Name: Yüksek Verimli İskele Tabanlı Kültür Platformu Olarak SPOTun Tekrarlanabilir Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Keşfedin SPOT platformunun yüksek verimli iskele tabanlı kültür üretimini. Otomatik sıvı işleyicilerle entegre edilen bu yöntem, ilaç tarama çalışmalarında tekrarlanabilirliği artırır ve hastadan türetilmiş organoid kültürlerde gelişmiş hastalık modellemesi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Antoni, D., Burckel, H., Josset, E., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Cell+Culture%3A+A+Breakthrough+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Cell Culture: A Breakthrough in vivo.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 5517-5527 (2015).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (10), 839-845 (2007).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Done, A. J., Birkeland, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+as+a+tool+in+drug+discovery+and+patient-specific+therapy+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CR+Med%22%5BJournal%5D)">Organoids as a tool in drug discovery and patient-specific therapy for head and neck cancer.</a> CR Med. 4 (6), 101087(2023).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Schuster, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+microfluidic+platform+for+dynamic+and+combinatorial+drug+screening+of+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Automated microfluidic platform for dynamic and combinatorial drug screening of tumor organoids.</a> Nat Commun. 11 (1), 5271(2020).</li>
<li>Bozal, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+automated+3D+high+content+cell+screening+platform+for+organoid+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Disc%22%5BJournal%5D)">Development of an automated 3D high content cell screening platform for organoid phenotyping.</a> SLAS Disc. 29 (7), 100182(2024).</li>
<li>Seiler, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+automated+microfluidic+cell+culture+platform+reduces+glycolytic+stress+in+cerebral+cortex+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Modular automated microfluidic cell culture platform reduces glycolytic stress in cerebral cortex organoids.</a> Sci Rep. 12 (1), 20173(2022).</li>
<li>Costa, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+tumor+spheroids%3A+an+overview+on+the+tools+and+techniques+used+for+their+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis.</a> Biotechnol Adv. 34 (8), 1427-1441 (2016).</li>
<li>Pinho, D., Santos, D., Vila, A., Carvalho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+Colorectal+Cancer+Organoids+in+Microfluidic-Based+System%5BTitle%5D)+AND+%22Micromachines%22%5BJournal%5D)">Establishment of Colorectal Cancer Organoids in Microfluidic-Based System.</a> Micromachines. 12 (5), 497(2021).</li>
<li>Töpfer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+colon+organoids%3A+From+3D+bioprinting+to+cryopreserved+multi-well+screening+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Bovine colon organoids: From 3D bioprinting to cryopreserved multi-well screening platforms.</a> Toxicol in Vitro. 61, 104606(2019).</li>
<li>Tong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+defined+ECM+and+small+molecule+based+monolayer+culture+system+for+the+expansion+of+mouse+and+human+intestinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Towards a defined ECM and small molecule based monolayer culture system for the expansion of mouse and human intestinal stem cells.</a> Biomaterials. 154, 60-73 (2018).</li>
<li>Krebs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carrageenan-Based+Crowding+and+Confinement+Combination+Approach+to+Increase+Collagen+Deposition+for+In+Vitro+Tissue+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Gels%22%5BJournal%5D)">Carrageenan-Based Crowding and Confinement Combination Approach to Increase Collagen Deposition for In Vitro Tissue Development.</a> Gels. 9 (9), 705(2023).</li>
<li>Li, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+off-the-shelf+multi-well+scaffold-supported+platform+for+tumour+organoid-based+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An off-the-shelf multi-well scaffold-supported platform for tumour organoid-based tissues.</a> Biomaterials. 291, 121883(2022).</li>
<li>Phan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-throughput+approach+identifies+actionable+drug+sensitivities+in+patient-derived+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple high-throughput approach identifies actionable drug sensitivities in patient-derived tumor organoids.</a> Commun Biol. 2 (1), 78(2019).</li>
<li>Hofer, M., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineering organoids.</a> Nat Rev Mater. 6 (5), 402-420 (2021).</li>
<li>Landon-Brace, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Engineered+Patient-Derived+Tumor+Organoid+Model+That+Can+Be+Disassembled+to+Study+Cellular+Responses+in+a+Graded+3D+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Func+Mater%22%5BJournal%5D)">An Engineered Patient-Derived Tumor Organoid Model That Can Be Disassembled to Study Cellular Responses in a Graded 3D Microenvironment.</a> Adv Func Mater. 31 (41), 2105349(2021).</li>
<li>Cao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Automation+Workflow+for+High-Throughput+Manufacturing+and+Analysis+of+Scaffold-Supported+3D+Tissue+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">An Automation Workflow for High-Throughput Manufacturing and Analysis of Scaffold-Supported 3D Tissue Arrays.</a> Adv Healthcare Mater. 12 (19), 2202422(2023).</li>
<li>Rodenhizer, D., Dean, T., Xu, B., Cojocari, D., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+engineered+heterogeneous+tumor+model+for+assessing+cellular+environment+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional engineered heterogeneous tumor model for assessing cellular environment and response.</a> Nat Protoc. 13 (9), 1917-1957 (2018).</li>
<li>Young, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+3D+Co-Culture+tumour+model+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A TRACER 3D Co-Culture tumour model for head and neck cancer.</a> Biomaterials. 164, 54-69 (2018).</li>
<li>Dean, T., Li, N. T., Cadavid, J. L., Ailles, L., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+culture+invasion+assay+to+probe+the+impact+of+cancer+associated+fibroblasts+on+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">A TRACER culture invasion assay to probe the impact of cancer associated fibroblasts on head and neck squamous cell carcinoma cell invasiveness.</a> Biomater Sci. 8 (11), 3078-3094 (2020).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+miniaturized+3D+organoid+culture+platform+for+ultra-high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening.</a> J Mol Cell Biol. 12 (8), 630-643 (2020).</li>
<li>Shing, C. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShing%2C+CB+%22Automating+the+Generation+of+a+High-Throughput+Three-+Dimensional+Human+Adipocyte+Model%22">Automating the Generation of a High-Throughput Three- Dimensional Human Adipocyte Model</a>. , University of Toronto. (2009).</li>
</ol>

Biyomedikal araştırmalardaki ilerlemelere rağmen, fizyolojik olarak ilgili in vitro tahlillerin geliştirilmesi hala zordur. İdeal bir tahlil, çeşitli disiplinlerdeki araştırmacıların ihtiyaçlarını karşılamak için çok çeşitli hücre tiplerini, tedavi formülasyonlarını, zaman ölçeklerini, ticari enstrümantasyonu ve analitik okumaları barındırmalıdır. Bununla birlikte, uygun araçların bulunmaması nedeniyle, araştırmacılar genellikle, özellikle kanser araştırmalarındakarmaşıklığı ve klinik alaka düzeyini özetlemekte başarısız olan, ölümsüzleştirilmiş hücre dizilerinin 2D tek katmanları gibi basit modellere güvenirler 1,2. Bunu ele almak için, büyük ölçekli tümör biyobankacılığı ve klinisyen işbirliği, hücre hatlarına kıyasla hastaya özgü daha fazla genetik ve terapötik profili koruyan hasta kaynaklı tümör organoidleri (PDO'lar) gibi yüksek kaliteli in vitro modellerin geliştirilmesine yol açmıştır 3,4,5. Bu arada, laboratuvar otomasyonu ve ilaç keşfindeki gelişmeler, yüksek verimli iş akışlarına sorunsuz bir şekilde entegre olan platformlar gerektiriyor. Mevcut platformlar ya biyolojik doğruluğu ya da ölçeklenebilirliği ele alırken, çok azı her iki zorluğu da aynı anda çözebilmiştir 6,7,8. Temel hastalık özelliklerini kopyalayan otomatik, yüksek verimli modeller geliştirmek, biyomedikal araştırmaları ilerletmek ve çeviri uygulamaları için veri üretimini hızlandırmak için çok önemlidir.
Ortaya çıkan çok sayıda model, PDO'lar gibi yüksek verime sahip özel hücre tiplerinin kültürlenmesiyle ilgili zorlukları ele almayı amaçlamaktadır (Şekil 1). Organoidlerin 96 veya 384 oyuklu plakalarda hidrojel ile karıştırıldığı standart platformlar çeşitli sınırlamalar sunar: (i) yüksek hücre-jel hacmi tutarsız besin erişimine yol açar, (ii) kuyu menisküs eğriliği görüntüleme artefaktları ve hücresel gradyanlar oluşturur, (iii) hidrojel tohumlama, partiler ve personel arasında tekdüzelik eksikliği, (iv) otomatik üretim ve otomatik mikroskopi ile uyumsuzluk ve (v) tipik olarak yumuşak ve kırılgan risk örneği olan hücre dışı matris (ECM) kullanımı fizyolojik doku yoğunluklarında yıkım veya kasılma hücre tiplerinin dahil edilmesi 1,9. Şu anda, plaka bazlı PDO çalışmalarının çoğu, hücre jelinin plaka10,11'e manuel olarak tohumlanmasıyla veya hidrojelin daha az viskoz bir ortamla seyreltildiği ve hücrelerin uygun optik düzleme yerleştirmek için kuyu dibine santrifüjlendiği bir jel kaplama yöntemiyle yürütülmektedir12,13. Her iki yaklaşım da uzun vadeli kültür için mekanik destek sağlamada başarısız olmaktadır. Önceki gözlemlerimize (yayınlanmamış veriler) dayanarak, standart kuyu plakalarındaki hücrelerle karıştırılan ticari hidrojel, 12 gün boyunca 12 kuyudan 9'u için kuyu yüzeylerinden büzülürken, jel-kaplama yöntemi fizyolojik hücre-matris etkileşimlerinden yoksundur. Ek olarak, elde edilen kültürler, kuyu içindeki alan sınırlamaları nedeniyle uzun süreler boyunca sürdürülemez ve yüksek reaktif-hücre-ortam oranı14,15,16 gerektiren tahlillerle uyumlu değildir. Bu pratik engeller, 3B modellerin benimsenmesini engeller ve saha genelinde deneysel tekrarlanabilirliği sınırlar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig1.jpg"> 
Şekil 1: Ölçeklenebilirlik ve biyolojik uygunluğa dayalı kültür modellerinin değerlendirilmesi. Çeşitli in vitro ve in vivo kültür sistemlerinin, plaka verimi ve biyolojik alaka düzeyi (x ekseni) ile tanımlanan ölçeklenebilirlik (y ekseni) boyunca göreceli olarak konumlandırılması, verim potansiyeli ile fizyolojik doğruluk arasındaki dengeleri vurgular. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Bu zorluklardan yola çıkarak, hem 96 hem de 384 kuyucuklu formatlarda mevcut olan Organoid Bazlı Dokular için İskele destekli Platform'u (SPOT) geliştirmek için ince bir selüloz iskelenin yüksek gözenekliliği ve mekanik takviyesinden yararlanıldı. SPOT, plaka düzenine uyan, hassas hücre-jel damlacık yerleşimini sağlayan ve hidrojel fazı için yapısal destek sağlayan, önceden geliştirilmiş bir sızma yöntemi17 kullanan bir polimer önceden desenli iskele içerir (Şekil 2A). İskeleye kılcal fitilleme, hücre-jel çözeltisini yönlendirerek mekanik olarak zorlanmış bir biyokompozit ağ oluşturur (Şekil 2B). İskelenin gözenekli yapısı nedeniyle, hücre jeli sızar ve ince bir tabaka (yaklaşık 70 μm kalınlığında) oluşturur, bu da kuyunun14 tabanını kaplamak için on kat daha az miktarda hücre jeli gerektirir. SPOT'un tohumlama pankreatik duktal adenokarsinomu (PDAC) PDO'ları ile uyumluluğu, metabolik testler ve görüntü tabanlı ölçümler kullanılarak büyümelerinin değerlendirilmesiyle de gösterilmiştir. Geliştirilmesinden bu yana SPOT, organoid kültürüyle uğraşan araştırmacılar için önemli çok yönlülük ve kullanılabilirlik göstermiştir. Ek olarak, SPOT'un tasarımı, düz, menisküs içermeyen mikrojel geometrisi sayesinde azaltılmış reaktif hacimleri ve gelişmiş görüntüleme yetenekleri ile kullanıcı dostu ölçeklenebilirliği barındırarak tek tip ışık penetrasyonu ve doğru yüksek içerikli görüntülemesağlar 14 (Şekil 2C,D). SPOT ayrıca, tümör mikroçevresini daha iyi özetlemek için fibroblastlar gibi diğer ilgili hücre tipleriyle ko-kültürü de destekler18.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig2.jpg"> 
Şekil 2: 96-SPOT cihazına ve görüntü analizi iş akışına genel bakış. (A) SPOT plaka imalatının şematik gösterimi: cihaz, ticari bir dipsiz kuyu plakası (üstte), PMMA desenli iskele (mavi renkle gösterilmiştir) ve polikarbonat filmin (altta) çift taraflı poliakrilik yapıştırıcı katmanları (sarı ile gösterilmiştir) kullanılarak harmanlanmasıyla monte edilir. (B) İskele kuyusuna hücre tohumlama: hücreler, polimerize olmayan bir hidrojel (pembe renkle gösterilmiştir) içinde süspanse edilir ve iskeleye sızdığı her bir oyuğa pipetlenir. Hidrojelin daha sonra iskele destekli hidrojel içindeki hücreleri kapsüllemek için jelleşmesine izin verilir. (C) Mikroskopi: Elde edilen mikrodoku, otomatik geniş alan mikroskobu kullanılarak görüntülenebilir. (D) Görüntü tabanlı analiz: Jel içinde süspanse edilmiş floresan hücrelerin (yeşil) elde edilen görüntüleri, standart görüntü analizi boru hatları kullanılarak analiz edilebilir. Bir 96-SPOT kuyusunda GFP eksprese eden KP4 hücrelerinin temsili epifloresan mikroskobu görüntüsü. Ölçek çubuğu 500 μm'dir. Bu rakam14'ten değiştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
SPOT'un bir diğer avantajı, sistemin açık kaynaklı bir sıvı işleyici ile entegre edilebilmesi ve PDO kültürlerinin otomatik, tekrarlanabilir üretimini kolaylaştırmasıdır. Bu ilerleme, kullanıcı değişkenliğini azaltır ve yüksek verimli ilaç taraması ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımları dahil olmak üzere karmaşık deneysel tasarımları destekler18. SPOT'un ayrıca daha önce heterojen tümör ortamlarında hücresel fenotiplerin tek hücre tabanlı çoğullanmış karakterizasyonu ve hücrelerin sindirim18 yoluyla SPOT'tan talep üzerine alınması ile uyumlu olduğu gösterilmişti. Bu özellikler, SPOT'u, fizyolojik olarak ilgili koşullar altında ilaç etkinliğini ve hücresel davranışı değerlendirmek için uzunlamasına, yüksek çözünürlüklü verilerin gerekli olduğu tarama uygulamaları için çok yönlü bir araç olarak konumlandırmaktadır14,18. Bu teknik yenilikleri bir araya getiren SPOT, geleneksel 3D kültür sistemlerindeki kritik sınırlamaları ele alıyor.
Bu protokol, sağlam ve tekrarlanabilir 3D organoid kültürler için SPOT bileşenlerinin üretimi, plakaların birleştirilmesi ve tohumlama yöntemleri için kapsamlı bir kılavuz sağlar. Mikropipet kullanarak manuel plaka tohumlama ve hem 96 hem de 384 kuyucuklu formatları destekleyen sıvı işleyicili otomatik tohumlama iş akışları için ayrıntılı talimatlar içerir. Ek olarak, bu protokol, yüksek deneysel standartları korumak için tek tip jel dağılımının ve iskele bütünlüğünün doğrulanması gibi temel kalite kontrol önlemlerini ana hatlarıyla belirtir. Eksik jel sızması, tohumlama sırasında buharlaşma ve iskele ayrılması gibi yaygın sorunları ele almak için sorun giderme stratejileri de sağlanarak araştırmacıları iş akışlarını optimize etmek ve güvenilir sonuçlar elde etmek için pratik çözümlerle donatmaktadır.
SPOT, jel bütünlüğünü korurken tahlillerin gerçekleştirilmesi ve ortam değişikliği ile ilgili zorluklar da dahil olmak üzere geleneksel organoid tahlillerin karşılaştığı boşlukları doldurmak için tasarlanmıştır 10,11,12,13. Bu yöntemin genel amacı, 12 günlük bir süre boyunca organoid kültürü destekleyen iskele destekli bir platform üretmektir. Ek olarak, bu yöntem ayrıca, kullanıcıların ilaç IC50 tahlilleri ve küçük molekül taraması dahil olmak üzere herhangi bir aşağı akış pertürbasyonu gerçekleştirmesine izin vermek için manuel veya sıvı işleyici destekli tohumlama yoluyla SPOT'ta doku dizileri oluşturmayı da kapsar.

<table><tbody><tr><td>0.2mL PCR tüpleri (8'li şeritler)&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>72.985.002</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL santrifüj tüpü</td><td>Kurbağa Biyo</td><td>LMCT1.7B</td><td></td></tr><tr><td>1000-&mu; L pipet uçları</td><td>Tutulma</td><td>4-1019-260-000</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serolojik pipetler</td><td>Kurbağa Biyo</td><td>394010</td><td></td></tr><tr><td>10 mL şırınga</td><td>BD, Kanada</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10x Minimum temel ortam (MEM 10x)</td><td>Gibco</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>150 mm çanak</td><td>Corning</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>Luer kilit bağlantılı 16 gauge dağıtım uçları</td><td>McMaster-Carr, Illinois, ABD</td><td>6699A2</td><td></td></tr><tr><td>20&mikro; L filtre uçları rafları</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00099</td><td></td></tr><tr><td>200&mikro; L filtre uçları rafları</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00081</td><td></td></tr><tr><td>200-&mu; L pipet uçları</td><td>Tutulma</td><td>4-1030-260-000</td><td></td></tr><tr><td>Luer lock bağlantılı 20 gauge dağıtım uçları</td><td>McMaster-Carr, Illinois, ABD</td><td>6699A4</td><td></td></tr><tr><td>384 oyuklu dipsiz kuyu plakası (siyah)</td><td>Greiner</td><td>82051-544</td><td></td></tr><tr><td>3-mL şırınga&nbsp;</td><td>BD, Kanada</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>50 mL polipropilen konik santrifüj tüpü</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>50 mL polipropilen konik santrifüj tüpü</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu dipsiz kuyucuk plakası (siyah)</td><td>Greiner</td><td>82050-714</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>A18-1 Fırlatma Uçağı</td><td></td></tr><tr><td>Analitik terazi</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Inkscape için AxiDraw uzantısı (https://wiki.evilmadscientist.com/Axidraw_Software_Installation)</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw Python API'si (https://axidraw.com/doc/py_api/#installation)&nbsp;</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw V3 Yüksek Performanslı Kişisel Yazma ve Çizim Makinesi</td><td>Kötü Çılgın Bilim Adamları, ABD</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Sığır kolajeni (PureCol 3 mg/ml)</td><td>Gelişmiş BioMatrix</td><td>5005</td><td></td></tr><tr><td>Tercih edilen hücre hattı</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Klipsli Şövale (AxiDraw V3 paketine dahildir)</td><td>Kötü Çılgın Bilim Adamları, ABD</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Tercih edilen kültür ortamı</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Kir Tutucu Koruma Bandı</td><td>3 milyon</td><td>6851 PN36851</td><td></td></tr><tr><td>Çift taraflı poliakrilik yapışkan bant (800 mm x 1200 mm)</td><td>Yapıştırıcı Araştırmaları, ARcare</td><td>90106 Not</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Finum çay filtreleri XL&nbsp;</td><td>Riensch & Held GmbH & Co. KG, Hamburg, Almanya</td><td>420.69.00</td><td></td></tr><tr><td>0,2 mL PCR tüpleri için düz kapaklar (8'li şeritler)</td><td>Sarstedt</td><td>65.989.002</td><td></td></tr><tr><td>Ağır hizmet tipi plastik yaylı kelepçeler</td><td>KRİTER</td><td>1024-554</td><td></td></tr><tr><td>HEPA modülü &ndash; 110-130V 60Hz modeli</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00109</td><td></td></tr><tr><td>Buz torbası (dondurulmuş, 1400 mm x 1800 mm)</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Inkscape yazılımı</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Lazer kesici</td><td>Üniversal Lazer Sistemi</td><td>VLS3.75 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>0,07 inç dış çaplı minyatür etil vinil asetat (EVA) boru</td><td>McMaster-Carr, Illinois, ABD</td><td>1883T3</td><td></td></tr><tr><td>Çok Kanallı elektronik pipet P20 (Gen2)</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00005</td><td></td></tr><tr><td>Çok Kanallı elektronik pipet P300 (Gen2)</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00006</td><td></td></tr><tr><td>Oje</td><td>Sally Hansen</td><td>SBS-006861</td><td>PMMA mürekkebinin pigmentasyonu için isteğe bağlı</td></tr><tr><td>Opentron'lar OT-2</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00111</td><td></td></tr><tr><td>P1000 pipet</td><td>Gilson'ın</td><td>FA10006M</td><td></td></tr><tr><td>P200 8 kanallı pipet</td><td>Gilson'ın</td><td>F144072</td><td></td></tr><tr><td>P200 pipet</td><td>Gilson'ın</td><td>FA10005M</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt havlular</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis Şirketi A.Ş.</td><td>52859-079</td><td></td></tr><tr><td>Pergament kağıdı&nbsp; &nbsp;</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Pastör pipetleri</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin (P/S)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Poli(metil metakrilat) (PMMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>182230</td><td></td></tr><tr><td>Polikarbonat film (760 mm x 1300 mm)</td><td>McMaster-Carr'ın fotoğrafı.</td><td>85585K102 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Polidimetilsiloksan monomer ve çapraz bağlayıcı (PDMS, 1500 mm x 2700 mm)</td><td>Ellsworth Yapıştırıcılar</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>Hassas bıçak</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Sert akrilik destek (kuyu plakasının altına takılan boyut)</td><td>McMaster-Carr'ın fotoğrafı.</td><td>8560K239 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Sert karton destek</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Cetvel</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Makas&nbsp;</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat (damıtılmış suda 0,8M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum bloklu sıcaklık güvertesi (Gen2)</td><td>Opentron'lar</td><td>999-00097</td><td></td></tr><tr><td>İzleme tekerleği&nbsp;</td><td>HEEPDD (Amazon)</td><td>B07YQWB284</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf bant&nbsp;</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>Vortex karıştırıcı&nbsp;</td><td>YOK</td><td>YOK</td><td></td></tr></tbody></table>

yüksek verimli İskele tabanlı kültür platformu olarak spot'un tekrarlanabilir Üretimi

Reproducible Manufacturing of SPOT as a High-throughput Scaffold-based Culture Platform

Kağıt iskelenin PMMA deseni, kuyular arasında içerik alışverişini önlemek için fiziksel bir bariyer görevi görür. Bu tasarım, bitişik kuyucukların kimyasal ve biyolojik olarak izole kalmasını sağlamak, ortamın, ilaçların, salgılanan faktörlerin ve hatta hücrelerin istenmeyen difüzyonunu önlemek için kritik öneme sahiptir14. PMMA'nın dahil edilmesi, hassas bölümlere ayırmaya izin vererek, SPOT'u çapraz kontaminasyonun en aza indirilmesi gereken yüksek verimli tarama ve ko-kültür çalışmaları için gü...

Yüksek Verimli İskele Tabanlı Kültür Platformu Olarak SPOT'un Tekrarlanabilir Üretimi

Patient-derived organoids (PDOs) are becoming increasingly used in the field of cancer research to model tumors. They combine the benefits of in vivo and ...

reproducible-manufacturing-spot-as-high-throughput-scaffold-based

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Ağırlıklı olarak tek tabaka kültürler - sık sık farklılaştırılmış birincil hücreler, nispeten kısa bir ömrü vardı ve kültürü içinde de farklılaşmış dezavantaj muzdarip geçmişte birçok in vitro kültür sistemleri. Bunun bir sonucu olarak, organ-spesifik fonksiyonları en hızlı kaybedildi. Böylece, bu hücrelerin in vitro için daha iyi koşullar çoğalmak için, değişiklikler ve uyarlamalar geleneksel monolayer kültürlere edilmiştir.

Röportaj: Kök Hücre Araştırma ve Yüzey-Modifiye 3D-Yapı iskeleleri Biyoreaktörler

Protein terapötikler üretmek için hücre hattı geliştirme, üretim, yüksek verimlilik, otomatik bir platform açıklanmıştır. Uygulama, BD FACS Aria Hücre Sıralayıcısı CloneSelect Imager ve Tecan Özgürlük EVO sıvı taşıma sistemi, gelişmiş hücre hattı kalite ve yüksek tekrarlanabilirlik hücre hattı geliştirme işleme kapasitesi önemli ölçüde artış göstermiştir.

Protein Therapeutics İmalat Hücre Hatları Kalkınma Yüksek throughput Otomatik Platformu

Açıklanan protokoller, laboratuvarların programlanabilir bir sıvı işleme robotu ve 96 oyuklu plakalar kullanarak minimum işçilik, deneyim ve ekipman yatırım maliyeti ile yüksek verimde ölçeklenebilir, yapışık kök hücre kültürü gerçekleştirmesine olanak tanır.  Bu sistemde 20'den fazla kez geçen iPSC'ler pluripotentliği, normal karyotipleri korudu ve kardiyomiyositlere farklılaştı.

Bir Robotik Sıvı İşleme Sisteminin Kullanılması Ölçeklenebilir 96-iyi iPSC Kültür Bazlı Plaka ve Üretim

Bu makalede, bir Multiplexed yapay hücresel MicroEnvironment (MACME) dizi taklit eden vivo içinde hücresel microenvironments fiziksel ve kimyasal yüksek üretilen iş manipülasyonu ipuçları ve için hazırlamak için ayrıntılı metodolojisi insan pluripotent kök hücreler (hPSCs) için en iyi hücresel ortam tek hücreli profil oluşturma ile tanımlayın.

Çoğaltılmış yapay hücresel MicroEnvironment dizi imalatı

Bu protokol, viskoz malzemelerin yeni bir açık kaynak otomasyon teknolojisi ile standartlaştırılmış ve tekrarlanabilir bir şekilde karıştırılması için kapsamlı bir öğretici görevi görür. Yeni geliştirilen açık kaynaklı bir iş istasyonunun çalışması, açık kaynaklı bir protokol tasarımcısının kullanımı ve tekrarlanabilir karışımları tanımlamak için doğrulama ve doğrulama hakkında ayrıntılı talimatlar sağlanmaktadır.

Hidrojel Tabanlı 3D Kültür Modellerini Otomatik ve StandartLaştırılmış Bir Şekilde Üretecek Açık Kaynaklı Bir Teknoloji Platformu

Kök hücre kaynaklı kardiyomiyositler kullanılarak biyomühendislik yapılan üç boyutlu kalp dokuları, doğal kardiyak nişin temel yönlerini özetlerken, sağlıklı ve hastalıklı insan miyokardını in vitro incelemek için umut verici modeller olarak ortaya çıkmıştır. Bu makale, insan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerden üretilen yüksek içerikli tasarlanmış kardiyak dokuların üretilmesi ve analiz edilmesi için bir protokolü açıklamaktadır.

Tasarlanmış Kardiyak Dokuların Veri Toplamasını ve Model Verimini İyileştirmek için Bir Biyoreaktör Tasarlama

Bu yazıda, organoidlerin yüksek çözünürlüklü mikroskopi kullanılarak kültürlenebildiği ve gözlemlenebildiğimm2 başına yüzlerce mikro konteynere sahip yeni bir kültür substratı türü için bir üretim protokolü sunulmaktadır. Hücre tohumlama ve immün boyama protokolleri de detaylandırılmıştır.

Organoidlerin kültürü ve 3D görüntülenmesi için yüksek verimli bir platform

Burada, otomatik bir hücre kültürü sistemi için bir protokol sunuyoruz. Bu otomatik kültür sistemi, işçiliği azaltır ve indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerin bakımından, çeşitli hücre tiplerine farklılaşmaya kadar, indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerin işlenmesine aşina olmayan araştırmacılar da dahil olmak üzere kullanıcılara fayda sağlar.

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin korunması ve ayırt edilmesi için otomatik bir kültür sistemi

Bu protokol, endüstriyel mikroorganizmalar için standart yüksek verimli tarama iş akışı sunar. ARTP mutagenezi yoluyla mutant bir kütüphane oluşturmayı, otomatik mikrofluidiklerle pozitif damla taraması yapılmasını ve ardından sonuçların doğrulanmasını içerir. İş akışının güvenilirliği, yüksek verimli B. coagulans suşlarının taramasıyla doğrulandı.

L-laktik asit aşırı üreten Bacillus coagulans mutantlarının yüksek verimli taraması otomatik damla mikrofluidik platform kullanılarak

Geleneksel iki boyutlu hücre kültür teknikleri genellikle farklılaşma belirteçleri, sitokinler ve büyüme faktörleri açısından değişmiş özellikleri. Extravillous trofoblast hücre hattı ile burada gösterildiği gibi dönen hücre kültür sistemi Üç boyutlu hücre kültürü (RCC), bu faktörlerin çoğunun ifade yeniden kurar.

İnsan Hücre Kültürü Döner Hücre Kültür Sistemleri: Bir Model Olarak İnsan trofoblast Hücreleri

Keşfedin SPOT platformunun yüksek verimli iskele tabanlı kültür üretimini. Otomatik sıvı işleyicilerle entegre edilen bu yöntem, ilaç tarama çalışmalarında tekrarlanabilirliği artırır ve hastadan türetilmiş organoid kültürlerde gelişmiş hastalık modellemesi sağlar.

Yüksek Verimli İskele Tabanlı Kültür Platformu Olarak SPOT'un Tekrarlanabilir Üretimi

Daha fazla video keşfet