Değiştirilmiş İsviçre Roll Tekniği Kullanarak Fare Mide Kası Katmanlarının Geliştirilmiş Mekansal Haritalanması
November 25th, 2025
Bu protokol, fare bağırsağı için geliştirilen "Swiss roll" tekniğinden modifiye edilmiş tüm mide bağışıklık boyama yöntemini açıklar.
Araştırmalarımız, görüntüleme için hafif mideyi nasıl hazırladığımızı ve analiz ettiğimizi geliştirmeye odaklanıyor. Başlangıçta fare bağırsağı için geliştirilen İsviçre Roll Tekniğini, fundus, korpus ve antrum dahil tüm ana mide bölgelerinin tek bir kriyobölümde birleştirilmesini sağlayacak şekilde uyarladık. Bu, mide yapısını ve hücresel bileşimi yan yana görselleştirmemizi sağlarken, doğru mekansal yönelim ve yüksek görüntü kalitesini koruyabilir.
Mide, hassas dokulara sahip karmaşık bir organdır. Küçük hatalar hücrelere zarar verebilir veya düzeni bozabilir, bu da yüksek çözünürlüklü görüntüleme ve bağışıklık boyamalarını tutarsız hale getirir. İsviçre roll tekniğimiz, onikibarı ve özofagus dahil tüm bölgeleri tek bir kriyo blokta sağlam tutarak bu durumu çözüyor; böylece deneyler daha güvenilir ve tekrarlanabilir hale geliyor.
Başlamak için, makasla onikili komediyanın ventral mezenterisi boyunca ve mideni korpustaki pine kadar kesin. PBS ile doldurulmuş bir transfer pipeti kullanarak, mide lümeninden kalan yiyecekleri temizleyin. Açık karnınızı nazikçe gererek düz bir yön elde edin.
Kısa fiksasyondan sonra dokuyu tekrar düzleştirin. Makasla, karnını kesik çizgi boyunca keserek yuvarlamaya uygun bir düzgün bir şekil elde edin. Kesilen mide dokusunu PBS ile nemlendirilmiş filtre kağıdına yerleştirin.
Dokuyu Swiss roll konfigürasyonuna getirin ve ortadan bir kürdan geçirerek sabitleyin. Yuvarlandıktan sonra, şeklini sabitlemek için 30 kalibre bir iğne yerleştirin. Sonra iğneyi 90 derece açı ile bükerek kıvrılan mideyi stabilize edin.
Rulo dokuyu dört derece Celsius'ta 4%4 paraformaldehit ile altı saat boyunca sabitleyin. Sonra stabilizasyon iğnesini nazikçe çıkarın. Dokuyu optimal kesme sıcaklığı bileşiğine tek kullanımlık baz kalıpları kullanarak yerleştirin.
Sonra küfü kuru buzda dondurun. Tamamen donduktan sonra kalıpı -80 derece Celsius sıcaklığında saklayın. Yeni yöntem, fundus, korpus, antrum, yemek borusunun bir kısmı ve onikiparik komediyanın tek bir mide rulo kesitinde yer almasını sağladı.
Mide rulosunun hematoksilin ve eozin boyaması, fundus, korpus, antrum, özofagus ve onikizili bölgelerde iyi korunmuş mimariyi ortaya koymuş, mukozal, submukozal ve kas tabakaları açıkça görülmektedir. İmmünofluoresan boyama, Cajal'ın interstisiel hücrelerinde KIT ve ANO1'in ekspresyonunu ve enterik nöronlarda beta tubulin üç'ün ekspresyonunu göstererek, mide rulonunda hücresel korunmayı doğruladı. KIT ekspresyonu ayrıca mide mukozasındaki paneth ve goblet hücrelerinde tespit edildi; ANO1 ise fundik sütunlu epitel hücrelerinde yüksek şekilde ekspresyona çıktı.
Beta tubulin üç ekspresyonu gastrik, endokrin ve mukus salgılayan hücrelerde ve enterik nöronlara eklenmiştir. Miyozin ağır zincir 11 boyama, mide mukozasında düz kas hücreleri ve miyofibroblastların varlığını doğrularken, E-kadherin boyama epitel hücreleri ve KIT boyama tekrar Cajal'ın interstisyel hücrelerini belirledi. İsviçre yol tekniği, bölgeye özgü mide dokusu değişiklikleri üzerine araştırmaları ilerletebilir.
Bölgeyi ayrı gömmeden geleneksel yaklaşımların aksine, İsviçre Roll Tekniği tüm mide bölgelerini aynı koşullarda işleyerek hem zaman hem de reaktiflerden tasarruf sağlar. Bu, hem sağlık hem de hastalık açısından mide dokusunun kapsamlı analizi için pratik ve ölçeklenebilir bir platform haline getirir.
Genel Bakış
Bu protokol, başlangıçta murin bağırsağı için geliştirilen "Swiss Roll" tekniğinden modifiye edilmiş bir tüm mide immün boyama yöntemi sunmaktadır. Yöntem, mekansal yönlendirmeyi ve görüntü kalitesini korurken, mide yapısının ve hücresel bileşiminin görselleştirilmesine izin verir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Gastroenteroloji
- Histoloji
Arka Plan
- Mide, hassas dokular içeren karmaşık bir organdır.
- Geleneksel yöntemler genellikle görüntüleme ve boyamadaki tutarsızlıklara yol açar.
- Swiss Roll Tekniği, birden fazla mide bölgesinin birlikte gömülmesine izin verir.
- Bu, deneylerin güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini artırır.
Çalışmanın Amacı
- Görüntüleme için mide dokularının hazırlanması ve analizini geliştirmek.
- Tek bir kriyo kesitte tüm büyük mide bölgelerini görselleştirmek.
- Görüntüleme sırasında doğru mekansal yönlendirmeyi korumak.
Kullanılan Yöntemler
- Tüm mide immün boyama için Swiss Roll Tekniği'nin adaptasyonu.
- Doku hazırlaması için makas ve pipetlerin kullanımı.
- Dokunun optimal kesme sıcaklığı bileşiğinde gömülmes.
- Doku mimarı değerlendirmesi için hematoksilin ve eozin boyaması.
Ana Sonuçlar
- Çeşitli mide bölgelerinde iyi korunmuş mimari.
- Belirli hücre tiplerinin başarılı immünfloresan boyanması.
- Mide dokularında önemli proteinlerin ifadesinin gösterilmesi.
- Düz kas hücreleri ve epitel hücrelerinin varlığının doğrulanması.
Sonuçlar
- Swiss Roll Tekniği, mide dokusunun analizini geliştirir.
- Tüm mide bölgelerinin eşzamanlı işlenmesine izin verir.
- Bu yöntem, sağlık ve hastalık araştırmaları için pratik ve ölçeklenebilirdir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Consistent spatial mapping of gastric muscle layers is critical for high-confidence target validation and mechanistic de-risking in gastrointestinal drug discovery. The modified Swiss roll technique enables reproducible, side-by-side analysis of all major mouse gastric regions, supporting robust comparative studies and minimizing experimental variability. This scalable approach enhances predictive confidence for early discovery and translational research pipelines focused on gastric biology.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables comprehensive interrogation of region-specific cellular markers across the fundus, corpus, and antrum.
- Supports biological de-risking by preserving native tissue architecture for accurate pathway analysis.
- Facilitates functional target validation through high-quality immunofluorescence and histological readouts.
- Improves predictive confidence for prioritizing gastric targets in discovery portfolios.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, reproducible tissue sections for downstream assay development and screening workflows.
- Ensures quantitative and qualitative consistency in immunostaining outputs across all gastric regions.
- Enables scalable preparation of validated biological samples for high-throughput analysis.
- Reduces reagent use and experimental time by processing all regions under identical conditions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns spatial omics and biomarker studies with disease-relevant gastric regions for translational continuity.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by minimizing tissue loss and experimental variability.
- Facilitates side-by-side comparison of physiological and pathological states in preclinical models.
- Enhances mechanistic de-risking for gastric disease research and therapeutic development.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through assay development and preclinical research, providing a reproducible platform for spatial and molecular analysis of gastric tissues.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by enabling region-specific marker analysis in native tissue context.
- Screening: Delivers assay-ready, reproducible sections for quantitative immunostaining and comparative studies.
- Analytics: Provides high-resolution, multiplexed readouts for robust statistical comparison of gastric regions.
- Translational Research: Maintains anatomical and molecular continuity from discovery through preclinical validation.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, standardized tissue preparation platform for diverse gastric research applications.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in gastric target studies.
- Operational Value: Enhances standardization, reproducibility, and scalability of tissue preparation workflows.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision quality and capital efficiency by minimizing experimental variability.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of gastric research programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in tissue handling, fixation, and cryosectioning for optimal results.
- Needs access to cryostat, immunofluorescence, and histological imaging infrastructure.
- Demands cross-team standardization of tissue orientation and staining protocols.
- Adaptable to various mouse models and compatible with spatial omics workflows.
- Dependent on careful handling to preserve delicate gastric architecture and minimize tissue loss.
