Name: İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerde fibroblast büyüme faktörü sinyal bozulmasının gerçek zamanlı izlenmesine dayalı gelişimsel toksisite testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Keşfedin, insan iPS hücrelerinde FGF/SRF sinyal bozulmasını gerçek zamanlı izleyerek gelişimsel toksisiteyi değerlendiren yeni bir hücre bazlı analiz yöntemi. Bu yöntem, hayvan deneyleri olmadan teratojenik kimyasalları yüksek doğrulukla tespit eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Gilbert-Barness, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+causes+of+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Teratogenic causes of malformations.</a> Ann Clin Lab Sci. 40 (2), 99-114 (2010).</li>
<li>DeSesso, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+of+developmental+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Future of developmental toxicity testing.</a> Curr Opin Toxicol. 3, 1-5 (2017).</li>
<li>Teixidó, E., Krupp, E., Amberg, A., Czich, A., Scholz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species-specific+developmental+toxicity+in+rats+and+rabbits%3A+Generation+of+a+reference+compound+list+for+development+of+alternative+testing+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Species-specific developmental toxicity in rats and rabbits: Generation of a reference compound list for development of alternative testing approaches.</a> Reprod Toxicol. 76, 93-102 (2018).</li>
<li>Vargesson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thalidomide-induced+teratogenesis%3A+History+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Thalidomide-induced teratogenesis: History and mechanisms.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 105 (2), 140-156 (2015).</li>
<li>van der Laan, J. W., Chapin, R. E., Haenen, B., Jacobs, A. C., Piersma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+strategies+for+embryo-fetal+toxicity+of+human+pharmaceuticals.+Animal+models+vs.+in+vitro+approaches%3A+A+workshop+report%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Testing strategies for embryo-fetal toxicity of human pharmaceuticals. Animal models vs. in vitro approaches: A workshop report.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 63 (1), 115-123 (2012).</li>
<li>Kanno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luciferase+assay+system+to+monitor+fibroblast+growth+factor+signal+disruption+in+human+iPSCs%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Luciferase assay system to monitor fibroblast growth factor signal disruption in human iPSCs.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101439(2022).</li>
<li>Kanno, S., Okubo, Y., Kageyama, T., Yan, L., Fukuda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+fibroblast+growth+factor+signal+disruptions+in+human+iPS+cells+for+prediction+of+teratogenic+toxicity+of+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Integrated fibroblast growth factor signal disruptions in human iPS cells for prediction of teratogenic toxicity of chemicals.</a> J Biosci Bioeng. 133 (3), 291-299 (2022).</li>
<li>Kanno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+developmental+toxicity+assay+based+on+human+iPSC+reporter+to+detect+FGF+signal+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Establishment of a developmental toxicity assay based on human iPSC reporter to detect FGF signal disruption.</a> iScience. 25 (2), 103770(2022).</li>
<li>Miano, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+serum+response+factor+in+the+pathogenesis+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Role of serum response factor in the pathogenesis of disease.</a> Lab Invest. 90 (9), 1274-1284 (2010).</li>
<li>Purvis, J. E., Lahav, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encoding+and+decoding+cellular+information+through+signaling+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Encoding and decoding cellular information through signaling dynamics.</a> Cell. 152 (5), 945-956 (2013).</li>
<li>Paradis, F. -H., Hales, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+valproic+acid+inhibits+chondrogenesis+and+osteogenesis+in+mid-organogenesis+mouse+limbs%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Exposure to valproic acid inhibits chondrogenesis and osteogenesis in mid-organogenesis mouse limbs.</a> Toxicol Sci. 131 (1), 234-241 (2013).</li>
<li>Bosman, S. L., Sonnen, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+oscillations+in+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling oscillations in embryonic development.</a> Curr Top Dev Biol. 149, 341-372 (2022).</li>
<li>Hall, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+luciferase+reporter+from+a+deep+sea+shrimp+utilizing+a+novel+imidazopyrazinone+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Engineered luciferase reporter from a deep sea shrimp utilizing a novel imidazopyrazinone substrate.</a> ACS Chem Biol. 7 (11), 1848-1857 (2012).</li>
<li>DeKelver, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomics%2C+proteomics%2C+and+regulatory+DNA+analysis+in+isogenic+settings+using+zinc+finger+nuclease-driven+transgenesis+into+a+safe+harbor+locus+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Functional genomics, proteomics, and regulatory DNA analysis in isogenic settings using zinc finger nuclease-driven transgenesis into a safe harbor locus in the human genome.</a> Genome Res. 20 (8), 1133-1142 (2010).</li>
<li>Hales, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+mutagenicity+and+teratogenicity+of+cyclophosphamide+and+its+active+metabolites%2C+4-hydroxycyclophosphamide%2C+phosphoramide++mustard%2C+and+acrolein%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of the mutagenicity and teratogenicity of cyclophosphamide and its active metabolites, 4-hydroxycyclophosphamide, phosphoramide mustard, and acrolein.</a> Cancer Res. 42 (8), 3016-3021 (1982).</li>
<li>Genschow, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ECVAM+international+validation+study+on+in+vitro+embryotoxicity+tests%3A+Results+of+the+definitive+phase+and+evaluation+of+prediction+models%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The ECVAM international validation study on in vitro embryotoxicity tests: Results of the definitive phase and evaluation of prediction models.</a> Altern Lab Anim. 30 (2), 151-176 (2002).</li>
<li>Suzuki, N., Ando, S., Yamashita, N., Horie, N., Saito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+novel+high-throughput+embryonic+stem+cell+tests+with+new+molecular+markers+for+screening+embryotoxic+chemicals+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of novel high-throughput embryonic stem cell tests with new molecular markers for screening embryotoxic chemicals in vitro.</a> Toxicol Sci. 124 (2), 460-471 (2011).</li>
<li>Uibel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ReProGlo%3A+A+new+stem+cell-based+reporter+assay+aimed+to+predict+embryotoxic+potential+of+drugs+and+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">ReProGlo: A new stem cell-based reporter assay aimed to predict embryotoxic potential of drugs and chemicals.</a> Reprod Toxicol. 30 (1), 103-112 (2010).</li>
<li>Sanz-Ezquerro, J. J., Münsterberg, A. E., Stricker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+Signaling+pathways+in+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Editorial: Signaling pathways in embryonic development.</a> Front Cell Dev Biol. 5, 76(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL Mikrosantrifüj Tüpü</td><td>FastGene</td><td>FG-MCT015C</td><td>Test kimyasal hazırlığı</td></tr><tr><td>15mL santrifüj tüpü</td><td>VIOLAMO</td><td>1-3500-21</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>8-şeritli PCR Tüp</td><td>Watson</td><td>137-333C</td><td>Test kimyasal hazırlığı</td></tr><tr><td>96 Kuyu Beyaz/Şeffaf Alt Plaka, TC Yüzeyi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>165306</td><td>Hücre kültürü ve lüminesans ölçümleri</td></tr><tr><td>Siyah Mikroplaka Düz Taban 96Well</td><td>ASONE</td><td>3-3321-04</td><td>Sitotoksisite testlerinde lüminesans ölçümü için</td></tr><tr><td>NEFES AL</td><td>TOHO</td><td>BERM-2000</td><td>Gaz geçirimli sızdırmazlık filmi</td></tr><tr><td>CellTiter-Glo Lüminesans Hücre Yaşam Testi</td><td>Promega</td><td>G7572</td><td>Sitotoksisite testi</td></tr><tr><td>Santrifüj 5702 R</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Santrifüjleme</td></tr><tr><td>ClipTip 300, Filtreli, Steril, Rack</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420513</td><td></td></tr><tr><td>ClipTip 50, Filtreli, Steril, Rack</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420253</td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 FL Otomatik Hücre Sacı</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Hücre sayımı</td></tr><tr><td>Kontes Hücresi Sayma Odası Slaytları</td><td>Invitrogen</td><td>C10312</td><td>Hücre sayımı</td></tr><tr><td>Kültür Elbette DMSO&nbsp;</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>031-24051</td><td>Kimyasallar için çözücü</td></tr><tr><td>CultureSure Y-27632</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>036-24023</td><td>iPSC tohumlaması için ROCK inhibitörü</td></tr><tr><td>DMEM/F12 HEPES, fenol kırmızısı yok</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11039-021</td><td>iPS hücre kültürü için kaplama</td></tr><tr><td>F1-ClipTip Çok Kanallı Pipetler, 30'dan 300'e kadar ve mikro; L</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4661180N</td><td></td></tr><tr><td>F1-ClipTip Çok Kanallı Pipetler, 5'ten 50'ye ve mikro; L</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4661160N</td><td></td></tr><tr><td>Filtre çipi</td><td>Watson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Geltrex LDEV-Serbest Azaltılmış Büyüme Faktörü Baz Zar Matrisi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1413202</td><td>iPS hücre kültürü için kaplama</td></tr><tr><td>HIENAI Mat 01R</td><td>COSMO BIYOGRAFİSİ</td><td>HMAT01R</td><td>Hücre kültürü işlenirken plaka sıcaklığı stabilitesini korumak için</td></tr><tr><td>HIENAI Tüp Isıtıcı GX01</td><td>COSMO BIYOGRAFİSİ</td><td>TWGX013</td><td>Deneysel taşıma sırasında ortamı sıcak tutmak için</td></tr><tr><td>İnsan Isı Stabil bFGF Rekombinant Protein</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PHG0367</td><td>Raporlayıcı testi için FGF uyarısı</td></tr><tr><td>İnsan İndüklenen Pluripotent Kök (iPS) Hücreleri</td><td>201B7 (RCB Cat# HPS0063, RRID: CVCL_A324)</td><td>RIKEN BRC Hücre Bankası</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka çalkalayıcı</td><td>TAITEC</td><td>0089532-000</td><td>Sitosisite testi için plaka sallanma</td></tr><tr><td>Çok plakalı okuyucu</td><td>PerkinElmer</td><td>ARVO X4</td><td>Lüminesans ölçümü</td></tr><tr><td>Nano-Glo Endurazin Canlı Hücre Substratı</td><td>Promega</td><td>N2571</td><td>Lüminesans altlığı</td></tr><tr><td>PBS (-)&nbsp;</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>166-23555</td><td>Hücre kulüteri</td></tr><tr><td>Parafilim</td><td>BİR OLARAK</td><td>65-1681-93</td><td>Kaplama plakası için depolanır</td></tr><tr><td>Pipetto</td><td></td><td>Eppendorf</td><td></td></tr><tr><td>WSL-1563 KronosHT</td><td>ATTO</td><td>3510140</td><td>Gerçek zamanlı lüminesans ölçüm sistemi&nbsp;</td></tr><tr><td>Depo</td><td>BMBio</td><td>BM-0850-1</td><td></td></tr><tr><td>STEMdif APEL2 Medium&nbsp;</td><td>STEMCELL Teknolojileri</td><td>ST-05275</td><td>Analiz ortamı</td></tr><tr><td>StemFlex Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A3349401</td><td>Bakım ortamı</td></tr><tr><td>Steril Su, Endotoksin Içermeyen</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>196-15645</td><td>iPS hücre kültürü için nem kontrolü</td></tr><tr><td>Doku Kültür Plakası VTC-P6</td><td>VIOLAMO</td><td>2-8588-01</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>TrypL Select Enzyme (1X), fenol kırmızısı yok</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12563011</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Valproik asit</td><td>FUJIFILM Wako</td><td>227-01071</td><td>Test kimyasalı</td></tr></tbody></table>

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerde fibroblast büyüme faktörü sinyal bozulmasının gerçek zamanlı izlenmesine dayalı gelişimsel toksisite testi

Developmental Toxicity Assay Based on Real-Time Monitoring of Fibroblast Growth Factor Signal Disruption in Human Induced Pluripotent Stem Cells

Deneyimlerimize göre, hücre morfolojisi, bir testin doğru yapılıp yapılmadığını belirlemek için yararlıdır. Şekil 2A , kimyasal maruziyetten hemen önce ve sonra hücrelerin tipik konfokal mikroskopi görüntülerini göstermektedir. Testin sonunda, kuyucukların neredeyse tüm yüzeyi hücrelerle kaplıdır. Şekil 2B , canlı/ölü hücre boyama görüntülerini göstermektedir. Propidyum iyodür (PI) ile boyanan ölü hücrelerin sayısı, kimyasal maruziyetten sonra artar; bununla birlikte, hücre canlılığı en az P'dir ve hemen hemen tüm hücreler kalsein-ile boyanır.
Tablo 1'de daha önceki çalışmalarımızda kullanılan test kimyasallarılistelenmiştir 7,8. Bu çalışmalar, Devtox kimyasallarının, insan iPS hücrelerinde FGF sinyalinin bozulmasına dayalı olarak gelişmiş doğrulukla ayırt edilebileceğini göstermektedir. Önemli bir bulgu, sinyal aktivitesinin sürekli izlenmesinin kritik olduğudur çünkü zaman içinde dinamik olarak değişir. Gerçek zamanlı lüminesans ölçüm sisteminin kullanılması, daha az ölçüm işçiliği ile önemli ölçüde daha yüksek zaman çözünürlüğü sağlar. Burada, gerçek zamanlı bir izleme sistemi kullanan bir protokolü açıklıyoruz.
Şekil 3A , test kimyasalı olmadan aynı koşullar altında altı kopya kuyuda 48 saat boyunca lüminesans yoğunluğundaki değişiklikleri göstermektedir. Altı eğri neredeyse hizalıdır ve kuyudan kuyuya iyi tekrarlanabilirliği gösterir. Önceki çalışmalarımızda 24 saatlik manuel ölçümlerde net olarak tanımlanmamış olsa da, 48 saatlik gerçek zamanlı ölçümlerde iki farklı tepe noktası - FGF ligandı ilavesinden hemen sonra bir ilk tepe noktası ve yaklaşık 24 saatte ikinci bir tepe noktası - ortaya çıkar. Şekil 3B , iyi bilinen bir gelişimsel toksik madde olan valproik aside (VPA) maruz kaldığında lüminesans yoğunluğundaki değişiklikleri göstermektedir. VPA, nöral tüpte, kalpte ve uzuvda kusurlara neden olan bir histon deasetilaz inhibitörüdür¹¹. VPA, FGF sinyalini konsantrasyona bağlı bir şekilde bozar. Otomatik gerçek zamanlı ölçüm sistemi, sinyal dinamiklerini manuel ölçümlerden daha doğru bir şekilde yakaladı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig1v2.jpg"> 
Şekil 1: FGF/SRF sinyal bozulma testi. (A) FGF/SRF sinyal raportör hücreleri oluşturmak için insan iPS hücrelerinin genetik mühendisliği. İnsan fosfogliserat kinaz promotörünün kontrolü altında serum yanıt elemanının aşağı akışında Nluc, hedeflenen nakavt için homolog kollar ve puromisin direnç geni içeren bir plazmit oluşturuldu. Puromisin seçimini takiben SRE-Nluc raportör hücreleri oluşturuldu. (B) Testin zaman çizelgesi. Raportör hücreler 96 oyuklu bir plakaya ekildi ve tüm yüzeyi kaplayacak şekilde 4 gün boyunca büyütüldü. Lüminesan substrat ve test kimyasalı, ölçüme başlamadan sırasıyla 3 ve 1 saat önce eklendi. FGF ligandı ekleme süresi 0 saat olarak ayarlandı ve lüminesans yoğunluğu takip eden 48 saat boyunca sürekli olarak ölçüldü . Sinyal dinamikleri, test kimyasallarına maruz kalan ve maruz kalmayan hücrelerde kaydedildi ve bir kimyasalın neden olduğu sinyal bozulmasının bir ölçüsü olarak eğriler arasındaki alanı tahmin etmek için araç kontrolüne normalleştirildi. Her kimyasal için farklı konsantrasyonlarda ABC değerleri elde edildi ve toplamları hesaplandı. Alıcı çalışma karakteristik eğrisi analizi, eşiği belirlemek için test edilen bilinen tüm gelişimsel toksik maddeler kullanılarak gerçekleştirildi. Kısaltmalar: iPS = indüklenmiş pluripotent kök hücreler; RLU = Bağıl Işık Birimi; AUC = Eğrinin altındaki alan; FGF = fibroblast büyüme faktörü; SRF = serum yanıt faktörü; SRE = serum yanıt elemanı; HA = homolog kol; L = sol; R = sağ; PuroR = puromisin direnç geni; hPGK = insan fosfogliserat kinaz; Nluc = NanoLuc lusiferaz; ROC = alıcı çalışma karakteristiği; ABC = eğriler arasındaki alan. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig1v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig2.jpg"> 
Şekil 2: Hücre morfolojisi ve canlı/ölü hücre boyama. (A) Bir test kimyasalına maruz kalmadan önce (4. gün) ve sonra (6. gün) hücrelerin konfokal mikroskobik görüntüleri. Testten sonra kuyuların neredeyse tüm yüzeyini kaplayan kalan hücreler, başarılı bir test çalışmasının göstergesidir. Testin sonunda neredeyse tam kuyu kapsamı, başarılı bir çalışmayı gösterir. (B) Bir test kimyasalına maruz kalmadan önce ve sonra canlı/ölü hücre boyama. Canlı hücreler Calcein-ile yeşile, ölü hücreler propidyum iyodür (PI) ile kırmızıya boyandı. kalsein-(yeşil) ve ölü hücreler propidyum iyodür (PI, kırmızı) ile boyandı. Ölü hücrelerin oranı, toplam hücrelerin &lt; P'sinden az olmalıdır. Ölçek çubukları = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68910/68910fig3.jpg"> 
Şekil 3: Lüminesans yoğunluk dinamiğinin tipik örnekleri. (A) Zaman süreci lüminesansı, gerçek zamanlı bir lüminesans ölçüm sistemi kullanılarak ölçülen FGF ligand stimülasyonundan sonra lüminesansın zaman sürecini değiştirir. Lüminesans yoğunluğu 48 saat boyunca her 22 dakikada bir izlendi. Altı renkli çizgi, farklı kuyulardan gelen sinyalleri temsil eder. (B) Manuel ve gerçek zamanlı lüminesans ölçümlerinin valproik asit ile karşılaştırılması. Her iki ölçüm yönteminde de sinyal bozulması gözlemlenirken, gerçek zamanlı izleme, ikinci tepe noktasındaki gelişmiş sinyali daha net bir şekilde yakaladı. Kısaltmalar: RLU = Bağıl Işık Birimi; VPA = valproik asit; FGF = fibroblast büyüme faktörü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68910/68910_Table%201.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:font-size="8px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Test Kimyasalı</td>
			<td>Kısaltma</td>
			<td>Cas NO.</td>
			<td>Hayvan çalışması (önceki çalışma)</td>
			<td>In vitro çalışma (bu çalışma)</td>
			<td>ABC değerlerinin toplamı</td>
			<td>Maksimum Konsantrasyon (μg/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>all-trans-Retinoik asit</td>
			<td>ATRA</td>
			<td>302-79-4</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>65.9</td>
			<td>0.0100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hidroksiüre</td>
			<td>HU</td>
			<td>127-07-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>63.3</td>
			<td>149</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metoksiasetik asit</td>
			<td>MEMİŞ</td>
			<td>625-45-6</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>225</td>
			<td>683</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metil cıva klorür</td>
			<td>MeHg</td>
			<td>115-09-3</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>77.7</td>
			<td>1.20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metotreksat hidrat</td>
			<td>MTX</td>
			<td>133073-73-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>80.5</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodyum salisilat</td>
			<td>SA</td>
			<td>54-21-7</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>38.7</td>
			<td>666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valproik asit</td>
			<td>VPA</td>
			<td>99-66-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>63.3</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Aminonikotinamid</td>
			<td>6-BİR</td>
			<td>329-89-5</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>24.9</td>
			<td>1.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borik asit</td>
			<td>BA</td>
			<td>10043-35-3</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>24.2</td>
			<td>250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Bromo-2'-deoksiüridin</td>
			<td>BrdU</td>
			<td>59-14-3</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>83.9</td>
			<td>50.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,5-Dimetil-2,4-oksazolidindion</td>
			<td>DMO</td>
			<td>695-53-4</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>50.3</td>
			<td>840</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lityum klorür</td>
			<td>LiCl</td>
			<td>7447-41-8</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>29.8</td>
			<td>250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Florourasil</td>
			<td>5-FU</td>
			<td>51-21-8</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>92.4</td>
			<td>2.65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siklofosfamid monohidrat</td>
			<td>EBM</td>
			<td>6055-19-2</td>
			<td>P</td>
			<td>N</td>
			<td>19.1</td>
			<td>400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>İmatinib mesilat</td>
			<td>IMA</td>
			<td>220127-57-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>42.4</td>
			<td>12.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenalidomid</td>
			<td>LEN</td>
			<td>191732-72-6</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>94.7</td>
			<td>35.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pomalidomid</td>
			<td>POM</td>
			<td>19171-19-8</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>50.9</td>
			<td>2.50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talidomid</td>
			<td>THA</td>
			<td>50-35-1</td>
			<td>P</td>
			<td>P</td>
			<td>53.3</td>
			<td>12.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Akrilamid</td>
			<td>AcA</td>
			<td>79-06-01</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>37.1</td>
			<td>454</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Kafur</td>
			<td>CAM</td>
			<td>464-49-3</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>27.5</td>
			<td>50.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difenhidramin hidroklorür</td>
			<td>DHM</td>
			<td>147-24-0</td>
			<td>N</td>
			<td>P</td>
			<td>68.2</td>
			<td>262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimetil pthalat</td>
			<td>DMP'nin</td>
			<td>131-11-3</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>24.4</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penisilin G sodyum tuzu</td>
			<td>PenG</td>
			<td>69-57-8</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>22.1</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodyum sakarin</td>
			<td>SAC</td>
			<td>82385-42-0</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>34.0</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asetaminofen</td>
			<td>ORTALAMA</td>
			<td>103-90-2</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>22.3</td>
			<td>20.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amoksisilin trihidrat</td>
			<td>AMX</td>
			<td>61336-70-7</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>28.4</td>
			<td>25.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Simetidin</td>
			<td>SANTİM</td>
			<td>51481-61-9</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>25.3</td>
			<td>30.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eritromisin</td>
			<td>ERY</td>
			<td>114-07-8</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>20.0</td>
			<td>15.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hidroklorotiyazid</td>
			<td>HCTZ</td>
			<td>58-93-5</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>21.9</td>
			<td>20.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sülfasalazin</td>
			<td>SSZ</td>
			<td>599-79-1</td>
			<td>N</td>
			<td>N</td>
			<td>30.8</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimyasal</td>
			<td>AUC</td>
			<td>Eşik</td>
			<td>Duyarlılık</td>
			<td>Özgüllüğü</td>
			<td>Doğruluk</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 madde</td>
			<td>0.819</td>
			<td>37.9</td>
			<td>0.778</td>
			<td>0.917</td>
			<td>0.833</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: Hayvan deneylerinde sınıflandırılan Devtox ve Devtox olmayan kimyasallar ve FGF sinyal kesintisi olan ve olmayan sonuçlar tahmin edilmektedir. Kısaltmalar: P = pozitif (Devtox); N = negatif (Devtox olmayan).

Developmental toxicity (Devtox) is typically evaluated in animal models. However, there are challenges in ensuring accuracy, such as false negatives due ...

developmental-toxicity-assay-based-on-real-time-monitoring-fibroblast

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Biz, insan faktörleri Oct4, Sox2, Nanog ve Lin28 lentivirüs aracılı teslim kullanarak insan somatik hücre alınan uyarılmış pluripotent kök hücreleri üretimi için protokol göstermektedir. Pluripotency morfolojisi ve embriyonik kök (ES) hücre-spesifik belirteçler varlığı teyit edilmiştir.

Stemgent İnsan TF lentivirüs İnsan Fibroblastlar yeniden programlanması Bağlı Pluripotent Kök Hücre Üretimi ayarla

Biz retroviral Oct3 / 4, Sox2, Klf4 ve c-myc (OSKM) kodlayan vektörler ve canlı boyama ile doğru yeniden programlanması hiPSC belirlenmesi kullanarak insan kaynaklı pluripotent kök hücreler (hiPSC) Tra-içine insan somatik hücre verimli yeniden programlama için bir protokol sunmak 1-81 antikor.

İnsan İsteyerek Pluripotent Kök Hücre seçme ve ayırma Kolonileri Yetişkin Fibroblastlar gelen reprogrammed

Fare embriyonik fibroblast (MEFS) kalitesi, CF-1 gibi farenin sağ suşu tarafından dikte edilir. Bu elde edilen Pluripotency destekleyici MEFS ve klimalı ortam (CM) işbirliği içinde kendini yenileyen ve pluripotency korumak için aktivin / Düğüm ve FGF yolları için gerekli aktivin A, Gremlin ve Tgfβ1 optimal konsantrasyonu içermelidir.

Kültürleme İnsan Embriyonik ve Bağlı Pluripotent Kök Hücrelerinin için uygundur Fare embriyonik fibroblast hücreleri hazırlanması

protokoller, insan embriyonik kök hücreleri ve transcriptome çalışmalarına dayalı iki in vitro gelişimsel toksisite test sistemleri (UKK ve UKN1) açıklar. test sistemleri, insan gelişimsel toksisite tehlike tahmin ve hayvan çalışmaları, maliyet ve kimyasal güvenlik testi için gerekli süreyi azaltmak için katkıda bulunabilir.

Kimyasal Güvenlik Tarama ve Sistem Biyolojisi Veri Üretimi Gelişim Toksisite Tahliller Tabanlı İnsan Pluripotent Kök Hücre

Bu protokol, ek eksojen takviye veya hPSC'ye özgü sentetik substrat olmaksızın jelatin kaplı bir tabakta yalnızca insan plasentasından türetilen şartlandırılmış ortamı kullanarak insan pluripotent kök hücrelerini (hPSC'ler) çoğaltmak için basit ve etkili bir yol sağlar.

A Novel Kültür Modeli İnsan Pluripotent için Plasenta klimalı Medyada Jelatin üzerinde hücre çoğalma Kök

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücreler (hiPSC), ilaç ve kimyasal tarama için ve nörotoksisiteyi de içeren toksisite testi için yeni in vitro modellerin geliştirilmesi için güçlü bir araç olarak düşünülür. Burada, hiPSC'lerin nöronlara ve glia'ya diferansiyelleştirilmesi için ayrıntılı bir protokol anlatılmıştır.

Nörotoksisite Testi İçin İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Nöronlar ve Glia Karışık Kültürlerine Ayrıştırılması Protokolü

Burada sunulan Protokolü küçük moleküller karaciğer hastalığının tedavisi için tanımlamak için bir platform açıklar. Adım adım açıklamasını nasıl iPSCs hücrelere 96-şey plakaları hepatosit özellikleri ile ayırt etmek ve küçük moleküller için potansiyel terapötik etkinlik ile ekran için hücreleri kullanmak için ayrıntılı sunulmaktadır.

İnsan kullanarak Pluripotent kök hücre kaynaklı hepatosit benzeri hücreler indüklenen ilaç bulma için

Burada biz insan birincil fibroblastlar değiştirilmiş mRNA'ların programlama faktörler kodlama kullanarak indüklenmiş pluripotent kök hücre yeniden programlamak için klinik, yüksek verimli, besleyici-Alerjik bir yöntemi açıklamak ve olgun mikroRNA-367/302 taklit eder. Ayrıca programlama verimlilik, değerlendirmek için yöntem klonal IPSC kolonileri genişletin ve pluripotency işaretin TRA-1-60 ifade onaylamak bulunmaktadır.

RNA tabanlı insan birincil fibroblastlar indüklenmiş Pluripotent kök hücre yeniden programlama

Hücre yeniden programlama, pluripotent hücre durumunu düzenleyen ve koruyan anahtar genlerin tanıtılmasını gerektirir. Açıklanan protokol, insan dermal fibroblastlarından viral/entegre yöntemler olmadan ancak modifiye edilmeyen RNA'lar (NM-RNA) kullanarak hücresel savunma mekanizmalarını azaltan immün kaçırma faktörleri ile birlikte indüklenen pluripotent kök hücrelerin (iPSCs) kolonilerinin oluşmasını sağlar.

Erişkin İnsan Dermal Fibroblastlarının Abdominal Deriden İzolasyon ve İndüklenen Pluripotent Kök Hücrelerin Indüklenen Alacalı Kök Hücrelerin Indükleyici Olmayan Yöntemle Üretilmesi

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositler (hiPSC-CM'ler), ilaca bağlı kardiyotoksisite taraması ve hastalık modellemesi için umut verici bir in vitro model olarak ortaya çıkmıştır. Burada, hiPSC-CM'lerin kontraktilitesini ve elektrofizyolojisini ölçmek için bir protokol detaylandırıyoruz.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyositler Üzerindeki Mikroelektrot Dizisi ve Yama Kelepçesi Kayıtlarının Teknik Uygulamaları

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositler (hiPSC-CM'ler), klinik öncesi kardiyotoksisite taraması için hayvanların kullanılmasına bir alternatif sunar. Preklinik toksisite taramasında hiPSC-CM'lerin yaygın olarak benimsenmesinin bir sınırlaması, hücrelerin olgunlaşmamış, fetal benzeri fenotipidir. Burada hiPSC-CM'lerin sağlam ve hızlı olgunlaşması için protokoller sunulmaktadır.

Olgun İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyosit Monokatmanları Kullanılarak Yüksek Verimli Kardiyotoksisite Taraması

Keşfedin, insan iPS hücrelerinde FGF/SRF sinyal bozulmasını gerçek zamanlı izleyerek gelişimsel toksisiteyi değerlendiren yeni bir hücre bazlı analiz yöntemi. Bu yöntem, hayvan deneyleri olmadan teratojenik kimyasalları yüksek doğrulukla tespit eder.

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerde fibroblast büyüme faktörü sinyal bozulmasının gerçek zamanlı izlenmesine dayalı gelişimsel toksisite testi (Video) | JoVE Journal

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerde fibroblast büyüme faktörü sinyal bozulmasının gerçek zamanlı izlenmesine dayalı gelişimsel toksisite testi

Daha fazla video keşfet