Name: Hücresiz Kaposi Sarkomu ile İlişkili Herpes Virüsü ile De Novo Litik Enfeksiyonun Kurulması ve Miktarının Belirlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Keşfedin: KSHV de novo litik enfeksiyon modeli, HCT116 hücrelerinde viral çoğalma ve GFP tabanlı kantifikasyon yöntemleriyle erken herpesvirus replikasyon olaylarını güvenilir şekilde incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mesri, E. A., Cesarman, E., Boshoff, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma+herpesvirus%2Fhuman+herpesvirus-8+%28KSHV%2FHHV8%29%2C+and+the+oncogenesis+of+Kaposi%27s+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma herpesvirus/human herpesvirus-8 (KSHV/HHV8), and the oncogenesis of Kaposi's sarcoma.</a> Nat Rev Cancer. 10 (10), 707(2010).</li>
<li>Cesarman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gammaherpesvirus+and+lymphoproliferative+disorders+in+immunocompromised+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Gammaherpesvirus and lymphoproliferative disorders in immunocompromised patients.</a> Cancer Lett. 305 (2), 163-174 (2011).</li>
<li>Golas, G., Alonso, J. D., Toth, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+de+novo+lytic+infection+of+dermal+lymphatic+microvascular+endothelial+cells+by+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Characterization of de novo lytic infection of dermal lymphatic microvascular endothelial cells by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> Virology. 536, 27-31 (2019).</li>
<li>Dittmer, D. P., Damania, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi+sarcoma-associated+herpesvirus%3A+immunobiology%2C+oncogenesis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Kaposi sarcoma-associated herpesvirus: immunobiology, oncogenesis, and therapy.</a> J Clin Invest. 126 (9), 3165-3175 (2016).</li>
<li>Chang, H. H., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+herpesviral+transcriptional+program+in+KSHV-infected+lymphatic+endothelial+cells+leads+to+mTORC1+activation+and+rapamycin+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">A unique herpesviral transcriptional program in KSHV-infected lymphatic endothelial cells leads to mTORC1 activation and rapamycin sensitivity.</a> Cell Host Microbe. 13 (4), 429-440 (2013).</li>
<li>Brulois, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+manipulation+of+a+new+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+bacterial+artificial+chromosome+clone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Construction and manipulation of a new Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus bacterial artificial chromosome clone.</a> J Virol. 86 (18), 9708-9720 (2012).</li>
<li>Myoung, J., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+doxycycline-inducible+KSHV+producer+cell+line+of+endothelial+origin%3A+Maintenance+of+tight+latency+with+efficient+reactivation+upon+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of a doxycycline-inducible KSHV producer cell line of endothelial origin: Maintenance of tight latency with efficient reactivation upon induction.</a> J Virol Methods. 174 (1-2), 12-21 (2011).</li>
<li>Grundhoff, A., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inefficient+establishment+of+KSHV+latency+suggests+an+additional+role+for+continued+lytic+replication+in+Kaposi+sarcoma+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Inefficient establishment of KSHV latency suggests an additional role for continued lytic replication in Kaposi sarcoma pathogenesis.</a> J Clin Invest. 113 (1), 124-136 (2004).</li>
<li>Gao, S. J., Deng, J. H., Zhou, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Productive+lytic+replication+of+a+recombinant+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+in+efficient+primary+infection+of+primary+human+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Productive lytic replication of a recombinant Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus in efficient primary infection of primary human endothelial cells.</a> J Virol. 77 (18), 9738-9749 (2003).</li>
<li>Atyeo, N., Chae, M. Y., Toth, Z., Sharma, A., Papp, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+immediate+early+proteins+trigger+FOXQ1+expression+in+oral+epithelial+cells%2C+engaging+in+a+novel+lytic+cycle-sustaining+positive+feedback+loop%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus immediate early proteins trigger FOXQ1 expression in oral epithelial cells, engaging in a novel lytic cycle-sustaining positive feedback loop.</a> J Virol. 97 (3), e0169622(2023).</li>
<li>Lagunoff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+infection+and+serial+transmission+of+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+in+cultured+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">De novo infection and serial transmission of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus in cultured endothelial cells.</a> J Virol. 76 (5), 2440-2448 (2002).</li>
<li>ViejoBorbolla, A., Schulz, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+and+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus and innate immunity.</a> J Gen Virol. 98 (2), 271-284 (2017).</li>
<li>Chandran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+events+in+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+infection+of+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Early events in Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infection of target cells.</a> J Virol. 84 (5), 2188-2199 (2010).</li>
<li>Zhu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+induces+mitochondrial+fission+to+evade+host+immune+responses+and+promote+viral+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus induces mitochondrial fission to evade host immune responses and promote viral production.</a> Nat Microbiol. 10 (6), 1501-1520 (2025).</li>
<li>Lee, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+and+HIF-1alpha+promote+lytic+de+novo+KSHV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia and HIF-1alpha promote lytic de novo KSHV infection.</a> J Virol. 97 (11), e0097223(2023).</li>
<li>White, I. E., Campbell, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+cell-free+and+cell-associated+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+DNA+by+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Quantitation of cell-free and cell-associated Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus DNA by real-time PCR.</a> J Clin Microbiol. 38 (5), 1992-1995 (2000).</li>
<li>Bechtel, J., Grundhoff, A., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAs+in+the+virion+of+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">RNAs in the virion of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 79 (16), 10138-10146 (2005).</li>
<li>Lin, X., Li, X., Liang, D., Lan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs+and+unusual+small+RNAs+discovered+in+Kaposi%27s+sarcoma-associated+herpesvirus+virions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs and unusual small RNAs discovered in Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus virions.</a> J Virol. 86 (23), 12717-12730 (2012).</li>
<li>Watzinger, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+quantitative+PCR+assays+for+detection+and+monitoring+of+pathogenic+human+viruses+in+immunosuppressed+pediatric+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Real-time quantitative PCR assays for detection and monitoring of pathogenic human viruses in immunosuppressed pediatric patients.</a> J Clin Microbiol. 42 (11), 5189-5198 (2004).</li>
<li>Cho, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+activity+of+angelicin+against+gammaherpesviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">Antiviral activity of angelicin against gammaherpesviruses.</a> Antiviral Res. 100 (1), 75-83 (2013).</li>
<li>Coen, N., Duraffour, S., Snoeck, R., Andrei, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KSHV+targeted+therapy%3A+An+update+on+inhibitors+of+viral+lytic+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">KSHV targeted therapy: An update on inhibitors of viral lytic replication.</a> Viruses. 6 (11), 4731-4759 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 &mikro; m polietersülfom (PES) filtre&nbsp;</td><td>VWR</td><td>76479-020</td><td></td></tr><tr><td>Biyolojik render</td><td>Biyolojik render</td><td>YOK</td><td>Grafik tasarım, yazarların lisansına sahip olduğu BioRender.com ile oluşturulmuştur </td></tr><tr><td>CFX Opus 96 Gerçek Zamanlı PCR Sistemi</td><td>Biyo-Rad</td><td>184-5072</td><td></td></tr><tr><td>DMEM'i tamamlayın</td><td></td><td></td><td>Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle's ortamı (DMEM; Sigma-Aldrich) %10(h/h) fetal sığır serumu (FBS; Gibco), 2 mM L-glutamin (Gibco) ve 100U/ml penisilin-streptomisin (Pen-Strep; GenClone).</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>New England Biyolaboratuvarları</td><td>M0303S</td><td></td></tr><tr><td>Doksisiklin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9891 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>LSR II 18 akış sitometresi</td><td>BD Biyobilim</td><td>YOK</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa SYBR Yeşil Usta Süper Karışım</td><td>Quantabio</td><td>95054-02K</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA Mini Kiti</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td></td></tr><tr><td>sodyum bütirat (NaB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Saf 0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Termo Balıkçı</td><td>15575020</td><td></td></tr></tbody></table>

hücresiz kaposi sarkomu ile İlişkili herpes virüsü ile de novo litik enfeksiyonun kurulması ve miktarının belirlenmesi

Establishment and Quantification of De Novo Lytic Infection by Cell-free Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus

Hücresiz Kaposi Sarkomu ile İlişkili Herpes Virüsü ile De Novo Litik Enfeksiyonun Kurulması ve Miktarının Belirlenmesi

Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), a gammaherpesvirus implicated in multiple human malignancies, can undergo lytic replication during primary ...

establishment-quantification-de-novo-lytic-infection-cell-free-kaposi

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Konak hücre faktörleri, kuruluş ve Kaposi sarkomu (KS) bakım çok önemli bir rol oynamaktadır. Biz KSHV enfekte DMVEC hücreleri değişmiş konak hücre faktörleri belirlemek için yöntemler anahat ve KS tümör dokusu. Virüs tarafından değiştirilmiş Hücresel gen roman tedavi için potansiyel hedef (ler) olarak hizmet edecektir.

Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi

Biz bir model herpes, gamma herpes 68 (γHV68) litik çoğaltma konak sinyal molekülleri arasında önemli rolleri tanımlamak için bir protokol açıklar. Genetiği değiştirilmiş fare suşları ve γHV68 litik replikasyon için embriyonik fibroblastlar kullanarak, protokol fenotipik karakterizasyonu ve viral litik çoğaltma virüs konak etkileşimler moleküler sorgulama hem de izin verir.

Model Herpesvirüs Litik çoğaltma Diseksiyon Host-virüs Etkileşim

γ-herpesvirüslerinin (γ-HVS) ev sahibi ömür boyu kalıcılığı kurmak. Enfeksiyon γ-HV68 ile farelerin genetik çözülebilir...

Farelerde γHV68 Enfeksiyon ölçümü

Canlı hücreler içinde ayrı DNA molekülleri gözlenmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu teknik ilgi DNA içine yerleştirilmiştir bağlanma yerleri için bir floresan etiketlendi lac represör proteininin bağlayıcı esas alınmaktadır. Bu yöntem, zaman içindeki çok sayıda canlı hücreler rekombinant DNA izlemek için adapte edilebilir.

Floresan Mikroskobu ile Çoklu Nesiller boyunca Canlı Memeli Hücrelerinde Plazmid Çoğaltma İzlenmesi

Bu videoda, enfeksiyöz herpes simpleks virüsü veya HSV'nin virüs plak testi açıklanmaktadır. Seyreltilmiş viral partiküller, epitel hücrelerinin tek tabakasına aşılanır. Kuluçka sırasında, virüs plaklar oluşturur ve bulaşıcı virüs titresini belirlemek için görsel olarak sayılır.

Virüs Plak Testi: Virüsle enfekte olmuş hücrelerin tek tabakasında oluşan plakların miktar tayini yoluyla enfeksiyöz herpes simpleks virüsünü ölçmek için bir teknik

İnsan Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) ve Epstein-Barr virüsü (EBV) ile yakından ilgili olan bir model herpesvirüs, kemirgen gamma herpes virüsü 68 (γ HV68) ile enfekte olan fareler içindeki antiviral sitokin üretimini ölçmek için bir protokolü tarif eder. Genetik olarak modifiye edilmiş olan fare soyları ve fare embriyonik fibroblastlar (MEF'ler) kullanarak, biz antiviral sitokin üretimini in vivo ve ex vivo hem de değerlendirildi. Lentiviral transdüksiyonu ile nakavt embriyonik...

Sitokin Üretimi Viral Evasion Doğuştan Bağışıklık Sinyalizasyonu Diseksiyon

Bu hayvan modellerinin doku bölümleri içinde kalıcı bir DNA virüsü genomunun saptanması için in situ hibridizasyon protokolünde bir floresan kurulmuştur. Bu protokol, viral genomun codetection, kendi RNA ürünleri ve tek bir hücre içinde viral veya hücresel proteinleri tarafından enfeksiyon süreci üzerinde çalışırken sağlar.

Floresan Nöronal Dokularda Kalıcı DNA Virüs Genomu ve Transkriptlerinin Algılama In situ Melezleme immün ile birlikte

Deri, insan patojeni herpes simpleks virüsü tip 1'in (HSV-1) hedef dokularından biridir. HSV-1'in dokuya invazyon yolunu araştırmak için, cildin en dış tabakasını temsil eden murin epidermal tabakalarının ex vivo bir enfeksiyon modeli oluşturduk.

Herpes Simplex virüs tip 1 ile murin Epidermis Ex ​​vivo enfeksiyon

Kaposi sarkomu (KS) enfeksiyon oncogenic virüs insan herpesvirus-8/KS herpesvirus (HHV-8/KSHV) ile indüklenen bir tümördür. Burada açıklanan endotel hücre kültür model benzersiz olarak hangi konak hücreleri KSHV dönüşümleri mekanizmaları eğitim için uygundur.

Hücresel dönüştürme Kaposi sarkomu Herpesvirus tarafından eğitim için bir Vitro modeli

Biz situ hibridizasyon floresan kullanan bir protokol tarif (FISH) lytically enfekte insan hücrelerinin içinde birden fazla herpesviral RNA görselleştirmek için, süspansiyon veya yapışık. Bu protokol, nükleositoplazmik oran üreten floresan ların niceliğini içerir ve konak ve viral proteinlerin immünoresans (IF) ile eşzamanlı olarak görüntülenmesi için uzatılabilir.

KSHV Enfekte Hücrelerde Spesifik Gen Ürünlerinin Situ Hibridizasyonunda (FISH) ve İmmünfloresansında (IF) Kantitatif Floresan

Bu protokol, Epstein-Barr virüs parçacıklarının, forbol 12-miristat 13-asetat ile viral litik döngüyü indükledikten sonra insan P3HR1 hücre hattından izole edilmesine izin verir. DNA daha sonra viral preparattan çıkarılır ve viral parçacık konsantrasyonunu ölçmek için gerçek zamanlı PCR'ye tabi tutulur.

Epstein-Barr Virüsünün P3HR1 Hücre Hattından İzolasyonu ve Nicelleştirilmesi

Keşfedin: KSHV de novo litik enfeksiyon modeli, HCT116 hücrelerinde viral çoğalma ve GFP tabanlı kantifikasyon yöntemleriyle erken herpesvirus replikasyon olaylarını güvenilir şekilde incelemeyi sağlar.

Hücresiz Kaposi Sarkomu ile İlişkili Herpes Virüsü ile De Novo Litik Enfeksiyonun Kurulması ve Miktarının Belirlenmesi

Daha fazla video keşfet