Hippophae rhamnoides subsp. sinensis ve Hippophae gyantsensis 'in Polisakkarit İçerikleri ve Antioksidan Aktiviteleri Üzerine Karşılaştırmalı Çalışma

Bu çalışma, farklılıklarını aydınlatmak için Hippophae rhamnoides sub. sinensis ve Hippophae gyantsensis arasındaki polisakkarit içeriğini ve antioksidan aktiviteyi karşılaştırmaktadır. Çalışma metodolojik olarak sağlamdır ve polisakkarit özelliklerindeki türe özgü farklılıklarla ilgili literatürdeki bir boşluğu ele almaktadır.

Bu çalışmanın bulguları, kalite değerlendirmesi ve potansiyel farmasötik uygulamalar için önemlidir. Başlamak için, beş gram deniz topalak numune tozunu 250 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye aktarın. Daha sonra 50 mililitre susuz etanol ekleyin ve 24 saat boyunca 25 santigrat derece oda sıcaklığında bekletin.

Ertesi gün, filtre kalıntısını elde etmek için ıslatılmış numune tozunu bir Buchner hunisi kullanarak filtreleyin. Filtre kalıntısını 50 mililitre deiyonize su ile üç kez yıkayın. Şimdi, yağı alınmış filtre kalıntısını kurutulmuş 250 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye aktarın.

Mililitrede bir ila 30 gram katı/sıvı oranında 150 mililitre deiyonize su ekleyin. Reflü ekstraksiyonunu 80 santigrat derecede bir su banyosunda iki saat boyunca iki kez gerçekleştirin. Daha sonra ekstraktı döner bir buharlaştırıcı kullanarak konsantre edin.

Konsantre çözeltiyi daha sonra kullanmak üzere dört santigrat derecede bir buzdolabında saklayın. Daha sonra, Sevag reaktifini ham polisakkarit çözeltisine bir ila dört hacim oranında ekleyin ve manyetik bir karıştırıcıya yerleştirin. Daha sonra karışımı 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.

Süspansiyonu 15 dakika boyunca 4.000 g'da santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın. Protein çıkarıldıktan sonra polisakkarit ekstraktını konsantre etmek için, polisakkaritleri çökeltmek üzere hacim oranı bir ila üç oranında susuz etanol ekleyin. Karışımı gece boyunca dört santigrat dereceye koyun.

Ertesi gün, etanolün üst tabakasını çıkarın. Karışımı 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve daha önce olduğu gibi santrifüjleyin. Toplam polisakkaritler elde etmek için çökeltiyi dondurarak kurutun.

Üç gram fenolü kahverengi hacimsel bir şişeye aktarın. Fenolü çözmek için 50 mililitre deiyonize su ekleyin. Homojen olana kadar çalkalayın, ardından şişeyi etiketleyin ve daha sonra kullanmak üzere saklayın.

Ardından, 10 miligram susuz glikozu 10 mililitrelik hacimsel bir şişeye aktarın. Deiyonize su ekleyin ve karışımı iyice çalkalayın. Ardından şişeyi etiketleyin.

Test numunesi çözeltisinin hazırlanması için, beş miligram dondurularak kurutulmuş deniz topalak polisakkaritini hacimsel şişelere tartın. Her birini 50 mililitrelik son hacme getirmek için deiyonize su ekleyin. Her karışımı tamamen eriyene kadar 20 dakika boyunca sonikasyon yapın.

Standart glikoz çözeltisini deiyonize suyla mililitrede 0.1 miligrama seyreltin. Daha sonra bir mikropipet kullanarak 200, 300, 400, 500, 600 ve 700 mikrolitreyi altı temiz test tüpüne aktarın. Her birini toplam bir mililitre hacme getirmek için saf su ekleyin ve eşit seyreltme sağlamak için her çözeltiyi hafifçe karıştırın.

Her test tüpüne bir mililitre %6fenol çözeltisi ve beş mililitre sülfürik asit ekleyin ve iyice karıştırın. Numuneleri küvetlere aktarın. Saf suyu boş olarak kullanın ve üç kopyada UV görünür spektrofotometre ile 490 nanometrede absorbansı ölçün.

Hassasiyet testi için test solüsyonunu hazırlayın. Fenol-sülfürik asit kolorimetrisi yapın. Absorbansı belirleyin ve bağıl standart sapmayı hesaplamak için altı kez tekrarlayın.

Stabilite testi için test solüsyonunu hazırlayın. Hazırlıktan sıfır, iki, dört, altı, sekiz ve 10 saat sonra kolorimetri yapın. Bağıl standart sapmayı hesaplamak için yukarıda belirtilen zaman noktalarında absorbansı belirleyin.

Tekrarlanabilirlik testi için numunenin altı paralel kopyasını hazırlayın. Fenol-sülfürik asit kolorimetrisi yapın ve belirlenen prosedürü izleyerek absorbansı belirleyin. Kurtarma testini gerçekleştirmek için test çözümünün dokuz paralel kopyasını hazırlayın.

Toplam polisakkarit içeriğinin %80, 100 ve %120'sine eşdeğer referans hacimleri ekleyin. Ardından fenol-sülfürik asit kolorimetrisi yapın. İçerik belirleme için örnek çözümü hazırlayın.

Belirlenen yöntemi izleyerek fenol-sülfürik asit kolorimetrisi gerçekleştirin. Ardından absorbansı belirleyin. 2.7 mililitrelik boş bir hacimsel şişeye 50 miligram DPPH tartın.

DPPH'yi çözmek ve bir stok çözeltisi hazırlamak için 50 mililitre susuz etanol ekleyin. Daha sonra, mililitre başına 0,5 miligramlık bir çözelti hazırlamak için beş miligram C vitaminini 10 mililitre deiyonize suda eritin. C vitamini test solüsyonları hazırlamak için bu solüsyonu art arda seyreltin.

Şimdi mililitre başına 0,5 miligramlık bir çözelti hazırlamak için her bir deniz topalak polisakkarit örneğinin beş miligramını 10 mililitre deiyonize suda çözün. Test konsantrasyonlarını elde etmek için bu çözeltileri art arda seyreltin. Substrat olarak DPPH çözeltisini kullanarak test gruplarını 96 oyuklu bir plakada hazırlayın.

Negatif kontrol grubu A0 için 150 mikrolitre su ve 50 mikrolitre DPPH ekleyin. A1 numune grubu için 150 mikrolitre numune veya C vitamini solüsyonu ve 50 mikrolitre DPPH ekleyin. Numune kontrol grubu A2 için 150 mikrolitre numune ve 50 mikrolitre susuz etanol ekleyin. Reaksiyonun karanlıkta 30 dakika ilerlemesine izin verin. Ardından absorbansı 517 nanometrede ölçün.

Standart glikoz eğrisi, mililitrede 0.02 ila 0.07 miligram aralığında absorbans ve konsantrasyon arasında güçlü bir doğrusal ilişki gösterdi. Hippophae gyantsensis'in ortalama polisakkarit verimi, Hippophae rhamnoides alt türü sinensis'inkinden önemli ölçüde daha yüksekti. Hassasiyet testi, altı ölçümde absorbansta minimum değişiklik olduğunu ve %0.21'lik RSD'nin yüksek cihaz hassasiyetini gösterdiğini gösterdi.

Stabilite testi, absorbans değerlerinin 10 saatlik bir süre boyunca tutarlı kaldığını ve %0,45'lik RSD değerinin numune çözeltisi stabilitesini doğruladığını gösterdi. Tekrarlanabilirlik testi, yöntemin tekrarlanabilirliğini doğrulayan %0.5'lik RSD ile altı kopyada tutarlı absorbans değerleri üretti. Glikoz içeriği için geri kazanım deneyi, yöntemin doğruluğunu doğrulayan ortalama %99.18'lik bir geri kazanım oranı verdi.

Hippophae rhamnoides alt türü sinensis'in ortalama polisakkarit içeriği, Hippophae gyantsensis'inkinden önemli ölçüde daha yüksekti. Hippophae gyantsensis, test edilen tüm konsantrasyonlarda Hippophae rhamnoides alt türü sinensis'ten biraz daha yüksek antioksidan aktivite sergilemiştir. Mililitrede 0,5 miligramda, Hippophae gyantsensis'in DPPH temizleme oranı %81,93'e ulaşırken, Hippophae rhamnoides alt türü sinensis %75,17'ye ulaştı