Name: Glikan Analizi için Microgliadan Mitokondriyal Hazırlık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Öğrenin mikroglial hücrelerden mitokondri izolasyonu ve kitle spektrometrisi ile glikan analizi yöntemini. Bu protokol nöroimmün etkileşimleri ve beyin hastalıklarını anlamak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Dos Santos, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+microglial+cell+densities+across+brain+structures+and+mammalian+species%3A+Implications+for+brain+tissue+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Similar microglial cell densities across brain structures and mammalian species: Implications for brain tissue function.</a> J Neurosci. 40 (24), 4622-4643 (2020).</li>
<li>Shao, F., Wang, X., Wu, H., Wu, Q., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+neuroinflammation%3A+Crucial+pathological+mechanisms+in+traumatic+brain+injury-induced+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia and neuroinflammation: Crucial pathological mechanisms in traumatic brain injury-induced neurodegeneration.</a> Front Aging Neurosci. 14, 825086(2022).</li>
<li>Arcuri, C., Mecca, C., Bianchi, R., Giambanco, I., Donato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiological+role+of+microglia+in+dynamic+surveillance%2C+phagocytosis+and+structural+remodeling+of+the+developing+cns%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The pathophysiological role of microglia in dynamic surveillance, phagocytosis and structural remodeling of the developing cns.</a> Front Mol Neurosci. 10, 191(2017).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J Neuroinflammation. 18 (1), 129(2021).</li>
<li>Cătălin, B., Cupido, A., Iancău, M., Albu, C. V., Kirchhoff, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+First+responders+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Rom+J+Morphol+Embryol%22%5BJournal%5D)">Microglia: First responders in the central nervous system.</a> Rom J Morphol Embryol. 54 (3), 467-472 (2013).</li>
<li>Cai, Y., Liu, J., Wang, B., Sun, M., Yang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+the+neuroinflammatory+pathogenesis+of+alzheimer%27s+disease+and+related+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia in the neuroinflammatory pathogenesis of alzheimer's disease and related therapeutic targets.</a> Front Immunol. 13, 856376(2022).</li>
<li>Hickman, S., Izzy, S., Sen, P., Morsett, L., El Khoury, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia in neurodegeneration.</a> Nat Neurosci. 21 (10), 1359-1369 (2018).</li>
<li>Norat, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+in+neurological+disorders%3A+Exploring+mitochondrial+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction in neurological disorders: Exploring mitochondrial transplantation.</a> NPJ Regen Med. 5 (1), 22(2020).</li>
<li>Picca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+glia+remodeling+and+mitochondrial+dysfunction+in+neurodegeneration%3A+Antioxidant+supplementation+as+a+possible+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Age-associated glia remodeling and mitochondrial dysfunction in neurodegeneration: Antioxidant supplementation as a possible intervention.</a> Nutrients. 14 (12), 2406(2022).</li>
<li>Mcavoy, K., Kawamata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+mitochondrial+function+and+dysfunction+in+health+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial mitochondrial function and dysfunction in health and neurodegeneration.</a> Mol Cell Neurosci. 101, 103417(2019).</li>
<li>Fairley, L. H., Wong, J. H., Barron, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+regulation+of+microglial+immunometabolism+in+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial regulation of microglial immunometabolism in alzheimer's disease.</a> Front Immunol. 12, 624538(2021).</li>
<li>Starossom, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-1+deactivates+classically+activated+microglia+and+protects+from+inflammation-induced+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Galectin-1 deactivates classically activated microglia and protects from inflammation-induced neurodegeneration.</a> Immunity. 37 (2), 249-263 (2012).</li>
<li>Puigdellívol, M., Allendorf, D. H., Brown, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialylation+and+galectin-3+in+microglia-mediated+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialylation and galectin-3 in microglia-mediated neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Front Cell Neurosci. 14, 162(2020).</li>
<li>Gerlach, J. Q., Kilcoyne, M., Eaton, S., Bhavanandan, V., Joshi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-carbohydrate-mediated+interaction+of+lectins+with+plant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Non-carbohydrate-mediated interaction of lectins with plant proteins.</a> Adv Exp Med Biol. 705, 257-269 (2011).</li>
<li>Cummings, R. D., Pierce, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenge+and+promise+of+glycomics%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">The challenge and promise of glycomics.</a> Chem Biol. 21 (1), 1-15 (2014).</li>
<li>Robichaud, G., Barry, J. A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IR-MALDESI+mass+spectrometry+imaging+of+biological+tissue+sections+using+ice+as+a+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">IR-MALDESI mass spectrometry imaging of biological tissue sections using ice as a matrix.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 25 (3), 319-328 (2014).</li>
<li>Barry, J. A., Groseclose, M. R., Robichaud, G., Castellino, S., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+drug+and+metabolite+detection+in+liver+tissue+by+uv-maldi+and+ir-maldesi+mass+spectrometry+imaging+coupled+to+ft-icr+ms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Assessing drug and metabolite detection in liver tissue by uv-maldi and ir-maldesi mass spectrometry imaging coupled to ft-icr ms.</a> Int J Mass Spectrom. 377, 448-155 (2015).</li>
<li>Pace, C. L., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+analysis+of+native+N-linked+glycans+by+IR-MALDESI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Direct analysis of native N-linked glycans by IR-MALDESI.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 31 (8), 1759-1762 (2020).</li>
<li>Palomino, T. V., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+sialic+acid+content+of+N-linked+glycans+using+the+isotopic+pattern+of+chlorine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Predicting sialic acid content of N-linked glycans using the isotopic pattern of chlorine.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 34 (7), 1392-1399 (2023).</li>
<li>Mariethoz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycomics%40expasy%3A+Bridging+the+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Glycomics@expasy: Bridging the gap.</a> Mol Cell Proteomics. 17 (11), 2164-2176 (2018).</li>
<li>Varki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symbol+nomenclature+for+graphical+representations+of+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Symbol nomenclature for graphical representations of glycans.</a> Glycobiology. 25 (12), 1323-1324 (2015).</li>
<li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+glycopattern+alterations+of+mitochondrial+proteins+in+cerebral+cortex+between+rat+alzheimer%27s+disease+and+the+cerebral+ischemia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of the glycopattern alterations of mitochondrial proteins in cerebral cortex between rat alzheimer's disease and the cerebral ischemia model.</a> Sci Rep. 7 (1), 39948(2017).</li>
<li>Dixit, B., Vanhoozer, S., Anti, N. A., O'Connor, M. S., Boominathan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+mitochondria+from+mammalian+cell+cultures+using+digitonin%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of mitochondria from mammalian cell cultures using digitonin.</a> MethodsX. 8, 101197(2021).</li>
<li>Kalathil, A. A., et al. New pathway for cisplatin prodrug to utilize metabolic substrate to overcome cancer intrinsic resistance. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKalathil%2C+AA+%22central+science%22">central science</a>. 9, 1297-1312 (2023).</li>
<li>Hecht, E. S., McCord, J. P., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+screening+design+optimization+of+mass+spectrometry+parameters+for+sensitive+comparison+of+filter+and+solid+phase+extraction+purified%2C+inlight+plasma+N-glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Definitive screening design optimization of mass spectrometry parameters for sensitive comparison of filter and solid phase extraction purified, inlight plasma N-glycans.</a> Anal Chem. 87 (14), 7305-7312 (2015).</li>
<li>Hecht, E. S., McCord, J. P., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+glycomics+and+proteomics+combined+purification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A quantitative glycomics and proteomics combined purification strategy.</a> J Vis Exp. (109), e53735(2016).</li>
<li>Fischler, D. A., Orlando, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-linked+glycan+release+efficiency%3A+A+quantitative+comparison+between+NaOCl+and+PNGase+F+release+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Tech%22%5BJournal%5D)">N-linked glycan release efficiency: A quantitative comparison between NaOCl and PNGase F release protocols.</a> J Biomol Tech. 30 (4), 58-63 (2019).</li>
<li>Tu, A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+energy+deposition+in+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization+with+and+without+the+use+of+ice+as+a+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Internal energy deposition in infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization with and without the use of ice as a matrix.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 30 (11), 2380-2391 (2019).</li>
<li>Barry, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+antiretroviral+drugs+in+tissue+by+IR-MALDESI+MSI+coupled+to+the+Q+exactive+and+comparison+with+LC-MS%2FMS+SRM+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Mapping antiretroviral drugs in tissue by IR-MALDESI MSI coupled to the Q exactive and comparison with LC-MS/MS SRM assay.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 25 (12), 2038-2047 (2014).</li>
<li>Samal, J., Palomino, T. V., Chen, J., Muddiman, D. C., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+detection+of+charged+N-glycans+in+the+brain+by+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization+mass+spectrometric+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced detection of charged N-glycans in the brain by infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization mass spectrometric imaging.</a> Anal Chem. 95 (29), 10913-10920 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amersham 600 görüntüleyici</td><td>Cytvia&nbsp;</td><td>29194217</td><td>Jel ve membran görüntüleyici</td></tr><tr><td>Kontes 3 otomatik hücre sayacı</td><td>Fisher Scientific</td><td>X003SZ1LY9</td><td></td></tr><tr><td>Kuru Banyo Stdrd 4 blck 100-120V</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>88870003</tr><tr><td>i-Blot2 Jel Transfer Cihazı</td><td>Invitrogen</td><td>IB21001</td><td>Western blot transfer sistemi</td></tr><tr><td>Ters mikroskop</td><td>Hücre Tedavisi</td><td>04355223EA</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu</td><td></td><td>82050-760</td><td></td></tr><tr><td>Mini jel tankı</td><td>Invitrogen</td><td>A25977</td><td></td></tr><tr><td>Açık Hava Rocker</td><td>Fisher Marka</td><td>88861025</td><td></td></tr><tr><td>Pipet çocuk&nbsp;</td><td>BioTek</td><td>229310</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks karıştırıcı</td><td>Integra- VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mitokondri izolasyon reaktifleri&nbsp; </güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mitokondriyal İzolasyon kiti</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>89874</td><td></td></tr><tr><td>Fosfotaz İnhibitörü</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>1861274</tr><tr><td>Proteaz İnhibitörü</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>1861281</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>N-glikan izolasyonu ve IR-MALDESI reaktifleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Asetik asit&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A11350</td><td>%50 ESI çözücü</td></tr><tr><td>Asetonitril &</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34851-4L</td><td>1 mM ESI çözücü</td></tr><tr><td>Amonyum bikarbonat ve nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A643500</td><td>100 mM</td></tr><tr><td>Kalibrasyon Çözeltisi</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A39239</td><td>Pierce FlexMix</td></tr><tr><td>Ditiyotreitol&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>AC426380100</td><td>1 M</td></tr><tr><td>İyodoasetamid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A322-10VL</td><td></td></tr><tr><td>LC/MS sınıfı su</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>047146.M6</td><td></td></tr><tr><td>PNGase F</td><td>Bulldog Bio</td><td></td><td>NZPP010 75000 U/mL, N-glikan salınımı için enzim&nbsp;</td></tr><tr><td>N-glikan izolasyonu ve IR-MALDESI sarf malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon santrifüj filtreler</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>UFC501024</td><td>10 kDa MWCO</td></tr><tr><td>Kütle spektrometresi</td><td>Orbitrap Exploris 240</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mid-IR Lazer</td><td>JGM Associates, Burlington, MA, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Teflon mikrokuyu slaytı</td><td>Prosolia, Indianapolis, IN, ABD</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>N-glikan analiz yazılımları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GlycoMod&nbsp;</td><td>Expasy&nbsp;</td><td></td><td>https://web.expasy.org/glycomod/</td></tr> <tr><td>GlyConnect</td><td>Expasy&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>https://glyconnect.expasy.org/Protein izolasyonu ve western blot sarf malzemeleri&nbsp; < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Basix jel yükleme uçları (10 & mikro; L)&nbsp;</td><td>Basix</td><td>13-611-102</td><td></td></tr><tr><td>Basix jel yükleme uçları ( 200 & mikro; L)&nbsp;</td><td>Basix</td><td>13-611-116</td><td></td></tr><tr><td>Hücre sıyırıcı</td><td>VWR labs</td><td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot NC düzenli yığınlar</td><td>Invitrogen</td><td>IB23001</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot2 PVDF Düzenli Yığınlar</td><td>Invitrogen</td><td>IB24001</td><td></td></tr><tr><td>10&nbsp; &mikro; L mikropipet</td><td>Fisher Scientific</td><td>FBE00010</td><td></td></tr><tr><td>20 & mikro; L mikropipet</td><td>Invitrogen</td><td>FBE00020</td><td></td></tr><tr><td>200&nbsp; &mikro; L mikropipet&nbsp;</td><td>Fisher Marka</td><td>FBE00200</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mikro; L mikropipet</td><td>Fisher marka</td><td>FBE01000</td><td></td></tr><tr><td>10&nbsp; &mikro; L pipet uçları&nbsp;</td><td>VWR laboratuvarları</td><td>76322-528</td><td></td></tr><tr><td>20&nbsp; &mikro; L pipet uçları</td><td>VWR labs</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200&nbsp; &mikro; L pipet uçları&nbsp;</td><td>VWR laboratuvarları</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>1000&nbsp; &mikro; L pipet uçları</td><td>VWR labs</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>Kuyu plakası ve nbsp;</td><td>Fisher marka</td><td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td>Protein izolasyonu ve western blot reaktifleri&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Actin antikoru ( Ev sahibi : Tavşan )</td> <td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojileri</td><td>8457T</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Tavşan IgG HRP Bağlantılı&nbsp;</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojileri</td><td>7074S</td><td></td></tr><tr><td>Bolt %4-12 Bis-Tris Plus</td><td>Invitrogen</td><td>NW04120BOX</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin</td><td>Fisher biyoreaktifleri</td><td>BP9700-100</td><td></td></tr><tr><td>COXIV antikoru ( Ev sahibi : Tavşan)</td> <td>Hücre Sinyal Teknolojileri</td><td>4844S</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH antikoru ( Konak : Tavşan)</td> <td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojileri</td><td>2118S</td><td></td></tr><tr><td>MicroBCA protein tahlil Kiti</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>Nupage MOPS SDS Çalışma Tamponu [20x]</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>NP0001</td><td></td></tr><tr><td>SAYFA Cetvel önceden boyanmış protein merdiveni</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>815-968-0747</td><td>Seyreltme = 7&nbsp; &mikro kullanın; İlk kuyuya yüklemek için L</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su&nbsp;</td><td>Aniara Diagnostics</td><td>A12-9423-5</td><td>10x tozdan 1x PBS hazırlayın&nbsp;</td></tr><tr><td>Pierce ECL Western Blotting Substrat</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>32106</td><td>Kemilüminesan substrat kiti</td></tr><tr><td>RIPA Tampon</td><td>Thermofisher scientific&nbsp;</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>Numune Tamponu</td><td>Novex</td><td>B0007</td><td>Cıvata LDS numune tamponu, numunenin numune tamponuna 3: 1 oranında hazırlanır</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>MP Biyomedikal</td><td>TWEEN201</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü sarf malzemeleri&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess Slaytlar</td><td>Avantor</td><td>229411</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tüpleri</td><td>Cell Treat</td><td>414004-265612-5884</td><td></td></tr><tr><td>2 mL aspirasyonlu pipet</td><td>Vista lab</td><td>5090-0010E</td><td></td></tr><tr><td>5 mL serolojik pipet&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serolojik pipet&nbsp;</td><td>Basix</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>25 mL serolojik pipet</td><td>Vista lab</td><td>FB012937</td><td></td></tr><tr><td>50 mL serolojik pipet</td><td>Vista lab</td><td>14955233</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Konik tüp</td><td>Avantor</td><td>229225A</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik tüp</td><td>Hücre tedavisi</td><td>4190-0050</td><td></td></tr><tr><td>T-75 cm2 Doku kültürü şişesi</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>FB012937</tr><tr><td>T-180 cm2 Doku kültürü şişesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012939</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü reaktifleri&nbsp; < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BV2 mikroglial hücre hattı&nbsp;</td><td>Yaratıcı Biyoarray&nbsp;</td><td>CSC-I2227Z</td><td>C57 / BL6 neonatal mikroglia'dan türetilen Ölümsüzleştirilmiş Fare Mikrogliası (BV2);</td></tr><tr><td>Hücre ayrışma enzimleri&nbsp;</td><td>Thermofisher bilimsel&nbsp;</td><td>12563029</td><td>TrypLE&nbsp;</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium (DMEM) Düşük Glikoz Ortamı&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10567014</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır</td><td>Serumu Cytiva</td><td>SH30071.03HI</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Esansiyel Orta (MEM) Esansiyel Olmayan Amino Asitler</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Penicillium Streptomisin</td><td>Cytivia</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponu salin</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi leke% 0.4</td> <td>İnvitrojen</td><td>T10282</td><td></td></tr></tbody></table> Serisi

glikan analizi için microglia'dan mitokondriyal hazırlık

Mitochondrial Preparation from Microglia for Glycan Analysis

Şekil 1, kütle spektrometrik glikan analizi için BV2 mikroglial hücre hattından mitokondrinin izolasyonunda yer alan adımların şematik bir taslağını temsil etmektedir. Mikroglial hücrelerin aynı başlangıç yoğunluğundan farklı mitokondriyal preparatlar arasındaki mitokondriyal protein izolasyonunun tekrarlanabilirliği, mikro BCA testi kullanılarak tahmin edilen mitokondriyal protein konsantrasyonu arasında önemli bir fark göstermeyen Şekil 2'de temsil edilmektedi...

Glikan Analizi için Microglia'dan Mitokondriyal Hazırlık

Understanding the glycosylation patterns of mitochondrial proteins in microglia is critical for determining their role in neurodegenerative diseases. ...

mitochondrial-preparation-from-microglia-for-glycan-analysis

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Beynin hücresel heterojenite birincil mikroglia Yalıtımlı fizyolojik ve patolojik hem de kendi rolünü araştırmak için esastır. Bu protokol bir mekanik izolasyon ve yüksek verim ve yüksek saflıkta sağlar karışık hücre kültürü tekniği için geçerli birincil mikroglia hücreleri...

Yenidoğan Rat Beyin Dokusu Karışık Glial Hücre Kültürleri Primer mikroglia İzolasyonu

Mikroglia merkezi sinir sisteminin savunma ve bağışıklık gözetim ilk satırı sağlamak makrofajlar ikamet ediyorsanız. MicroRNA aktivasyonu ve makrofaj farklılaşma da dahil olmak üzere bir çok fizyolojik süreçlerin önemli bir rol oynar düzenleyici moleküllerdir. Bu yazıda, mikroglia yılında microRNA ölçümü için bir yöntem sunduk.

Normal MSS Real-time PCR ve Nöro sırasında mikroglia içinde microRNA tespiti

Video, yetişkin bir fare beyninin korteksinden mikroglia'yı izole etmek için bir tekniği göstermektedir. İlk olarak, korteks, mikroglia'yı koruyarak nöronları ve diğer glial hücreleri uzaklaştırmak için segmentasyon ve homojenizasyona uğrar. Bunu takiben, hücre süspansiyonu, anti-miyelin manyetik mikro boncuklara ve bir manyetik alana maruz bırakılır, bu da mikroglia ve miyeloid hücreleri miyelin kalıntılarından ve miyelin içeren hücrelerden etkili bir şekilde ayırır.

Mikroglia'nın Yetişkin Bir Fare Beyninin Korteksinden İzolasyonu

Bu işlem yetişkin fare beyin mitokondri ilişkili ER membranlar veya MAM ve MAM ve mitokondriyal hazırlıkları glycosphingolipid zenginleştirilmiş microdomain fraksiyonları izole etmek için nasıl göstermektedir.

Mitokondri ilişkili ER Membranlar (MAM) ve Glycosphingolipid zenginleştirilmiştir Microdomains (GEM&#39;lerle): Fare Beyin izolasyon

Biz neonatal serebral korteks ve yetişkin omurilik canlı mikroglia verimli ve hızlı izolasyon / kültür yöntemleri özetlemektedir. Kortikal mikrogliya diseksiyonu ve kaplama ilk diseksiyonu sonrasında yer ~ 10 gün alarak sonraki mikrogliyal hasat ile, 90 dakika içinde yapılabilir.

Yenidoğan ve Erişkin Merkezi sinir sisteminin Kültüre Mikroglia

Mikrogliyal biyoloji başarılı bir soruşturma için bir anahtar CNS dokudan izolasyonu sırasında ex vivo mikroglialardan immunofunction korunmasıdır. Flüoresan görüntüleme, bağışıklık kimyası ve proenflamatuar stimuli lipopolisakarit (LPS) ile Pam 3 CSK 4 (PAM) ile ELISA aşağıda mikroglia aktivasyonu ile değerlendirilen gibi son derece saf ve immunofunctional hücre kültürlerinde döner çalkalama sonuçları ile mikroglia izole edilmesi.

Kemirgen Yenidoğan itibaren Korunan immunfenotipine ve İşlevselliği ile Kortikal mikrogliya İzolasyonu

Burada, bir protokol (MitoCeption) GSC metabolizması ve fonksiyonları üzerine biyolojik etkilerini inceleyerek amacı ile glioblastoma kök hücreler (GSC) için, insan mezenkimal kök hücrelerin (MSC) izole mitokondri, transfer sunulmaktadır. Benzer bir protokol için diğer hücre tipleri arasında mitokondri aktarmak için adapte edilebilir.

MitoCeption: Glioblastoma Kök Hücreleri için İzole İnsan MSC kondriyayı aktarma

Burada verilen farklı dokulardan ve beynin çeşitli bölgelerinden izole mitokondri ile farklı peptidler ve proteinlerin yerli formu, prefibrillar ve olgun amiloid fibrils arasındaki etkileşimleri araştırmak için bir protokoldür.

Amiloid Fibrils ile Beyin Mitokondrisi ile Etkileşimler ve Membran Permeabilizasyonu

Biz yetişkin bir fare beyin yarımkürenin farklı parçalanmış bölgelerinden mikroglia izolasyoniçin bir protokol sağlamak, tam uzunlukta transkripsiyon derin tek hücreli RNA sıralama için yarı otomatik kütüphane hazırlık izledi. Bu yöntem, sağlık ve hastalık mikroglia fonksiyonel heterojenite açıklığa kavuşturmak için yardımcı olacaktır.

Derin Tek Hücreli RNA Sıralamaiçin Bir Yetişkin Fare Beyin Yarımküre'den Bölgeye Özgü MikrogliaNın İzolasyon

Bu çalışma, fare beyin dokusunda immün boyama ve görüntü analizine dayalı olarak mitokondri morfolojisini analiz etmek için bir yöntem sunmaktadır. Ayrıca, bunun Parkinson hastalığı modellerinde protein agregasyonunun neden olduğu mitokondriyal morfolojideki değişiklikleri nasıl tespit etmesine izin verdiğini de açıklar.

Bir Parkinson Hastalığı Modelinde Mitokondriyal Morfolojinin Histolojik İncelemesi

Bu protokol, birincil fare mikrogliasında metabolik yeniden programlamayı niceliklendirmek için glikoliz stres testi yapmanın maliyet etkin bir yolunu tanımlar. İzolasyon ve inflamatuar uyarımdan sonra, taze hazırlanmış, pH-ayarlanmış reaktiflerle hücre dışı asitleşme oranı (ECAR) ölçülür, ardından protein normalizasyonu uygulanarak glikolitik değişimlerin doğru ve tekrarlanabilir değerlendirilmesini sağlar.

Birincil mikrogliada glikolizin ekstraselüler akı testi kullanılarak araştırılması

Öğrenin mikroglial hücrelerden mitokondri izolasyonu ve kitle spektrometrisi ile glikan analizi yöntemini. Bu protokol nöroimmün etkileşimleri ve beyin hastalıklarını anlamak için kullanılır.

Glikan Analizi için Microglia'dan Mitokondriyal Hazırlık

Daha fazla video keşfet