Name: Virolojide Taramalı Transmisyon Elektron Mikroskobu Tomografisi: Yüksek Basınçlı Dondurulmuş, Dondurularak İkame Edilmiş Örneklerin 3 Boyutlu Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Öğrenin, yüksek basınçlı dondurma ve dondurularak ikame yöntemleriyle virüs enfeksiyonu sonrası hücresel değişikliklerin 3 boyutlu görüntülenmesi için STEM tomografi protokolünü. Bu teknik, onkolitik virüs araştırmalarında detaylı ultra yapısal analiz sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Laue, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1+electron+microscopy+of+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 1 electron microscopy of viruses.</a> Methods Cell Biol. 96, 1-20 (2010).</li>
<li>Goldsmith, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+and+electron+microscopy+for+identifying+viruses+in+diseases+of+unknown+cause%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Cell culture and electron microscopy for identifying viruses in diseases of unknown cause.</a> Emerg Infect Dis. 19 (6), 864-869 (2013).</li>
<li>Guo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+electron+microscopy+in+virus+diagnosis+and+advanced+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Application of electron microscopy in virus diagnosis and advanced therapeutic approaches.</a> J Histotechnol. 47 (1), 1-4 (2024).</li>
<li>Schauflinger, M., Villinger, C., Mertens, T., Walther, P., von Einem, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+human+cytomegalovirus+secondary+envelopment+by+advanced+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of human cytomegalovirus secondary envelopment by advanced electron microscopy.</a> Cell Microbiol. 15 (2), 305-314 (2013).</li>
<li>Abdellatif, M. E. A., Sinzger, C., Walther, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+HCMV+entry+into+host+cells+by+STEM+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating HCMV entry into host cells by STEM tomography.</a> J Struct Biol. 204 (3), 406-419 (2018).</li>
<li>Wieland, J., Frey, S., Rupp, U., Essbauer, S., Groß, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zika+virus+replication+in+glioblastoma+cells%3A+electron+microscopic+tomography+shows+3D+arrangement+of+endoplasmic+reticulum%2C+replication+organelles%2C+and+viral+ribonucleoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zika virus replication in glioblastoma cells: electron microscopic tomography shows 3D arrangement of endoplasmic reticulum, replication organelles, and viral ribonucleoproteins.</a> Histochem Cell Biol. 156 (6), 527-538 (2021).</li>
<li>Bergner, T., Zech, F., Hirschenberger, M., Stenger, S., Sparrer, K. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-native+visualization+of+SARS-CoV-2+induced+membrane+remodeling+and+virion+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Near-native visualization of SARS-CoV-2 induced membrane remodeling and virion morphogenesis.</a> Viruses. 14 (12), 2786(2022).</li>
<li>Romero-Brey, I., Bartenschlager, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+infection+at+high+magnification%3A+3D+electron+microscopy+methods+to+analyze+the+architecture+of+infected+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Viral infection at high magnification: 3D electron microscopy methods to analyze the architecture of infected cells.</a> Viruses. 7 (12), 6316-6345 (2015).</li>
<li>Baena, V., Conrad, R., Friday, P., Fitzgerald, E., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIB-SEM+as+a+volume+electron+microscopy+approach+to+study+cellular+architectures+in+SARS-CoV-2+and+other+viral+infections%3A+a+practical+primer+for+a+virologist%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">FIB-SEM as a volume electron microscopy approach to study cellular architectures in SARS-CoV-2 and other viral infections: a practical primer for a virologist.</a> Viruses. 13 (4), 611(2021).</li>
<li>Villinger, C., Schauflinger, M., Gregorius, H., Kranz, C., Höhn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1117, 617-638 (2013).</li>
<li>Hohmann-Marriott, M. F., Sousa, A. A., Azari, A., Glushakova, S., Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+3D+cellular+imaging+by+axial+scanning+transmission+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Nanoscale 3D cellular imaging by axial scanning transmission electron tomography.</a> Nat Methods. 6 (10), 729-731 (2009).</li>
<li>Walther, P., Bauer, A., Wenske, N., Catanese, A., Garrido, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STEM+tomography+of+high-pressure+frozen+and+freeze-substituted+cells%3A+a+comparison+of+image+stacks+obtained+at+200+kV+or+300+kV%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">STEM tomography of high-pressure frozen and freeze-substituted cells: a comparison of image stacks obtained at 200 kV or 300 kV.</a> Histochem Cell Biol. 150 (5), 545-556 (2018).</li>
<li>Rachel, R., Walther, P., Maaßen, C., Daberkow, I., Matsuoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-axis+STEM+tomography+at+200+kV%3A+setup%2C+performance%2C+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Dual-axis STEM tomography at 200 kV: setup, performance, limitations.</a> J Struct Biol. 211 (3), 107551(2020).</li>
<li>Mielanczyk, L., Matysiak, N., Michalski, M., Buldak, R., Wojnicz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closer+to+the+native+state.+Critical+evaluation+of+cryo-techniques+for+transmission+electron+microscopy%3A+preparation+of+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Histochem+Cytobiol%22%5BJournal%5D)">Closer to the native state. Critical evaluation of cryo-techniques for transmission electron microscopy: preparation of biological samples.</a> Folia Histochem Cytobiol. 52 (1), 1-17 (2014).</li>
<li>Walther, P., Schmid, E., Höhn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+imaging+techniques%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell imaging techniques, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 931, 525-535 (2012).</li>
<li>Steyer, A. M., Ruhwedel, T., Möbius, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+sample+preparation+by+high-pressure+freezing%2C+microwave-assisted+contrast+enhancement%2C+and+minimal+resin+embedding+for+volume+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Biological sample preparation by high-pressure freezing, microwave-assisted contrast enhancement, and minimal resin embedding for volume imaging.</a> J Vis Exp. (145), e59156(2019).</li>
<li>Read, C., Walther, P., von Einem, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cytomegaloviruses%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human cytomegaloviruses, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 2244, 265-289 (2021).</li>
<li>Romero-Brey, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Influenza virus, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1836, 213-236 (2018).</li>
<li>Elbaum, M., Seifer, S., Houben, L., Wolf, S. G., Rez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+compositional+contrast+by+cryo-STEM%5BTitle%5D)+AND+%22Acc+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">Toward compositional contrast by cryo-STEM.</a> Acc Chem Res. 54 (19), 3621-3631 (2021).</li>
<li>Kirchweger, P., Mullick, D., Wolf, S. G., Elbaum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+organelles+in+situ+by+cryo-STEM+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Visualization of organelles in situ by cryo-STEM tomography.</a> J Vis Exp. (196), (2023).</li>
<li>McDonald, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+28+%26%2334%3Btips+and+tricks%26%2334%3B+for+high-pressure+freezing+of+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 28 &#34;tips and tricks&#34; for high-pressure freezing of model systems.</a> Methods Cell Biol. 96, 671-693 (2010).</li>
<li>Sosinsky, G. E., Crum, J., Jones, Y. Z., Lanman, J., Smarr, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+combination+of+chemical+fixation+procedures+with+high-pressure+freezing+and+freeze+substitution+preserves+highly+labile+tissue+ultrastructure+for+electron+tomography+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">The combination of chemical fixation procedures with high-pressure freezing and freeze substitution preserves highly labile tissue ultrastructure for electron tomography applications.</a> J Struct Biol. 161 (3), 359-371 (2008).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Struct Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Rauch-Wirth, L., Schuetz, D., Groß, R., Rode, S., Glocker, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+enhancing+EF-C+peptide+nanofibrils+are+endocytosed+by+macropinocytosis+and+subsequently+degraded%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Transduction enhancing EF-C peptide nanofibrils are endocytosed by macropinocytosis and subsequently degraded.</a> Biomaterials. , 317(2025).</li>
<li>Tonnemacher, S., Folly-Klan, M., Gazi, A. D., Schaefer, S., Pénard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccinia+virus+H7-protein+is+required+for+the+organization+of+the+viral+scaffold+protein+into+hexamers%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Vaccinia virus H7-protein is required for the organization of the viral scaffold protein into hexamers.</a> Sci Rep. 12 (1), 13007(2022).</li>
<li>Villinger, C., Gregorius, H., Kranz, C., Hoehn, K., Münzberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIB%2FSEM+tomography+with+TEM-like+resolution+for+3D+imaging+of+high-pressure+frozen+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">FIB/SEM tomography with TEM-like resolution for 3D imaging of high-pressure frozen cells.</a> Histochem Cell Biol. 138 (4), 549-556 (2012).</li>
<li>Hackstadt, T., Chiramel, A. I., Hoyt, F. H., Williamson, B. N., Dooley, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+Golgi+apparatus+and+contribution+of+the+endoplasmic+reticulum+to+the+SARS-CoV-2+replication+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Disruption of the Golgi apparatus and contribution of the endoplasmic reticulum to the SARS-CoV-2 replication complex.</a> Viruses. 13 (9), 1798(2021).</li>
<li>Horstmann, H., Körber, C., Sätzler, K., Aydin, D., Kuner, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+section+scanning+electron+microscopy+%28S3EM%29+on+silicon+wafers+for+ultra-structural+volume+imaging+of+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Serial section scanning electron microscopy (S3EM) on silicon wafers for ultra-structural volume imaging of cells and tissues.</a> PLoS ONE. 7 (4), e35172(2012).</li>
<li>Lewczuk, B., Szyryńska, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field-emission+scanning+electron+microscope+as+a+tool+for+large-area+and+large-volume+ultrastructural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">Field-emission scanning electron microscope as a tool for large-area and large-volume ultrastructural studies.</a> Animals. 11 (12), 3390(2021).</li>
<li>Höög, J. L., Schwartz, C., Noon, A. T., O'Toole, E. T., Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+interphase+microtubules+in+fission+yeast+analyzed+by+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Organization of interphase microtubules in fission yeast analyzed by electron tomography.</a> Dev Cell. 12 (3), 349-361 (2007).</li>
<li>Jiang, Y., Lin, H., Fu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+mitochondrial+ultrastructure+of+Drosophila+indirect+flight+muscle+revealed+by+serial-section+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">3D mitochondrial ultrastructure of Drosophila indirect flight muscle revealed by serial-section electron tomography.</a> J Vis Exp. (130), e56567(2017).</li>
<li>Snijder, E. J., Limpens, R. W. A. L., de Wilde, A. H., de Jong, A. W. M., Zevenhoven-Dobbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unifying+structural+and+functional+model+of+the+coronavirus+replication+organelle%3A+tracking+down+RNA+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Biol%22%5BJournal%5D)">A unifying structural and functional model of the coronavirus replication organelle: tracking down RNA synthesis.</a> PloS Biol. 18 (6), e3000715(2020).</li>
<li>Welsch, S., Miller, S., Romero-Brey, I., Merz, A., Bleck, C. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+and+three-dimensional+architecture+of+the+dengue+virus+replication+and+assembly+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Composition and three-dimensional architecture of the dengue virus replication and assembly sites.</a> Cell Host Microbe. 5 (4), 365-375 (2009).</li>
<li>Cortese, M., Goellner, S., Acosta, E. G., Neufeldt, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+characterization+of+Zika+virus+replication+factories%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural characterization of Zika virus replication factories.</a> Cell Rep. 18 (9), 2113-2123 (2017).</li>
<li>Milrot, E., Lazar, S., Schuster, O., Makdasi, E., Schmaya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+from+the+infection+cycle+of+VSV-%CE%94G-spike+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Insights from the infection cycle of VSV-ΔG-spike virus.</a> Viruses. 14 (12), 2828(2022).</li>
<li>Schauflinger, M., Bergner, T., Neusser, G., Kranz, C., Read, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+permanganate+is+an+excellent+alternative+to+osmium+tetroxide+in+freeze-substitution%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Potassium permanganate is an excellent alternative to osmium tetroxide in freeze-substitution.</a> Histochem Cell Biol. 157 (4), 481-489 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Heksadeken</td><td>Merck KGaA</td><td>8220640500</td><td></td></tr><tr><td>200 bakır ızgara paralel çubuklarla</td><td>Plano GmbH</td><td>G2014C</td><td></td></tr><tr><td>37 ve derece; C kurutma odası</td><td>Binder GmbH</td><td>9010-0323</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>VWR international GmbH</td><td>20066330</td><td></td></tr><tr><td>DDSA</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>13710</td><td></td></tr><tr><td>Elmas bıçak</td><td>Diatome Ltd</td><td>https://www.diatomeknives.com/ultra-35</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Embed-812 Reçine</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>EM araçları</td><td>TVIPS GmbH</td><td>TVIPS Yazılımı: EM-Tools; https://www.tvips.com/imaging-software/em-tools/</td><td></td></tr><tr><td>Etanol %100</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00983.2511</td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>VWR international GmbH</td><td>516-0812</td><td></td></tr><tr><td>Flaschen mit Schnappdeckelglas 11 mL</td><td>VWR international GmbH</td><td>548-0625</td><td></td></tr><tr><td>Formvar</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>15830-25</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma yerine geçme ünitesi Leica EM AFS2</td><td>Leica Microsystems GmbH</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/sample-preparation-for-electron-microscopy/p/leica-em-afs2/</td><td></td></tr><tr><td>Glod Sol 25 nm</td><td>AURION Immuno Altın Reaktifleri & Aksesuarlar</td><td>425.011</td><td></td></tr><tr><td>Altın çam deliği ve oslash; 2000 & Mu; m</td><td>Science Services GmbH</td><td>GA2000-AU</td><td></td></tr><tr><td>Graiticules Buchstaben-Netzchen Kupfer</td><td>Plano GmbH</td><td>NH6C</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma plakası</td><td>MEDAX GmbH & Şirket KG</td><td>12501</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek vakum buharlaştırma sistemi BAF 300</td><td>BAL-TEC AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yüksek basınçlı dondurucu Wohlwend HPF Compact 01</td><td>Mühendislik Ofisi M. Wohlwend GmbH</td><td>https://www.wohlwend-hpf.ch/index.html</td><td></td></tr><tr><td>Sıvı azot tankı</td><td>H.Erben GmbH</td><td>94500</td><td></td></tr><tr><td>Azot (sıvı)</td><td>VWR international GmbH</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>NMA</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>19000</td><td></td></tr><tr><td>Osmiyum tetrooksit</td><td>ChemPur Feinchemikalien und Forschungsbedarf GmbH</td><td>006051</td><td></td></tr><tr><td>Fırın 120 derece ve derece; C</td><td>Binder GmbH</td><td>9010-0194</td><td></td></tr><tr><td>PELCO easi-Glow</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>91000</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin %0,1 b/v aq. Çözüm</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>18026</td><td></td></tr><tr><td>Güvenli Kilitli Tüpler 0.5 mL</td><td>Eppendorf SE</td><td>0030 121.023</td><td></td></tr><tr><td>Örnek kapları (Beem kapsülleri)</td><td>Plano GmbH</td><td>G360-1</td><td></td></tr><tr><td>Safir disk diametri 3 x 0.16 mm</td><td>Mühendislik Ofisi M. Wohlwend GmbH</td><td>500</td><td></td></tr><tr><td>Ultramikrotom Leica EM UC7</td><td>Leica Microsystems GmbH</td><td>https://www.leica-microsystems.com/de/produkte/em-probenvorbereitung/p/leica-em-uc7/</td><td></td></tr><tr><td>Uranyl asetat</td><td>Riedel de Ha&euml; n AG</td><td>31697</td><td></td></tr><tr><td>UV ışık odası</td><td>Dinies</td><td>ELG100S</td><td></td></tr></tbody></table>

virolojide taramalı transmisyon elektron mikroskobu tomografisi: yüksek basınçlı dondurulmuş, dondurularak İkame edilmiş Örneklerin 3 boyutlu görüntülenmesi

Scanning Transmission Electron Microscopy Tomography in Virology: 3D Imaging of High-pressure Frozen, Freeze-substituted Samples

Virolojide Taramalı Transmisyon Elektron Mikroskobu Tomografisi: Yüksek Basınçlı Dondurulmuş, Dondurularak İkame Edilmiş Örneklerin 3 Boyutlu Görüntülenmesi

Electron microscopy (EM) and especially three-dimensional (3D) EM techniques have become established methods in structural virology. Investigation of ...

scanning-transmission-electron-microscopy-tomography-virology-3d

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Protokol zarı proteinleri kullanarak kriyo-elektron tomografisi ve 3D görüntü işleme yapıları belirlemek için yüksek verimli bir yaklaşımı açıklar. Numune hazırlama, veri toplama, veri işleme ve yorumlama kapsar ve yaklaşım, HIV-1 zarf glikoprotein bir temsilcisi hedef üretim ile son bulur. Bu hesaplama prosedürleri, araştırmacılar ve öğrenciler uzaktan çalışma ve veri işleme ve yapısal analiz için katkıda bulunmayı sağlayan bir şekilde dizayn edilmiştir.

Cryo-Elektron Tomografi ve Otomatik Sub-tomogram Ortalaması kullanarak HIV Zarf Glikoproteinler Moleküler Yapılarının Belirlenmesi

Biz yüksek hızlı 3D canlı hücre floresan ışık mikroskobu ve yüksek çözünürlüklü kriyo-elektron tomografi birleştiren bir karşılıklı mikroskopi yöntemi açıklanmaktadır. Biz burada görüntüleme, dinamik ana HeLa hücreleri ile etkileşime küçük bir HIV-1 parçacıkların bağıntılı yöntemin özelliği göstermektedir.

Dinamik Etkileşimler 3D Yapısal Analiz için karşılıklı Mikroskopi

Biz toplamak ve tüm mitokondri süreç elektron cryo-tomografi nasıl bir protokol mevcut. Teknik, doğal biyolojik membranların büyük membran protein komplekslerinin yapısı, işlevi, ve organizasyon hakkında detaylı bilgiler sağlar.

Elektron Cryo-tomografi ile Mitokondri ATP Sintazı dimerlerini Görselleştirme

Virionların yüzeye bağlanması, Süper çözünürlüklü floresan görüntüleme veya atomik kuvvet mikroskopisi (AFM) ile tek virion görüntüleme için bir gerekliliktir. Burada, VIRIONların AFM ve süper çözünürlüklü floresan görüntülemede kullanıma uygun cam yüzeylere kontrollü yapışıklık için örnek bir hazırlama yöntemi gösteriyoruz.

Tek Virion Atomik Kuvvet Mikroskopisi ve Süper Çözünürlüklü Floresan Görüntüleme için Numune Hazırlama

Bu rapor, kalın biyolojik örneklerin taramalı transmisyon elektron tomografisini gerçekleştirmek için bir numune hazırlama protokolünü ve özel görüntüleme koşullarını açıklar.

Tarama Transmisyon Elektron Tomografi ile hazırlanması ve Kalın Biyolojik Örneklerinin Gözlem

Bu iletişim kuralı, siyanobakteriler geçici DNA sıkıştırma görselleştirmek açıklar. Zaman uyumlu ekimi, floresans mikroskobu, Hızlı dondurma ve yüksek tarafından izleme gerilim cryo-elektron tomografi kullanılır. Bu metodolojileri için bir protokol sundu ve gelecekteki uygulamalar ve gelişmeler ele alınmıştır.

Siyanobakteriler yüksek gerilim Cryo-elektron tomografi tarafından DNA sıkıştırma görselleştirme

Burada, kriyo yumuşak X-ışını tomografisinde (SXT) kriyo-korunmuş hücrelerin ultrayapısını 25 nm yarım perde çözünürlükte görüntülemek için gerekli numune hazırlama ve veri toplama adımlarını açıklayan bir protokol sunulmaktadır.

Cryo Soft X-ray Tomografisi ile Hücrenin 3D Kartografik Açıklaması

Kriyo-elektron tomografisi ile in situ makromoleküllerin yüksek çözünürlüklü yapısal çalışmaları için kriyo odaklı iyon ışını mikromakine ile dalma donmuş biyolojik örneklerin lamel hazırlanması için bir protokol sunuyoruz. Sunulan protokol, Saccharomyces cerevisiaeiçindeki makromoleküllerin yapısal karakterizasyonu için yüksek tekrarlanabilirlik ile yüksek kaliteli lamel hazırlanması için yönergeler sağlar.

Kriyo-Elektron Tomografisi için Saccharomyces cerevisiae'nin Hazırlanması ve Kriyo-FIB mikromakinesi

Burada, transmisyon elektron mikroskobu kullanılarak nano ölçekte sıvı-EM ve kriyo-EM analizi için uygun virüs düzenekleri hazırlamak için protokoller açıklanmaktadır.

Sıvı ve Buzdaki Virüs Düzeneklerinin Yüksek Çözünürlüklü Görüntülenmesinin İlerlemesi

Kriyo-STEM tomografisi, bozulmamış hücrelerin organellerini gömme, kesitleme veya diğer invaziv preparatlar olmadan görselleştirmek için bir araç sağlar. Elde edilen 3D çözünürlük şu anda birkaç nanometre aralığında, birkaç mikrometrelik bir görüş alanı ve 1 μm mertebesinde erişilebilir bir kalınlık ile.

Kriyo-STEM Tomografi ile Organellerin In Situ Görüntülenmesi

Öğrenin, yüksek basınçlı dondurma ve dondurularak ikame yöntemleriyle virüs enfeksiyonu sonrası hücresel değişikliklerin 3 boyutlu görüntülenmesi için STEM tomografi protokolünü. Bu teknik, onkolitik virüs araştırmalarında detaylı ultra yapısal analiz sağlar.

Virolojide Taramalı Transmisyon Elektron Mikroskobu Tomografisi: Yüksek Basınçlı Dondurulmuş, Dondurularak İkame Edilmiş Örneklerin 3 Boyutlu Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal

Virolojide Taramalı Transmisyon Elektron Mikroskobu Tomografisi: Yüksek Basınçlı Dondurulmuş, Dondurularak İkame Edilmiş Örneklerin 3 Boyutlu Görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet