Name: CAR T Hücrelerinde CRISPR-Cas9 Ekranlarının İyileştirmesi: Kütüphane Hazırlığı için Geliştirilmiş Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-02T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Keşfedin: CAR T hücrelerinde CRISPR-Cas9 ekranları için optimize edilmiş bir protokol. Enzimatik sindirim ve seçici pulldown ile sgRNA kurtarımını iyileştirerek genetik düzenleyicilerin güvenilir tespitini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Brudno, J. N., Maus, M. V., Hinrichs, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+and+T-cell+therapies+for+cancer%3A+A+translational+science+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">CAR T cells and T-cell therapies for cancer: A translational science review.</a> JAMA. 332 (22), 1924-1935 (2024).</li>
<li>Cappell, K. M., Kochenderfer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcomes+following+CAR+T+cell+therapy%3A+What+we+know+so+far%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Long-term outcomes following CAR T cell therapy: What we know so far.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (6), 359-371 (2023).</li>
<li>Cui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenges+and+progress+of+CAR-T+cell+therapy+in+the+treatment+of+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">The challenges and progress of CAR-T cell therapy in the treatment of solid tumors.</a> Mol Cell Biochem. 480 (10), 5345-5367 (2025).</li>
<li>Shah, N. N., Fry, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+resistance+to+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (6), 372-385 (2019).</li>
<li>Redondo-Frutos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+in+CAR+T+cells+for+solid+tumors%3A+Current+state%2C+barriers+and+future+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering in CAR T cells for solid tumors: Current state, barriers and future developments.</a> Hum Gene Ther. 36 (17-18), 1138-1153 (2025).</li>
<li>Bock, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+CRISPR+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">High-content CRISPR screening.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-23 (2022).</li>
<li>Shang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+identifies+FAM49B+as+a+key+regulator+of+actin+dynamics+and+T+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen identifies FAM49B as a key regulator of actin dynamics and T cell activation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (17), E4051-E4060 (2018).</li>
<li>Shifrut, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+in+primary+human+T+cells+reveal+key+regulators+of+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens in primary human T cells reveal key regulators of immune function.</a> Cell. 175 (7), 1958-1971 (2018).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+CD8%2B+T+cell+CRISPR+screening+reveals+control+by+Fli1+in+infection+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo CD8+ T cell CRISPR screening reveals control by Fli1 in infection and cancer.</a> Cell. 184 (5), 1262-1280.e22 (2021).</li>
<li>Belk, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+of+T+cell+exhaustion+identify+chromatin+remodeling+factors+that+limit+T+cell+persistence%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens of T cell exhaustion identify chromatin remodeling factors that limit T cell persistence.</a> Cancer Cell. 40 (7), 768-786.e7 (2022).</li>
<li>Henriksson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+in+T+helper+cells+reveal+pervasive+crosstalk+between+activation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens in T helper cells reveal pervasive crosstalk between activation and differentiation.</a> Cell. 176 (4), 882-896.e18 (2019).</li>
<li>Gurusamy, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-phenotype+CRISPR-Cas9+screen+identifies+p38+kinase+as+a+target+for+adoptive+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Multi-phenotype CRISPR-Cas9 screen identifies p38 kinase as a target for adoptive immunotherapies.</a> Cancer Cell. 37 (6), 818-833.e9 (2020).</li>
<li>Wei, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+REGNASE-1+programs+long-lived+effector+T+cells+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Targeting REGNASE-1 programs long-lived effector T cells for cancer therapy.</a> Nature. 576 (7787), 471-476 (2019).</li>
<li>Dong, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+immunotherapy+target+discovery+using+genome-scale+in+vivo+CRISPR+screens+in+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Systematic immunotherapy target discovery using genome-scale in vivo CRISPR screens in CD8 T cells.</a> Cell. 178 (5), 1189-1204.e23 (2019).</li>
<li>Legut, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-scale+screen+for+synthetic+drivers+of+T+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-scale screen for synthetic drivers of T cell proliferation.</a> Nature. 603 (7902), 728-735 (2022).</li>
<li>Ye, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-scale+gain-of-function+CRISPR+screen+in+CD8+T+cells+identifies+proline+metabolism+as+a+means+to+enhance+CAR-T+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">A genome-scale gain-of-function CRISPR screen in CD8 T cells identifies proline metabolism as a means to enhance CAR-T therapy.</a> Cell Metab. 34 (4), 595-614.e14 (2022).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+screening+of+CAR+T+cells+and+cancer+stem+cells+reveals+critical+dependencies+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">CRISPR screening of CAR T cells and cancer stem cells reveals critical dependencies for cell-based therapies.</a> Cancer Discov. 11 (5), 1192-1211 (2021).</li>
<li>Yukl, S. A., Kaiser, P., Kim, P., Li, P., Wong, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+using+the+QIAshredder+instead+of+restriction+digestion+to+prepare+DNA+for+droplet+digital+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Advantages of using the QIAshredder instead of restriction digestion to prepare DNA for droplet digital PCR.</a> BioTechniques. 56 (4), 194(2014).</li>
<li>Latham, S., Hughes, E., Budgen, B., Morley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+the+PCR+by+genomic+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inhibition of the PCR by genomic DNA.</a> PLoS One. 18 (4), e0284538(2023).</li>
<li>Owczarzy, R., Moreira, B. G., You, Y., Behlke, M. A., Wälder, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+stability+of+DNA+duplexes+in+solutions+containing+magnesium+and+monovalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Predicting stability of DNA duplexes in solutions containing magnesium and monovalent cations.</a> Biochemistry. 47 (19), 5336-5353 (2008).</li>
<li>Sasaki, Y., Miyoshi, D., Sugimoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+molecular+crowding+on+DNA+polymerase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Effect of molecular crowding on DNA polymerase activity.</a> Biotechnol J. 1 (4), 440-446 (2006).</li>
<li>Seitz, V., Schaper, S., Dröge, A., Lenze, D., Hummel, M., Hennig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+to+prevent+carryover+contaminations+in+two-step+PCR+NGS+library+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A new method to prevent carryover contaminations in two-step PCR NGS library preparations.</a> Nucleic Acids Res. 43 (20), e135(2015).</li>
<li>Giuffre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+Agilent+Technologies+SureSelectTM+target+enrichment+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Tech%22%5BJournal%5D)">Overview of the Agilent Technologies SureSelectTM target enrichment system.</a> J Biomol Tech. 22 (Suppl), S30(2011).</li>
<li>Chen, R., Im, H., Snyder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-exome+enrichment+with+the+Roche+NimbleGen+SeqCap+EZ+Exome+Library+SR+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Whole-exome enrichment with the Roche NimbleGen SeqCap EZ Exome Library SR platform.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2015 (7), 634-641 (2015).</li>
<li>Horlbeck, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+and+highly+active+next-generation+libraries+for+CRISPR-mediated+gene+repression+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Compact and highly active next-generation libraries for CRISPR-mediated gene repression and activation.</a> eLife. 5, e19760(2016).</li>
<li>Rodriguez-Marquez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((density+influences+antitumoral+efficacy+of+BCMA+CAR+T+cells+and+correlates+with+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">density influences antitumoral efficacy of BCMA CAR T cells and correlates with clinical outcome.</a> Sci Adv. 8 (39), 514(2022).</li>
<li>Gilbert, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-mediated+control+of+gene+repression+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-mediated control of gene repression and activation.</a> Cell. 159 (3), 647-661 (2014).</li>
<li>Dash, S., Balasubramaniam, M., Dash, C., Pandhare, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biotin-based+pulldown+assay+to+validate+mRNA+targets+of+cellular+miRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Biotin-based pulldown assay to validate mRNA targets of cellular miRNAs.</a> J Vis Exp. (136), e57786(2018).</li>
<li>Tsuji, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+biotinylated+RNA+or+DNA+pulldown+assays+for+detection+of+binding+proteins%3A+Examples+of+IRP1%2C+IRP2%2C+HuR%2C+AUF1%2C+and+Nrf2%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of biotinylated RNA or DNA pulldown assays for detection of binding proteins: Examples of IRP1, IRP2, HuR, AUF1, and Nrf2.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3604(2023).</li>
<li>Sui, H., Chen, Q., Imamichi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pulldown+assay+using+DNA%2FRNA-conjugated+beads+with+a+customized+competition+strategy%3A+An+effective+approach+to+identify+DNA%2FRNA+binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">A pulldown assay using DNA/RNA-conjugated beads with a customized competition strategy: An effective approach to identify DNA/RNA binding proteins.</a> MethodsX. 7, 100890(2020).</li>
<li>Chaparian, R. R., van Kessel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoter+pulldown+assay%3A+A+biochemical+screen+for+DNA-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Promoter pulldown assay: A biochemical screen for DNA-binding proteins.</a> Methods Mol Biol. 2346, 165-172 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4200 TapeStation</td><td>Çevik</td><td>G2991A</td><td></td></tr><tr><td>Acridine Portakal</td><td>Invitrogen</td><td>A1301</td><td></td></tr><tr><td>AMPure XP&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63881</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS NEO Separator</td><td>Miltenyi</td><td>130-120-327</td><td>Yüksek hızlı manyetik hücre ayırıcı</td></tr><tr><td>Biotinile oligolar</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Çellometre K2 Floresan Hücre Sayacı</td><td>Revvity</td><td>CMT-K2-MX-150</td><td>Floresan hücre sayacı</td></tr><tr><td>CHT4 Sayım Odaları</td><td>Revvity</td><td>CHT4-SD100-002</td><td></td></tr><tr><td>CytoSinct CD4 Nanoboncukları</td><td>GenScript</td><td>L00863-1</td><td></td></tr><tr><td>CytoSinct CD8 Nanoboncuklar</td><td>GenScript</td><td>L00864-1</td><td></td></tr><tr><td>dNTP</td><td>Çevik</td><td>200418-51</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads M-280 Streptavidin</td><td>Invitrogen</td><td>11206D</td><td></td></tr><tr><td>DynaMag-2 mıknatıs</td><td>Invitrogen</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 0.5 M pH 8.0</td><td>Invitrogen</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>1,00,98,31,000</td><td></td></tr><tr><td>ExPERT ATX Elektroporatörü</td><td>MaxCyte</td><td>ExPERT ATx</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td></td></tr><tr><td>Filtropur S 0.2 & micro; m</td><td>Sarstedt</td><td>83,18,26,001</td><td></td></tr><tr><td>GenCRISPR Ultra NLS-Cas9-Araştırma</td><td>GenScript</td><td>Z03621-1</td><td></td></tr><tr><td>Herculase Buffer 5X</td><td>Çevik</td><td>600675-52</td><td>5X tampon</td></tr><tr><td>Herculase II Füzyon Enzimi</td><td>Çevik</td><td>600679-51</td><td>DNA polimeraz</td></tr><tr><td>IL-15</td><td>Miltenyi</td><td>130-095-765</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>Miltenyi</td><td>130-095-362</td><td></td></tr><tr><td>Mastercycler X50a</td><td>Eppendorf</td><td>6313HG006059</td><td></td></tr><tr><td>MaxCyte Elektroporasyon Tamponu</td><td>Cytiva</td><td>EPB1</td><td></td></tr><tr><td>NdeI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0111L</td><td></td></tr><tr><td>Nukleospin dokusu</td><td>Macherey-Nagel</td><td>74,09,52,250</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Merck</td><td>TR-1003-6</td><td></td></tr><tr><td>Temel Bilgiler</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Propidium iyot</td><td>Sigma</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>PspXI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0656S</td><td></td></tr><tr><td>Puromysin</td><td>Gibco</td><td>A11138-03</td><td></td></tr><tr><td>Qubit 3.0 Florometre</td><td>Invitrogen</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>Kubit HS DNA testi</td><td>Invitrogen</td><td>Q32851</td><td></td></tr><tr><td>R-50x3 Steril Kuyu İşleme Montajı</td><td>MaxCyte</td><td>LM243882</td><td></td></tr><tr><td>T Hücresi TransAct insan</td><td>Miltenyi</td><td>130-111-160</td><td>T hücresi stimülasyon reaktifi</td></tr><tr><td>Tape Station HSD1000</td><td>Çevik</td><td>5067-5585</td><td></td></tr><tr><td>TEXMACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-097-196</td><td>T hücresi büyüme ortamı</td></tr><tr><td>Tris Buffer, 1.0 M, pH 8.0, Moleküler Biyoloji Derecesi</td><td>EMD Milipore</td><td>648314</td><td></td></tr><tr><td>Su, moleküler biyoloji için, DNAse, RNA ve Proteaz içermiyor</td><td>TermoBilimsel</td><td>327390010</td><td></td></tr></tbody></table>

car t hücrelerinde crispr-cas9 ekranlarının İyileştirmesi: kütüphane hazırlığı için geliştirilmiş bir yöntem

Improving CRISPR-Cas9 Screens in CAR T Cells: A Refined Method for Library Preparation

CAR T Hücrelerinde CRISPR-Cas9 Ekranlarının İyileştirmesi: Kütüphane Hazırlığı için Geliştirilmiş Bir Yöntem

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have demonstrated remarkable efficacy in several hematological malignancies, yet their success has not ...

improving-crispr-cas9-screens-car-t-cells-refined-method-for-library

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Video, CRISPR-Cas9 Sistemi aracılığıyla genetik olarak değiştirilmiş CAR T hücreleri oluşturma sürecini özetlemektedir. T hücrelerinin CRISPR ve CAR lentivirüsleri ile enfekte edilmesi, hedef gende modifikasyonlara ve bir kimerik antijen reseptörü veya CAR'ın sentezine neden olur ve sonuçta genetik olarak değiştirilmiş CAR T hücrelerinin oluşumuna yol açar.

CRISPR-Cas9 Sistemi Kullanarak CAR T Hücrelerini Genetik Olarak Değiştirme

Bu iletişim kuralı koşullarda besleyici içermeyen insan pankreas hücreleri ayak izi-Alerjik İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPSCs) nesil ayrıntılı olarak anlatılmaktadır kullanarak CRISPR/Cas9 ribonucleoproteins ve değiştirilmiş karakterizasyonu düzenleyerek takip tek hücre klonlar.

Verimli üretimi ve besleyici-Alerjik IPSCs CRISPR-Cas9 sistemini kullanarak insan pankreas hücreleri düzenleme

CRISPR-Cas bitki ve hayvan karmaşık genleri Mühendisi için güçlü bir teknolojidir. Burada, verimli bir şekilde farklı Cas endonucleases kullanarak insan genomu düzenlemek için bir iletişim kuralı ayrıntılı. Biz ilgili önemli noktalar ve Düzenleme verimliliği optimize etmek için tasarım parametreleri vurgulayın.

Memeli hücre CRISPR-Cas kullanarak satırları genom düzenleme

Burada, CRISPR-Cas9-hedefi faaliyeti kaybı olmadan daha yüksek bir özgüllüğü elde etmek için en iyi duruma getirmek için bir protokol mevcut. Keskin nişancı-ekran denilen bir yönlendirilmiş evrim yaklaşım istenen özelliklere sahip bir mutant Cas9 bulmak için kullanın. Keskin nişancı-Cas9 kesilmiş tek-Kılavuzu RNA'lar ve teslimat Ribonükleoprotein biçiminde, daha yüksek özelliklerine ulaşmak için iyi bilinen stratejileri ile uyumludur.

Keskin nişancı-Cas9 CRISPR-Cas9 hedef olarak faaliyet yönlendirilmiş evrim yoluyla kaybı olmadan hedef kapalı etkilerini en aza indirmek için kullanma

CRISPR/sgRNA Kütüphane protein kodlayıcı genlerin sorguya için uygulanmıştır. Ancak, işlev bir CTCF sınır gen düzenlemesi içinde ortaya çıkarmak için bir sgRNA kitaplığı fizibilite keşfedilmemiş kalır. Burada, CTCF sınırları içinde HOX loci fonksiyon aydınlatmak için HOX loci belirli sgRNA Kütüphane açıklayın.

HOX Loci odaklı CRISPR/sgRNA Kütüphane eleme tanımlayan kritik CTCF sınırları

CRISPR-Cas9 teknolojisi, memeli lerin genomunu herhangi bir hücre tipinde tam olarak dizmek için etkili bir yöntem sağlar ve genom çapında genetik ekranlar gerçekleştirmek için yeni bir araç tır. Havuzlu genom genişliğindeCRISPR-Cas9 ekranlarının başarılı bir şekilde performans alabildikleri adımları tartışan ayrıntılı bir protokol burada verilmiştir.

Memeli Hücrelerinde Havuzlu CRISPR Tabanlı Genetik Ekranlar

Bu el yazması, hücre dışı reseptör-ligand etkileşimlerini tanımlamak için genom ölçeğinde hücre tabanlı tarama yaklaşımını açıklamaktadır.

Genom ÖlçeğiCRISPR/Cas9 Genetik Ekranlar Kullanılarak Hücre Yüzey Reseptör Tanımlama

Burada, immün yetmetik farelerin deri ve ağız boşluğundaki çeşitli genlerin işlevlerini aynı anda değerlendirmek için utero embriyonik lentiviral enjeksiyonlarda ultrason güdümlü ultrason güdümlü kullanarak hızlı ve doğrudan bir in vivo CRISPR / Cas9 tarama metodolojisini açıklıyoruz.

Fare Derisi ve Ağız Boşluğundaki Gen İşlevlerini Aynı Anda Değerlendirmek için Vivo CRISPR/Cas9 Taraması

Burada, CAR-T hücrelerini değiştirmek için CRISPR Cas Teknolojisini kullanarak birincil insan T hücrelerinde gen düzenleme protokolü sunuyoruz.

İnsan CRISPR-Engineered CAR-T Hücrelerinin Üretimi

Makale, sağlıklı donör kimerik antijen reseptörü T hücrelerinde genom çapında bir CRISPR nakavt ekranını tamamlamak için tükenme için bir in vitro modelin uygulanması için bir protokolü açıklamaktadır.

Kimerik Antijen Reseptörü T Hücrelerinde İn Vitro Genom Çapında CRISPR Nakavt Taraması Gerçekleştirme

Burada, doz yükseltme yaklaşımıyla kemodirençli hücreler üretmek için bir protokol sunuyoruz; ardından edinilmiş kemodirenç düzenleyicilerini belirlemek için epigenetik modifikatörleri hedefleyen odaklı bir sgRNA kütüphanesi kullanılarak CRISPR/Cas9 tabanlı bir ekran sunuluyor. Protokol ayrıca, kemodirençli hücre modellerine uyarlanmış çoklu optimizasyon noktaları sunar ve direnç mekanizmalarını araştıran araştırmacılar için sağlam bir çerçeve sunar.

Kemodirençli Hücrelerde Epigenom Genelinde CRISPR-Cas9 Tabanlı Knockout Screen'ler

Keşfedin: CAR T hücrelerinde CRISPR-Cas9 ekranları için optimize edilmiş bir protokol. Enzimatik sindirim ve seçici pulldown ile sgRNA kurtarımını iyileştirerek genetik düzenleyicilerin güvenilir tespitini sağlar.

CAR T Hücrelerinde CRISPR-Cas9 Ekranlarının İyileştirmesi: Kütüphane Hazırlığı için Geliştirilmiş Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet