Name: Murin Glomerüler Mezanjiyal Hücrelerin İzolasyonunu ve Saflaştırılmasını Optimize Etmek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: Öğrenin, murin mezanjiyal hücrelerin kolajenaz sindirimiyle izolasyonunu ve böbrek hastalığı modellerinde kültürünü. Bu yöntem, alfa-SMA ve vimentin ekspresyonunu koruyarak böbrek araştırmaları için güçlü bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 ve mikro; m Hücre Süzgeci</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Petri Kabı</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Santrifüj Tüpü</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>15 mm cam tabanlı hücre kültürü kabı</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus Boyalı Protein İşaretleyici</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 mM L-glutamin</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>% 4 Paraformaldehit</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 & m Hücre Süzgeci</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Santrifüj Tüpü</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petri Kabı</td><td>Sorfa</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>%75 Alkol</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>96 Kuyu Hücre Kültürü Plakaları, TC ile tedavi edilmiş</td><td>Servicebio</td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotikler (10 &mu; g/mL seftriakson artı 100 &mu; g / mL gentamisin)</td> <td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (Bikinkoninik asit) Protein Test kiti</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Sayma Kiti-8</td><td>Oriscience</td><td>CB101</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal Mikroskop</td><td>FV-3000</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle's Dengeli Tuz Çözeltisi (1x EBSS)&nbsp;</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Hücre Analiz Cihazı</td><td>Mira FL ve nbsp;</td><td>Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount media</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin, Transferrin, Selenyum Çözeltisi 100x (ITS -G)</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Ters Floresan Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>Lizis Tamponu</td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>Tek Adımlı PAGE Hazırlama Kiti (%10)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>Tek Adımlı PAGE Hazırlama Kiti (%7,5)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-fare CD140b Antikor</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Plastik Hücre Havaneli</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz İnhibitörü Kokteyl</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>PVDF Membran</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan İnsülini</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Orta</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE Numune Yükleme Tamponu (5x)</td><td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>Özel olarak özelleştirilmiş Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (L-valin yerine D-valin)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Tamponlu Salin)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.25)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Tip I kollajenaz</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; CB140</td><td></td></tr></tbody></table> Serisi

murin glomerüler mezanjiyal hücrelerin İzolasyonunu ve saflaştırılmasını optimize etmek

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

Bu çalışma, murin MC'lerin izolasyonu ve ex vivo hücre kültürü için optimize edilmiş bir protokol geliştirmiştir. Bildiğimiz kadarıyla, birincil MC'leri ex vivo olarak doğrulamak için standart bir yöntem mevcut değildir. Önceki yayınlara göre, MC'ler αSMA, Vimentin ve Fibronektin 3,14,15 ekspresyonu ile karakterize edilir. MK'lerin ekspresyon düzeylerini tespit etmek için Western blot analizi kullanıldı. Bu çal...

Murin Glomerüler Mezanjiyal Hücrelerin İzolasyonunu ve Saflaştırılmasını Optimize Etmek

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

optimizing-isolation-purification-murine-glomerular-mesangial

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu yazıda, gelişmekte olan böbrek kök / progenitör hücreleri düzenleyen sinyalizasyon yolaklar çalışma için kullanılabilir embriyonik fare böbrek progenitör hücre niş izolasyonu ve kültürü için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu kültür hücreleri küçük molekül ve rekombinant protein tedavisi için son derece erişilebilir ve önemlisi de aday yollarının etkin bir şekilde müdahale etmenizi sağlar viral iletimi,.

Embriyonik Fare Böbrek Nefrojenik Zone Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Bu videoda, fare böbreklerinden sağlam glomerülleri izole etme yöntemi açıklanmaktadır. Bu şekilde elde edilen kapsüllenmiş ve kapsüllenmiş glomerüller, murin böbreğinden parietal epitel hücre büyümelerini kültürlemek için de kullanılabilir.

Glomerül İzolasyonu: Murin Böbrek'ten Sağlam Glomerül Elde Etme Tekniği

Bu videoda, çok çeşitli moleküler biyoloji ve hücre kültürü çalışmaları için renal tübüler epitel hücrelerini izole etme ve saflaştırma adımlarını gösteriyoruz.

Murin Renal Hücre İzolasyonu: Renal Tübüler Epitel Hücrelerinin Primer Kültürünü İzole Etmek ve Oluşturmak İçin Bir Teknik

Böbrek bağışıklık hücrelerinin izolasyonu için güvenilir ve verimli teknikler, sonraki uygulamalar için gereklidir. Bu, az sayıda böbrek bağışıklık hücresinin yüzey antikoru etiketlemesini gerektirir. Burada, görünüşte bu amaca ulaşan böbrek bağışıklık hücrelerinin izolasyonu için özlü bir yöntem açıklıyoruz.

Böbrek Bağışıklık Hücreleri Güvenilir ve Yüksek Verimlilik Ekstraksiyon

Bir iletişim kuralı üzerinden fare beyni birincil microglia yalıtım için sunulmaktadır. Bu teknik nörolojik koşullar geçerli anlayışı sürdürmek yardımcı olur. Yoğunluk gradient Santrifüjü ve manyetik ayırma son derece saf bir örnek yeterli verim üretmek için birleştirilmiştir. Ayrıca, biz microglia karakterizasyonu için adımlar verilmiştir.

Karakterizasyonu ve yoğunluk Gradient Santrifüjü tarafından fare birincil Microglia izolasyonu

Bu protokol ana odak verimli bir şekilde uygun birincil glomeruli kültürlerin çeşitli aşağı akım uygulamaları kullanmak için en az kirletici maddeleri ile izole etmektir. İzole glomeruli bileşeni hücre tipleri arasındaki yapısal ilişkileri korumak ve kültürlü ex vivo kısa bir süre için olabilir.

Yetişkin sıçan böbrek üzerinden olduğu gibi Glomeruli yalıtmak için verimli bir eleme yöntemi

Burada fare vivo biotin ile glomerular hücre yüzey proteinlerin etiketleme için bir iletişim kuralı mevcut. Bu protokolü nasıl fare böbrekler sıvı, glomeruli ayırma ve ilgi proteinin endojen immunoprecipitation gerçekleştirmek yönergeler içerir.

Yalıtım Glomeruli ve Glomerular hücre yüzey proteinleri Vivo etiketleme

Temel araştırma ve biyoloji ve tedavi potansiyelini araştırmak için murine kardiyak perisitleri izole etmek ve arındırmak için bir protokol optimize ettik.

Murine Kardiyak Perisitlerin İzolasyon ve Safifikasyonu

Bu makalede, fare böbreği izole kapsüllü glomeruli glomeruli glomerual hücre outgrowths kültürve analiz için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem parietal epitel hücre çoğalması ve göç ile ilgili yolları incelemek için kullanılabilir.

Parietal Epitel Hücre Aktivasyonunda Yer Alan Yolları Analiz Etmek Için Ex Vivo Analizi olarak Glomerüler Büyüme

Makalede, termolabil simian virüsü 40'ı eksprese eden transgenik farelerin böbreklerinden şartlı olarak ölümsüzleştirilmiş glomerüler endotel hücrelerinin izole edilmesi ve foto-aktive edilebilir mitokondri, PhAMeksize edilmesi yöntemi açıklanmaktadır. Boncuklar, sindirim adımları, tohumlama ve GEC-CD31 pozitifin kültürlenmesi kullanılarak tüm böbreklerden glomerül izolasyonu prosedürünü açıklıyoruz.

Şartlı Ölümsüzleştirilmiş Fare Glomerüler Endotel Hücrelerinin Floresan Mitokondri ile İzolasyonu

Öğrenin, murin mezanjiyal hücrelerin kolajenaz sindirimiyle izolasyonunu ve böbrek hastalığı modellerinde kültürünü. Bu yöntem, alfa-SMA ve vimentin ekspresyonunu koruyarak böbrek araştırmaları için güçlü bir araç sunar.

Murin Glomerüler Mezanjiyal Hücrelerin İzolasyonunu ve Saflaştırılmasını Optimize Etmek

Daha fazla video keşfet