Name: Glial Fibriller Asitli Protein ve Hastalıkla İlgili Varyantlarının Biyokimyasal Analizi İçin Deneysel Yaklaşımlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-28T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Keşfedin GFAP ve hastalıkla ilişkili mutasyonlarının biyokimyasal analizi için deneysel yöntemleri. Bu protokol, Alexander hastalığı mekanizmalarını anlamak ve potansiyel tedavi stratejileri geliştirmek için standartlaştırılmış bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>%30 Akrilamid/Bis çözeltisi 37.5:1</td><td>Biorad</td><td>1610158</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum Persülfat (APS)</td><td>Biorad</td><td>1610700</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>USB</td><td>11259</td><td></td></tr><tr><td>anti-GFAP antikoru</td><td>Hücre Sinyal Teknolojisi</td><td>12389</td><td></td></tr><tr><td>Anti-ubiquitin antikor</td><td>Millipore</td><td>ST 1200</td><td>Klon FK2</td></tr><tr><td>Avanti J-26S XP Santrifüj</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kloroamfenikol</td><td>USB</td><td>23660</td><td></td></tr><tr><td>CM-Sephrose</td><td>Cytiva</td><td>1707 1901</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie mavi boyası</td><td>USB</td><td>32826</td><td></td></tr><tr><td>Bakır ızgara</td><td>Ted Pella</td><td>01753-F</td><td></td></tr><tr><td>CS 150 NX Micro ultracentrfuge</td><td>Hitachi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Dounce homojenizatörü</td><td>Wheaton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>UR</td><td>DTT</td><td></td></tr><tr><td>E. coli BL21(DE3) pLysS suşu</td><td>Çevik</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasiGlow</td><td>Ted Pella</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECL reaktifi</td><td>PerkinElmer</td><td>NEL 105001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>USB</td><td>15699</td><td></td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>18312</td><td></td></tr><tr><td>HiRes S Sütunu</td><td>Cytiva</td><td>2927 5877</td><td></td></tr><tr><td>HiTrap Q sütunu</td><td>Cytiva</td><td>1711 5301</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>UR</td><td>IPTG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Honeywell</td><td>12636</td><td></td></tr><tr><td>LB orta (LB Agar)</td><td>USB</td><td>75851</td><td></td></tr><tr><td>LB orta (LB Sçorbası)</td><td>BD Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>MES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Honeywell</td><td>31434S</td><td></td></tr><tr><td>NGC kromatografi sistemi</td><td>BioRad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optima XE-90 Ultrasantrifüj</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>ACROS ORGANICS</td><td>215740050</td><td></td></tr><tr><td>polyehtyleneimine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3143</td><td></td></tr><tr><td>Rotor</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S55S Rotor</td><td>Hitachi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>S80AT3 Rotor</td><td>Hitachi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>USB</td><td>75819</td><td></td></tr><tr><td>SDS-SAYFA</td><td>Biorad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StarBright Blue 520 keçi fare karşıtı IgG&nbsp;</td><td>Biorad</td><td>12005867</td><td></td></tr><tr><td>StarBright Blue 700 keçi anti-tavşan IgG&nbsp;</td><td>BioRad</td><td>12004161</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5391</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>USB</td><td>76320</td><td></td></tr><tr><td>Geçirim elektron mikroskobu H-7700)</td><td>Hitachi</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>USB</td><td>75825</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Uranyl asetat</td><td>Elektron Mikroskop Bilimleri&nbsp;</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>Üre</td><td>Honeywell</td><td>15604H</td><td></td></tr></tbody></table>

glial fibriller asitli protein ve hastalıkla İlgili varyantlarının biyokimyasal analizi İçin deneysel yaklaşımlar

Experimental Approaches for Biochemical Analysis of Glial Fibrillary Acidic Protein and Its Disease-associated Variants

AxD neden olan mutasyonların GFAP montaj özelliklerini nasıl etkilediğini araştırmak için, PET tabanlı bir ekspresyon sistemi kullanarak bakterilerde rekombinant proteinler ürettik. GFAP'ın ifade edilmesi ve arındırılması için protokolleri, örneğin WT GFAP'ı detaylandırıyoruz. IPTG indüksiyonundan sonra (Şekil 1A, şerit 2), GFAP dahil edici gövde hazırlığı (Şekil 1B) ve iyon değişim kromatografisi, CM sütunu (Şekil 1C, şerit 1) ve Q...

Glial Fibriller Asitli Protein ve Hastalıkla İlgili Varyantlarının Biyokimyasal Analizi İçin Deneysel Yaklaşımlar

Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) is a key intermediate filament protein critical for maintaining the structural integrity and function of astrocytes ...

experimental-approaches-for-biochemical-analysis-glial-fibrillary

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Biz insan kortikal homojenatlarında açıklık, SDS-PAGE ile protein ayırma, antijen alımı ve Aβ peptid antikor immunoblotting hazırlanması için kullanılan bir tekniktir açıklar. Bu protokolü kullanarak, biz sürekli olarak insanlarda Alzheimer patolojisi olan kortikal doku monomerik ve multimer Aβ algılar.

İnsan Kortikal Doku Aβ multimerlerin SDS-PAGE/Immunoblot Algılama Antijen-epitop Alma kullanarak homojenatlarında

İnsan ve fare beyin dokusu için üre / tiyoüre / SDS tamponu kullanılarak ortak bir protein ekstraksiyon protokolü sağlar: 2D-dige ve mini 2DE immunoblotting kendi müteakip özellik tayini ile protein indentification. Bu yöntem, insan biyopsi ve deneysel modellerden gerçekleştirilen daha güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için bir olanak sağlar.

Konsensus Beyin kaynaklı protein, 2D-DIGE ve Mini 2DE İmmünoblotting Hem kullanma İnsan ve Kemirgen Beyin proteomun Çalışmaları Ekstraksiyon Protokolü

Atomik kuvvet mikroskobunu biyopanlama teknolojisi ile birlikte kullanarak, düşük konsantrasyonlarda bile herhangi bir biyolojik materyalde bulunan hastalığa özgü protein varyantlarına karşı antikorlar elde etmek için negatif ve pozitif bir biyopanlama sistemi oluşturduk.  Amyotrofik Lateral Sklerozda rol oynayan TDP-43 protein varyantlarına karşı antikor elde etmede başarılı olduk.

Amyotrofik Lateral Skleroz TDP-43 Türevleri karşı Morfoloji Özel Reaktifler İzolasyonunda Roman Atomik Kuvvet Mikroskobu Tabanlı biopanning

Yeni bir kantitatif yaklaşım sunan bir ELISA açıklanmaktadır. Spesifik olarak, bir transgenik fare modeli (M83) içindeki (M83) sinoleinopatide, Ser129 fosforile αS formu veya proteinin C-terminal kısmına karşı çeşitli antikorlar kullanarak hastalıkla ilişkili α-sineulini (αSD) tespit etmektedir.

İnsan A53T aşırı eksprese eden transjenik farelerin beyninde Geliştirilmiş ELISA ile Hastalık ile ilişkili α-sinüklein tespiti α-sinüklein Mutasyona uğramış

Burada, ölüm sonrası insan beyin dokusundan giderek çözünmeyen/kümelenmiş alfa-sinükleinin (α-syn) izolasyonu için bir protokol sunuyoruz. Deterjan mukavemeti arttırılmış tamponların ve yüksek hızlı ultrasantrifüj tekniklerinin kullanılmasıyla, hastalıklı ve hastalıksız dokularda α-syn agregasyonunun değişken özellikleri incelenebilir.

Parkinson Brains gelen Çözünür ve çözünmez alfa-sinüklein Sıralı Ekstraksiyon

Burada sunulan tek tek veya birlikte fibrin pıhtısı yapısı üzerinde beta-amiloid etkisini analiz için kullanılan iki yöntem vardır. Vitro fibrin pıhtısı oluşturma takip için pıhtı bulanıklık ve Tarama elektron mikroskobu ile yöntemleri dahil bir protokoldür.

β-amiloid-indüklenen anormallikler Fibrin pıhtısı yapısına spektroskopisi ve elektron mikroskobu tarama Analizi

Burada, biz Parkinson hastalığı ve multipl proteinleri dahil Alfa Raisin hastalığın spesifik konformasyon türevleri tanımlanması için izin cilt biyopsisi bölümlerde serbest yüzen dolaylı immünofluorescence tahlil için bir protokol sunuyoruz Periferik sinir sistemi.

Serbest yüzen Immünofluorescence tahlil ile kutanöz periferik sinir lifleri Alfa Synuclein toplamları hedefleme

Bu protokol, beyin bağışı programı ve beyinlerin doğru karakterizasyonu yoluyla bireysel beyin yaşlanma yörüngelerini izlemek için bir yöntem açıklar. Beyin bağışçıları seri çok boyutlu değerlendirmeler de dahil olmak üzere uzun vadeli bir uzunlamasına çalışmada yer almaktadır. Protokol beyin işleme ve doğru bir tanı metodolojisi ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Abbiategrasso Beyin Bankası Toplama, İşleme ve Yaşlanma Beyinleri Karakterize için Protokol

Sinaptik iletim için gerekli olan hücre altı olayları görselleştirmek için iki ilgili yöntem tanımlanmıştır. Bu protokoller, in vitro kültürlü nöronların canlı hücre görüntülemesini kullanarak presinaptik kalsiyum akışı ve sinaptik vezikül membran füzyonunun dinamiklerinin gerçek zamanlı olarak izlenmesini sağlar.

Amiyotrofik Lateral Skleroz Modellerinde Sinaptik Fonksiyonların Gerçek Zamanlı Floresan Ölçümü

Burada, hSOD1G93A sıçan modelinde amiyotrofik lateral sklerozun patofizyolojisi üzerine araştırmalar için hücre içi Ca2+'nın hızlandırılmış video görüntülemesi için sıçan kortekslerinden glial hücrelerin, astrositlerin ve mikrogliaların primer kültürlerinin nasıl hazırlanacağına dair bir protokol sunuyoruz.

Sıçan Astrositleri ve Mikroglia'nın Birincil Kültürleri ve Amiyotrofik Lateral Skleroz Çalışmalarında Kullanımları

Kütle spektrometrisine dayalı proteomik analiz ile bu biyokimyasal saflaştırma yöntemi, Alzheimer hastalığını önleme hedeflerinin belirlenmesini hızlandırabilecek amiloid fibril çekirdeklerinin sağlam karakterizasyonunu kolaylaştırır.

Beyinden Amiloid Fibril Çekirdeklerinin Biyokimyasal Saflaştırılması ve Proteomik Karakterizasyonu

Keşfedin GFAP ve hastalıkla ilişkili mutasyonlarının biyokimyasal analizi için deneysel yöntemleri. Bu protokol, Alexander hastalığı mekanizmalarını anlamak ve potansiyel tedavi stratejileri geliştirmek için standartlaştırılmış bir çerçeve sunar.

Glial Fibriller Asitli Protein ve Hastalıkla İlgili Varyantlarının Biyokimyasal Analizi İçin Deneysel Yaklaşımlar

Daha fazla video keşfet