Name: Prostat Kanseri ile İlişkili Fibroblastların İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Keşfedin, prostat kanseri ile ilişkili fibroblastların izolasyonu, kültürü ve karakterizasyonu için 3D organoid yöntemini. Bu protokol, CAF-tümör hücresi etkileşimlerini inceleyerek yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>12 kuyucuklu plaka</td><td>Sarstedt</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyucuklu plaka</td><td>Sarstedt</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyucuklu plaka</td><td>Sarstedt</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyucuklu plaka</td><td>Sarstedt</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GAPDH Fare mAb'si (6C5)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CB1001 Serisi</td><td>Kaynak: Fare; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5228&nbsp;</td><td>Kaynak: Fare; Dünya Bankası için seyreltme: 1:3000</td></tr><tr><td>Caveolin</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>CST3267</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-VioBlue</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-119-980</td><td>Akış Sitometrisi Ab, Endotel hücre belirteci</td></tr><tr><td>CD326-PE (EpCAM)</td><td>Milteny Biotec</td><td>130113-826</td><td>Akış Sitometrisi Ab, Epitel hücre belirteci</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-110769</td><td>Akış Sitometrisi Ab, Pan lökosit belirteci</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-114-903</td><td>Akış Sitometrisi Ab, Fibroblast belirteci</td></tr><tr><td>Kolajen VI (COL6A1)</td><td>Abcam</td><td>ab182744</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>Konik tüp 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüp 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mL mikrotüpler</td><td>Sarstedt</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>Kültür tabağı 100 mm çapında&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Kültür tabağı 100 mm çapında&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Kültür tabağı 60 mm çapında&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td><td>Sigma Aldirch</td><td>D8418 Serisi</td><td>Biyolojik başlıkta kullanım</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modifiye Kartal' s Orta (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>4 &deg; C, Biyolojik başlıkta kullanın</td></tr><tr><td>FAP</td><td>Abcam</td><td>AB53066</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:500</td></tr><tr><td>FcR Engelleme Reaktifi, insan</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-059-901</td><td>FC Engelleyici</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>4 &deg; C, Biyolojik başlıkta kullanın</td></tr><tr><td>Filtrelenmiş uçlar 10 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>Filtrelenmiş uçlar 100 &mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>Filtrelenmiş uçlar 1000 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>Filtrelenmiş uçlar 20 &micro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>Filtrelenmiş uçlar 200 &mikro; L</td><td>Sarstedt</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S Plus 0,20 &micro; m&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>2Biol</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>D9F9D (13018)</td><td>Kaynak: Tavşan; Dünya Bankası için seyreltme: 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Abklonal teknoloji</td><td>A0286 Serisi</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>ResimJ</td><td>Ulusal Sağlık Enstitüsü</td><td>Sürüm 1.53C</td><td>Görüntü analizi için yazılım</td></tr><tr><td>incucyte imagelock 96 oyuklu plaka</td><td>Sartorik</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg; SX5 Serisi</td><td>Sartorik</td><td>SX5 Serisi</td><td>Canlı hücre analiz cihazı&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfeksiyon Reaktifi</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>11668019</td><td>katyon lipid aracılı transfeksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>MACS&reg; Doku Depolama Çözümü</td><td>Milteny Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu (600 nm absorbans)</td><td>Promega</td><td>GM3500 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotüpler 1.5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>NCAD</td><td>Abcam</td><td>AB18203</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>Nitro Mavi Tetrazolium&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>N5514</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>Addgene</td><td>1771</td><td>-20 &deg'de saklayın; C, Biyolojik başlıkta kullanın</td></tr><tr><td>pCL-Ampho</td><td>Novus Biyolojik&nbsp;</td><td>NBP2-29541 Serisi</td><td>-20 &deg'de saklayın; C, Biyolojik başlıkta kullanın</td></tr><tr><td>PDGFRB Hakkında</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-432 Serisi</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (PS, 10,000 &mu; g/mL)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>4 &deg; C, Biyolojik başlıkta kullanın</td></tr><tr><td>Faz kontrast mikroskobu&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>BX42 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin&nbsp; (PBS)</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td>NaCl, 137 mM; KCl, 2.7 mM; Na2HPO4, 10 mM;KH2PO4, 1.8 mM. RT'de Otoklav ve Mağaza</td></tr><tr><td>Poli-L-lizin çözeltisi</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8920</td><td>4 &deg; C, Biyolojik başlıkta kullanın</td></tr><tr><td>Puromisin dihidroklorür</td><td>Sigma Aldirch</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura Yarı Mikro Terazi</td><td>Sartorius</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet 10 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet 2 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet 25 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipet 5 mL&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>İSTAT3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>Kaynak: Fare; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>Kaynak: Tavşan; WB için seyreltme: 1:1000</td></tr><tr><td>stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>MZ125 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 10 mL</td><td>Pentafert</td><td>00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>TermoMikser</td><td>Eppendorph</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (%0,5), fenol kırmızısı içermez</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vim</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260 Serisi</td><td>Kaynak: Fare; Dünya Bankası için seyreltme: 1:2000</td></tr><tr><td>Vivaspin 20 santrifüj konsantratör&nbsp;</td><td>Sigma Aldirch</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10,000 Da&nbsp;</td></tr><tr><td>Wagner makası</td><td>2Biol</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

prostat kanseri ile İlişkili fibroblastların İzolasyonu, kültürü ve karakterizasyonu

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

Bu protokol ile 7 yüksek dereceli PCa hastasından alınan CAF ve NF çiftleri başarılı bir şekilde izole edildi. Hastaların ameliyat yaşı ve Gleason skorları Tablo 3'te özetlenmiştir. Türetilmiş fibroblast popülasyonlarının saflığını değerlendirmek için, pasaj iki birincil CAF ve NF ayrıldı ve apoptozu değerlendirmek için belirtilen floresan antikorlarla veya propidyum iyodür ile boyandı. Müteakip FACS analizinden elde edilen temsili sonuçlar, geçit stratejisini ve her bir...

Prostat Kanseri ile İlişkili Fibroblastların İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Kanser İlişkili Fibroblastlar (cafs) proliferasyon, anjiyogenez ve inflamasyon teşvik eden sinyal yoluyla tümör gelişimini, büyüme ve ilerlemesini hızlandırabilir. Burada bir yüzey işaretleyici olarak PDGFRα kullanarak hücre sıralama ile taze fare ve insan dokularında normal fibroblastlar ve cafs saf popülasyonlarının izole etmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Floresans Aktif Hücre Ayırma (FACS) Taze Dokular Normal ve Kanser ilişkili Fibroblastlar İzolasyonu

Doğrudan insan dokularından kanser kök hücreler (rulmanları) izolasyonu biyolojik karakterizasyonu için bir koşuldur. Ayrıca zor sorun giderme adımları konusunda ipuçları sağlarken Bu makale, insan dokularından prostat CSCS izolasyonu için bir yöntem anlatılmaktadır.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

Burada, kanser hücresi davranışının çok hücreli etkileşimlerini ve hücre dışı matrise bağlı modülasyonunu araştırmak için yararlı olan üç boyutlu ko-kültür için bir protokol sunuyoruz. Bu deneysel modelde, kanser hücreleri, insan kanseriyle ilişkili fibroblastlarla gömülü kollajen jelleri üzerinde kültürlenir.

Tümör-stromal Etkileşim için üç boyutlu Co-kültür Modeli

Fibroblast davranışı, bir klinik antite spektrumunun temelini oluşturur, ancak büyük ölçüde doğal heterojenlikleri nedeniyle zayıf karakterize edilirler. Geleneksel fibroblast araştırmaları, in vivo fibroblast davranışını maskeleyen in vitro manipülasyona dayanır. Hücre kültürü gerektirmeyen fare derisi fibroblastlarının izolasyonu için FACS tabanlı bir protokol tanımladık.

FACS ile Murin Dermal fibroblast İzolasyonu

Burada, primer prostat epitel hücrelerinin üç boyutlu kültürlenmesini ve ardından luminal farklılaşmasını destekleyen hızlı bir in vitro sistemin kurulması için bir yöntem sunuyoruz.

Primer Prostat Hücre Farklılaşma için hızlı Filtre Ekle tabanlı 3D Kültür Sistemi

Bu yazıda insan derisinden papiller ve retiküler fibroblastların yalıtımına yönelik FACS tabanlı bir protokol açıklanmaktadır. Eksplant kültürler aracılığıyla yaygın olarak kullanılan izolasyon protokolüyle kaçınılmaz olan in vitro kültürünü bozur. Yayılımlı fibroblast alt setleri işlevsel olarak farklıdır ve dermis içinde diferansiyel gen ifadesi ve lokalizasyonu görüntüler.

Floresan-aktif hücre sıralama ile ınsan derisinden papiller ve Reiküler fibroblastların izolasyonu

Birincil erişkin fibroblastları, yeni başlayanlar tarafından (örn. öğrenciler) kolay, hızlı ve güvenilir bir şekilde ayırmak için bir protokol sunuyoruz. Prosedür primer fibroblastlar elde etmek için enzimatik doku sindirim ve ultrasonik dalgalar ile mekanik ajitasyon birleştirir. Protokol, belirli deneysel gereksinimlere (örn. insan dokusu) kolayca adapte edilebilir.

Ultrasonik-Augmented primer yetişkin fibroblast yalıtım

İnsan primer prostat epitel hücreleri kullanarak, kök benzeri hücrelerin küresel tabanlı etiket tutma testi ile fonksiyonel karakterizasyonu için yeni bir biyomarker-free yöntemi ni rapor ediyoruz. BrdU, CFSE veya Far Red 2D hücre etiketlemesi için adım adım bir protokol tanımlanır; üç boyutlu küresel oluşum; immünositokimya ile etiket tutucu kök benzeri hücre tanımlama; ve FACS tarafından izolasyon.

3 Boyutlu Spheroid Kültürlerden Kök Benzeri Hücrelerin İzolasyon

Fibroblastların saf bir popülasyon elde yara onarımı ve fibrozis rollerini incelemek için çok önemlidir. Burada açıklanan yaralanmamış ve yaralı fare kalplerinden fibroblastlar ve miyofibroblastlar izole etmek için ayrıntılı bir yöntem immünofloresan, RTPCR, floresan destekli hücre sıralama ve saflık ve işlevsellik karakterizasyonu takip kollajen jel kontraksiyonu.

Erişkin Kardiyak Fibroblastlar ve Miyofibroblastların İzolasyon ve Karakterizasyonu

Bu makale, üçlü negatif meme kanserinin singeneik bir murine modelinden primer kanser ilişkili fibroblastların izolasyonu ve kültürü ve tümör mikroçevrimini hedeflemek için tasarlanmış yeni nanopartiküllerin preklinik çalışması için uygulanması için bir protokol sağlamayı amaçlamaktadır.

Hedeflenen Nanopartiküllerin Çalışması için Meme Kanserinin Singeneik Murine Modelinden Primer Kanserle İlişkili Fibroblastların İzolasyonu

Çok hücreli 3D tümör sferoidleri, akciğer adenokarsinom hücreleri, fibroblastlar ve monositler ile hazırlandı ve bunu kanserle ilişkili fibroblastların (CAF'lar) bu sferoidlerden izole edilmesi izledi. İzole CAF'lar, mitokondriyal transmembran potansiyelini, reaktif oksijen türlerini ve enzimatik aktiviteleri inceleyerek mitokondriyal sağlığı değerlendirmek için normal fibroblastlarla karşılaştırıldı.

3D Çok Hücreli Akciğer Tümörü Sferoidlerinden İzole Edilen Kanserle İlişkili Fibroblastlarda Mitokondriyal Sağlığın Değerlendirilmesi

Keşfedin, prostat kanseri ile ilişkili fibroblastların izolasyonu, kültürü ve karakterizasyonu için 3D organoid yöntemini. Bu protokol, CAF-tümör hücresi etkileşimlerini inceleyerek yeni tedavi stratejileri geliştirmeye yardımcı olur.

Prostat Kanseri ile İlişkili Fibroblastların İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet