Name: Küresel N 6-metiladenosin RNA modifikasyon seviyelerini tespit etmek için nokta lekesi testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Öğrenin, nokta lekesi testiyle RNA'daki küresel m6A modifikasyon seviyelerini nasıl yarı nicel olarak değerlendireceğinizi. Bu yöntem, rutin tarama ve ön fonksiyonel çalışmalar için hızlı, uygun maliyetli bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-dependent+regulation+of+messenger+RNA+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-dependent regulation of messenger RNA stability.</a> Nature. 505 (7481), 117-120 (2014).</li>
<li>Zhang, Z., Wei, W., Wang, H., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-sculpted+regulatory+landscape+of+noncoding+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-sculpted regulatory landscape of noncoding RNA.</a> Front Oncol. 11 (1), 743990(2021).</li>
<li>Hsu, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA-binding+protein+FMRP+facilitates+the+nuclear+export+of+N6-methyladenosine-containing+mRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The RNA-binding protein FMRP facilitates the nuclear export of N6-methyladenosine-containing mRNAs.</a> J Biol Chem. 294 (52), 19889-19895 (2019).</li>
<li>Chen, X. -Y., Zhang, J., Zhu, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+m6A+RNA+methylation+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of m6A RNA methylation in human cancer.</a> Mol Cancer. 18 (1), 103(2019).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+and+clinical+relevance+of+m6A+regulators+across+33+cancer+types%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization and clinical relevance of m6A regulators across 33 cancer types.</a> Mol Cancer. 18 (1), 137(2019).</li>
<li>Hu, Y., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+m6A+in+osteoporosis%2C+arthritis+and+osteosarcoma+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Role of m6A in osteoporosis, arthritis and osteosarcoma (review).</a> Exp Ther Med. 22 (3), 926(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine+%28m6A%29+modification+in+osteosarcoma%3A+expression%2C+function+and+interaction+with+noncoding+RNAs-an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine (m6A) modification in osteosarcoma: expression, function and interaction with noncoding RNAs-an updated review.</a> Epigenetics. 18 (1), 2260213(2023).</li>
<li>Zhu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+N6methyladenosine+modification+residues+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of N6methyladenosine modification residues (review).</a> Int J Mol Med. 43 (6), 2267-2278 (2019).</li>
<li>Wang, Y., Jia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+methods+of+epitranscriptomic+mark+N6-methyladenosine%5BTitle%5D)+AND+%22Essays+Biochem%22%5BJournal%5D)">Detection methods of epitranscriptomic mark N6-methyladenosine.</a> Essays Biochem. 64 (6), 967-979 (2020).</li>
<li>Stejskal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+analysis+by+LC-MS%2FMS+of+N6-methyladenosine+and+inosine+in+mRNA+reveal+complex+incidence%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Global analysis by LC-MS/MS of N6-methyladenosine and inosine in mRNA reveal complex incidence.</a> RNA. 31 (4), 514-528 (2025).</li>
<li>Ensinck, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A-ELISA%2C+a+simple+method+for+quantifying+N6-methyladenosine+from+mRNA+populations%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">m6A-ELISA, a simple method for quantifying N6-methyladenosine from mRNA populations.</a> RNA. 29 (5), 705-712 (2023).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+mRNA+methylation+regulates+AKT+activity+to+promote+the+proliferation+and+tumorigenicity+of+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">m6A mRNA methylation regulates AKT activity to promote the proliferation and tumorigenicity of endometrial cancer.</a> Nat Cell Biol. 20 (9), 1074-1083 (2018).</li>
<li>Zhang, M., Li, Q., Xie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bayesian+hierarchical+model+for+analyzing+methylated+RNA+immunoprecipitation+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22Quant+Biol+%28Beijing%29%22%5BJournal%5D)">A Bayesian hierarchical model for analyzing methylated RNA immunoprecipitation sequencing data.</a> Quant Biol (Beijing). 6 (3), 275-286 (2018).</li>
<li>Dominissini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+of+the+human+and+mouse+m6A+RNA+methylomes+revealed+by+m6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq.</a> Nature. 485 (7397), 201-206 (2012).</li>
<li>Mishra, T., Phillips, S., Zhao, Y., Wilms, B., He, C., Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+m6A+modifications+during+reactivation+of+HIV-1+latency+in+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic m6A modifications during reactivation of HIV-1 latency in CD4+ T cells.</a> mBio. 15 (11), e0221424(2024).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((METTL16+promotes+lipid+metabolic+reprogramming+and+colorectal+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">METTL16 promotes lipid metabolic reprogramming and colorectal cancer progression.</a> Int J Biol Sci. 21 (11), 4782-4797 (2025).</li>
<li>Ren, F., Cai, Y., Song, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTUD7B+stabilization+by+METTL14-mediated+m6A+methylation+drives+HIF-1%CE%B1+expression+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Res%22%5BJournal%5D)">OTUD7B stabilization by METTL14-mediated m6A methylation drives HIF-1α expression in esophageal squamous cell carcinoma.</a> Oncol Res. 33 (8), 2055-2074 (2025).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WTAP+facilitates+progression+of+hepatocellular+carcinoma+via+m6A-HuR-dependent+epigenetic+silencing+of+ETS1%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">WTAP facilitates progression of hepatocellular carcinoma via m6A-HuR-dependent epigenetic silencing of ETS1.</a> Mol Cancer. 18 (1), 127(2019).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+circGDI2+inhibits+tumorigenesis+by+stabilizing+the+expression+of+RNA+m6A+demethylase+FTO+in+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Noncoding+RNA+Res%22%5BJournal%5D)">Upregulation of circGDI2 inhibits tumorigenesis by stabilizing the expression of RNA m6A demethylase FTO in oral squamous cell carcinoma.</a> Noncoding RNA Res. 10 (1), 140-152 (2025).</li>
<li>Ura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+dot+blot+analyses+of+blood-group-related+antigens+in+paired+normal+and+malignant+human+breast+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Quantitative dot blot analyses of blood-group-related antigens in paired normal and malignant human breast tissues.</a> Int J Cancer. 50 (1), 57-63 (1992).</li>
<li>Reed, K. C., Mann, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+transfer+of+DNA+from+agarose+gels+to+nylon+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid transfer of DNA from agarose gels to nylon membranes.</a> Nucleic Acids Res. 13 (20), 7207-7221 (1985).</li>
<li>Herrin, D. L., Schmidt, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+reversible+staining+of+northern+blots+prior+to+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Rapid, reversible staining of northern blots prior to hybridization.</a> Biotechniques. 6 (3), 196-200 (1988).</li>
<li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRio%2C+DC+%22RNA%3A+A+Laboratory+Manual%22">RNA: A Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. NY. (2010).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning: A Laboratory Manual</a>. , 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. (2001).</li>
<li>Helm, M., Motorin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+RNA+modifications+in+the+epitranscriptome%3A+Predict+and+validate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Detecting RNA modifications in the epitranscriptome: Predict and validate.</a> Nat Rev Genet. 18 (5), 275-291 (2017).</li>
<li>Meyer, K. D., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+epitranscriptome%3A+N6-methyladenosine+and+gene+expression+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamic epitranscriptome: N6-methyladenosine and gene expression control.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (5), 313-326 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-deazaadenosine (3-DAA)</td><td>MCE</td><td>HY-W013332A</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Anti-m6A Monoklonal antikor</td><td>Proteintech</td><td>68055-1-Ig</td><td>50 &mu; L</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA, Fraction V)</td><td>BioFroxx</td><td>4240GR100&nbsp;</td><td>100 g</td></tr><tr><td>ChemiDoc MP görüntüleme sistemi</td><td>BIO RAD</td><td>12003154</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Yüksek Glikoz</td><td>WISENT</td><td>319-005-CL</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>DS-11 spektrofotometresi</td><td>DeNOVIX</td><td>DS-11</td><td></td></tr><tr><td>EZ-press RNA Temizleme Kiti</td><td>EZB&nbsp;</td><td>B0004DP</td><td>100 Hazırlık</td></tr><tr><td>FBS- Üstün kalite</td><td>WISENT</td><td>086-150</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>HRP ile konjuge edilmiş keçi anti-fare IgG (H+L)</td><td>Beyotime</td><td>A0216</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Immobilon Western kemimilüminesans HRP Substratı&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td>2 & Times; 250 mL</td></tr><tr><td>Meklofenemik asit (MA)</td><td>MCE</td><td>HY-117275</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Metilen mavisi boyama çözeltisi</td><td>Solarbio</td><td>G1300</td><td>%0,1, 100 mL</td></tr><tr><td>Naylon transfer membranı</td><td>LABSELECT</td><td>TM-NY-XS-45</td><td>7.4 & Times; 8,5 cm, 0,45 &mu; m, 10 PCS/ÇANTA</td></tr><tr><td>PBS tamponu (kullanıma hazır kuru toz)</td><td>biosharp</td><td>BL601A</td><td>pH: 7.2-7.4, 2 L/torba</td></tr><tr><td>Sodyum dodesil sülfat (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L5750-500G</td><td>500 g</td></tr><tr><td>TBS tampon Premix tozu</td><td>Sangon</td><td>&nbsp; A510025-0001</td><td>1EA (243.9 g barıt)</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzimi</td><td>Gibco</td><td>12604-021</td><td>1&times;, 500 mL</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sangon</td><td>A600560-0500</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>UV çapraz bağlayıcı</td><td>UVP</td><td>CL-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

küresel n 6-metiladenosin rna modifikasyon seviyelerini tespit etmek için nokta lekesi testi

Dot Blot Assay for Detecting Global N6-Methyladenosine RNA Modification Levels

Küresel N 6-metiladenosin RNA modifikasyon seviyelerini tespit etmek için nokta lekesi testi

N6-methyladenosine (m&#8310;A) is the most abundant internal modification in eukaryotic messenger RNA (mRNA) and serves as a key regulator of ...

dot-blot-assay-for-detecting-global-n6-methyladenosine-rna

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

RNA N 6 -methyladenosine (m 6 A) değişiklikleri ölçmek için bir değiştirilmiş Northern lekeleme yöntemi tarif edilmektedir. Geçerli yöntem çeşitli deneysel tasarımlar altında çeşitli RNA'lar modifikasyonlar ve kontrolleri tespit edebilir.

RNA ölçülmesi için bir yöntem<em&gt; K</em<sup&gt; 6</supHücre ve dokularda&gt; -methyladenosine Değişiklikler

Burada, maya RNA-modifiye enzim, Mod5, biyokimyasal karakterizasyonu için bir iletişim kuralı tanımlamak ve nasıl diğer RNA enzimler için bu iletişim kuralı uygulanırsa tartışıyorlar.

TRNA-Isopentenyl transferaz aktivite tespit etmek için bir In Vitro tahlil

Burada RNA DNAzyme bağımlı dekolte için bir protokol salıyoruz. Bu, RNA 2'-O-metilasyonun hızlı ve yere bağlı analizini sağlar. Bu yaklaşım, snoRNA aktivitesinin ön veya önemli değerlendirilmesi için kullanılabilir.

RRNA 2'-O-Metilasyonun DNAzyme bağımlı analizi

Burada, sentetik veya in vitro transkripsiyonu RNA üzerinde metiltransferaz aktivitesinin doğrudan analizi için antikor içermeyen bir in vitro tahlil açıklanmıştır.

RNA metiltransferaz aktivite analizi için Antibody Içermeyen tahlil

Standart yöntemlere göre daha az önyargılı ve 2'-O-metil RNA'lar için artan hassasiyetiçeren ayrıntılı bir küçük RNA kütüphane telafi protokolü saiyoruz. Bu protokol maliyet tasarrufu veya kolaylık sağlamak için kitleri kullanarak ev yapımı reaktifler kullanılarak izlenebilir.

Küçük RNA-seq iyileştirilmesi: Daha Az Önyargı ve 2'-O-Metil RNA'ların Daha İyi Tespiti

Metillenmiş RNA immün önksepitasyon testi, metillenmiş RNA parçaları için zenginleştirmek için kullanılan antikor bazlı bir yöntemdir. Derin sıralama ile birleştiğinde, m5C modifikasyonlarını taşıyan transkriptlerin tanımlanmasına yol açar.

Arabidopsis'te m5C Modifikasyonu Çalışmak için Metillenmiş RNA İmmün Prempripitasyon Tahlil

Bitkilerde in vivo nükleozidler/nükleotidler nicelemesi için kesin ve tekrarlanabilir bir yöntem burada açıklanmıştır. Bu yöntem bir HPLC-MS/MS kullanmaktadır.

HPLC-MS/MS ile Nükleozid/Nükleotid İçerik Ölçümü için Bitki Numunesi Hazırlama

Viral enfeksiyonlarda RNA modifikasyonlarının rolü yeni yeni araştırılmaya başlanmıştır ve yeni viral konak etkileşim mekanizmalarını vurgulayabilir. Bu çalışmada, viral enfeksiyonlar bağlamında m6A ve m5C RNA modifikasyonlarını araştırmak için bir boru hattı sağlıyoruz.

Viral Enfeksiyon Üzerine m6A ve m5C Epitranscriptomes'i Keşfetmek: HIV ile Bir Örnek

RNA'nın transkripsiyon sonrası modifikasyonları, son zamanlarda merkezi sinir sistemi plastisitesi ile bağlantılı olan az çalışılmış bir translasyon düzenleme katmanını temsil eder. Burada, tek nöronlarda çok sayıda RNA modifikasyonunun eşzamanlı karakterizasyonu için numune hazırlama ve sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometrisi yaklaşımı tanımlanmıştır.

Kütle Spektrometrisi Kullanarak Tek Nöronlardaki RNA Modifikasyonlarını Karakterize Etme

Protokol, mutasyonel profilleme deneyleri için RNA'nın dimetil sülfat ile modifiye edilmesi için talimat sağlar. İki alternatif kütüphane hazırlama yöntemi ile in vitro ve in vivo problama içerir.

RNA Yapısının Dimetil Sülfat Mutasyonel Profillemesi ile İn Vitro ve İn Hücre Dizilimi ile İncelenmesi

Bu protokol, MeRIP-qPCR kullanılarak belirli RNA'nın m6Amodifikasyon seviyelerini değerlendirmek için ayrıntılı bir yaklaşım sunar.

Osteosarkom Hücrelerinde Spesifik RNA Modifikasyon Seviyeleriiçin MeRIP-qPCRTesti

Öğrenin, nokta lekesi testiyle RNA'daki küresel m6A modifikasyon seviyelerini nasıl yarı nicel olarak değerlendireceğinizi. Bu yöntem, rutin tarama ve ön fonksiyonel çalışmalar için hızlı, uygun maliyetli bir alternatif sunar.

Küresel N 6-metiladenosin RNA modifikasyon seviyelerini tespit etmek için nokta lekesi testi

Daha fazla video keşfet