30 Aralık 2025
Bu protokol, güvenli ve iyi tolere edilen fare çift taraflı böbrek lenfadenektomisi için bir hayatta kalma prosedürünü tanımlar.
Böbrek lenf düğümünden böbreğe bağışıklık hücrelerinin ve dreneyen lenf düğümüne böbrek antijeninin kaçakçılığını inceliyoruz. Cerrahi yaklaşımımız, böbrek lenf düğümlerini seçici olarak bozabilmemiz ve diğer tüm lenf düğümlerini sağlam bırakarak iyi tolere edilen uzun vadeli hayatta kalma modelinde benzersiz bir avantaj sağlar. Bu model geliştirildiğine göre, böbrek lenf düğümlerinin ve bağışıklık yanıtlarının katkılarını ve bu düğümlerin çıkarılmasının bağışıklık kaynaklı böbrek hasarına nasıl katkıda bulunduğunu inceleyebiliriz.
Başlamak için, anestezi altındaki hayvanı ameliyat masasına koyun ve merhem uygulayın. Hayvanın sol kolunu üst yöne, kuyruğunu ise alt yöne sabitlemek için bant kullanın; böylece rahat ama uzun bir duruş oluşturun. Kürkleri tıraş edin ve cerrahi alanı üç kez dezenfekte edin.
Anestezi derinliğini parmak sıkıştırmasıyla doğruladıktan sonra, dalağın hemen altındaki deriden bir santimetre eğik bir kesi yapın; bu kesik son kaburgadan yaklaşık bir santimetre aşağıda. Küt diseksiyon yöntemiyle deriyi karın ve göğüs duvarından ayırın ve karın içindeki dalağı tespit edin. Sonra, dalağın hemen altında karın duvarı kaslarından bir santimetre kesik açarak periton boşluğuna girin.
Sol böbreği, dalağın hemen altındaki arka karın duvarı boyunca bulunan pürüzsüz bir organ olarak tanımlayın. İki açılı forseps kullanarak, sol böbreğin arkasından kesip retroperitoneuma ulaşın ve sol böbreği nazikçe anteromedial yönde yansıtın. Sol böbrek lenf düğümünü çevreleyen yağ dokusu yastığını, böbreğin arkasında ve böbrek damarlarının üstünde bulunan bölgeyi konumlandırın.
Üst tarafta bulunan adrenal bezi, arka tarafta aortayı ve anteromedialda cisterna chyli'yi tespit edin ve kaçının. İnce uçlu forseps kullanarak, lenf düğümü kapsülünün etrafını köşe damarlarından ayırmak için kesik bir şekilde kesin ve açılı forsepslerle hafif karşı gerilim sağlanır. Lenf düğümünü yukarıdan geri çekmek için ince uçlu düz forseps kullanın.
Sonra ince uçlu makas kullanarak posteromedial bağlantıları keskin bir şekilde kesin. Hemostazı doğrulamak için bölgeyi inceleyin. Sonra, böbreği normal anatomik konumuna döndürün.
Karın duvarını ve ardından deriyi 6-0 monofilament polipropilen dikişle koşu dikişiyle kapatın. Yarayı kapatmak için steril cerrahi yapıştırıcı uygulayın. Isteğe bağlı olarak, böbrek lenf düğümlerinin daha iyi tanımlanması için, renal lenfadenektomi öncesi her iki arka ayak pedine 10 ila 20 mikrolitre steril, %5 filtrelenmiş Evans mavi boyası PBS ile enjekte edilir.
Enjeksiyondan sonraki beş dakika içinde, boya iliak lenfat yolu boyunca drenaj yoluyla böbrek lenf düğümlerine ulaşır. Hayvanı sol yan dekübütus pozisyonuna sol tarafı aşağıya bakacak şekilde konumlandırın. Hayvanın sağ kolunu üst yöne, kuyruğunu ise alt yönde sabitlemek için bant kullanın ki rahat ama uzun bir duruş kalın.
Şimdi, son kaburganın hemen altında, sol taraftan biraz daha yukarıda konumlandırılan bir santimetre çapında eğik deri kesisi yapın. Küt diseksiyon yöntemiyle deriyi karın ve göğüs duvarından ayırın. Daha sonra karın duvarı kaslarından bir santimetre kesik açarak periton boşluğuna ulaşın.
Sağ böbreği tanımlayın; bu, arka karın duvarı boyunca ve karaciğerin hemen altında bulunan pürüzsüz bir organdır. İki açılı forseps kullanarak, sağ böbreğin arkasından kesik bir şekilde kesin ve retroperitoneal boşluğa girin ve sağ böbreği anteromedial yönde yansıtın. Sağ böbrek lenf düğümünü çevreleyen yağ dokusu pedini tespit edin; bu ped, böbreğin arkasında ve böbrek damarlarının üstünde yer alır.
Lenf düğümünün üstünde bulunan adrenal bezi tespit edin ve ondan kaçının. Şimdi, ince uçlu forseps kullanarak, lenf düğümünün kapsülünü yakındaki damarlardan ayırmak için kesici bir şekilde inceleyin ve açılı forsepsle hafif karşı çekiş uygulayın. Sonra, ince uçlu düz forsepsle, lenf düğümlerini yukarıdan çekip posteromedial bağlantıları ince uçlu makasla keskin bir şekilde kesin.
Bölgeyi kontrol ederek hemostazın olup olmadığını kontrol edin. Son olarak, sağ böbreği anatomik konumuna geri döndürün. Karın duvarını ve deriyi 6-0 monofilament polipropilen dikişi ile iki kat halinde kapatın ve kesi bölgesine steril cerrahi yapıştırıcı uygulayın.
Akış sitometrisi, sol ve beş sağ böbrek lenfadenektomi örneğinde başarılı lenf düğümü çıkarımını doğruladı; her biri %50'den fazla CD45 pozitif canlı hücre gösterdi; bu oran visseral yağ kontrollerinde %2'nin altında. CD45-pozitif hücrelerin niceliklendirilmesi, sol ve sağ böbrek lenfadenektomi örnekleri arasında visseral yağ dokusuna kıyasla oldukça anlamlı bir fark gösterdi ve sol ve sağ taraflar arasında anlamlı bir fark bulunmadı.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, diğer lenfatik dokuları korurken renal lenf nodlarının seçici olarak çıkarılmasını sağlayan, farelerde bilateral renal lenfadenektomi gerçekleştirilmesine yönelik ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Bu yöntem, özellikle sistemik lupus eritematozus gibi sistemik otoimmün hastalıklar bağlamında, renal lenf nodlarının immün hücre trafiğindeki ve böbrekle ilgili immün yanıtlardaki rolü üzerine yapılan çalışmaları kolaylaştırmak için tasarlanmıştır. Prosedür iyi tolere edilmektedir, uzun süreli sağkalımı desteklemektedir ve sonraki analizlar için uygun, sağlam lenf nodları sağlamaktadır.
Selektif murin bilateral renal lenfadenektomi, böbreği drene eden lenf düğümlerinin hassas bir şekilde incelenmesine olanak tanıyarak otoimmün ve renal immünoloji araştırmalarında mekanistik risk azaltmaya destek sağlar. Bu model, lokal immün aktivasyonu ve trafiğini analiz etmek için benzersiz bir platform sunarak, sistemik otoimmünitede hedef doğrulaması ve translasyonel biyobelirteç stratejilerine doğrudan bilgi sağlar. Bu yaklaşım, böbrek hedefli terapilerin keşiften preklinik aşamaya geçiş noktasındaki öngörü güvenilirliğini artırır.
Bu cerrahi model, erken keşif ile preklinik araştırma arayüzünde entegre olarak, mekanistik çalışmalar ile böbrek hastalığı modellerindeki translasyonel immün profilleme arasında köprü kurmaktadır.