td><td>Jackson İmmünoAraştırma</td><td>715-545-020/AB_2340844</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Eşek anti-tavşan IgG Alexa Fluor Plus AF555</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32794/AB_2762834</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>EasyDip Boyama Sistemi</td><td>Yeni Gelen Arzı</td><td>5300 KITLIK</td><td>Slayt boyama sistemi</td></tr><tr><td>Flor Montajı-G</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>00-4958-02</td><td>Montaj ortamı</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Biyotyum</td><td>40046</td><td>IBEX görüntüleme için nükleer boya. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Imaris Dosya Dönüştürücü x64 10.2.0</td><td>Imaris Oxford Enstrümanları</td><td></td><td>Ücretsiz dosya dönüştürücü</td></tr><tr><td>ImarisViewer yazılımı x64 10.2.0</td><td>Imaris Oxford Enstrümanları</td><td></td><td>Ücretsiz görüntü işleme yazılımı</td></tr><tr><td>ImmEdge Kalemi</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>H-4000 Serisi</td><td>Hidrofobik bariyer kalemi</td></tr><tr><td>Lityum Borohidrür (1 gram)</td><td>STREM Kimyasallar</td><td>93-0397</td><td>Boya inaktivasyonu için kimyasal, bu kimyasalın küçük kısımlarını satın alın (1 gram)</td></tr><tr><td>Lumikan Biyotini</td><td>R& D Sistemleri</td><td>BAF2846</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Mikro Kapaklı Camlar</td><td>VWR</td><td>48393-241</td><td>Cam sürgülü kapaklar</td></tr><tr><td>Pan-sitokeratin Alexa Flor 750</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-33200AF750/AB_2868569</td><td>IBEX görüntüleme için antikor. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>PELCO BioWave Pro Mikrodalga Sistemi</td><td>Ted Pella A.Ş.</td><td>36500-230</td><td>Isıtmasız bilimsel mikrodalga</td></tr><tr><td>PELCO Sabit Sıcaklık Pro</td><td>Ted Pella A.Ş.</td><td>50062</td><td>Bilimsel mikrodalga için tam otomatik sıcaklık kontrolü</td></tr><tr><td>Basit ITK</td><td>Açık kaynaklı yazılım</td><td></td><td>Kayıt ve kanal işleme yazılımı</td></tr><tr><td>Streptavidin Alexa Flor 594</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>S11227</td><td>IBEX görüntüleme için etiketleme reaktifi. Tablo 1'e bakınız.</td></tr><tr><td>Geniş Alan Mikroskobu</td><td>Leica Mikrosistemleri</td><td>NA</td><td>LED8 ışık kaynağına ve LAS X yazılımına sahip Leica Microsystems THUNDER görüntüleyici (3.7.1.21655). Floresan görüntüleme için, geçiş başına yedi boya kanalını görüntülemek için iki ek tek bantlı filtre (PN: 8118215) ile harici filtre tekerleğine (PN: 11536075) sahip özel bir dört bantlı filtre kullanıldı. Filtre uyarma, dikroik ve emisyon çizgileri şunlardır: (1) Dört Bantlı küp: 391/32, 479/33, 554/24, 638/31'de dikroik, uyarma veya emisyon filtresi yok; (2) harici filtre çarkı konumu 1: 434/32, konum 2: 520/40, konum 3: 585/20, konum 4: 720/60, konum 5: geçiş; (3) tek bantlı 1&mdash; 585/22 uyarma, 594 dikroik, 625/30 emisyon; (4) tek bantlı 2&mdash; 635/20 uyarma, 647 dikroik, 667/30 emisyon.</td></tr><tr><td>Zeiss Optik Lens Temizleyici</td><td>Amazon</td><td>B00GPVQVCO</td><td>Mikroskop objektif lens temizleyici</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Antikorlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ag85B</td><td>Abcam</td><td>ab43019</td><td>Poliklonal Tavşan IgG, döngü 1</td></tr><tr><td>Alfa-düz kas aktini DyLight 755</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-345221R Serisi</td><td>1A4/asm-1, döngü 1</td></tr><tr><td>CD4 Alexa Flor 488</td><td>R& D Sistemleri</td><td>FAB8165G</td><td>Poliklonal Keçi IgG, döngü 1</td></tr><tr><td>CD8 Alexa Flor 647</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>372906</td><td>C8/144B, döngü 1</td></tr><tr><td>CD68 iFlor 594</td><td>Caprico Biyoteknoloji</td><td>1064135</td><td>KP1, döngü 1</td></tr><tr><td>Eşek anti-keçi IgG Alexa Fluor Plus 488</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32814 Serisi</td><td>Poliklonal Eşek, döngü 1</td></tr><tr><td>Eşek anti-fare IgG Alexa Fluor Plus AF647</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32787 Serisi</td><td>Poliklonal Eşek, döngü 1</td></tr><tr><td>Eşek anti-tavşan IgG Alexa Fluor Plus AF555</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32794 Serisi</td><td>Poliklonal Eşek, döngü 1</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Biyotyum</td><td>40046</td><td>Nükleer etiket, döngü 1</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD15</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>347420</td><td>MMA, döngü 2</td></tr><tr><td>CD20 eFlor 660</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>50-0202-82</td><td>L26, döngü 2</td></tr><tr><td>CD45 Fikoeritrin (PE)</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-34528PE Serisi</td><td>2B11 + PD7/26, döngü 2</td></tr><tr><td>Eşek anti-fare IgM Alexa Fluor 488</td><td>Jackson İmmünoAraştırma</td><td>715-545-020</td><td>Poliklonal Eşek, döngü 2</td></tr><tr><td>Lumikan Biyotini</td><td>R& D Sistemleri</td><td>BAF2846</td><td>Poliklonal Keçi IgG, döngü 2</td></tr><tr><td>Pan-sitokeratin Alexa Flor 750</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-33200AF750 Serisi</td><td>AE-1/AE-3, döngü 2</td></tr><tr><td>Streptavidin Alexa Flor 594</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>S11227</td><td>Yok, döngü 2</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Biyotyum</td><td>40046</td><td>Döngü 2</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Çözümler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Engelleme Tamponu (Döngü 1)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Hacimce %0,3</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4503 Serisi</td><td>Hacimce %1</td></tr><tr><td>İnsan BD Fc Bloğu</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>564220</td><td>Hacimce %1</td></tr><tr><td>1x PBS&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td>Hacimce %97,7</td></tr><tr><td><güçlü>Birincil Antikor Boyama Solüsyonu #1 (Döngü 1)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Engelleme Arabelleği (Döngü 1)</td><td>Yukarıyı görmek</td><td></td><td>Antikor ekledikten sonra hacme kadar doldurun</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Biyotyum</td><td>40046</td><td>1:5000</td></tr><tr><td>CD8 AF647</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>372906</td><td>1:10</td></tr><tr><td><güçlü>Birincil Antikor Boyama Solüsyonu #2 (Döngü 1)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Engelleme Arabelleği (Döngü 1)</td><td>Yukarıyı görmek</td><td></td><td>Antikor ekledikten sonra hacme kadar doldurun</td></tr><tr><td>CD4&nbsp; AF488</td><td>R& D Sistemleri</td><td>FAB8165G</td><td>1:10</td></tr><tr><td>Ag85B</td><td>Abcam</td><td>ab43019/NA</td><td>1:100</td></tr><tr><td><güçlü>İkincil Antikor Boyama Solüsyonu #1 (Döngü 1)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Engelleme Arabelleği (Döngü 1)</td><td>Yukarıyı görmek</td><td></td><td>Antikor ekledikten sonra hacme kadar doldurun</td></tr><tr><td>Eşek Keçi Karşıtı AF Plus 488</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32814/AB_2762838</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Eşek anti-Tavşan AF Plus 555</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32794/AB_2762834</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Eşek anti-Fare AF Plus 647</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A32787/AB_2762830</td><td>1:50</td></tr><tr><td><güçlü>Birincil Antikor Boyama Solüsyonu #3 (Döngü 1)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Engelleme Arabelleği (Döngü 1)</td><td>Yukarıyı görmek</td><td></td><td>Antikor ekledikten sonra hacme kadar doldurun</td></tr><tr><td>CD68 iF594</td><td>Caprico Biyoteknoloji</td><td>1064135</td><td>1:10</td></tr><tr><td>a-SMA DL755</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-345221R/NA</td><td>1:30</td></tr><tr><td><güçlü>BSA içermeyen Engelleme Tamponu (Döngü 2)&nbsp; </güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Hacimce %0,3</td></tr><tr><td>İnsan BD Fc Bloğu</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>564220</td><td>Hacimce %1</td></tr><tr><td>1x PBS&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td>Hacimce %98,7</td></tr><tr><td><güçlü>Birincil Antikor Boyama Çözeltisi #4 (Döngü 2)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA içermeyen Engelleme Arabelleği (Döngü 2)</td><td>Yukarıyı görmek</td><td></td><td>Antikor ekledikten sonra hacme kadar doldurun</td></tr><tr><td>CD15</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td>347420</td><td>1:30</td></tr><tr><td>Lumikan Biyotini</td><td>R& D Sistemleri</td><td>BAF2846</td><td>1:100</td></tr><tr><td>CD45 PE</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-34528PE Serisi</td><td>1:20</td></tr><tr><td>CD20 eFlor 660</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>50-0202-82</td><td>1:10</td></tr><tr><td>Pan-Sitokeratin AF750</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NBP2-33200AF750 Serisi</td><td>1:10</td></tr><tr><td><güçlü>İkincil Antikor Boyama Solüsyonu #2 (Döngü 2)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA içermeyen Engelleme Arabelleği (Döngü 2)</td><td>Yukarıyı görmek</td><td></td><td>Antikor ekledikten sonra hacme kadar doldurun</td></tr><tr><td>Eşek anti-Fare IgM AF488</td><td>Jackson İmmünoAraştırma</td><td>715-545-020/AB_2340844</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Strepavidin AF594</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>S11227</td><td>1:200</td></tr></tbody></table>

yinelemeli beyazlatma için optimize edilmiş İş akışı, yüksek otofloresan klinik numunelerin Çok yönlü görüntülemesini genişletir

Optimized Workflow for Iterative Bleaching Extends Multiplexity Imaging of Highly Autofluorescent Clinical Samples

Çoğullanmış antikor tabanlı bir görüntüleme paneli tasarlamak önemli ölçüde zaman, çaba ve kaynak gerektirir12. Bu zorluklar, burada açıklandığı gibi yüksek derecede otofloresan dokulardan arşivlenmiş FFPE örnekleri için bir panel tasarlanırken özellikle belirgindir (Şekil 1). Bu zorlukların üstesinden gelmek için önce boya inaktivasyon protokolümüzle uyumlu en parlak floroforları belirledik (Tablo 1). Örneğin, Alexa Fluor Plus ikincil antikorlarının,...

Yinelemeli Beyazlatma için Optimize Edilmiş İş Akışı, Yüksek Otofloresan Klinik Numunelerin Çok Yönlü Görüntülemesini Genişletir

The prevalence of pulmonary disease due to nontuberculous mycobacteria (NTM) has been increasing globally. Though NTM-induced pulmonary disease often ...

optimized-workflow-for-iterative-bleaching-extends-multiplexity

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Arka plan autofluorescence biyolojik örneklerin kez Floresans tabanlı görüntüleme teknikleri, özellikle yaşlı insan postmitotic doku zorlaştırmaktadır. Bu protokolü nasıl autofluorescence bu örnekler üzerinden etkin bir şekilde kaldırılabilir açıklar bir ticari olarak mevcut ışık yayan diyot ışık kullanarak örnek immunostaining önce photobleach için kaynak.

İnsan beyninin Formalin sabit bir doku arka plan Floresans ayirt mikroskopi için basit ortadan kaldırılması

Detaylı bir iletişim kuralı için bir altı-marker multiplex ayirt panel en iyi duruma getirilmiş ve gerçekleştirilen, daha tutarlı sonuçlar ve daha kısa işlem süresi için bir otomatik stainer kullanarak. Bu yaklaşım doğrudan IMMUNO-Onkoloji araştırmalar amaçlı herhangi bir laboratuvar tarafından adapte edilebilir.

IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik

Multiplex floresan immünhistokimya, bozulmamış formalin-sabit, parafin katıştırılmış (FFPE) dokusu içinde birden fazla hücre türlerinin görselleştirilmesini sağlayan gelişmekte olan bir teknolojidir. Sunulan başarılı bir 7-renk Multiplex antikor ve reaktifler optimize etmek için talimatlar, slaytlar, tasarım ve ortak sorunları önlemek için ipuçları hazırlanması sağlamak için yönergeler vardır.

Manuel Multiplex floresan Immünhistokimya 'da optimizasyon, tasarım ve kaçınarak tuzaklar

Biz dondurulmuş dokularda multispektral görüntüleme gerçekleştirmek için hızlı bir boyama yöntemi açıklar.

Dondurulmuş Doku Kesitlerinin Multispektral Floresan Görüntülemesi için Hızlı Bir Yöntem

Multipleks siklik immünohistokimya, tekrarlanan antijen-antikor inkübasyonu, görüntü taraması ve görüntü hizalama ve entegrasyonu kullanılarak aynı anda birden fazla belirtecin in situ tespitine izin verir. Burada, akciğer kanseri ve eşleştirilmiş beyin metastazı örneklerinde bu teknoloji ile immün hücre substratlarının tanımlanması için çalışma protokolünü sunuyoruz.

Multipleks Siklik Floresan İmmünohistokimya

Bu rapor, otomatik bir slayt boyayıcı üzerinde multipleks immünofloresan (mIF) testleri için otomatik bir protokolü açıklar. Translasyonel araştırmalarda çok sayıda doku slaytında özel mIF tahlilleri için ideal olan standart yüksek verimli doku otomatik boyalayıcıları ve tam slayt floresan görüntüleyiciler üzerinde uzamsal proteomiklerin yüksek tekrarlanabilirliğini gösterir.

Translasyonel Araştırmalar için Yüksek Verimli Otomatik Multipleks İmmünofloresan Testleri

Yinelemeli ağartma-uzatma-çoğullama (IBEX) ve ticari bir nükleotid etiketleme testinin (Click-iT EdU) kombinasyonu, sabit donmuş murin dokusu kesitlerinde oldukça dinamik süreçlerde bölünen hücre tiplerinin saptanmasını ve sınıflandırılmasını sağlar. Ayrıca, yeni bir açık kaynaklı görüntü işleme hattı, yüksek verimli görüntü elde etme ve analiz sağlar.

Doku Örneklerinde Cilt Hücresi Fenotiplerini ve Proliferasyon Durumlarını Değerlendirmek için Yüksek Verimli Görüntüleme ve Analiz İş Akışı

Burada, ticari olarak temin edilebilen, otomatik doku boyalayıcıları ve tiramid sinyal amplifikasyonu bazlı reaktiflerin kullanımı için optimizasyon hususlarını kullanan Yinelemeli Ağartma Çokluğu Uzatır (IBEX) yönteminin uygulamasını açıklıyoruz.

Yinelemeli Ağartma, Çekirdek Tesisler için Boyama Otomasyonu Kullanımıyla Çeşitliliği Artırıyor

Bu makale, peritoneal metastazların üç boyutlu mimarisini karakterize etmek için optimize edilmiş bir multipleks immünofloresan protokolünü açıklamaktadır.

Yinelemeli Beyazlatma Genişletilmiş Çokluk Yaklaşımı kullanılarak tümör taşıyan dokunun üç boyutlu görüntülenmesi

Spektral Yinelemeli Ağartma Çoklamayı Genişletir (IBEX), spesifik olmayan bağlanmayı en aza indirmek için heparin blokajı ekleyerek ve otofloresansı bastırmak için hesaplamalı karıştırma ile spektral algılamadan yararlanarak temel IBEX tekniğini temel alır. Bu yaklaşım, arka plan kaynaklarını azaltırken görüntü elde etmeyi hızlandırır ve sağlam, çok yönlü, yüksek parametreli uzamsal proteomik analizlere olanak tanır.

Spesifik Olmayan Doku Floresansını En Aza İndirmek için Spektral Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Yüksek Pleks Görüntüleme

Çoklu immünoflüoresans, doku mimarisi ve hücre popülasyonlarının mekansal analizini desteklemek için tek bir doku bölümünde birden fazla antikor belirteçinin ardışık olarak etiketlenmesini sağlar. Burada, yaşlanma ile ilişkili, yapısal ve bağışıklık belirteçlerinin çoklu algılanması için manuel ve otomatik slayt hazırlığı, yinelemeli görüntüleme ve dijital patoloji yazılımı kullanılarak tek hücre analizi dahil olmak üzere bir iş akışı sunulmaktadır.

Yaşlanma Belirteçlerinin Mekansal Değerlendirmesi İçin Multipleksli İmmünoflüoresans Testi

Öğrenin, fotoirradyasyon tekniğiyle yüksek otofloresanlı klinik doku örneklerinde çok yönlü görüntüleme ve bağışıklık hücrelerinin uzamsal analizi için optimize edilmiş iş akışı.

Yinelemeli Beyazlatma için Optimize Edilmiş İş Akışı, Yüksek Otofloresan Klinik Numunelerin Çok Yönlü Görüntülemesini Genişletir (Video) | JoVE Journal

Yinelemeli Beyazlatma için Optimize Edilmiş İş Akışı, Yüksek Otofloresan Klinik Numunelerin Çok Yönlü Görüntülemesini Genişletir

Daha fazla video keşfet