Tavşan Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi için İntraduktal Etanol Bazlı Ablatif İnfüzyonun X-ışını Görselleştirmesi

Meme kanseri, kansere bağlı ölümlerin ikinci önde gelen nedenidir. Ortalama riskli kadınlar için çok az proaktif müdahale olsa da, profilaktik mastektomi ve hormon tedavisi yüksek riskli kadınlar için mevcut seçeneklerdir. Bununla birlikte, bu önleyici seçeneklerin ciddi olumsuz yan etkileri nedeniyle, birçok yüksek riskli kadın bunları almamayı tercih etmektedir.

Bu nedenle, yüksek riskli bireyler için yeni bir önleme stratejisine ihtiyaç vardır. Mastektomiye lokal, daha az invaziv bir alternatif olarak meme kanserinin ortaya çıktığı hafıza epitel hücrelerini ablasyon için intraduktal bir uygulama tekniği geliştirdik. Önceki çalışmamız, agresif bir fare modelinde meme kanseri oluşumunu önlemek için %70 etanolün tek intraduktal infüzyonunun etkinliğini göstermiştir.

Bu prosedürü bir sıçan modeline ölçeklendirebildik ve infüzyonun başarısını mikro BT ile doğrulayabildik. Hem fare hem de sıçan modellerinde duktal ağacın doldurulmasını ve in vivo X-ışını görüntülemesini göstermiş olsak da, bu modellerde meme bezi başına sadece tek bir duktal ağaç vardır. Bu nedenle, bu prosedürde, çok kanallı ağaç sistemine sahip bir tavşan modelinde bu tekniğin ölçeklenebilirliğini ele alacağız.

Tavşanlar, bu ID ablatif prosedürünün insanlara translasyonel uygulaması için pratik ve ilgili bir ara büyük hayvan modeli sağlar. Kısaca, enjekte edilecek meme başlarını çevreleyen kürkü çıkararak hayvanı prosedüre hazırlayarak başladık, ardından intraduktal infüzyonlar yapılır ve her infüzyonun ardından duktal ağacın doldurulduğundan emin olmak için bir X-ışını floroskopi görüntüsü alınır. Son olarak, ablatif solüsyonun başarı oranını belirlemek için doku analizi yapılır.

İzofluran uygulamasından 20 dakika önce kas içine anestezi enjekte ederek tavşanı sakinleştirin. Ketamin ve ksilazin kullandık. Klinik sedasyon belirtileri gösterildikten sonra bir analjezi enjekte edin.

Ketoprofen kullandık. Tavşanı, devridaim yapan ılık su battaniyesi ile kaplı görüntüleme masasına yerleştirin ve daha sonra bir izofluran makinesine takılan uygun boyuttaki entübasyon tüpünü kullanarak tavşanı entübe edin. Tüpün boyutu tavşanın ağırlığına bağlıdır, ancak her zaman doğru değildir, bu nedenle elinizde birden fazla boyut bulundurmak iyi bir uygulamadır.

Entübasyon tüpü düzgün bir şekilde kapatılamazsa onun yerine maske kullanılabilir. Acil ilaç uygulamasına izin vermek için tavşanın kulağına 25 gauge venöz kateter yerleştirin. Tavşan tamamen uyuşturulduktan sonra, ikinci ve üçüncü meme başı çiftlerinin etrafındaki kaudal karnı tıraş edin.

Kablosuz bir elektrikli süpürge, infüzyon bölgesinin temiz tutulmasına yardımcı olabilir. Tüylerin çoğu alındıktan sonra, meme başı bölgesinin çevresine tüy dökücü krem sürün ve uygulamadan 15 saniye sonra ıslatılmış gazlı bezle çıkarın. Meme ucu bölgesine iyi bir görüş ve erişim sağlayın ve gerekirse tekrarlayın.

Kanülasyondan önce enjeksiyon bölgesini temizlemek için alanı klorheksidin gazlı bezle silin. Tavşanlar, çıkarılmadığı takdirde meme ucunun başarılı bir şekilde kanülasyonunu önleyebilecek duktal açıklıktan çıkıntı yapan bir tıkaç olabilir. İnce uçlu forseps kullanarak duktal açıklıkların üzerindeki deri tabakasını nazikçe çıkarın.

Eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde 28 gauge bir iğneyi emziğin yan tarafına yerleştirin ve yavaşça 0,2 mililitre steril %0,9 salin infüze edin. Duktal açıklıklardan bir miktar salin dışarı çıkabilir. Bu, kanülasyon sırasında duktal açıklıkların daha iyi görüntülenmesini sağlayacaktır.

Aseptik teknik kullanarak 12 inçlik uzatma hattını kanülasyon için hazırlayın. Tezgah yüzeyini etanol ile temizleyin ve dikkatlice steril eldivenler giyin. Uzatma hattının her iki ucundaki koruyucu kapakları çıkarın.

Bir mililitrelik Luer-Lok şırıngası kullanarak bir mililitre hazırlanmış ablatif çözeltiyi aspire edin. Şırıngayı dikkatlice dişi kanatlı uca takın, ardından karşı uca 27 gauge küt uçlu bir iğneyi dikkatlice takın. İğneden sabit bir çözelti akışı çıkana kadar çözeltiyi yavaşça çizgi boyunca itin.

Hava kabarcıklarının oluşmasına neden olacağından şırıngayı devirmemeye dikkat edin. Emziği başparmağınız ve işaret parmağınızla nazikçe tutun ve intraduktal infüzyon için hafifçe kaldırın. 27 gauge künt uçlu bir iğne kullanarak ilgilenilen kanalı dikkatlice kanüle edin.

10X büyüteçli bir lamba, duktal açıklıkların görselleştirilmesine yardımcı olabilir. Kanal içinde hızla hareket eden sıvıların neden olabileceği potansiyel hasarı en aza indirmek için solüsyonu yavaşça infüze edin. Tipik olarak, bir araştırmacı iğneyi kanüle eder ve tutarken, ikinci bir araştırmacı şırıngayı tutar ve pistonu istenen hızda iter.

Omnipaque, x-ışını floroskopi görüntülemesi altında duktal ağacı görmemizi sağlayan FDA onaylı iyot bazlı bir kontrast maddedir. Bu, bir duktal ağacın ablatif solüsyonla doldurulduğunu gerçek zamanlı olarak görmemizi ve solüsyon duktal ağaç uçlarına ulaştığında teslimatı durdurmamızı sağlar. Floroskopi görüntüleme ayrıca infüzyondan hemen sonra tüm duktal ağacın başarılı bir şekilde doldurulduğunun hızlı ve kolay bir şekilde doğrulanmasını sağlar.

Üçüncü kanala infüzyonun bu canlı oturumunda, Kanal 1 ve 2'nin zaten infüze edildiğini görebilirsiniz. Bu canlı görüntüleme, duktal ağacın dolumunu en üst düzeye çıkarmak için rehberlik eder. İşlem tamamlandıktan sonra, kas içine bir tersine çevirme ajanı uygulayarak tavşanı kurtarmaya başlayın.

Bizim durumumuzda atipamezol kullandık. İyileşme belirtileri arasında çiğneme ve burun seğirmesi bulunur. Tavşanın kendi kendine iyileşmesine izin vermeden önce kendini dik tutabildiğinden emin olun.

Enflamasyonu azaltmaya ve yara izini en aza indirmeye yardımcı olmak için ketoprofen'i işlemden sonra en az üç gün boyunca deri altından uygulayın. Hematoksilen ve eozin boyası, veya daha yaygın olarak H&E boyası olarak bilinen, histolojide en çok kullanılan lekedir. Bununla, meme bezi içindeki dört duktal açıklığı ve duktal yolları görebiliriz.

Deneylerimizde, %10 ila %70 etanol konsantrasyonuna sahip bir dizi çözeltiyi test ettik. Bu konsantrasyon aralığına dayanarak, %10'dan daha az etanol içeren ablatif bir çözeltinin, daha yüksek etanol yüzdesine kıyasla duktal ağacı hala verimli bir şekilde ablate edebildiğini görebiliriz. Bu sonuçlar, bu düşük %10'luk etanol ablatif solüsyona daha ileri çalışmalar için öncelik verilmesi gerektiğini göstermektedir.

Tavşan meme bezinin duktal ağaç sistemine görüntü kılavuzluğunda infüzyon için bir prosedür açıklıyoruz. Floroskopi gerçek zamanlı görüntüleme ile tüm meme açıklıklarına etanol bazlı ablatif solüsyon içeren x-ışını kontrast maddesinin kontrollü infüzyonunu gösteriyoruz ve histolojik analiz ile epitel hücre ablasyonu ve doku hasarı oranını doğruluyoruz. Bu prosedür, profilaktik mastektomiye alternatif olarak meme kanserinin birincil önlenmesi için daha az invaziv bir yöntemin ölçeklenebilirliğine yönelik bir adım sağlar.

Bu protokol, duktal ağaçların görselleştirilmesi için mevcut klinik uygulama ile uyumlu olan Omnipaque içeren etanol bazlı ablatif solüsyonun floroskopi kılavuzluğunda infüzyonu için aletler, reaktifler ve malzemeler kullanır. Böylece, açıklanan prosedür, ilk insan içi klinik deneylerde kolayca uygulanabilir ve değerlendirilebilir.