Name: Çok noktalı tioflavin t floresansı kullanılarak mutant P53 V157F meme kanseri hücrelerinde agregasyona meyilli davranışın tespiti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T14:57:00.000+00:00
Duration: 4 min 56 s
Description: Keşfedin mutant p53 V157F meme kanseri hücrelerinde agregasyon eğilimini çok noktalı tioflavin T floresansı ile. Bu yöntem protein agregasyonunun doğru tespitini sağlar ve kanser araştırmalarında terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Binayke, A., Mishra, S., Suman, P., Das, S., Chander, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Awakening+the+%26%2334%3Bguardian+of+genome%26%2334%3B%3A+Reactivation+of+mutant+p53%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemother+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Awakening the &#34;guardian of genome&#34;: Reactivation of mutant p53.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 83 (1), 1-15 (2019).</li>
<li>Chen, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+affordable+method+to+create+nonsense+mutation+clones+of+p53+for+studying+the+premature+termination+codon+readthrough+activity+of+ptc124%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">A simple and affordable method to create nonsense mutation clones of p53 for studying the premature termination codon readthrough activity of ptc124.</a> Biomedicines. 11 (5), 1310(2023).</li>
<li>Rangel, L. P., Costa, D. C., Vieira, T. C., Silva, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aggregation+of+mutant+p53+produces+prion-like+properties+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prion%22%5BJournal%5D)">The aggregation of mutant p53 produces prion-like properties in cancer.</a> Prion. 8 (1), 75-84 (2014).</li>
<li>Kim, S., An, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+p53+isoforms+and+aggregations+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Role of p53 isoforms and aggregations in cancer.</a> Medicine (Baltimore). 95 (26), e3993(2016).</li>
<li>Zhou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain-of-function+mutant+p53+promotes+cell+growth+and+cancer+cell+metabolism+via+inhibition+of+ampk+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Gain-of-function mutant p53 promotes cell growth and cancer cell metabolism via inhibition of ampk activation.</a> Mol Cell. 54 (6), 960-974 (2014).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain-of-function+mutant+p53+in+cancer+progression+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Gain-of-function mutant p53 in cancer progression and therapy.</a> J Mol Cell Biol. 12 (9), 674-687 (2020).</li>
<li>De Oliveira, G. aP., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+status+of+p53+oligomeric+and+aggregation+states+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">The status of p53 oligomeric and aggregation states in cancer.</a> Biomolecules. 10 (4), 548(2020).</li>
<li>Wang, H., Guo, M., Wei, H., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+p53+pathways%3A+Mechanisms%2C+structures%2C+and+advances+in+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeting p53 pathways: Mechanisms, structures, and advances in therapy.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 92(2023).</li>
<li>Sulatskaya, A. I., Kuznetsova, I. M., Turoverov, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+thioflavin+t+with+amyloid+fibrils%3A+Stoichiometry+and+affinity+of+dye+binding%2C+absorption+spectra+of+bound+dye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Interaction of thioflavin t with amyloid fibrils: Stoichiometry and affinity of dye binding, absorption spectra of bound dye.</a> J Phys Chem B. 115 (39), 11519-11524 (2011).</li>
<li>Cai, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nampt+inhibitor+and+p73+activator+represses+p53+r175h+mutated+HNSCC+cell+proliferation+in+a+synergistic+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Nampt inhibitor and p73 activator represses p53 r175h mutated HNSCC cell proliferation in a synergistic manner.</a> Biomolecules. 12 (3), 438(2022).</li>
<li>Cai, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorophyllides+repress+gain-of-function+p53+mutated+hnscc+cell+proliferation+via+activation+of+p73+and+repression+of+p53+aggregation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Basis+Dis%22%5BJournal%5D)">Chlorophyllides repress gain-of-function p53 mutated hnscc cell proliferation via activation of p73 and repression of p53 aggregation in vitro and in vivo.</a> Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 1871 (3), 167662(2025).</li>
<li>Wu, K. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+anticancer+activity+of+hsp70+inhibitor+and+doxorubicin+in+gain-of-function+mutated+p53+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Synergistic anticancer activity of hsp70 inhibitor and doxorubicin in gain-of-function mutated p53 breast cancer cells.</a> Biomedicines. 13 (5), 1034(2025).</li>
<li>Nasir, I., Linse, S., Cabaleiro-Lago, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+filter-trap+assay+for+amyloid+fibril+formation+kinetics+in+complex+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fluorescent filter-trap assay for amyloid fibril formation kinetics in complex solutions.</a> ACS Chem Neurosci. 6 (8), 1436-1444 (2015).</li>
<li>Goldsbury, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+structure+and+assembly%3A+Insights+from+scanning+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Amyloid structure and assembly: Insights from scanning transmission electron microscopy.</a> J Struct Biol. 173 (1), 1-13 (2011).</li>
<li>Kayed, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibril+specific%2C+conformation+dependent+antibodies+recognize+a+generic+epitope+common+to+amyloid+fibrils+and+fibrillar+oligomers+that+is+absent+in+prefibrillar+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Fibril specific, conformation dependent antibodies recognize a generic epitope common to amyloid fibrils and fibrillar oligomers that is absent in prefibrillar oligomers.</a> Mol Neurodegener. 2, 18(2007).</li>
<li>Xue, C., Lin, T. Y., Chang, D., Guo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioflavin+t+as+an+amyloid+dye%3A+Fibril+quantification%2C+optimal+concentration+and+effect+on+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22R+Soc+Open+Sci%22%5BJournal%5D)">Thioflavin t as an amyloid dye: Fibril quantification, optimal concentration and effect on aggregation.</a> R Soc Open Sci. 4 (1), 160696(2017).</li>
<li>Biancalana, M., Koide, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+of+thioflavin-t+binding+to+amyloid+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism of thioflavin-t binding to amyloid fibrils.</a> Biochim Biophys Acta. 1804 (7), 1405-1412 (2010).</li>
<li>Yang-Hartwich, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+protein+aggregation+promotes+platinum+resistance+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">P53 protein aggregation promotes platinum resistance in ovarian cancer.</a> Oncogene. 34 (27), 3605-3616 (2015).</li>
<li>Lei, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+allosteric+mechanisms+of+the+lung-enriched+p53+mutants+v157f+and+r158l%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Insights into allosteric mechanisms of the lung-enriched p53 mutants v157f and r158l.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), 10100(2022).</li>
<li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry A. 95 (2), 219-226 (2019).</li>
<li>Mansoury, M., Hamed, M., Karmustaji, R., Al Hannan, F., Safrany, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+edge+effect%3A+A+global+problem.+The+trouble+with+culturing+cells+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">The edge effect: A global problem. The trouble with culturing cells in 96-well plates.</a> Biochem Biophys Rep. 26, 100987(2021).</li>
<li>Yoshimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+crystal-like+amyloid+fibrils+and+glass-like+amorphous+aggregates+from+their+kinetics+of+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinguishing crystal-like amyloid fibrils and glass-like amorphous aggregates from their kinetics of formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (36), 14446-14451 (2012).</li>
<li>Yang, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesoscopic+protein-rich+clusters+host+the+nucleation+of+mutant+p53+amyloid+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mesoscopic protein-rich clusters host the nucleation of mutant p53 amyloid fibrils.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (10), e2015618118(2021).</li>
<li>Hackl, E. V., Darkwah, J., Smith, G., Ermolina, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+acidic+and+basic+ph+on+thioflavin+t+absorbance+and+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Effect of acidic and basic ph on thioflavin t absorbance and fluorescence.</a> Eur Biophys J. 44 (4), 249-261 (2015).</li>
<li>Bom, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+p53+core+domain+is+a+molten+globule+at+low+ph%3A+Functional+implications+of+a+partially+unfolded+structure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The p53 core domain is a molten globule at low ph: Functional implications of a partially unfolded structure.</a> J Biol Chem. 285 (4), 2857-2866 (2010).</li>
<li>Ano Bom, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutant+p53+aggregates+into+prion-like+amyloid+oligomers+and+fibrils%3A+Implications+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mutant p53 aggregates into prion-like amyloid oligomers and fibrils: Implications for cancer.</a> J Biol Chem. 287 (33), 28152-28162 (2012).</li>
<li>Muller, P., Ceskova, P., Vojtesek, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hsp90+is+essential+for+restoring+cellular+functions+of+temperature-sensitive+p53+mutant+protein+but+not+for+stabilization+and+activation+of+wild-type+p53%3A+Implications+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Hsp90 is essential for restoring cellular functions of temperature-sensitive p53 mutant protein but not for stabilization and activation of wild-type p53: Implications for cancer therapy.</a> J Biol Chem. 280 (8), 6682-6691 (2005).</li>
<li>Arsic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%94133p53%CE%B2+isoform+pro-invasive+activity+is+regulated+through+an+aggregation-dependent+mechanism+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Δ133p53β isoform pro-invasive activity is regulated through an aggregation-dependent mechanism in cancer cells.</a> Nat Commun. 12 (1), 5463(2021).</li>
<li>Zhao, L., Punga, T., Sanyal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delta133p53alpha+and+delta160p53alpha+isoforms+of+the+tumor+suppressor+protein+p53+exert+dominant-negative+effect+primarily+by+co-aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Delta133p53alpha and delta160p53alpha isoforms of the tumor suppressor protein p53 exert dominant-negative effect primarily by co-aggregation.</a> Elife. 14, RP106469(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96 kuyu kültür plakası</td><td>Basitçe</td><td>PC396-0100</td><td></td></tr><tr><td>Karşı Kaydırma</td><td>Invitrogen</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL Otomatik Hücre Sacı</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>dPBS</td><td>Basitçe</td><td>CC704-0500</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tüpü</td><td>Basitçe</td><td>PC101-5000</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>AAT Bioquest</td><td>17530</td><td></td></tr><tr><td>SpectraMax iD3</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>735-0391&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Thioflavin T</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3516</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Mavisi</td><td>Invitrogen</td><td>T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

Çok noktalı tioflavin t floresansı kullanılarak mutant p53 v157f meme kanseri hücrelerinde agregasyona meyilli davranışın tespiti

Detection of Aggregation-Prone Behavior in Mutant P53 V157F Breast Cancer Cells Using Multipoint Thioflavin T Fluorescence

Çok noktalı tioflavin t floresansı kullanılarak mutant P53 V157F meme kanseri hücrelerinde agregasyona meyilli davranışın tespiti

The tumor suppressor p53, encoded by the TP53 gene, plays a central role in maintaining genomic stability. TP53 mutations, particularly hotspot variants, ...

detection-aggregation-prone-behavior-mutant-p53-v157f-breast-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, proteazom aktivitesini bloke eden, yanlış katlanmış, mutant proteinlerin, bir floresan etikete kaynaşmış, ubikitine bağımlı proteazomal bozunmaya uğramasını önleyen proteazom inhibitörleri kullanılarak hücre bazlı bir protein agregasyon testini gösteriyoruz, bu da hücre sitoplazması içinde birikmelerine yol açar. Protein agregatları daha sonra floresan mikroskobu ile görselleştirilir ve ölçülür.

Protein Agregat Oluşum Deneyi: Proteazom İnhibitörü ile İndüksiyon Üzerine Kültürlenmiş Hücrelerde Protein Agregasyonunu Tespit Etmek ve Ölçmek İçin Bir Yöntem

Bu video, genetiği değiştirilmiş Drosophila beyinlerindeki protein agregatlarının görüntülenmesini ve miktarının belirlenmesini göstermektedir. Beyinler sabitlenir, yıkanır ve montajdan önce solma önleyici bir madde ile muamele edilir. Görüntüler konfokal bir mikroskop kullanılarak yakalanır ve mutant protein agregatlarının iletimini gözlemlemek için nicelleştirilir.

Genetiği Değiştirilmiş Drosophila Beyinlerinde Protein Agregatlarının Görüntülenmesi ve Miktarının Belirlenmesi

Değiştirilmemiş ve hiperfosforile tau proteinleri hiperfosforizasyonu bağımlı hızlı agregasyon kinetiğini ortaya çıkarmak için, iki in vitro toplanma deneylerde kullanıldı. Bu deneyler Alzheimer hastalığının ilerlemesini altında yatan fibriller oluşturmak için hiperfosforilize tau eğilimini modüle edebilir bileşikler için gelecek ekranlar için önünü.

In Vitro toplama Deneyler hiperfosforile tau proteini kullanılarak

Burada, genotoksik strese maruz kalan süspansiyon hücre kültürlerinde ATM ve p53 arasındaki doğrudan protein-protein etkileşimlerini tespit etmek ve görselleştirmek için in situ Proximity Ligation Assay (PLA) 'nın nasıl kullanılabileceği gösterilmiştir.

Proximity Ligation Testi ile Süspansiyon Hücre Kültürlerinde DNA Hasarına Bağlı Protein Komplekslerinin Saptanması ve Görselleştirilmesi

Hedef proteinler üzerinden toplam protein ürünleri ölçmek için bir ticari platformu kullanarak bir kılcal tabanlı immunoassay gösterilmiştir. Buna ek olarak, pozlama süresi, protein konsantrasyonu ve antikor seyreltme tahlil parametreleri bir hücre kültür modeli sistemi için optimize edilmiştir.

Yordam ve anahtar optimizasyon stratejileri için bir otomatik Kapiler elektroforetik tabanlı Immunoassay yöntemi

Kanıt biriken patojenik protein toplamları deli dana gibi özelliklere sahip hücreleri arasında yaymak nörodejeneratif hastalıklar ile ilgili fikir destekler. Burada, hücre hücre yayılma model organizma, Drosophila melanogasterdeli dana gibi toplamları görselleştirme sağlar bir yöntemi açıklanmaktadır.

Drosophila Melanogaster deli dana gibi Protein toplamları izleme hücre hücre iletim

Burada büyük ölçüde yüksek hassasiyet ile bağlama benzeşim denge ve çözüm belirlemek için yeni bir yöntem mevcut. Bu transkripsiyon faktörü-DNA bağlayıcı kantitatif analiz artırır. Yönteminin otomatik floresans anizotropi ölçümlerde kontrollü bir iletim sistemi temel alır.

Transkripsiyon faktörü-DNA bağlayıcı Affinities floresans mikroskobu kullanarak rekabet titrasyon tarafından yüksek hassasiyet ölçümü

Burada sunulan dört protokolleri oluşturmak ve mayalı Saccharomyces cerevisiae muhabiri suşları insan p53 Transaktivasyon potansiyeli, çeşitli kanserle ilişkili mutasyonlar etkileri, ortak ifade etkileşim proteinleri çalışma ve istismar spesifik küçük moleküllerin etkileri.

Insan p53 çalışma fonksiyonel Assays geliştirmek için bir şasi olarak Maya

Floresan mikroskopi görüntülerinde belirli hücre bölmelerinde hücresel cisimlerin hızlı araştırılması ve doğru analizi için oluşturulmuş serbestçe kullanılabilir bir iş akışı salıyoruz. Bu kullanıcı dostu iş akışı açık kaynak yazılım Icy üzerinde tasarlanmıştır ve aynı zamanda ImageJ işlevleri kullanır. Boru hattı görüntü analizi nde bilgi olmadan uygun fiyatlı.

Alt Yapı Analizörü: Floresan Mikroskopi Görüntülerinde HücreCisimlerinin Hızlı Araştırılması ve Doğru Analizi için Kullanıcı Dostu İş Akışı

Burada floresan korelasyon spektroskopisi kullanarak hücre lisat ve canlı hücrelerde protein oligomerlerini ve toplamayı ölçmek için bir prosedür sunuyoruz.

Floresan Korelasyon Spektroskopisi Kullanılarak Protein Toplamanın Tespiti

Burada, multipl miyelom hastalarından alınan kemik iliği yaymalarında interfaz floresan in situ hibridizasyon tespitinin başarısını artırmak için bir protokol sunuyoruz.

İnfaz Floresan in situ Multipl Miyelomun Kemik İliği Yaymalarının Hibridizasyonu

Keşfedin mutant p53 V157F meme kanseri hücrelerinde agregasyon eğilimini çok noktalı tioflavin T floresansı ile. Bu yöntem protein agregasyonunun doğru tespitini sağlar ve kanser araştırmalarında terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

Çok noktalı tioflavin t floresansı kullanılarak mutant P53 V157F meme kanseri hücrelerinde agregasyona meyilli davranışın tespiti (Video) | JoVE Journal

Çok noktalı tioflavin t floresansı kullanılarak mutant P53 V157F meme kanseri hücrelerinde agregasyona meyilli davranışın tespiti

Daha fazla video keşfet