Name: Yaşlanma Belirteçlerinin Mekansal Değerlendirmesi İçin Multipleksli İmmünoflüoresans Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-24T12:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Öğrenin, çoklu immünoflüoresans boyama yöntemiyle insan dokularında yaşlanma belirteçlerinin mekansal analizini. Bu protokol, tek bir doku kesitinde çoklu biyobelirteçlerin eşzamanlı tespitini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Gorgoulis, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence%3A+Defining+a+Path+Forward%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence: Defining a Path Forward.</a> Cell. 179 (4), 813-827 (2019).</li>
<li>Hernandez-Segura, A., Nehme, J., Demaria, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cellular senescence.</a> Trends Cell Biol. 28 (6), 436-453 (2018).</li>
<li>De Souza, N., Zhao, S., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+protein+imaging+in+tumour+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multiplex protein imaging in tumour biology.</a> Nat Rev Cancer. 24 (3), 171-191 (2024).</li>
<li>Teo, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+mediates+secondary+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Notch signaling mediates secondary senescence.</a> Cell Rep. 27 (3), 997-1007 (2019).</li>
<li>Ogrodnik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+minimal+information+on+cellular+senescence+experimentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines for minimal information on cellular senescence experimentation in vivo.</a> Cell. 187 (16), 4150-4175 (2024).</li>
<li>Sharpless, N. E., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forging+a+signature+of+in+vivo+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Forging a signature of in vivo senescence.</a> Nat Rev Cancer. 15 (7), 397-408 (2015).</li>
<li>Schürch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+cellular+neighborhoods+orchestrate+antitumoral+immunity+at+the+colorectal+cancer+invasive+front%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Coordinated cellular neighborhoods orchestrate antitumoral immunity at the colorectal cancer invasive front.</a> Cell. 182 (5), 1341-1359.e19 (2020).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+immunofluorescence+imaging+of+human+tissues+and+tumors+using+t-CyCIF+and+conventional+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed immunofluorescence imaging of human tissues and tumors using t-CyCIF and conventional optical microscopes.</a> eLife. 7, e31657(2018).</li>
<li>Tomimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+immunofluorescence+cancelling+for+highly+multiplexed+imaging+to+capture+specific+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Precise immunofluorescence cancelling for highly multiplexed imaging to capture specific cell states.</a> Nat Commun. 15, 3657(2024).</li>
<li>Kiessling, P., Kuppe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+multi-omics%3A+novel+tools+to+study+the+complexity+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Spatial multi-omics: novel tools to study the complexity of cardiovascular diseases.</a> Genome Med. 16 (1), 14(2024).</li>
<li>Chaib, S., Tchkonia, T., Kirkland, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+and+senolytics%3A+the+path+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence and senolytics: the path to the clinic.</a> Nat Med. 28, 1556(2022).</li>
<li>Freund, A., Laberge, R. M., Demaria, M., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+B1+loss+is+a+senescence-associated+biomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Lamin B1 loss is a senescence-associated biomarker.</a> Mol Biol Cell. 23 (11), 2066-2075 (2012).</li>
<li>Eng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+multiplex+imaging+optimization+and+reproducible+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for multiplex imaging optimization and reproducible analysis.</a> Commun Biol. 5 (1), 1-11 (2022).</li>
<li>Wallis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+morphological+profiles+%28SAMPs%29%3A+an+image-based+phenotypic+profiling+method+for+evaluating+inter-+and+intra-model+heterogeneity+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated morphological profiles (SAMPs): an image-based phenotypic profiling method for evaluating inter- and intra-model heterogeneity of senescence.</a> Aging (Albany NY). 14, 1-27 (2022).</li>
<li>González-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Muñoz-Espín, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> FEBS J. 288 (1), 56-80 (2021).</li>
<li>O’Sullivan, E. A., Wallis, R., Mossa, F., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+senescent-marker+positive+cancer+cells%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Aging%22%5BJournal%5D)">The paradox of senescent-marker positive cancer cells: challenges and opportunities.</a> NPJ Aging. 10 (1), 1-11 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>30% Hydrogen Peroxide (H2O2)</td><td>Merck</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Antigen unmasking solution 1 (H3300) (ARS1)</td><td>Vector Labs.</td><td>H-3300</td><td>Prepare with 12.5 ml Antigen Unmasking Solution + 237.5 ml ddH2O</td></tr><tr><td>Antigen unmasking solution 2 (ARS2)</td><td>Sigma</td><td>T6066 / E5134</td><td>Prepare 10x stock (12.9 g Trizma base, 3.7 g EDTA, 5 mL Tween 20, 995 mL ddH20).&nbsp;</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Merck</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Dewaxing Solution</td><td>Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Epitope Retrieval 1 (ER1)</td><td>Leica</td><td>AR9961</td><td></td></tr><tr><td>Bulk&nbsp; Epitope Retrieval (ER2)</td><td>Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Wash Solution</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Doubled distilled water (ddH20)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>Donkey Serum</td><td>Merck</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Merck</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Merck</td><td>BP399</td><td></td></tr><tr><td>Propyl Gallate</td><td>Merck</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>Merck</td><td>H5141</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Base</td><td>Merck</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Merck</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Diğer sarf malzemeleri veya Ekipmanlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decloaking chamber</td><td>BioCare</td><td>DC2012</td><td></td></tr><tr><td>Steam strips</td><td>BioCare</td><td>613QC</td><td></td></tr><tr><td>Bond RXm Auto Slide Stainer</td><td>Leica</td><td>HIS2330</td><td>Referred to as automated slide stainer&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell DIVE</td><td>Leica</td><td>29429159</td><td>Referred to as multiplex fluorescence imaging system&nbsp;</td></tr><tr><td>Click Well slide holders</td><td>Leica</td><td>29463259</td><td>Referred to as Well Coverslipless Slide Holder&nbsp;</td></tr><tr><td>Antikor Listesi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31 (Pecam-1)</td><td>Cell Signalling</td><td>61255</td><td>Clone: 89C2 Fluorophore: AF555 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>BioLegend</td><td>372906</td><td>Clone: C8/144B Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>CDKN2A/p16</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-56330 AF647</td><td>Clone: jc8 Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 200</td></tr><tr><td>FOXP3</td><td>BioLegend</td><td>320114</td><td>Clone: 206D Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>Keratin 15</td><td>Abcam</td><td>ab194065</td><td>Clone: EPR1614Y Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 200</td></tr><tr><td>Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab215226</td><td>Clone: EPR3610 Fluorophore: AF555 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>Lamin B1</td><td>Abcam</td><td>ab194106</td><td>Clone: EPR8985(B) Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>PanCK_AE1/AE3</td><td>Thermofisher</td><td>53-9003-82</td><td>Clone: AE1/AE3 Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>SMA</td><td>R&amp;D systems</td><td>IC1420S</td><td>Clone: 1A4 Fluorophore: Alexa 750 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>Vimentin</td><td>Cell Signalling</td><td>69227</td><td>Clone: D21H3 Fluorophore: Alexa 750 Dilution: 1 in 100</td></tr></tbody></table>

yaşlanma belirteçlerinin mekansal değerlendirmesi İçin multipleksli İmmünoflüoresans testi

Multiplexed Immunofluorescence Assay for Spatial Assessment of Senescence Markers in vivo

Yaşlanma Belirteçlerinin Mekansal Değerlendirmesi İçin Multipleksli İmmünoflüoresans Testi

Multiplexed immunofluorescence (IF) staining represents a step-change in sophistication over traditional IF imaging allowing sequential detection of ...

multiplexed-immunofluorescence-assay-for-spatial-assessment

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hücresel senesans, Yaş ile ilgili kronik patolojilerin gelişiminde önemli bir faktördür. Parlak hücreleri hedefleyen terapinin tanımlanması, sağlıklı yaşlanmanın uzatılması için söz veriyor. Burada, tek hücrelerde senesans ilişkili β-galaktosidaz aktivitesinin ölçümüne dayalı senoterapötik teşhis için ekrana bir roman tahlil sunuyoruz.

Senoterapötik Ilaçların tanımlanması için SA-β-Galactosidaz tabanlı tarama tahlili

Biz dondurulmuş dokularda multispektral görüntüleme gerçekleştirmek için hızlı bir boyama yöntemi açıklar.

Dondurulmuş Doku Kesitlerinin Multispektral Floresan Görüntülemesi için Hızlı Bir Yöntem

Bu protokol, çok etiketli FISH ve floresan IHC sinyali elde etmek amacıyla hem taze dondurulmuş hem de sabit fare beyin bölümlerinde floresan in situ hibridizasyon (FISH) ve floresan immünohistokimyasını (IHC) birleştirmek için bir yöntemi açıklar. IHC, sitoplazmik ve membrana bağlı proteinleri hedefledi.

Multipleks Floresan In Situ Hibridizasyonun Floresan İmmünohistokimya ile Taze Dondurulmuş veya Sabit Fare Beyin Kesitlerinde Birleştirilmesi

Burada, tek hücrelerde çoklu yaşlanma ile ilişkili belirteçlerin görselleştirilmesi ve nicelleştirilmesi için akış sitometrisine dayalı bir yöntem sunuyoruz.

Tedaviye Bağlı Yaşlanan Kanser Hücrelerinde Çoklu Floresan Yaşlanma Belirteçlerinin Eşzamanlı Görüntüleme ve Akış Sitometrisine Dayalı Tespiti

Kemoterapi ilaçlarının hücre kültüründe veya murin tümör modellerinde indüklediği yaşlanan kanser hücrelerinin floresan, akım sitometrik nicelleştirilmesi için bir protokol sunulmuştur. İsteğe bağlı prosedürler arasında ko-immün boyama, büyük parti veya zaman noktası analizini kolaylaştırmak için numune fiksasyonu ve akış sitometrik sıralama ile canlı yaşlanan hücrelerin zenginleştirilmesi yer almaktadır.

Akış Sitometrisi ile Yaşlanan Tümör Hücrelerinin Tanımlanması ve Zenginleştirilmesi için Uzak Kırmızı Floresan Yaşlanma İlişkili β-Galaktosidaz Probu

Bu makalede, manuel tiramid sinyal amplifikasyonu (TSA) multipleks immünofloresan (mIF) protokolü ile birlikte görüntü analizi ve uzamsal analiz anlatılmaktadır. Bu protokol, laboratuvarda bulunan slayt tarayıcısına bağlı olarak slayt başına iki ila altı antijenin boyanması için formalin sabit parafin gömülü (FFPE) bölümlerle birlikte kullanılabilir.

Multipleks İmmünofloresan, Tümör Mikroçevresinin Klinik ve Biyolojik Değerlendirmesi için Uzamsal Görüntü Analizi ile Kombine Edildi

Bu rapor, otomatik bir slayt boyayıcı üzerinde multipleks immünofloresan (mIF) testleri için otomatik bir protokolü açıklar. Translasyonel araştırmalarda çok sayıda doku slaytında özel mIF tahlilleri için ideal olan standart yüksek verimli doku otomatik boyalayıcıları ve tam slayt floresan görüntüleyiciler üzerinde uzamsal proteomiklerin yüksek tekrarlanabilirliğini gösterir.

Translasyonel Araştırmalar için Yüksek Verimli Otomatik Multipleks İmmünofloresan Testleri

Bu protokol, insan yağ dokusundan izole edilen stromal damar fraksiyonunda yaşlanma ile ilişkili beta-galaktosidaz (SA-β-gal) aktivitesinin objektif ve tek hücreli tespiti için yansıtılmış ışık konfokal mikroskopisi sunmaktadır. Yöntem, immünositokimya ile uyumludur, nicel değerlendirme için pH kontrollerini içerir ve ayrıca geleneksel SA-β-gal boyamaya daha hassas ve daha az öznel bir alternatif sunar.

Yağlı stromal damar fraksiyonunda yansıtılan ışık kullanılarak yaşlanma tespiti

DNA çift iplikli tatili yanıt Ser-139 H2AX fosforilasyon aşağıdaki formu γH2AX odakları, mikroskobik analiz radyasyon biyoloji paha biçilmez bir araç haline gelmiştir. Burada çekirdeğin içinde radyasyona bağlı γH2AX oluşumu uzamsal dağılımını değerlendirmek için, aktif transkripsiyonu ökromatin bir epigenetik işaretleyici olarak mono-metil histon H3 lizin 4 antikor kullanılır.

Radyasyondan aşağıdaki γH2AX Mekansal Dağılımı Değerlendirilmesi

Biz doğrudan kas kuvveti, kas gücü, kasılma kinetiği ve izole iskelet kaslarında yorulma ölçmek için bir yöntem...

İzole İskelet Kaslar Kasılma, çabuk yorulma ve Alternans Ex Vivo Değerlendirilmesi

Öğrenin, çoklu immünoflüoresans boyama yöntemiyle insan dokularında yaşlanma belirteçlerinin mekansal analizini. Bu protokol, tek bir doku kesitinde çoklu biyobelirteçlerin eşzamanlı tespitini sağlar.

Yaşlanma Belirteçlerinin Mekansal Değerlendirmesi İçin Multipleksli İmmünoflüoresans Testi

Daha fazla video keşfet