Name: Hücrelerden Salınan ve Hücrelere Bağlanan İnsan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2nin Kapsamlı Belirlenmesi için Doğrulanmış İmmünokimyasal Test (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Öğrenin, yeni anti-HER2 monoklonal antikorları kullanan doğrulanmış sandwich ELISA yöntemiyle hücrelere bağlı ve salınan HER2 proteininin hassas ölçümünü. Bu test kanser tanısı ve tedavi takibinde güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. İnsan kanser hücrelerinin kültürlenmesi
<ol><li>Dulbecco'nun Modifiye Eagle ortamındaki MDA-MB-231, SK-BR-3 ve SK-OV-3 hatlarını, 2 mM ʟ-glutamin ve% 10 (h / h) ısıyla etkisiz hale getirilmiş FBS ile desteklenmiş 4.5 g / L ᴅ-glikoz (DMEM-HG) içerir. Kültürleri 37 °C'de% 5 CO2 nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin.</li>
	<li>Kültür ~% 80 birleşmeye ulaştığında, hücreleri tripsinizasyon ile ayırın ve bunları ayrı 15 mL konik tüplere toplayın.</li>
	<li>Deney için hücreleri otomatik bir hücre sayacı ve tohum hücreleri ile 1 mL büyüme ortamında 3 ×10 5 hücre / kuyu başına 12 oyuklu plakalar halinde sayın. Kültürleri 37 °C'de% 5 CO2 nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. NOT: Deneyin her zaman noktası için bir kuyu tohumlayın. Daha ileri analizlerde hem kültür sonrası ortam hem de hücre lizatları kullanılacaktır.</li>
</ol>2. Numune toplama ve hazırlama
<ol><li>24 saatlik kültürden, her hücre hattının bir oyuğundan kültür ortamını 1.5 mL'lik bir tüpe toplayın.</li>
	<li>Toplanan numuneleri 10.000 × g'da 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın ve salgılanan ECD HER2 seviyesini daha fazla belirlemek için -20 °C'de saklayın.</li>
	<li>Plakada kalan hücreleri 1 mL soğuk PBS ile yıkayın, nazikçe aspire edin ve PBS'yi atın.</li>
	<li>Her oyuğa 200 μL RIPA tamponu (%1 proteaz inhibitörü ile desteklenmiş) ekleyin ve 5 dakika inkübe edin. Hücreleri hücre sıyırıcı ile kazıyın ve lizatı homojenize etmek için birkaç kez pipetleyerek karıştırın.</li>
	<li>Parçalanmış hücreleri yeni bir tüpe toplayın ve bir iğne ile 2 mL şırıngaya yavaşça aspire edin (G21 / 0.8 mm × 40 mm). Hücreleri daha fazla parçalamak için aspirasyon adımını 5-10 kez tekrarlayın.</li>
	<li>Toplanan numuneleri 10 000 x g'da 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın ve HER2 proteininin hücreye bağlı fraksiyonunun daha fazla belirlenmesi için -20 ° C'de saklayın.</li>
	<li>Kalan zaman noktaları için hazırlık adımlarını izleyerek kültür ortamı ve hücresel materyallerin toplanmasını tekrarlayın - 48 saat ve 72 saat kültür.</li>
</ol>3. HER2 tayini için sandviç ELISA yapılması
<ol><li>Tamponları hazırlayın.<ol><li>Kaplama tamponu: 0.42 g NaHCO3'ü 50 mL damıtılmış su içinde çözerek 0.1 M NaHCO3 çözeltisi hazırlayın ve iyice karıştırın. 3 M NaOH ile pH'ı 9,6'ya ayarlayın.</li>
		<li>Tamponu bloke etme: 10 mL PBS'ye 0,5 g kurutma sütü tozu ekleyerek PBS'de% 5 yağsız süt sütü (NFDM) hazırlayın ve iyice karıştırın.</li>
		<li>Yıkama tamponu: 0,5 mL %0,05 Tween-20 ila 1000 mL PBS ekleyerek Tween 20 (PBST) ile fosfat tamponlu tuzlu su hazırlayın ve karıştırın (aşırı köpürmeyi önleyin).</li>
	</ol></li>
	<li>Tespit edilen antikoru biyotinile edin.<ol><li>Üreticinin talimatlarına göre ticari bir biyotin etiketleme kiti kullanılarak 50-200 μg tespit edici anti-HER2 antikoru (klon 70.21.73.67) biyotinilat. NOT: Biyotinilasyon işleminin güvenilirliği ve tekrarlanabilirliği, elde edilen antikorun nihai protein konsantrasyonunun ölçümüne ve ürünün partiden partiye karşılaştırmasına dayanmaktadır.</li>
	</ol></li>
	<li>Plakayı kaplayın.<ol><li>Anti-HER2 yakalama antikorunu (klon 70.27.58) kaplama tamponunda 1 μg/mL konsantrasyonuna seyreltin. Bir plakayı kaplamak için, 6.5 mL yakalama antikor çözeltisi kullanın.</li>
		<li>Çok kanallı bir pipet kullanarak, 96 oyuklu bir ELISA plakası üzerindeki her bir oyuğa 100 μL yakalama antikor çözeltisi (adım 3.3.1'de hazırlanır) ekleyin. NOT: Kenar etkisinin neden olduğu değişkenliği azaltmak için plakanın en dış kuyularından (örn. A1, H12) kaçının. Kararlı reaksiyon koşullarını sağlamak için en dıştaki kuyular damıtılmış su ile doldurulmalıdır.</li>
		<li>Plakayı bir sızdırmazlık filmi ile örtün.</li>
		<li>Plakayı gece boyunca (O/H) 4 °C'de inkübe edin.</li>
		<li>O/N inkübasyonundan sonra, plakayı oda sıcaklığında (RT) 1 saat boyunca yatay bir mikro plaka çalkalayıcı (20 ° -30 ° eğim açısıyla 4-6 rpm) üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Bir mikroplaka yıkayıcı kullanarak, kaplama solüsyonunu aspire edin ve plakayı bir yıkama tamponu ile üç kez yıkayın (oyuk başına 3 x 300 μL PBST).</li>
	</ol></li>
	<li>Plakayı bloke edin.<ol><li>Çok kanallı bir pipet kullanarak, spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmek için kaplanmış her bir oyuğa 100 μL bloke edici tampon (PBS'de% 5 NFDM) ekleyin.</li>
		<li>Plakayı bir sızdırmazlık filmi ile örtün.</li>
		<li>Plakayı bir nem odasında 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.</li>
		<li>Bir mikroplaka yıkayıcı kullanarak, kaplama solüsyonunu aspire edin ve plakayı bir yıkama tamponu ile üç kez yıkayın (oyuk başına 3 x 300 μL PBST).</li>
	</ol></li>
	<li>Bir kalibrasyon eğrisi ve pozitif kontrol hazırlayın (Şekil 2).<ol><li>0.001 mg / mL (1000 ng / mL) HER2 konsantrasyonu elde etmek için 1998 μL PBS'ye 2 μL 1 mg / mL stok çözeltisi ekleyerek HER2 antijeninin çalışma standart çözeltisini hazırlayın.</li>
		<li>Standart çözelti 1'i (STD 1) elde etmek için 1800 μL PBS'ye 200 μL çözelti ekleyerek çalışma standart çözeltisini (WSS) seyreltin.</li>
		<li>PBS'de STD 2'in seri seyreltmeleriyle sonraki altı standardı (STD 7-STD 1) hazırlayın (Şekil 2).<ol><li>STD 2: 500 μL STD 1 ila 500 μL PBS ekleyin ve 50 ng / mL hazırlamak için iyice karıştırın.</li>
			<li>STD 3: 500 μL STD 2 ila 500 μL PBS ekleyin ve 25 ng / mL hazırlamak için iyice karıştırın.</li>
			<li>STD 4: 500 μL STD 3 ila 500 μL PBS ekleyin ve 12.5 ng / mL hazırlamak için iyice karıştırın.</li>
			<li>STD 5: 500 μL STD 4 ila 500 μL PBS ekleyin ve 6.25 ng / mL hazırlamak için iyice karıştırın.</li>
			<li>STD 6: 500 μL STD 5 ila 500 μL PBS ekleyin ve 3.125 ng / mL hazırlamak için iyice karıştırın.</li>
			<li>STD 7: 500 μL STD 6 ila 500 μL PBS ekleyin ve 1.5625 ng / mL hazırlamak için iyice karıştırın.</li>
			<li>STD 8: 0 ng / mL hazırlamak için 500 μL PBS ekleyin.</li>
		</ol></li>
		<li>Pozitif kontrol: 10 ng / mL protein konsantrasyonunda bir HER2 çözeltisi elde etmek için 900 μL PBS'ye 100 μL STD 1 çözeltisi ekleyerek STD 1'i seyreltin.</li>
	</ol></li>
	<li>Ani yükselme ve kurtarma deneyleri için numuneler hazırlayın.<ol><li>Bilinen HER2 protein konsantrasyonu ile çivilenmiş matris örneklerini (PBS, hücre lizatları ve kültür ortamı) hazırlayın. Yöntemin LOD'sinin altında HER2 seviyesine sahip bir numune matrisi elde etmek için 5 mL PBS'ye 2.5 μL uygun hücre lizatı ekleyerek hücre lizatlarını 1:2000 seyreltin.</li>
		<li>Matris örneklerini yükseltmek için WSS (1000 ng/mL) ve STD1 (100 ng/mL) kullanın.</li>
		<li>Her matris için 0, 2, 5, 10, 30 ve 50 ng/mL konsantrasyonlarda 6 numune hazırlayın.</li>
		<li>0 ng / mL hazırlamak için 400 μL PBS / kültür ortamı / hücre lizatı ekleyin.</li>
		<li>2 ng / mL hazırlamak için, 392 μL PBS / kültür ortamı / hücre lizatına 8 μL STD1 ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
		<li>5 ng / mL hazırlamak için, 380 μL PBS / kültür ortamı / hücre lizatına 20 μL STD1 ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
		<li>10 ng/mL hazırlamak için, 396 μL PBS/kültür ortamı/hücre lizatına 4 μL WSS ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
		<li>30 ng / mL hazırlamak için, 388 μL PBS / kültür ortamı / hücre lizatına 12 μL WSS ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
		<li>50 ng / mL hazırlamak için, 380 μL PBS / kültür ortamı / hücre lizatına 20 μL WSS ekleyin ve iyice karıştırın.</li>
	</ol></li>
	<li>Örneği, boş ve standardı ekleyin.<ol><li>Tek kanallı bir pipet kullanarak, uygun kuyucuklara 100 μL standart, boş (PBS) ve test edilmiş numuneler (hücre lizatları ve kültür ortamı) ekleyin. NOT: Her numunenin üç kopya halinde çalıştırılması tavsiye edilir.</li>
		<li>Plakayı bir sızdırmazlık filmi ile örtün.</li>
		<li>Plakayı bir nem odasında 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.</li>
		<li>Bir mikroplaka yıkayıcı kullanarak, kaplama solüsyonunu aspire edin ve plakayı bir yıkama tamponu ile üç kez yıkayın (oyuk başına 3 x 300 μL PBST).</li>
	</ol></li>
	<li>Antikor bağlanmasını tespit edin.<ol><li>PBS'deki biyotinile tespit edici antikoru (klon 70.21.73.67) 1 μg / mL'lik bir çalışma konsantrasyonuna seyreltin. Bir plaka için 6.5 mL tespit edici antikor çalışma solüsyonu kullanın.</li>
		<li>Çok kanallı bir pipet kullanarak, her bir oyuğa 100 μL tespit edici antikor çalışma solüsyonu ekleyin.</li>
		<li>Plakayı bir sızdırmazlık filmi ile örtün.</li>
		<li>Plakayı bir nem odasında 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.</li>
		<li>Bir mikroplaka yıkayıcı kullanarak, kaplama solüsyonunu aspire edin ve plakayı bir yıkama tamponu ile üç kez yıkayın (oyuk başına 3 x 300 μL PBST).</li>
	</ol></li>
	<li>Avidin-HRP eşleniği ekleyin.<ol><li>Ticari olarak temin edilebilen Avidin-HRP konjugatını 1: 40.000 oranında seyreltin, 40 mL PBST'ye 1 μL enzimatik konjuge ekleyin.</li>
		<li>Çok kanallı bir pipet kullanarak, her oyuğa 100 μL seyreltilmiş konjugat ekleyin.</li>
		<li>Plakayı bir sızdırmazlık filmi ile örtün.</li>
		<li>Plakayı bir nem odasında 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.</li>
		<li>Bir mikroplaka yıkayıcı kullanarak, kaplama solüsyonunu aspire edin ve plakayı bir yıkama tamponu ile üç kez yıkayın (oyuk başına 3 x 300 μL PBST).</li>
	</ol></li>
	<li>Kolorimetrik reaksiyon<ol><li>Çok kanallı bir pipet kullanarak, her oyuğa 100 μL 3,3",5,5" -Tetrametilbenzidin (TMB) substratı ekleyin.</li>
		<li>Plakayı bir sızdırmazlık filmi ile örtün.</li>
		<li>Plakayı ışıktan 37 ° C'de 1-5 dakika inkübe edin ve renk gelişimini izleyin.</li>
		<li>Renk beklenen seviyeye ulaştığında, reaksiyonu sonlandırmak için 100 μL durdurma çözeltisi ekleyin. NOT: Beklenen seviye, yüksek konsantrasyonda analit içeren numuneler içeren kuyucuklarda yoğun bir mavi renge karşılık gelir.</li>
	</ol></li>
	<li>Verileri toplayın ve analiz edin.<ol><li>Bir mikroplaka okuyucu kullanarak absorbansı 450 nm'de ölçün.</li>
		<li>4 parametrik bir kalibrasyon eğrisi kullanarak, eğri denklemine dayalı olarak numune konsantrasyonunu hesaplayın.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68204/68204fig1v5.jpg"> Şekil 1: Geliştirilen anti-HER2 sandviç ELISA iş akışının şematik diyagramı. Sandviç ELISA prosedüründeki temel adımlara genel bakış. Bunlar, yakalayan anti-HER2 antikoru 70.27.58 ile plaka kaplaması, numunelerin eklenmesi (eğri standartları, boş, hücre lizatlarının veya kültür ortamının deneysel numuneleri) ve tespit edilen anti-HER2 antikorunun bağlanması gibi kritik adımları (kırmızı bir çerçeve ile vurgulanmıştır) içerir 70.21.73.67. Tahlil, hedef antijenin konsantrasyonunu belirlemek için kolorimetrik sinyalin bir mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçüldüğü sinyal algılama ve veri analizi ile sona erer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68204/68204fig1v5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68204/68204fig02.jpg"> Şekil 2: Kalibrasyon eğrisi standart çözeltilerinin hazırlanmasını sunan şema. HER2 rekombinant proteininin seri dilüsyonları, 1.56-100 ng / mL'lik bir konsantrasyon aralığında bir kalibrasyon eğrisi oluşturmak için hazırlanır (şişeler STD 1-STD 7). Ek olarak, HER2 proteini içermeyen negatif kontrol numunesi dahil edilir (STD 8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68204/68204fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<ol><li>Subbiah, V., Kurzrock, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Debunking+the+delusion+that+precision+oncology+is+an+illusion%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Debunking the delusion that precision oncology is an illusion.</a> Oncologist. 22 (8), 881-882 (2017).</li>
<li>Swain, S. M., Shastry, M., Hamilton, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+HER2positive+breast+cancer%3A+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting HER2positive breast cancer: advances and future directions.</a> Nat Rev Drug Discov. 22 (2), 101-126 (2023).</li>
<li>McLemore, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+testing+in+breast+cancers%3A+comparison+of+assays+and+interpretation+using+ASCO%2FCAP+2013+and+2018+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">HER2 testing in breast cancers: comparison of assays and interpretation using ASCO/CAP 2013 and 2018 guidelines.</a> Breast Cancer Res Treat. 187 (1), 95-104 (2021).</li>
<li>Iqbal, N., Iqbal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+epidermal+growth+factor+receptor+2+%28HER2%29+in+cancers%3A+overexpression+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Int%22%5BJournal%5D)">Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) in cancers: overexpression and therapeutic implications.</a> Mol Biol Int. 2014, 852748(2014).</li>
<li>Tsé, C., Gauchez, A. S., Jacot, W., Lamy, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+shedding+and+serum+HER2+extracellular+domain%3A+biology+and+clinical+utility+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Rev%22%5BJournal%5D)">HER2 shedding and serum HER2 extracellular domain: biology and clinical utility in breast cancer.</a> Cancer Treat Rev. 38 (2), 133-142 (2012).</li>
<li>Reix, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+study+to+assess+the+clinical+utility+of+serum+HER2+extracellular+domain+in+breast+cancer+with+HER2+overexpression%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">A prospective study to assess the clinical utility of serum HER2 extracellular domain in breast cancer with HER2 overexpression.</a> Breast Cancer Res Treat. 160 (2), 249-259 (2016).</li>
<li>Di Gioia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+HER2+supports+HER2testing+in+tissue+at+the+time+of+primary+diagnosis+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Serum HER2 supports HER2testing in tissue at the time of primary diagnosis of breast cancer.</a> Clin Chim Acta. 430, 86-91 (2014).</li>
<li>Carney, W. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+circulating+levels+of+the+HER2%2Fneu+oncoprotein+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Breast+Cancer%22%5BJournal%5D)">Monitoring the circulating levels of the HER2/neu oncoprotein in breast cancer.</a> Clin Breast Cancer. 5 (2), 105-116 (2004).</li>
<li>Azar, F. P., Fatemeh, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+serum+human+epidermal+growth+factor+receptor+2+%28HER2%29%2Fneu+testing+in+breast+cancer+patients+to+maximize+detection+of+HER2%2Fneupositive+patients+and+susceptibility+to+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Value of serum human epidermal growth factor receptor 2 (HER2)/neu testing in breast cancer patients to maximize detection of HER2/neupositive patients and susceptibility to trastuzumab.</a> Clin Biochem. 44 (13), (2011).</li>
<li>Pandey, I., Misra, V., Pandey, A., Verma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+HER2%2Fneu+in+gastric+adenocarcinoma+and+its+correlation+with+serum+HER2%2Fneu+level+and+Ecadherin+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Pathol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Expression of HER2/neu in gastric adenocarcinoma and its correlation with serum HER2/neu level and Ecadherin expression.</a> Indian J Pathol Microbiol. 65 (1), 35-41 (2022).</li>
<li>Agnon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELISA+assay+employing+epitopespecific+monoclonal+antibodies+to+quantify+circulating+HER2+with+potential+application+in+monitoring+cancer+patients+undergoing+therapy+with+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">ELISA assay employing epitopespecific monoclonal antibodies to quantify circulating HER2 with potential application in monitoring cancer patients undergoing therapy with trastuzumab.</a> Sci Rep. 10 (1), 3016(2020).</li>
<li>Antos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unique+monoclonal+antibodies+and+immunochemical+assay+for+comprehensive+determination+of+the+cellbound+and+soluble+HER2+in+different+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">The unique monoclonal antibodies and immunochemical assay for comprehensive determination of the cellbound and soluble HER2 in different biological samples.</a> Sci Rep. 14 (1), 3978(2024).</li>
<li>Andreasson, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+immunoassay+method+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">A practical guide to immunoassay method validation.</a> Front Neurol. 6, 179(2015).</li>
<li>Perrier, A., Gligorov, J., Lefèvre, G., Boissan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+domain+of+HER2+in+serum+as+a+biomarker+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">The extracellular domain of HER2 in serum as a biomarker of breast cancer.</a> Lab Invest. 98 (6), 696-707 (2018).</li>
<li>Van Gorkom, T., van Arkel, G. H. J., Voet, W., Thijsen, S. F. T., Kremer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+the+edge+effect+in+a+commercial+enzymelinked+immunosorbent+assay+for+the+diagnosis+of+Lyme+neuroborreliosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Consequences of the edge effect in a commercial enzymelinked immunosorbent assay for the diagnosis of Lyme neuroborreliosis.</a> J Clin Microbiol. 59 (8), e0328020(2021).</li>
<li>Sadok, I., Rachwał, K., Staniszewska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+quantification+of+selected+kynurenines+analyzed+by+liquid+chromatographymass+spectrometry+in+medium+collected+from+cancer+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Simultaneous quantification of selected kynurenines analyzed by liquid chromatographymass spectrometry in medium collected from cancer cell cultures.</a> J Vis Exp. 159, e61031(2020).</li>
<li>Giordani, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+changing+patterns+in+HER2+addiction+by+liquid+biopsy+in+advanced+breast+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring changing patterns in HER2 addiction by liquid biopsy in advanced breast cancer patients.</a> J Exp Clin Cancer Res. 43 (1), 182(2024).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+monitoring+HER2+expression+in+breast+cancer+during+trastuzumab+therapy+with+a+peptide+probe+99mTcHYNICH10F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Nucl+Med+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Imaging and monitoring HER2 expression in breast cancer during trastuzumab therapy with a peptide probe 99mTcHYNICH10F.</a> Eur J Nucl Med Mol Imaging. 47 (11), 2613-2623 (2020).</li>
<li>NinioMany, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR125a+induces+HER2+expression+and+sensitivity+to+trastuzumab+in+triplenegative+breast+cancer+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">miR125a induces HER2 expression and sensitivity to trastuzumab in triplenegative breast cancer lines.</a> Front Oncol. 10, 191(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Biotin etiketleme kiti-NH2</td><td>Abnova</td><td>KA0003</td><td></td></tr><tr><td>Kurutma Sınıfı, süt tozu, düşük yağ Roth</td><td></td><td>T145.1</td><td></td></tr><tr><td>TC10 / TC20 hücre Sayacı için Hücre Sayma Slaytları, Çift Odacıklı</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Plakaları</td><td>Biologix</td><td>07-6012</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Sıyırıcılar</td><td>Biologix</td><td>70-1250</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Ohaus</td><td>30130868</td><td></td></tr><tr><td>Sınıf II Biyolojik Güvenlik Kabini - Telstar Bio II Advance 6</td><td>Telstar</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf Düz Tabanlı 96 Kuyulu Plakalar</td><td>Thermo Fisher</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Kültürü Güvenli CO2 İnkübatörleri - Touch 190S</td><td>Leec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM - yüksek glikoz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0822</td><td></td></tr><tr><td>ELISA plaka okuyucu</td><td>BioTek</td><td>800TSUVI</td><td></td></tr><tr><td>FBS Standardı, fetal sığır serumu</td><td>PAN Biotech</td><td>P30-19375</td><td></td></tr><tr><td>Cebri sirkülasyonlu laboratuvar kurutucusu</td><td>BINDER</td><td>9090-0018</td><td></td></tr><tr><td>HRP-Avidin</td><td>Thermo Fisher</td><td>43-4423</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Her2 / ErbB2 Proteini, Fc Etiketi, birinci sınıf</td><td>AcroBIOSYSTEMS</td><td>HER2-H5253</td><td></td></tr><tr><td>Immunowash Mikroplaka Yıkayıcı</td><td>Bio-Rad</td><td>170-7009</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (klon 70.21.73.67)</td><td>SDS Optik</td><td>BIO-ABH-2</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (klon 70.27.58)</td><td>SDS Optik</td><td>BIO-ABH-1</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 Hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>POCH</td><td>810530115</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>POCH</td><td>BA0981118</td><td></td></tr><tr><td>Proteaz İnhibitörü Kokteyl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Tampon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Fuarı PBS</td><td>Roth</td><td>1111.2</td><td></td></tr><tr><td>SK-BR-3 [SKBR3] Hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td></td></tr><tr><td>SK-OV-3 [SKOV-3; SKOV3] Hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td></td></tr><tr><td>Durdurma çözümü 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210900</td><td></td></tr><tr><td>TC20 Otomatik Hücre Sayacı</td><td>Bio-rad</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>TMB substratı 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210902</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Ohaus</td><td>30392117</td><td></td></tr><tr><td>Dalga hareket çalkalayıcı</td><td>Ohaus</td><td>30391968</td><td></td></tr></tbody></table>

hücrelerden salınan ve hücrelere bağlanan İnsan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2'nin kapsamlı belirlenmesi için doğrulanmış İmmünokimyasal test

Validated Immunochemical Assay for Comprehensive Determination of the Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Released from and Bound to Cells

Sandviç ELISA doğrulaması Yeni geliştirilen tahlil, bir doğrulama prosedürü gerektirir. Önemli doğrulama parametreleri arasında doğrusallık, kesinlik ve algılama limitleri, yani alt tespit limiti (LLOD) ve üst tespit limiti bulunur. Önceki makalede, kapsamlı bir yöntem doğrulaması gerçekleştirdik. ELISA doğrusallığı, PBS ve serum gibi HER2'nin miktar tayini için önemli olan diğer matrislerde seyreltilmiş antijenin düşük (2, 5, 10 ng/mL), orta-yüksek (30 ng/mL) ve önemli ölçüde artmış (50 ng/mL) konsan...

Hücrelerden Salınan ve Hücrelere Bağlanan İnsan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2'nin Kapsamlı Belirlenmesi için Doğrulanmış İmmünokimyasal Test

Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is a well-established cancer marker. It became a very successful diagnostic and therapeutic target, ...

validated-immunochemical-assay-for-comprehensive-determination-human

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Krom salınım tahlili, sitotoksik T hücresi aktivitesini tespit etmek için ortak bir tahlil, bazı sınırlamalar vardır. Bu madde, antijen spesifik CD8 T hücreleri ve insan göğüs kanseri tümör hattı ile, SKBR3 kullanarak, bir empedans dayalı bir yaklaşım hücre öldürme saptama yeteneğine için incelenmiştir.

XCELLigence Sistemi Cr51 Yayın Assay Karşılaştırılması tarafından İnsan Her2neu Özgül CD8 T hücrelerinin Optimal Sitotoksik Aktivite Belirlenmesi

Son yıllarda, canlı hücre bazlı deneyler, yüzey ve şekilsel antijenlere karşı antikorlar tespit etmek için başarılı bir şekilde kullanılmıştır. Burada, hastaların büyük kuşaklarının analiz sağlayarak sitometri yüksek verimli akışını kullanarak bir yöntem açıklanmaktadır. Yeni antikorların tespiti immün aracılı bozuklukların tanı ve tedavi artıracaktır.

İnsan Serum içinde N-metil-D-aspartat reseptör ya da dopamin-2 reseptör antikorları algılamak üzere yüksek verimli Flow Cytometry hücre bazlı bir deneyde

Bu protokol, COS7 fibroblast hücreleri üzerindeki epidermal büyüme faktörü reseptörünün (EGFR) etiketlenmesini ve ardından hidratlı durumdaki tüm hücrelerin korelasyon ışık ve elektron mikroskobunu açıklar. Etiket, floresan kuantum noktaları içeriyordu. Protokol, EGFR'nin stokiyometrisini tek molekül seviyesinde incelemek için kullanılabilir.

Korelatif Mikroskopisi kullanılarak sağlam hücrelerde Epidermal Büyüme Faktörü Alıcısının stokiyometrisinden incelenmesi

Biz, tespit miktarının ve ligandların vasküler endotelyal büyüme faktörü ailesinin üyelerinin aktivitesini izlemek için basit bir hücre bazlı biyolojik tayini açıklamaktadır. Deney ligand ile reseptör ve çapraz bağlama bir yarı-nicel veya kantitatif bir değerlendirmesini sağlamak için bir faktör bağımlı hücre hattı içinde ilave kimerik reseptörler kullanır.

Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörlerinin Değerlendirilmesi için Basit Biyoassay

Kapiller isoelectric odaklanarak proteinler ve onların izoformlarının son derece küçük biyolojik örneklerinden detaylı karakterizasyonu etkinleştirme bir antikor tabanlı, vericiyi, yüksek üretilen iş, tekniğidir. Aşağıda bir protokol olarak algılanmasını ve miktar belirli proteinlerin ve onların izoformlarının otomatik ve robotized bir şekilde açıklanmıştır.

Proteinler ve onların izoformlarının kapiller Isoelectric odaklanarak yöntemi tarafından son derece hassas ve nicel tespiti

Hedef reseptörleri hücre yüzeyinde bağlanan antikorlar uyum ve küme değişikliklerini görüşmek. Bu dinamik değişiklikler ilaç geliştirme hedef hücrelerdeki karakterize konusunda da etkileri vardır. Bu iletişim kuralı confocal mikroskobu ve görüntü korelasyon spektroskopisi ile hücre yüzeyinde kümeleme reseptör kapsamını ölçmek için ImageJ/FIJI kullanır.

Confocal mikroskobu ortaya hücre yüzey reseptör toplama görüntü korelasyon spektroskopisi ile

Burada nötralize antikorlar veya enzim replasman terapiler beyin omurilik sıvısı (BOS) veya insan serumu gibi insan bir matris hücresel alımını müdahale diğer faktörler tespit etmek için bir hücre tabanlı akış sitometresi Yöntem mevcut.

Enzim replasman terapileri ile hücre tabanlı tahlil hücresel alımını nötralize antikorların tespiti

Sıvı ve katı tümör hücrelerini hedefleyen kimerik antijen reseptör T hücrelerinin gücünü değerlendirmek için kantitatif gerçek zamanlı in vitro sitoz ispat sistemini tanımlıyoruz. Bu protokol diğer bağışıklık etki hücreleri değerlendirmek için uzatılabilir, yanı sıra kombinasyon tedavileri.

Katı ve Hematolojik Kanser Hücrelerini Hedefleyen İmhimik Antijen Reseptör T Hücreleri Için Gerçek Zamanlı Potens Tsay

Antikanser aptamer gelişiminde gerekli bir adım, hedefe bağlanmasını test etmektir. Bu bağlanmayı incelemek için akış sitometrik tabanlı bir tahlil gösteriyoruz ve negatif bir kontrol aptamer ve bu belirli protein için pozitif veya negatif olan kanser hücrelerinin dahil edilmesinin önemini vurguluyoruz.

Bir Antikanser Aptamerinin Seçiciliğini ve Özgüllüğünü Değerlendirmek için Akış Sitometrisine Dayalı Hücre Yüzeyi Protein Bağlama Testi

Burada, bir ADCC biyo-tahlil kiti kullanarak antikora bağımlı, hücre aracılı sitotoksisite (ADCC) testi için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, ADCC mekanizmasını aydınlatmak ve kanser immünoterapisinde antikorların terapötik potansiyelini değerlendirmek için değerli bir araç sunmaktadır.

Antikora Bağımlı Hücre Aracılı Sitotoksisite Raportörü Biyotahlil Kullanılarak Kanser Hücrelerinde Antikora Bağımlı, Hücre Aracılı Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi

Öğrenin, yeni anti-HER2 monoklonal antikorları kullanan doğrulanmış sandwich ELISA yöntemiyle hücrelere bağlı ve salınan HER2 proteininin hassas ölçümünü. Bu test kanser tanısı ve tedavi takibinde güvenilir bir araç sunar.

Hücrelerden Salınan ve Hücrelere Bağlanan İnsan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2nin Kapsamlı Belirlenmesi için Doğrulanmış İmmünokimyasal Test (Video) | JoVE Journal

Hücrelerden Salınan ve Hücrelere Bağlanan İnsan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2'nin Kapsamlı Belirlenmesi için Doğrulanmış İmmünokimyasal Test

Daha fazla video keşfet