Name: Tümör Hücrelerinin Tip 1 Konvansiyonel Dendritik Hücre Benzeri Hücrelere İzlenebilir İn Vivo Yeniden Programlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:35:00.000+00:00
Duration: 10 min 4 s
Description: Öğrenin fare tümör hücrelerinin tip 1 konvansiyonel dendritik hücre benzeri hücrelere in vivo yeniden programlanmasını. PU.1, IRF8 ve BATF3 transkripsiyon faktörleri kullanılarak soğuk tümörleri sıcak tümörlere dönüştürme yöntemi sunulmaktadır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Oliveira, G., Wu, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+and+specificities+of+T+cells+in+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dynamics and specificities of T cells in cancer immunotherapy.</a> Nat Rev Cancer. 23 (5), 295-316 (2023).</li>
<li>Larkin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five-year+survival+with+combined+nivolumab+and+ipilimumab+in+advanced+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Five-year survival with combined nivolumab and ipilimumab in advanced melanoma.</a> N Engl J Med. 381 (16), 1535-1546 (2019).</li>
<li>Adams, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+monotherapy+for+previously+untreated%2C+PD-L1-positive%2C+metastatic+triple-negative+breast+cancer%3A+cohort+B+of+the+phase+II+KEYNOTE-086+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab monotherapy for previously untreated, PD-L1-positive, metastatic triple-negative breast cancer: cohort B of the phase II KEYNOTE-086 study.</a> Ann Oncol. 30 (3), 405-411 (2019).</li>
<li>Patel, M. R., Falchook, G. S., Hamada, K., Makris, L., Bendell, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+2+trial+of+trifluridine%2Ftipiracil+plus+nivolumab+in+patients+with+heavily+pretreated+microsatellite-stable+metastatic+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Med%22%5BJournal%5D)">A phase 2 trial of trifluridine/tipiracil plus nivolumab in patients with heavily pretreated microsatellite-stable metastatic colorectal cancer.</a> Cancer Med. 10 (4), 1183-1190 (2021).</li>
<li>Reardon, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+phase+3+study+evaluating+the+efficacy+and+safety+of+nivolumab+vs+bevacizumab+in+patients+with+recurrent+glioblastoma%3A+CheckMate+143%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Randomized phase 3 study evaluating the efficacy and safety of nivolumab vs bevacizumab in patients with recurrent glioblastoma: CheckMate 143.</a> Neuro Oncol. 19 (suppl_3), iii21-iii21 (2017).</li>
<li>Sharma, P., Hu-Lieskovan, S., Wargo, J. A., Ribas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary%2C+adaptive%2C+and+acquired+resistance+to+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Primary, adaptive, and acquired resistance to cancer immunotherapy.</a> Cell. 168 (4), 707-723 (2017).</li>
<li>Heras-Murillo, I., Adán-Barrientos, I., Galán, M., Wculek, S. K., Sancho, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+as+orchestrators+of+anticancer+immunity+and+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells as orchestrators of anticancer immunity and immunotherapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 21 (4), 257-277 (2024).</li>
<li>Heras-Murillo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunotherapy+with+conventional+type-1+dendritic+cells+induces+immune+memory+and+limits+tumor+relapse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Immunotherapy with conventional type-1 dendritic cells induces immune memory and limits tumor relapse.</a> Nat Commun. 16 (1), 3369(2025).</li>
<li>Theisen, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WDFY4+is+required+for+cross-presentation+in+response+to+viral+and+tumor+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">WDFY4 is required for cross-presentation in response to viral and tumor antigens.</a> Science. 362 (6415), 694-699 (2018).</li>
<li>Meiser, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+stimulatory+cDC1+subpopulation+amplifies+CD8%2B+T+cell+responses+in+tumors+for+protective+anti-cancer+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A distinct stimulatory cDC1 subpopulation amplifies CD8+ T cell responses in tumors for protective anti-cancer immunity.</a> Cancer Cell. 41 (8), 1498-1515.e10 (2023).</li>
<li>Spranger, S., Dai, D., Horton, B., Gajewski, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-residing+Batf3+dendritic+cells+are+required+for+effector+T+cell+trafficking+and+adoptive+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor-residing Batf3 dendritic cells are required for effector T cell trafficking and adoptive T cell therapy.</a> Cancer Cell. 31 (5), 711-723.e4 (2017).</li>
<li>Hubert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-III+is+selectively+produced+by+cDC1+and+predicts+good+clinical+outcome+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-III is selectively produced by cDC1 and predicts good clinical outcome in breast cancer.</a> Sci Immunol. 5 (46), eaav3942(2020).</li>
<li>Mahadevan, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+conventional+dendritic+cells+facilitate+immunotherapy+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Type I conventional dendritic cells facilitate immunotherapy in pancreatic cancer.</a> Science. 384 (6703), eadh4567(2024).</li>
<li>Ascic, E., Pereira, C. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+factor-mediated+reprogramming+to+antigen-presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Transcription factor-mediated reprogramming to antigen-presenting cells.</a> Curr Opin Genet Dev. 90, 102300(2025).</li>
<li>Silk, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-presentation+of+tumour+antigens+by+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+CD141%2B+XCR1%2B+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Cross-presentation of tumour antigens by human induced pluripotent stem cell-derived CD141+ XCR1+ dendritic cells.</a> Gene Ther. 19 (10), 1035-1040 (2012).</li>
<li>Nair, S., Archer, G. E., Tedder, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+generation+of+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Isolation and generation of human dendritic cells.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 7, 7.32.1-7.32.23 (2012).</li>
<li>Makino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+cDC-like+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+via+Notch+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Generation of cDC-like cells from human induced pluripotent stem cells via Notch signaling.</a> J Immunother Cancer. 10 (1), e003827(2022).</li>
<li>Balan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+human+dendritic+cell+differentiation+revealing+Notch-dependent+lineage+bifurcation+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Large-scale human dendritic cell differentiation revealing Notch-dependent lineage bifurcation and heterogeneity.</a> Cell Rep. 24 (7), 1902-1915.e6 (2018).</li>
<li>Kirkling, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+facilitates+in+vitro+generation+of+cross-presenting+classical+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Notch signaling facilitates in vitro generation of cross-presenting classical dendritic cells.</a> Cell Rep. 23 (12), 3658-3672.e6 (2018).</li>
<li>Ascic, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+dendritic+cell+reprogramming+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo dendritic cell reprogramming for cancer immunotherapy.</a> Science. 386 (6719), eadn9083(2024).</li>
<li>Rosa, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+reprogramming+of+fibroblasts+into+antigen-presenting+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Direct reprogramming of fibroblasts into antigen-presenting dendritic cells.</a> Sci Immunol. 3 (30), 1-16 (2018).</li>
<li>Rosa, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptional+profiling+informs+efficient+reprogramming+of+human+somatic+cells+to+cross-presenting+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptional profiling informs efficient reprogramming of human somatic cells to cross-presenting dendritic cells.</a> Sci Immunol. 7 (69), eabg5539(2022).</li>
<li>Zimmermannova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoring+tumor+immunogenicity+with+dendritic+cell+reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Restoring tumor immunogenicity with dendritic cell reprogramming.</a> Sci Immunol. 8 (85), eadd4817(2023).</li>
<li>Bouquet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RapaCaspase-9-based+suicide+gene+applied+to+the+safety+of+IL-1RAP+CAR-T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">RapaCaspase-9-based suicide gene applied to the safety of IL-1RAP CAR-T cells.</a> Gene Ther. 30 (9), 706-713 (2023).</li>
<li>Huangfu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+primary+human+fibroblasts+with+only+Oct4+and+Sox2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from primary human fibroblasts with only Oct4 and Sox2.</a> Nat Biotechnol. 26 (11), 1269-1275 (2008).</li>
<li>Rojas, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+RNA+neoantigen+vaccines+stimulate+T+cells+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Personalized RNA neoantigen vaccines stimulate T cells in pancreatic cancer.</a> Nature. 618 (7963), 144-150 (2023).</li>
<li>Guan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+reprogramming+of+human+somatic+cells+to+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemical reprogramming of human somatic cells to pluripotent stem cells.</a> Nature. 605 (7909), 325-331 (2022).</li>
<li>Ferreira, A. G., Zimmermannova, O., Kurochkin, I., Ascic, E., Åkerström, F., Pereira, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+cancer+cells+to+antigen-presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Reprogramming cancer cells to antigen-presenting cells.</a> Bio Protoc. 13 (22), 1-25 (2023).</li>
<li>Cabrita, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tertiary+lymphoid+structures+improve+immunotherapy+and+survival+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tertiary lymphoid structures improve immunotherapy and survival in melanoma.</a> Nature. 577 (7791), 561-565 (2020).</li>
<li>Ng, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+against+endogenous+retroviruses+promote+lung+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Antibodies against endogenous retroviruses promote lung cancer immunotherapy.</a> Nature. 616 (7957), 563-573 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 &mu; m düşük proteinli bağlayıcı filtre, 150 mL Şişe Üstü Vakum Filtresi</td><td>Fisher bilimsel</td><td>15983297</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol 50 mM</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>31350010</td><td></td></tr><tr><td>Anti-fare CD45 Monoklonal Antikor (klon: 30-F11), Sıçan IgG2b, &kappa;</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>14-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>B6. SJL-PtprcaPepcb/BoyCrl (CD45.1)</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>002014</td><td></td></tr><tr><td>BD Micro-Fine U-100 İnsülin Şırıngaları (0,5 mL)</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>11395751</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz D</td><td>Sigma Aldrich</td><td>11088882001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Falcon Hücre Süzgeci 50ml Konik Tüplerle Kullanım İçin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS352340</td><td></td></tr><tr><td>Corning kapak camları 24 x 50 mm&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS2975245</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol, dihidroklorür)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>D1306 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience Sabitlenebilir Canlılık Boyası eFluor 450</td><td>Davetli</td><td>65-0863-14</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience IHC Antijen Alma Solüsyonu - Düşük pH (10x)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>00-4955-58</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>Floromount-G Montaj Ortamı</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>00-4958-02</td><td></td></tr><tr><td>GFP Antikoru [Alexa Fluor 594]</td><td>Novus Biyolojik Ürünler</td><td>NB600-308AF594 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM/Besin Karışımı F-12 (DMEM/F-12)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>31331028</td><td></td></tr><tr><td>Gibco MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler Çözeltisi (100x)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>11140035</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Opti-MEM I</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>11058021</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Roswell Park Anıt Enstitüsü (RPMI) 1640 Orta</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>52400025</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Sodyum Piruvat (100 mM)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Tripan Mavisi Çözeltisi, %0,4</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Takviyesi&nbsp;</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-sıçan IgG (H+L) Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Poliklonal, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>A-11006</td><td></td></tr><tr><td>HEK 293T hücreleri</td><td>ATTC</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>Heksadimmetrin bromür (Polibren)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H9268</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Dulbecco'nun yüksek glikozlu Modifiye Kartal Ortamı (DMEM)</td><td>Cytiva</td><td>SH30243.01</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Penisilin Streptomisin 100x Solüsyon (Kalem/Strep)</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Fosfat Tamponlu Salin çözeltisi (PBS)</td><td>Cytiva</td><td>SH30028.02</td><td></td></tr><tr><td>Ketaminol veterineri. Enjeksiyon çözeltisi 100 mg/mL</td><td>MSD Hayvan Sağlığı İsveç</td><td>QN01AX03</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom Bıçağı - C35</td><td>PFM Medikal</td><td>207500005</td><td></td></tr><tr><td>Fare anti-CD45.2 (104), Yüzey, APC, Monoklonal</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>109814</td><td></td></tr><tr><td>Fare anti-MHCII (M5/114.15.2), Yüzey, PE-Cy7, Monoklonal</td><td>Biyolojik Efsane</td><td>107630</td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu</td><td>Abcam</td><td>AB7481</td><td></td></tr><tr><td>Normal Sıçan Serumu (steril)</td><td>Abcam</td><td>AB7488</td><td></td></tr><tr><td>Üstü Açık İnce Duvarlı Polipropilen Borular</td><td>Beckman Coulter Yaşam Bilimleri</td><td>326823</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit, %16 w/v aq. soln., metanol içermez</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>043368,9 milyon</td><td></td></tr><tr><td>pFUW-tetO-Batf3, fare Batf3'ü kodlayan bir monosistronik kaset</td><td>Addgene</td><td>139837</td><td></td></tr><tr><td>pFUW-tetO-Irf8, fare Irf8'i kodlayan bir monosistronik kaset</td><td>Addgene</td><td>139838</td><td></td></tr><tr><td>pFUW-tetO-Pu.1, fare Pu.1'i kodlayan bir monosistronik kaset</td><td>Addgene</td><td>139839</td><td></td></tr><tr><td>Plazmit pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>Plazmit psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>Plazmit SFFV-eGFP (eGFP)</td><td>Evde klonlama</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Plazmit SFFV-mKiraz (mKiraz)</td><td>Evde klonlama</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Plazmid SFFV-PIB-eGFP,&nbsp; fare PU.1, IRF8 ve BATF3 (PIB)&nbsp;</td><td>Evde klonlama</td><td>-</td><td>Yeniden programlama için kullanılan yapılar ve vektörler, şirketle yapılan bir malzeme transfer anlaşması kapsamında Asgard Therapeutics'ten temin edilebilir</td></tr><tr><td>Polietilenimin (PEI), Doğrusal, MW 25000, Transfeksiyon Sınıfı</td><td>Polibilimler</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td>ReadyProbes Hidrofobik Bariyer Pap Kalem</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>R3777 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Butirat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>303410</td><td></td></tr><tr><td>Sakaroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7903 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus Yapışma Mikroskobu Slaytları</td><td>Epredia</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Bileşiği</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzim (1x) fenol kırmızısı içermez</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>12604021</td><td></td></tr><tr><td>TT Cryomold Intermediate, kare (15 x 15 x 5 mm)</td><td>Sakura Finetek</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Saf 0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Davetli</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>Xysol veterineri. Enjeksiyon çözeltisi 20 mg/mL</td><td>VM İlaç</td><td>QN05CM92</td><td></td></tr><tr><td>YUMM1.7 hücreleri</td><td>Antineo</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tümör hücrelerinin tip 1 konvansiyonel dendritik hücre benzeri hücrelere İzlenebilir İn vivo yeniden programlanması

Tractable In Vivo Reprogramming of Tumor Cells to Type 1 Conventional Dendritic Cell-like Cells

İzlenebilir in vivo yeniden programlama protokolünün şematik bir genel bakışı Şekil 1'de sunulmuştur. İlk olarak, cDC1 talimatlı yeniden programlama faktörleri PU.1, IRF8, BATF3'ü kodlayan polisistronik lentiviral vektör SFFV-PIB-IRES-eGFP'yi (PIB-eGFP) ürettik, ardından HEK 293T paketleme hücresi hattında dahili bir ribozomal giriş bölgesi (IRES) ve gelişmiş yeşil floresan proteini (eGFP) izledik. Lentivirüs aracılı immünojenisiteyi kontrol etmek için, çoklu klonlama bölgesi (MCS) ve IRES-eGFP içeren, ancak yeniden programlama faktörlerini hariç tutan boş bir SFFV-MCS-eGFP (eGFP) vektörü ürettik. Viral üretimin ardından, lentivirüs içeren süpernatanı hasat ettik ve ultrasantrifüjleme ile konsantre ettik. Transdüksiyondan sonraki 3. günde değerlendirdiğimiz, transdüksiyondan sonraki 3. günde değerlendirdiğimiz, transdüksiyon (eGFP+) ve transdüksiyon yapılmamış (eGFP-) hücrelerin 1:1 oranını elde etmek için gereken miktarı belirlemek için virüsü işlevsel olarak titre ettik. Daha sonra, elde edilen virüs miktarını, seçilen kanser hücre hattını -1. günde dönüştürmek için kullandık. 24 saat sonra hücreleri topladık ve tümörleri oluşturmak için deri altına implante ettik. Bu strateji, transdüksiyonlu hücrelerin TME içinde in vivo olarak cDC1 benzeri hücrelere yeniden programlanmasını sağlamıştır. Aşılama sonrası belirtilen zaman noktalarında, TME'deki değişiklikleri karakterize etmek için in vivo yeniden programlama verimliliğini veya dondurularak saklanmış tümör bölümlerinin immünofloresan boyamasını ölçmek için ayrışmış tümör hücrelerinin akış sitometrisi dahil olmak üzere aşağı akış analizleri için tümörleri eksize ettik ve işledik.
İlk olarak, yüksek lentiviral titrelerin üretimini sağlamak için, transfeksiyondan önce HEK 293T hücrelerini izledik,% 70-80 birleşmeye ulaşmayı hedefledik ve 24 saat sonra, floresan mikroskobu ile eGFP ekspresyonu yoluyla transfeksiyon verimliliğini değerlendirdik (Şekil 2A). Daha sonra, transfeksiyondan 48 saat ve 60 saat sonra virüs içeren ortamı topladık, ultrasantrifüjledik ve -80 ° C'de alikotlarda sakladık (Şekil 2B). Daha sonra, YUMM1.7 melanom hücrelerinde eGFP + / eGFP hücrelerinin 1: 1 oranını elde etmek için gereken optimal viral miktarı belirledik. 6 oyuklu bir plakada oyuk başına 105 YUMM1.7 hücresi ektik, hücreleri artan hacimlerde lentivirüs ile dönüştürdük ve virüs içeren süpernatanı 24 saat sonra taze DMEM / F12 tam ortamı ile değiştirdik (Şekil 2C). 3. günde, eGFP + hücrelerinin kesin yüzdelerini akış sitometrisi ile ölçmeye devam etmeden önce floresan mikroskobu ile eGFP ekspresyonunu değerlendirdik (Şekil 2C). eGFP + 'nın eGFP hücrelerine oranını ölçmek için, ölü hücreleri ve çiftleri dışlamak için canlı, tek hücrelere geçit yaptık (Şekil 2D). Üretilen lentivirüs partisinin optimal hacmi hem PIB-eGFP hem de kontrol eGFP virüsü için 105 YUMM1.7 hücre başına 2 μL olarak belirlendi, bu da sırasıyla P.0 ± %0.3 ve c.0 ± %0.9 eGFP+ hücresi ile sonuçlandı (Şekil 2E).
Daha sonra, in vivo yeniden programlama verimliliğini değerlendirmek için, floresan etiketli (mCherry +) bir kanser hücre hattı (YUMM1.7-mCherry) oluşturduk. Bu, akış sitometrisi analizinde canlı mCherry + hücrelerinde geçit yaparak kanser hücreleri ile stromal veya immün hücreler arasında ayrım yapabilmemizi sağladı (Şekil 3A, B). Daha sonra YUMM1.7-mCherry hücrelerini 2 μL PIB-eGFP ile transdüksiyon yaptık veya 1: 1eGFP + - eGFP oranı elde etmek için 10 5 hücre başına eGFP virüsünü kontrol ettik. CD45.1 farelerde tümör başına 1.6 × 106 hücreyi deri altına implante ettik ve karşılaştırma için in vitro kültüre bir dizi hücre tuttuk. Akış sitometrisi ile yeniden programlama verimliliğini değerlendirdik, eGFP veya mCherry'yi yutmuş konakçı bağışıklık hücrelerini dışlamak için canlı mCherry + eGFP + ve CD45.1- hücrelerini geçit ettik (Şekil 3B). 1. günden 9. güne kadar, kısmen yeniden programlanmış cDC1 benzeri hücreleri (CD45.2 + MHC-II - veya CD45.2- MHC-II +) ve tamamen yeniden programlanmış cDC1 benzeri hücreleri (CD45 + MHC-II +) işaretleyerek CD45.2 ve / veya MHC-II ekspresyonunun kademeli olarak edinildiğini gözlemledik (Şekil 3C). Fare kanseri hücrelerinin in vivo olarak yeniden programlanmasının, in vitro koşullara kıyasla 9. günde daha yüksek yüzdelerde cDC1 benzeri hücrelerle sonuçlandığını doğruladık (9.54 ± %1.54 CD45 + MHC-II + in vivo vs. 4.72 ± %1.1 CD45 + MHC-II + in vitro, P = 0.018). 4. gün gibi erken bir tarihte daha yüksek bir cDC1 benzeri hücre yüzdesi gözlemlediğimiz için yeniden programlama kinetiği de hızlandı (8.7 ± %3.3 CD45+ MHC-II+'ya karşı in vivo vs. 0.3 ± %0.1 CD45 + MHC-II + in vitro, P = 0.05), çevresel ipuçlarının varlığının cDC1 benzeri hücrelere doğru daha hızlı ve daha verimli yeniden programlamayı teşvik ettiğini gösterir19. İn vitro olarak yeniden programlanmış cDC1 benzeri hücreler 15. güne kadar mevcutken, in vivo cDC1 benzeri hücreler 9 gün boyunca devam etti, ancak 15. güne kadar tespit edilmedi, bu da konakçı bağışıklık sistemi tarafından TME'den tükenmeyi düşündürdü. 
Son olarak, ilk 9 gün içinde in vivo cDC1 yeniden programlamasının bir sonucu olarak TME'deki erken değişiklikleri karakterize etmeyi amaçladık. Pan-hematopoietik belirteç CD45 ile işaretlenen immün hücrelerin infiltrasyonuna odaklanarak, 3 ve 9 günlük in vivo yeniden programlamadan sonra hem eGFP hem de PIB-eGFP tümörlerinden kriyoprezervasyonlu ve kesitli tümör dokularının immünofloresan boyamasını gerçekleştirdik. Özellikle, cDC1 benzeri hücreler, eGFP tümörlerine kıyasla 3. günde TME'ye kolayca önemli ölçüde daha fazla CD45 hücresi aldı (49.6 ± 17.0'a karşı 8.0 ± 5.8 eGFP, tümör alanı başına CD45 boyamanın ortalama floresan yoğunluğu; Şekil 4A,B). İlginç bir şekilde, 9 günlük in vivo yeniden programlamadan sonra tümörlerin TME'sinde TLS tespit ettik. Bu, cDC1 benzeri hücrelerin TME'yi 3 gün içinde "bağışıklık-soğuk"tan "bağışıklık-sıcak" ortama hızla yeniden şekillendirebileceğini ve bunun daha sonra 9. günde TLS oluşumuna yol açtığını göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68739/68739fig1.jpg"> 
Şekil 1: Kanser hücrelerinin in vivo olarak yeniden programlanmasıyla cDC1 benzeri hücreler oluşturmak için protokole genel bakış. Dalak odak oluşturan virüs promotörü (SFFV) ve eGFP'nin kontrolü altında bir polisistronik kasette PU.1, IRF8 ve BATF3 kodlayan lentiviral vektörler SFFV-PIB-IRES-eGFP, dahili bir ribozom giriş bölgesinden sonra (IRES) akış sitometrisi ve floresan mikroskobu ile transdüksiyonlu hücreleri izlemek için HEK 293T paketleme hücre hattında üretilmektedir. Daha sonra, lentiviral vektörler ultrasantrifüjlenir ve kanser hücrelerinin transdüksiyonu için gereken virüs miktarını 1: 1 transdüksiyonlu eGFP + / transdüksiyonsuz eGFP hücreleri oranında belirlemek için fonksiyonel olarak titre edilir. İn vivo yeniden programlama deneyleri için, kanser hücreleri -1. günde en uygun miktarda lentivirüs ile kaplanır. Ertesi gün, transdüksiyonlu GFP + ve transdüksiyonsuz GFP hücrelerinin bu 1: 1 karışımı yıkanır ve farelerde deri altı tümör oluşumu için toplanır. Paralel in vitro kültürler, akış sitometrisi ile 3. günde transdüksiyonu doğrulamak için korunur. Hayvanlar, tümör büyümesi ve sağkalımı için her 2-3 günde bir izlenir. Tümörler tanımlanmış zaman noktalarında toplanır, ayrışır ve akış sitometrisi analizi için yüzey belirteç ekspresyonu için boyanır. Alternatif olarak, tüm dokular sabitlenir, kriyoprezervasyon yapılır ve immünofloresan boyama ve konfokal mikroskopi analizi için bölümlere ayrılır. İn vivo yeniden programlama etkinliği akış sitometri analizi ile değerlendirilirken, tümör mikroçevresindeki değişiklikler konfokal görüntüleme ile karakterize edilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68739/68739fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68739/68739fig2.jpg"> 
Şekil 2: İn vivo cDC1 yeniden programlama için lentivirüsün üretimi ve fonksiyonel titrasyonu.(A) HEK 293T hücreleri ~% 70-80 birleşmeye ulaştığında, 7.5 μg psPAX2 ve 2.5 μg mPD2.G ve 60 μL 1 mg / mL PEI ile birlikte SFFV-eGFP (PIB-eGFP) veya boş lentiviral vektör kontrolü SFFV-eGFP (eGFP) ile birlikte 10 μg transfer plazmidi içeren bir karışım ile transfekte edilir. Transfeksiyondan 24 saat sonra eGFP ekspresyonunu gösteren HEK 293T hücrelerinin parlak alan ve floresan mikroskopi görüntüleri, başarılı plazmit iletimini gösterir. Ölçek çubukları = 200 μm. (B) Lentivirüsü konsantre etmek için ultrasantrifüj iş akışının şematik gösterimi. HEK 293T hücrelerinin lentivirüs içeren süpernatanı, transfeksiyondan 48 saat ve 60 saat sonra toplanır, 0.45 μm düşük proteinli bağlayıcı PES filtresinden süzülür ve 37 g, bir tezgah üstü terazi kullanılarak Üstü Açık İnce Duvar Polipropilen Tüplerde tartılır. Tüpler bir Sallanan Kova Rotorunda ultrasantrifüjlenir, süpernatan aspire edilir ve pelet 5 dakika boyunca kurutulur. Peletler daha sonra HEPES içeren buz gibi soğuk DMEM'de yeniden süspanse edilir ve -80 ° C'de saklanmadan ve saklanmadan önce gece boyunca inkübe edilir. (C) GFP + / GFP hücrelerinin 1: 1 oranını elde etmek için optimal viral dozu belirlemek için fonksiyonel titrasyonun deneysel stratejisi. Transdüksiyondan 72 saat sonra YUMM1.7 melanom hücrelerinde eGFP ekspresyonunu gösteren parlak alan ve floresan mikroskobu görüntüleri, yeniden programlama faktörlerinin ve eGFP'nin başarılı bir şekilde verildiğini gösterir. Ölçek çubukları = 100 μm. (D) eGFP + hücrelerinin oranını ölçmek için geçit stratejisini gösteren temsili akış sitometrisi grafikleri. Canlı hücreler, canlılık boya negatif popülasyonu (DAPI) ve ardından çift dışlama için kapılandı. (E) 1: 1 GFP + / GFP- hücreleri elde etmek için en uygun hacmi belirlemek için artan viral dozlarla transdüksiyon verimliliğinin akış sitometrisi miktarı. Hem PIB-eGFP hem de eGFP lentivirüs için, 105 hücre başına 2 μL hacim istenen orana ulaştı. Kısaltmalar: cDC1s = tip 1 konvansiyonel dendritik hücreler; DAPI = 4',6-diamidino-2-fenilindol; PIB = PU.1, IRF8 ve BATF3; PEI = polietilenimin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68739/68739fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68739/68739fig3.jpg"> 
Şekil 3: İn vivo cDC1 yeniden programlama verimliliğinin değerlendirilmesi. (A) in vivo cDC1 yeniden programlama verimliliğini değerlendirmek için deneysel iş akışının şematik gösterimi. Kanser hücreleri başlangıçta floresan etiketli bir hücre hattı (YUMM1.7-mCherry) oluşturmak için mCherry eksprese eden bir lentivirüs ile transdüksiyon yapılır, ardından -1. günde optimize edilmiş PIB-eGFP lentivirus dozu ile transdüksiyon yapılır. Hücreler daha sonra, CD45.1 farelerinde tümörler oluşturmak ve PIB ile transdüksiyonlu hücrelerin TME içinde cDC1 benzeri hücrelere yeniden programlanmasına izin vermek için 0. günde 1: 1 oranında eGFP + / eGFP- hücreleri ile deri altına enjekte edilir. Tümörler daha sonra belirtilen zaman noktalarında izole edilir, ayrıştırılır ve akış sitometrisi kullanılarak CD45.1, CD45.2 ve MHC-II için boyanır. Bu, CD45.2 ve MHC-II'nin ekspresyonu ile in vivo cDC1 yeniden programlama verimliliğini ölçmek için CD45.1 konakçı bağışıklık hücrelerinin dışlanmasına izin verir. Paralel in vitro kültürler, in vivo yeniden programlamaya kıyasla zaman noktaları boyunca tutulur. (B) 9. gündeki geçit stratejisini gösteren temsili akış sitometrisi grafikleri. Hücreler, başarılı bir şekilde transdüksiyon yapılan kanser hücrelerini tanımlamak için mCherry + ve GFP + üzerinde kapılandı. Konak immün hücreleri, CD45.1+ hücreleri dışarı atılarak dışlandı. (C) YUMM1.7-mCherry hücrelerinin in vivo yeniden programlama verimliliğinin (solda) CD45+ MHC-II+ hücrelerinin (tamamen yeniden programlanmış) ve CD45.2+ HLA-DR- veya CD45.2- HLA-DR+ cDC1 benzeri hücrelerin (kısmen yeniden programlanmış) yüzdesi olarak akış sitometrisi ile ölçülmesi eGFP + mCherry + içinde kapılı Hücre. Belirtilen zaman noktaları boyunca PIB-eGFP ile transdüksiyonlu YUMM1.7-mCherry hücrelerinde CD45.2 ve MHC-II ekspresyonunun kademeli olarak edinilmesini gösteren temsili akış sitometrisi grafikleri (sağda). kontrol olarak eGFP ile transdüksiyonlu YUMM1.7-mCherry hücreleri kullanıldı ve karşılaştırma için in vitro yeniden programlanmış cDC1 benzeri hücreler kullanıldı. (C)'deki veriler, 3-5 biyolojik kopya deneyin ortalama ± SD'sini göstermektedir. (C)'de istatistiksel analiz CD45+ MHC-II+ hücreleri için Mann-Whitney testi kullanılarak yapıldı. *P &lt; 0.05. Kısaltmalar: cDC1s = tip 1 konvansiyonel dendritik hücreler; PIB = PU.1, IRF8 ve BATF3; TME = tümör mikroçevresi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68739/68739fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68739/68739fig4.jpg"> 
Şekil 4: İn vivo cDC1 yeniden programlamasını takiben tümör mikroçevresindeki immün infiltrasyonun analizi. (A) PIB-eGFP- veya kontrol eGFP ile transdüksiyonlu hücrelerin (transdüksiyonun ebeveyn hücrelerine oranı) 3. ve 9. günlerde deri altı implantasyonundan sonra YUMM1.7 tümörlerinde CD45+ hücrelerini gösteren temsili konfokal görüntüler. Ölçek çubukları = 500 μm. (B) PIB ile tedavi edilen ve 3. ve 9. günlerde eGFP ile transdüke edilen YUMM1.7 tümörlerini kontrol eden CD45 boyaması için MFI'nin miktarının belirlenmesi. (B)'deki veriler, 3-6 biyolojik kopya deneyin ortalama ± SD'sini göstermektedir. (B)'deki istatistiksel analiz Mann-Whitney testi kullanılarak yapıldı. *P &lt; 0.05 ve ***P &lt; 0.001. Kısaltmalar: cDC1s = tip 1 konvansiyonel dendritik hücreler; PIB = PU.1, IRF8 ve BATF3; MFI = ortalama floresan yoğunluğu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68739/68739fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Tümör Hücrelerinin Tip 1 Konvansiyonel Dendritik Hücre Benzeri Hücrelere İzlenebilir İn Vivo Yeniden Programlanması

The efficacy of cancer immunotherapy relies on the recruitment and activation of cytotoxic T cell responses against solid tumors by type 1 conventional ...

tractable-vivo-reprogramming-tumor-cells-to-type-1-conventional

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerden T lenfositlerin Nesil T hücre tabanlı immünoterapi için embriyonik kök hücreler kullanarak alternatif bir yaklaşım verir. Yöntem kullanılarak ya da...

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

Bu videoda, tümör antijenine özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretimi için bir teknik gösterilmektedir. Transgenik RNA taşıyan retroviral vektörler, T hücresi sağkalımını ve proliferasyonunu teşvik etmek için interlökin-2 ile takviye edilmiş bir ortamda dalak hücreleri ile karıştırılır. Karışım daha sonra rekombinant insan fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir plakaya aktarılır ve virüsün hücre ile füzyonunu kolaylaştırmak için santrifüjlenir, bu da RNA'nın...

Tümöre özgü kimerik antijen reseptör T hücreleri oluşturmak için bir ex vivo teknik

Tümör immünoterapide kullanım için otolog dendritik hücreler, çok sayıda (DC'ler) oluşturmak için en yaygın olarak kullanılan yöntem tarif edilmektedir. Gibi bir yöntem monositlerden DC'ler ayırt etmek için, IL-4 ve GM-CSF kullanır. Bu hastaya geri enjekte edilmeden önce olgunlaşmamış DC'lerin olgun ve daha sonra antijen ile yüklenir için uyarılır.

İmmünoterapi için Tümör Antijen-yüklü Olgun dendritik hücreler hazırlanması

Singeneik immün yetmetik konakçılarda değerlendirilen kanser kök hücre (KSS) bazlı dendritik hücre (DC) aşısı, heterojen dökme tümör hücreleri ile nabızlanan geleneksel DC aşılarına göre önemli ölçüde daha yüksek antitümör bağışıklık göstermiştir.

Melanom ve Skuamöz Kanser Kök Hücreleri Kullanılarak Yeni Bir Dendritik Hücre aşısının Üretilmesi

Bir hücre sedimantasyon manifoldu/slayt aparatı kullanarak yapışık olmayan bağışıklık hücrelerinin radyal hareketliliğini in vitro olarak izlemek için bir protokol açıklıyoruz. Hücre göçü, tümör hücrelerinin tek katmanlarında veya hücre dışı matriks proteinlerinde izlenir. Işık ve floresan mikroskobu ile inceleme, hücre hareketliliğinin ve sitotoksik işlevselliğin gözlemlenmesine izin verir.

Radyal Hareket ve retroviral replike olan bir vektör transduse, Yapışmayan Alloresponsive T lenfositlerinin sitotoksik işlev

Farklı dendritik hücre alt kümeleri, lenfoid organlarda nadir popülasyonlar olarak bulunur ve bu nedenle immünolojik deneyler için yeterli sayıda ve saflıkta izole edilmesi zordur. Burada, fare splenik dendritik hücrelerinin şu anda bilinen tüm ana alt kümelerinin izolasyonu için yüksek verimli, yüksek verimli bir yöntem açıklıyoruz.

Fare Dendritik Hücre Alt Grupları İzolasyonunda bir Verimli ve Yüksek Verim Yöntem

Bu protokolün amacı, melanom tümörüne sızan lenfositlerin indüklenmiş pluripotent kök hücrelere yeniden programlanması için protokolü göstermektir.

İnsan Melanom tümör-süzücü lemfositler ile ilgili uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Bu makalede, üç boyutlu (3D) timik kültür sistemi tarafından tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre kaynaklı timik göçmenler (iTE) oluşturmak için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. iTE, proliferasyon, hafıza oluşumu ve tümör baskılanması kapasitesine sahip naif T hücreleri ile yakından ilişkili T hücrelerinin homojen bir alt kümesidir.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

Burada, sitotoksisik T lenfosit (CTL) yanıt olarak bir model tümör antijeni için immundominance muayene sağlayan bir akış sitometri tabanlı in vivo öldürme tahlil tarif. Biz bu zarif tahlil mekanik çalışmalar için ve ilaç etkinliği test için istihdam olabilir nasıl örnekler sunuyoruz.

Tümör-spesifik CD8+ T hücre tepkiler Immunodominance çalışması Için In vivo sitotoksisite assays terzilik

Bu makalede, OP9/DLL1 co-kültür sistemini kullanarak fonksiyonel tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre türetilmiş CD8αβ+ tek pozitif T hücreleri oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır.

Tümör Antijene Özgü T Hücrelerinin Üretimi için İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Kullanılması

Burada sunulan kök hücre kaynaklı viral antijen (Ag) özgü T lenfositlerin benimseyen hücre transferi (ACT) kullanarak farelerde hepatit B virüsü (HBV) replikasyonu nun etkin bastırılması için bir protokoldür. Bu işlem HBV enfeksiyonunun act tabanlı potansiyel immünoterapisi için uyarlanabilir.

Kök Hücre Kaynaklı Viral Ag-Spesifik T Lenfositler Farelerde HBV Replikasyonlarını Baskılar

Öğrenin fare tümör hücrelerinin tip 1 konvansiyonel dendritik hücre benzeri hücrelere in vivo yeniden programlanmasını. PU.1, IRF8 ve BATF3 transkripsiyon faktörleri kullanılarak soğuk tümörleri sıcak tümörlere dönüştürme yöntemi sunulmaktadır.

Tümör Hücrelerinin Tip 1 Konvansiyonel Dendritik Hücre Benzeri Hücrelere İzlenebilir İn Vivo Yeniden Programlanması

Daha fazla video keşfet