Name: Oksidatif Miyofiber Davranışının Değerlendirilmesi İçin Tek Lifli İzolasyon Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Öğrenin, murin soleus kasından sağlam tek miyofiber izolasyonu için optimize edilmiş kollajenaz sindirim yöntemini. Bu teknik, yüksek verimli fiber elde ederek immünoetiketleme ve uydu hücre genişletme uygulamalarını mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Janssen, I., Heymsfield, S. B., Wang, Z. M., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+mass+and+distribution+in+468+men+and+women+aged+18%E2%80%9388+yr%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle mass and distribution in 468 men and women aged 18–88 yr.</a> J Appl Physiol. 89 (1), 81-88 (2000).</li>
<li>Mauro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cell+of+skeletal+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Satellite cell of skeletal muscle fibers.</a> J Biophys Biochem Cytol. 9 (2), 493-495 (1961).</li>
<li>Zammit, P. S., Partridge, T. A., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+skeletal+muscle+satellite+cell%3A+The+stem+cell+that+came+in+from+the+cold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">The skeletal muscle satellite cell: The stem cell that came in from the cold.</a> J Histochem Cytochem. 54 (11), 1177-1191 (2006).</li>
<li>Zammit, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+and+myogenic+progression+in+skeletal+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Pax7 and myogenic progression in skeletal muscle satellite cells.</a> J Cell Sci. 119 (9), 1824-1832 (2006).</li>
<li>Seale, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li>
<li>Günther, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myf5-positive+satellite+cells+contribute+to+Pax7-dependent+long-term+maintenance+of+adult+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myf5-positive satellite cells contribute to Pax7-dependent long-term maintenance of adult muscle stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 590-601 (2013).</li>
<li>Gnocchi, V. F., White, R. B., Ono, Y., Ellis, J. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+characterisation+of+the+molecular+signature+of+quiescent+and+activated+mouse+muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Further characterisation of the molecular signature of quiescent and activated mouse muscle satellite cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5205(2009).</li>
<li>Halevy, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+Pax7+expression+during+myogenesis+in+the+posthatch+chicken+establishes+a+model+for+satellite+cell+differentiation+and+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pattern of Pax7 expression during myogenesis in the posthatch chicken establishes a model for satellite cell differentiation and renewal.</a> Dev Dyn. 231 (3), 489-502 (2004).</li>
<li>Biressi, S., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+the+muscle+satellite+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in the muscle satellite cell population.</a> Semin Cell Dev Biol. 21 (8), 845-854 (2010).</li>
<li>Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+muscle+satellite+cells+are+equal%2C+but+are+some+more+equal+than+others%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">All muscle satellite cells are equal, but are some more equal than others.</a> J Cell Sci. 121 (18), 2975-2982 (2008).</li>
<li>Ortuste Quiroga, H. P., Fujimaki, S., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax7+reporter+mouse+models%3A+A+pocket+guide+for+satellite+cell+research%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Transl+Myol%22%5BJournal%5D)">Pax7 reporter mouse models: A pocket guide for satellite cell research.</a> Eur J Transl Myol. 33 (4), (2023).</li>
<li>Schiaffino, S., Reggiani, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+types+in+mammalian+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Fiber types in mammalian skeletal muscles.</a> Physiol Rev. 91 (4), 1447-1531 (2011).</li>
<li>Pette, D., Staron, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+isoforms%2C+muscle+fiber+types%2C+and+transitions%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Myosin isoforms, muscle fiber types, and transitions.</a> Microsc Res Tech. 50 (6), 500-509 (2000).</li>
<li>Ahmetov, I. I., Vinogradova, O. L., Williams, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+polymorphisms+and+fiber-type+composition+of+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">Gene polymorphisms and fiber-type composition of human skeletal muscle.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 22 (4), 292-303 (2012).</li>
<li>Guth, L., Samaha, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+differences+between+actomyosin+ATPase+of+slow+and+fast+mammalian+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Qualitative differences between actomyosin ATPase of slow and fast mammalian muscle.</a> Exp Neurol. 25 (1), 138-152 (1969).</li>
<li>Aguilera-Alcala, N., Morales-Reyes, Z., Martin-Lopez, B., Moleon, M., Sanchez-Zapata, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+scavengers+in+providing+non-material+contributions+to+people%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Indic%22%5BJournal%5D)">Role of scavengers in providing non-material contributions to people.</a> Ecol Indic. 117, 11(2020).</li>
<li>Sullivan, S. M., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+mitochondrial+volume+density+and+capillarity+in+hamster+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationship between mitochondrial volume density and capillarity in hamster muscles.</a> Am J Physiol. 252 (1), H149-H155 (1987).</li>
<li>Fujita, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+lipid+metabolism+and+capillary+density+of+the+skeletal+muscle+following+low-intensity+exercise+training+in+a+rat+model+of+obesity+with+hyperinsulinemia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in lipid metabolism and capillary density of the skeletal muscle following low-intensity exercise training in a rat model of obesity with hyperinsulinemia.</a> PLoS One. 13 (5), e0196895(2018).</li>
<li>Narusawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+myosin+in+developing+rat+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Slow myosin in developing rat skeletal muscle.</a> J Cell Biol. 104 (3), 447-459 (1987).</li>
<li>Faerman, A., Shani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+the+regulatory+myosin+light+chain+2+gene+during+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The expression of the regulatory myosin light chain 2 gene during mouse embryogenesis.</a> Development. 118 (3), 919-929 (1993).</li>
<li>Denardi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2x-myosin+heavy+chain+is+coded+by+a+muscle+fiber+type-specific+and+developmentally+regulated+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Type 2x-myosin heavy chain is coded by a muscle fiber type-specific and developmentally regulated gene.</a> J Cell Biol. 123 (4), 823-835 (1993).</li>
<li>Ciciliot, S., Rossi, A. C., Dyar, K. A., Blaauw, B., Schiaffino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+type+and+fiber+type+specificity+in+muscle+wasting%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle type and fiber type specificity in muscle wasting.</a> Int J Biochem Cell Biol. 45 (10), 2191-2199 (2013).</li>
<li>Talbot, J., Maves, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+fiber+type%3A+Using+insights+from+muscle+developmental+biology+to+dissect+targets+for+susceptibility+and+resistance+to+muscle+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle fiber type: Using insights from muscle developmental biology to dissect targets for susceptibility and resistance to muscle disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 5 (4), 518-534 (2016).</li>
<li>Celegato, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+protein+and+transcript+profiles+of+FSHD+patient+muscles+correlate+to+the+D4Z4+arrangement+and+reveal+a+common+impairment+of+slow+to+fast+fibre+differentiation+and+a+general+deregulation+of+MyoD-dependent+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Parallel protein and transcript profiles of FSHD patient muscles correlate to the D4Z4 arrangement and reveal a common impairment of slow to fast fibre differentiation and a general deregulation of MyoD-dependent genes.</a> Proteomics. 6 (19), 5303-5321 (2006).</li>
<li>Ganassi, M., Muntoni, F., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+and+identifying+satellite+cell-opathies+within+muscular+dystrophies+and+myopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Defining and identifying satellite cell-opathies within muscular dystrophies and myopathies.</a> Exp Cell Res. 411 (1), 112906(2022).</li>
<li>Gallagher, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+84-days+of+bedrest+and+resistance+training+on+single+muscle+fibre+myosin+heavy+chain+distribution+in+human+vastus+lateralis+and+soleus+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Effects of 84-days of bedrest and resistance training on single muscle fibre myosin heavy chain distribution in human vastus lateralis and soleus muscles.</a> Acta Physiol Scand. 185 (1), 61-69 (2005).</li>
<li>Grimby, G., Broberg, C., Krotkiewska, I., Krotkiewski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+fiber+composition+in+patients+with+traumatic+cord+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Rehabil+Med%22%5BJournal%5D)">Muscle fiber composition in patients with traumatic cord lesion.</a> Scand J Rehabil Med. 8 (1), 37-42 (1976).</li>
<li>Shenkman, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+slow+to+fast%3A+Hypogravity-induced+remodeling+of+muscle+fiber+myosin+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">From slow to fast: Hypogravity-induced remodeling of muscle fiber myosin phenotype.</a> Acta Naturae. 8 (4), 47-59 (2016).</li>
<li>Ohira, T., Kawano, F., Goto, K., Ohira, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+skeletal+muscles+to+gravitational+unloading+and%2For+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol+Sci%22%5BJournal%5D)">Responses of skeletal muscles to gravitational unloading and/or reloading.</a> J Physiol Sci. 65 (4), 293-310 (2015).</li>
<li>Higashino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+changes+in+muscle+atrophy+and+muscle+fiber+type+conversion+after+spinal+cord+transection+and+peripheral+nerve+transection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroeng+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Early changes in muscle atrophy and muscle fiber type conversion after spinal cord transection and peripheral nerve transection in rats.</a> J Neuroeng Rehabil. 10, 46(2013).</li>
<li>Webster, C., Silberstein, L., Hays, A. P., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+muscle+fibers+are+preferentially+affected+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fast muscle fibers are preferentially affected in Duchenne muscular dystrophy.</a> Cell. 52 (4), 503-513 (1988).</li>
<li>Pedemonte, M., Sandri, C., Schiaffino, S., Minetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+decrease+of+IIx+myosin+heavy+chain+transcripts+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Early decrease of IIx myosin heavy chain transcripts in Duchenne muscular dystrophy.</a> Biochem Biophys Res Commun. 255 (2), 466-469 (1999).</li>
<li>Rafael, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+and+utrophin+influence+fiber+type+composition+and+post-synaptic+membrane+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Dystrophin and utrophin influence fiber type composition and post-synaptic membrane structure.</a> Hum Mol Genet. 9 (9), 1357-1367 (2000).</li>
<li>Kotelnikova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+to+meta-analysis+of+microarray+datasets+reveals+muscle+remodeling-related+drug+targets+and+biomarkers+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel approach to meta-analysis of microarray datasets reveals muscle remodeling-related drug targets and biomarkers in Duchenne muscular dystrophy.</a> PLoS Comput Biol. 8 (2), e1002365(2012).</li>
<li>Banerji, C. R. S., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathomechanisms+and+biomarkers+in+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%3A+Roles+of+DUX4+and+Pax7%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Pathomechanisms and biomarkers in facioscapulohumeral muscular dystrophy: Roles of DUX4 and Pax7.</a> EMBO Mol Med. 13 (8), e13695(2021).</li>
<li>Lassche, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcomeric+dysfunction+contributes+to+muscle+weakness+in+facioscapulohumeral+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Sarcomeric dysfunction contributes to muscle weakness in facioscapulohumeral muscular dystrophy.</a> Neurology. 80 (8), 733-737 (2013).</li>
<li>Bischoff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+of+muscle+satellite+cells+on+intact+myofibers+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Proliferation of muscle satellite cells on intact myofibers in culture.</a> Dev Biol. 115 (1), 129-139 (1986).</li>
<li>Rosenblatt, J. D., Lunt, A. I., Parry, D. J., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+satellite+cells+from+living+single+muscle+fiber+explants%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Culturing satellite cells from living single muscle fiber explants.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 31 (10), 773-779 (1995).</li>
<li>Collins, C. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+grafting+of+single+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and grafting of single muscle fibres.</a> Methods Mol Biol. 482, 319-330 (2009).</li>
<li>Ravenscroft, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociated+flexor+digitorum+brevis+myofiber+culture+system%E2%80%94a+more+mature+muscle+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Dissociated flexor digitorum brevis myofiber culture system—a more mature muscle culture system.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64 (10), 727-738 (2007).</li>
<li>Keire, P., Shearer, A., Shefer, G., Yablonka-Reuveni, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+skeletal+muscle+myofibers+as+a+means+to+analyze+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of skeletal muscle myofibers as a means to analyze satellite cells.</a> Methods Mol Biol. 946, 431-468 (2013).</li>
<li>Smith, L. R., Meyer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+explants%3A+Ex-vivo+models+to+study+cellular+behavior+in+a+complex+tissue+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle explants: Ex-vivo models to study cellular behavior in a complex tissue environment.</a> Connect Tissue Res. 61 (3-4), 248-261 (2020).</li>
<li>Tarpey, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+utilization+of+the+flexor+digitorum+brevis+for+assessing+skeletal+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Characterization and utilization of the flexor digitorum brevis for assessing skeletal muscle function.</a> Skeletal Muscle. 8 (1), 14(2018).</li>
<li>Omairi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+dystrophin-associated+glycoprotein+complex+composition+by+the+metabolic+properties+of+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Regulation of the dystrophin-associated glycoprotein complex composition by the metabolic properties of muscle fibres.</a> Sci Rep. 9 (1), 2770(2019).</li>
<li>Moyle, L. A., Zammit, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+immunostaining+of+skeletal+muscle+fibres+to+study+myogenic+progression+in+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and immunostaining of skeletal muscle fibres to study myogenic progression in satellite cells.</a> Methods Mol Biol. 1210, 63-78 (2014).</li>
<li>Hettige, P., Tahir, U., Nishikawa, K. C., Gage, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+the+transcriptomes+of+EDL%2C+psoas%2C+and+soleus+muscles+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of the transcriptomes of EDL, psoas, and soleus muscles from mice.</a> BMC Genomics. 21 (1), 808(2020).</li>
<li>Blackburn, D. M., Lazure, F., Soleimani, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+single+myofibers+from+Mus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of single myofibers from Mus musculus.</a> Bio Protoc. 10 (4), e3525(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AT104</td><td></td></tr><tr><td>Basic fibroblast growth factor</td><td>Peprotech</td><td>450-33</td><td></td></tr><tr><td>Bovine serum albumin</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Yakuka Co., Ltd</td><td>711-12</td><td>Ürün adı: Vetorphale enjeksiyon</td></tr><tr><td>Chicken Embryo Extract</td><td>US Biological</td><td>C3999</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type I</td><td>Worthington</td><td>M9B2717</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Glucose-free DMEM</td><td>Gibco</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569</td><td></td></tr><tr><td>High-glucose DMEM+GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>10569-010</td><td></td></tr><tr><td>Horse serum</td><td>Life technology</td><td>16050-130</td><td></td></tr><tr><td>Low-protein binding filter</td><td>Millipore</td><td>SLGVR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride</td><td>Kyoritsu Seiyaku Co., Ltd</td><td>8816</td><td>Ürün adı: Dorbene Enjeksiyon</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>4987211762100</td><td>Ürün adı: Dormicum Enjeksiyon</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin-amphotericin B suspension</td><td>Wako</td><td>161-23181</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S stain solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>24-3875-5</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri (25 mL)</td><td>IWAKI</td><td>2362-025</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskop</td><td>Keyence</td><td>BZ-X810</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetler</td><td>IWAKI</td><td>5 3/4 IK-PAS-5P</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>M165C</td><td></td></tr><tr><td>Sterilin tabakları (100 mm)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3020-100</td><td>El yazısında Petri kabı olarak bahsedilmiştir</td></tr><tr><td>İmmün etikeleme için antikorlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-mouse (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-32723</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit (H+L), Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11012</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Myosin Heavy Chain</td><td>R&amp;D Systems</td><td>MAB4470</td><td>1:400</td></tr><tr><td>Mouse Anti-Pax7</td><td>DSHB</td><td>AB-528428</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-MyoD</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-760</td><td>1:100</td></tr><tr><td>İmmünblotting için antikorlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HRP-konjuge Anti-mouse IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA931</td><td>1:1000/ at kestanesi peroksidazı</td></tr><tr><td>HRP-konjuge Anti-Rabbit IgG</td><td>Cytiva</td><td>NA934</td><td>1:1000/ at kestanesi peroksidazı</td></tr><tr><td>Mouse Anti-MyHC I</td><td>Sigma</td><td>M8421</td><td>1:1000/ Myosin Heavy Chain I</td></tr><tr><td>Mouse Anti-MyHC II</td><td>Sigma</td><td>M4276</td><td>1:1000/ Myosin Heavy Chain II</td></tr><tr><td>Mouse Anti-PGC-1&alpha;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-517380</td><td>1:1000/ Pparg koaktivatör 1 alfa</td></tr><tr><td>Mouse Anti-&alpha;-tubulin</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#3873</td><td>1:1000/ Alfa tubulin</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-COXIV</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#4850</td><td>1:1000/ Cytochrome c oksidaz IV</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GAPDH</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2218</td><td>1:10000/ Gliseraldehit-3-Fosfat Dehidrogenaz</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-GLUT4</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>#2213</td><td>1:1000/ Glukoz Taşıyıcı 4</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-&beta;-actin</td><td>Proteintech</td><td>20536-1-AP</td><td>1:2000/ Nonmüsküler Beta-aktin</td></tr></tbody></table>

oksidatif miyofiber davranışının değerlendirilmesi İçin tek lifli İzolasyon testi

Single Fiber Isolation Assay for the Assessment of Oxidative Myofiber Behavior

Tekniğimiz, soleus (SOL) ve extensor digitorum longus (EDL) kaslarının izole liflerinin Pax7'ye karşı etkili bir şekilde immünoetiketlenebileceğini göstermektedir (Şekil 3B). Bu izole lifler, 3 gün boyunca yüzen bir kültür ortamında (%10 at serumu, %10 at serumu, %1 AB, %0,5 CEE içeren DMEM + GlutaMAX'tan oluşan) tutulabilir ve ardından immünoetiketleme işlemi yapılabilir (Şekil 3B). Liflerin 4 günden fazla süre yüzmesi tavsiye edilmez. Tarif edilen yüzen lif koşullarında, miyofiberler bu süreden sonra toplanma eğiliminde olur ve sonraki immünoetiketleme analizini tehlikeye atar.
Sunulan teknik, miyojenik program boyunca bağışıklık oblotasyonu için de kullanılabilir (Şekil 3C). Gerçekten de, SOL ve EDL kaynaklı miyoblastlar yaklaşık %70 birleşimde 24 kuyu plakalarına yerleştirilmiştir. Hücreler ya büyüme ortamında 1 gün (miyoblastlar) tutuldu ya da iki veya dört gün boyunca farklılaşmaya teşvik edildi (sırasıyla erken oluşan ve farklılaşan miyotüpler). Beş μg protein immünoblotasyon analizi için yüklendi.
MyHC I ekspresyonu, SOL'dan türetilen kas liflerinde neredeyse özgün olarak ekspresyona sahip, miyotüplerde minimum ve miyoblastlarda önemsiz şekilde ifade edilmiştir (Şekil 3C). MyHC II hem SOL hem de EDL kas liflerinde eksprese edildi. Bu ifade, ağırlıklı olarak tip-I ve IIa'dan oluşan SOL'u yansıtırken, EDL esas olarak IIx ve IIb liflerinden oluşur. Miyoblastlar MyHC II'yi ifade etmez, ancak farklılaşma sırasında ekspresyonu giderek artmıştır. Oksidatifle ilişkili proteinler PGC-1α ve COXIV, SOL kaynaklı liflerde beklenen daha yüksek ekspresyonu gösterdi. Ayrıca, izole SOL liflerinde EDL liflerine kıyasla daha yüksek bir GLUT4 ekspresyonu tespit edildi. İskelet kası biyologlarının karşılaşabileceği bir sorun, yaygın olarak kullanılan temizlik proteinleri ve yükleme kontrollerinin, örneğin α-tubulin, β-aktin, GAPDH ve Ponceau S dahil toplam protein boyamaların, miyoblastlar, miyotüpler ve izole kas lifleri arasında stabil kalmamasıdır; her biri belirgin değişkenlik gösterir. α-tubulin ve β-aktinin sinyal yoğunluğu miyotüplerde en yüksekken, Ponceau S boyama miyoblastlarda nispeten zayıftı. Buna karşılık, GAPDH EDL kas liflerinde daha güçlü bir ekspresyon göstermiştir. Bununla birlikte, deneysel amaca bağlı olarak, bu temizlik proteinlerinden biri hâlâ uygulanabilir olabilir, alternatif olarak ısı şoku proteini 70 (HSP70) gibi normalizasyon faktörleri de incelenebilir.
<img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig1.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 1"> 
Şekil 1. Soleus kasının diseksiyonu. (A) Diseksiyon için gerekli ekipman. 1: mikro makas, 2: ince forseps, 3: diseksiyon makası ve 4: diseksiyon pinleri. (B) PLA tendonu, GAS ve SOL tendon demetlerinden (sarı ok) kesilmiştir. Distal PLA (beyaz ok) tendonu forseps ile kaldırıldı. (C) SOL (kırmızı ok) ile GAS (yeşil ok) arasındaki proksimal tendon arasındaki boşluğa bir diseksiyon pimi yerleştirildi. (D) SOL, bir diseksiyon pimi kullanılarak GAS'tan ayrıldı. (E) GAS ve SOL tendon demetleri GAS tarafında kesildi. (F) SOL proksimal tendon daha sonra mikro makasla kesildi. (G) Ek distal tendon demetleri çıkarıldı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig1large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig2.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 2"> 
Şekil 2. Soleus liflerinin izolasyonu. (A) İzolasyon için gerekli ekipman. 1: dar delikli ve 2: geniş delikli Pasteur pipetleri. (B) İzolasyon için kullanılan stereomikroskop. (C) Kollajenazla sindirilen soleus, %1 AB ile DMEM'e aktarıldı. (D) Soleus lifleri ilk 10 yıkama seansından sonra kastan ayrıldı. (E) Tek lifler ikinci tabağa aktarılır. (F) Temiz liflerin döküntülerden ve küçülmüş liflerden çıkarıldığını gösteren görüntü. (G) Enkaz içermeyen tek lifler üçüncü çanakta aktarıldı. (H) Sağlam tek lifler net görünür. Ölçek çubuğu = 10 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig2large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70637/70637fig3.jpg" data-altupdatedat="1784005267000" data-alt="Figure 3"> 
Şekil 3. Hücre kültürünün genişletilmesi ve EDL ile SOL kaynaklı örneklerin analizi. (A) İzolasyondan 6 gün sonra, proliferasyon ortamı kültüründeki örneklerde, izole soleus liflerinden alınan saf bir miyoblast kültürü gösterilir. Ölçek çubuğu = 100 μm. (B) SOL ve EDL kaynaklı tek lifler, izolasyondan hemen veya 3 gün sonra, Pax7 (yeşil) için immüno-işaretlenmiş uydu hücrelerini gösterir. MyoD (kırmızı) eksikliği, uydu hücrelerinin henüz miyojenik aktivasyona bağlı kalmadığını doğrular. Lifler DAPI (mavi) ile karşı boyandı. Hücreler daha sonra floresans mikroskobu ile gözlemlendi. Ölçek çubuğu = 20 μm. (C) 5 μg protein miyoblastlar, miyotüpler ve miyofiber türevli örneklerin immünoblotasyonu için kullanıldı. İmmünoblotting paneller, MyHC I, MyHC II, PGC-1α, COX IV, GLUT4, α-tubulin, β-aktin ve GAPDH ekspresyonunu gösterdi. Ponceau S boyaması, toplam protein yükleme kontrolü olarak kullanıldı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70637/70637fig3large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Oksidatif Miyofiber Davranışının Değerlendirilmesi İçin Tek Lifli İzolasyon Testi

Skeletal muscle is composed of multinucleated myofibers whose integrity and function are essential for movement and overall health. In neuromuscular ...

single-fiber-isolation-assay-for-assessment-oxidative-myofiber

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Söz konusu modelde oksidatif fosforilasyon analizi ile birlikte Saponin-permeabilize elyaf hazırlama, mitokondriyal fonksiyon bütünleştirici değerlendirme sağlar. Mitokondriyal solunum fizyolojik ve patolojik durumlar mitokondriyal etkileşimleri, morfolojisi ve biyokimya da dahil olmak üzere çeşitli düzenleyici etkileri yansıtabilir.

Söz konusu modelde Saponin permeabilize Kardiyak Elyaf Oksidatif Fosforilasyon Değerlendirmesi

Bu video, hasat edilen murin Ekstansör Digitorum Longus (EDL) kasından tek miyoliflerin izolasyonunu göstermektedir. İzole edilen miyofiberler, miyofiber ile ilişkili kas kök hücre aktivitesini incelemek için kültürlenebilir.

Myofiber İzolasyonu: Hasat Edilen Fare Ekstansör Digitorum Longus (EDL) Kasından Tek Myofiber Elde Etme Tekniği

Myofibers izolasyonu ve kültürü altın...

Yetişkin İskelet Kası gelen bireysel Myofibers ve Uydu Hücre İzolasyonu ve Kültür

Bu protokolde, kas kök hücreleri için endojen nişleriyle etkileşimlerinin çoğunu koruyan bir in vitro kültleme ve fonksiyonel analiz yöntemi tanımlanmıştır.

Yetişkin Kas Kök Hücre İşlevselliğinin Değerlendirilmesi için Tek Miyofiber Kültür Tahlil Ex Vivo

Nöromüsküler kavşak bileşenlerini doğru bir şekilde tespit edebilme yeteneği, patolojik veya gelişimsel süreçler nedeniyle mimarisindeki değişikliklerin değerlendirilmesinde çok önemlidir. Burada, nicel ölçümler yapmak için kullanılabilecek tam montajlı nöromüsküler kavşakların yüksek kaliteli görüntülerini elde etmek için basit bir yöntemin tam bir açıklamasını sunuyoruz.

Tüm Mount Nöromüsküler Kavşakların İmmünofluoresan ve Morfometrik Analizleri için Tek İskelet Kas Liflerinin Diseksiyonu

Burada, fare iskelet kasından mitokondri izolasyonu için ayrıntılı bir yöntem ve ardından mikroplaka tabanlı respirometrik testler kullanılarak Oksijen Tüketim Hızı (OCR) ile solunum analizi için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Bu boru hattı, çoklu çevresel veya genetik müdahalelerin mitokondriyal metabolizma üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanabilir.

Respirometrik Testler için Fare İskelet Kasından Mitokondri İzolasyonu

Atlar olağanüstü bir aerobik egzersiz kapasitesine sahiptir, bu da at iskelet kasını hem at egzersiz fizyolojisi hem de memeli mitokondriyal fizyolojisi çalışmaları için önemli bir doku haline getirir. Bu makalede, at iskelet kasında mitokondriyal fonksiyonun kapsamlı değerlendirilmesi için teknikler açıklanmaktadır.

At İskelet Kasının Yüksek Çözünürlüklü Floro-Respirometrisi

Burada, memeli hücrelerinde moleküler oksijen tüketme yeteneklerinden bağımsız olarak mitokondriyal fonksiyonu doğrudan ölçmek için bir tahlil derlemesi sunuyoruz.

Memelilerde Mitokondriyal Fonksiyonu Ölçmek için Oksijenden Bağımsız Tahliller

Bu protokol, dondurularak kurutulmuş insan iskelet kasından tek lif izolasyonunu ve nokta lekeleme tekniği kullanılarak Miyozin ağır zincir (MHC) izoformuna göre lif tipi sınıflandırmayı gösterir. Tanımlanan MHC I ve II lif örnekleri daha sonra western blotlama kullanılarak protein ekspresyonunda lif tipine özgü farklılıklar için daha fazla analiz edilebilir.

İnsan İskelet Kasının Lif Tipi Tanımlaması

Yetişkin farelerin altı kasından farklı uzunluk ve tiplerde enzimatik olarak ayrışmış lifler elde etmek için bir protokol tarif ediyoruz: bunlardan üçü daha önce tarif edildi (fleksör digitorum brevis, ekstansör digitorum longus, soleus) ve üçü ilk kez başarılı bir şekilde ayrıştı (ekstansör hallusis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

Farelerin Altı Arka Bacak Kasının Enzimatik Ayrışmasıyla Elde Edilen Sağlam Kısa, Orta ve Uzun İskelet Kası Lifleri: Fleksör Digitorum Brevis'in Ötesinde

Burada, insan veya fare kasından taze geçirgen iskelet kası liflerinde mitokondriyal oksidatif fosforilasyonu ölçmek için kapsamlı bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, mevcut mitokondriyal ağları ve membran bütünlüğünü korurken mitokondriyal solunumun gerçek zamanlı olarak ölçülmesine ve yakıt tercihinin ve metabolik esnekliğin değerlendirilmesine olanak tanır.

İnsan ve Fare İskelet Kası Liflerinde Mitokondriyal Solunumun Yüksek Çözünürlüklü Respirometri ile Ölçülmesi

Öğrenin, murin soleus kasından sağlam tek miyofiber izolasyonu için optimize edilmiş kollajenaz sindirim yöntemini. Bu teknik, yüksek verimli fiber elde ederek immünoetiketleme ve uydu hücre genişletme uygulamalarını mümkün kılar.

Oksidatif Miyofiber Davranışının Değerlendirilmesi İçin Tek Lifli İzolasyon Testi

Daha fazla video keşfet