Erişkin Xenopus'ta Erişilebilir Dokuların Kapsamlı Örneklemesi için Etkili Teknikler

Bu, kapsamlı bir Xenopus örnekleme protokolünün birinci parçasıdır. Örnek alınan dokular kalp ventrikülü, arteriyel gövde, sol karaciğer lobu, safra kesesi, akciğer, pankreas, dalak, gırtlak, yemek borusu, mide, bağırsaklar, testisler, yağ cisimleri, yumurta kanalı, eşleştirilmiş böbrekler, siyatik pleksus, cilt, timus ve tüm gözdür.

Bu çalışma, Xenopus kalp ventrikülü, arteriyel gövde, sol karaciğer lobu, safra kesesi, akciğer, pankreas, dalak, gırtlak, yemek borusu, mide, bağırsaklar, testisler, yağ gövdesi, yumurta kanalı, eşleştirilmiş böbrekler, siyatik pleksus, cilt, timus ve tüm gözü bir saatten kısa sürede hızlı bir şekilde toplamak için tekrarlanabilir bir yöntem oluşturmayı amaçlamaktadır. Deneysel bir zorluk, doku tazeliğini optimize etmektir. Bu nedenle protokol bir saatin altında tamamlanacak şekilde tasarlanmıştır. Doku tazeliğine öncelik vererek, bu dokular proteomik gibi yüksek kaliteli biyokimyasal analizleri tamamlamak için kullanılabilir ve kullanılan hayvan sayısını en aza indirir. Gelecekte, beyin, kas ve kemik gibi erişilmesi daha zor olan dokular hakkında bir protokol yazacağız.

[Öğretim Görevlisi] Başlamak için, ötenazi yapılmış kurbağayı diseksiyon prosedürü için konumlandırın ve uzuvları sabitleyin. Diseksiyon makası kullanarak, cildi orta hat boyunca kesin ve ardından iki cilt flebi oluşturmak için yanal olarak kesin. Forseps kullanarak, linea alba'yı kavrayın ve sölomik boşluktan uzaklaştırın. Kas sistemini dikkatlice başa doğru kesin ve boşluk duvarının iki kanadını oluşturun. Kalbe daha iyi erişim sağlamak için korakoid kemikleri küçültün. Perikardı gerin, delin ve üç kalp odacığını ortaya çıkarmak için geri soyun. Şimdi kahinleri ventrikül ve arteriyel gövde ile buluştukları kavşakta kesin. Ventrikülün tepesini kavramak için forseps kullanın ve bir kenar boşluğu bırakarak arter gövdesi ile birleştiği yerin hemen altında kesin. Arteriyel gövde çatallanmasını gözlemleyerek, gövdeyi gergin bir şekilde çekin ve aort gövdelerini kemerlere ayrıldıkları noktalardan hemen sonra kesin. Daha sonra, sol karaciğer lobunun dudağını kavrayın ve hepatik ve kistik kanalları ortaya çıkarmak için hafifçe kaldırın. Bu ataşmanların altındaki sol lobun alt üçte ikisini örnekleyin. Safra kesesini belirledikten sonra, sağ karaciğer lobundan kavrayıp çekin ve bağlantısını kesin. Ardından akciğerin tepesini kavrayın ve gergin bir şekilde çekin. Akciğeri bronşlara geçtiği sınırda kesin. Bronşu gırtlaktan çıkarın. Yumurtalıkların çıkarılması için, böbreklere ventral bağlanma bölgelerini görselleştirmek için yumurtalık loblarını kendi taraflarına kaydırın. Makas kullanarak böbreklere yakın yumurtalıkları zarar vermeden çıkarın. Daha sonra, medyan lob olarak da bilinen karaciğerin ön lobunu inceleyin ve mezsentary yoluyla duodenum ile bağlantısını gözlemleyin. Mezsenter ve hepatoduodenal ligamenti kesmek için iridektomi makası kullanın. Kalan etli kütle pankreas ve koledok kanalıdır. Pankreas ve safra kanalının bağlantısını ön karaciğer lobundan kesin ve bir kenar boşluğu bırakın. Dişli forseps ile mideyi ve doku forseps ile pankreasın bir ucunu kavrayın. Büyütme altında, pankreası mideden nazikçe uzaklaştırın. Daha sonra dalağı tanımlayın ve peritona olan ekini keserek örnekleyin. Gırtlağı alt ucundan kavrayın ve boşluktan kaldırmaya başlayın, karşılaşıldıklarında peritoneal ekleri kesin. Gırtlak yükselirken, yemek borusu dokusunu gırtlaktan dikkatlice ayırmak ve kesmek için kavisli iridektomi makası kullanın. Ardından gırtlağı aşağı doğru çekin ve kalan görünür ekleri keserken ağız boşluğundan kesin. Midenin yemek borusundan ayıran eğriliğini ve bağırsağın başlangıcını işaret eden pilor kısıtlamasını gözlemleyin. Yemek borusundan ayırmak için mide eğriliğinin hemen önündeki sindirim kanalını kesin. Ağzı açın ve östaki borularının çatısındaki ortak açıklığı bulun. Ağzı açık tutarken, yapışmasını gözlemlemek için yemek borusunu çekin. Daha sonra yemek borusunu östaki açıklığının hemen altındaki bukkal boşluktan kesin. Ardından yemek borusunu çıkarın. Şimdi mideyi kavrayın ve duodenuma bağlandığı pilor kısıtlamasında kesin. Kolonu gergin bir şekilde çekin ve kloaka mümkün olduğunca yakın kesin. Bağırsakları çıkarın, yol boyunca görünür peritoneal ekleri kesin. Kurbağa erkekse, testisleri tanımlayın ve iridektomi makası kullanarak bir tanesini çıkarın, böylece böbreğin sağlam kalmasını sağlayın. Yağ cisimlerini ayırın ve böbreğin yakınındaki periton ekini ortaya çıkarmak için kendi taraflarına yerleştirin. Şişman bir gövdenin tabanını kavrayın ve bir kenar boşluğu bırakarak peritondan kesin. İdrar kesesini çıkarmak için, kloaka mümkün olduğunca yakın kesin. Kurbağa dişiyse veya görünür bir körelmiş yumurta kanalına sahipse, yumurta kanalının alt ucunu kavrayın ve kloakadan uzaklaştırın. Yumurta kanalını kloaka yakınında kesin ve ardından peritoneal ekleri keserek sölomik boşluktan dışarı çekin. Forseps kullanarak, retroperitoneal eşleştirilmiş böbrekleri kavrayın ve peritonu tabanlarından kesin. Tüm peritoneal ekleri keserek böbrekleri boşluktan çıkarın. Daha sonra, siyatik pleksustaki sinir demetini forseps ile kavrayın ve sinirleri sölomik boşluktan çıktıkları yerde kesin. Sinir demetini kaldırın ve vertebral kolonla olan bağlantısında tekrar kesin. Şimdi pimleri çıkarın ve hayvanı ventral tarafına çevirin. Uzuvları yeniden sabitleyin ve örnekleme için ayağını sabitleyerek bir arka uzuv seçin. Gastroknemius ve tibio fibula bölgesinin üzerindeki badem şeklindeki bir deri bölümünü çıkarın. Sırt derisini kavrayın ve hayvanın orta kısmı etrafında yanal bir kesi yapın. Sürekli dairesel bir kesim oluşturmak için. Pimleri çıkarın, bacakları bir elinizle sabitleyin ve ön sırt derisini kavramak için sıçan dişli forseps kullanın. Sırt derisini başın ve kolların üzerine kuvvetlice çekerek hayvanın derisini yüzün. Timusu örneklemek için, çene eklemini kaplayan yağ kütlesini tanımlayın ve pembe kas dokusu ile birleştiği kitlenin arka kenarını kesin. Varsa melanofor kümelerini ortaya çıkaran kemikten kitleyi kesmek için iridektomi makası kullanın. Ardından herhangi bir kas veya kıkırdağı ortadan kaldırmak için dokuyu kesin. Ardından, hayvanı yeniden sabitleyin ve bir göz seçin. Kavisli iridektomi makasını yörüngeye yerleştirin ve kas eklerini serbest bırakmak için gözün eğriliğini nazikçe kesin. Son olarak, makası yörüngenin daha derinlerine kaydırın ve gözün arkasındaki optik siniri kesin. Gözü yuvasından çıkarın ve kalan kasları kesin. Bu prosedürü izleyerek, tüm ana organlar ötenaziden sonraki bir saat içinde çıkarıldı, durulandı ve kesildi.