ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Almansour, N. M. Triple-negative breast cancer: brief review about epidemiology, risk factors, signaling pathways, treatment and role of artificial intelligence. Front Mol Biosci. 9, 836417 (2022).</li>
	<li>Nedeljkovic, M., Damjanovic, A. Mechanisms of chemotherapy resistance in triple-negative breast cancer-how we can rise to the challenge. Cells. 8 (9), 957 (2019).</li>
	<li>Bianchini, G., Balko, J. M., Mayer, I. A., Sanders, M. E., Gianni, L. Triple-negative breast cancer: challenges and opportunities of a heterogeneous disease. Nat Rev Clin Oncol. 13 (11), 674&#8211;690 (2016).</li>
	<li>Holohan, C., Van Schaeybroeck, S., Longley, D. B., Johnston, P. G. Cancer drug resistance: an evolving paradigm. Nat Rev Cancer. 13 (10), 714&#8211;726 (2013).</li>
	<li>Flavahan, W. A., Gaskell, E., Bernstein, B. E. Epigenetic plasticity and the hallmarks of cancer. Science. 357 (6348), eaal2380 (2017).</li>
	<li>Beretta, G. L. et al. Novel insights into taxane pharmacology: update on drug resistance mechanisms, immunomodulation and drug delivery strategies. Drug Resist Updat. 81, 101223 (2025).</li>
	<li>Sajid, A., Rahman, H., Ambudkar, S. V. Advances in the structure, mechanism and targeting of chemoresistance-linked ABC transporters. Nat Rev Cancer. 23 (11), 762&#8211;779 (2023).</li>
	<li>Szakacs, G., Paterson, J. K., Ludwig, J. A., Booth-Genthe, C., Gottesman, M. M. Targeting multidrug resistance in cancer. Nat Rev Drug Discov. 5 (3), 219&#8211;234 (2006).</li>
	<li>Robey, R. W. et al. Revisiting the role of ABC transporters in multidrug-resistant cancer. Nat Rev Cancer. 18 (7), 452&#8211;464 (2018).</li>
	<li>Chen, Z. et al. Mammalian drug efflux transporters of the ATP binding cassette (ABC) family in multidrug resistance: review of the past decade. Cancer Lett. 370 (1), 153&#8211;164 (2016).</li>
	<li>You, D., Richardson, J. R., Aleksunes, L. M. Epigenetic regulation of multidrug resistance protein 1 and breast cancer resistance protein transporters by histone deacetylase inhibition. Drug Metab Dispos. 48 (6), 459&#8211;480 (2020).</li>
	<li>Shalem, O., Sanjana, N. E., Zhang, F. High-throughput functional genomics using CRISPR-Cas9. Nat Rev Genet. 16 (5), 299&#8211;311 (2015).</li>
	<li>Doench, J. G. Am I ready for CRISPR? User&#39;s guide to genetic screens. Nat Rev Genet. 19 (2), 67&#8211;80 (2018).</li>
	<li>Yedier-Bayram, O. et al. EPIKOL, chromatin-focused CRISPR/Cas9-based screening platform, to identify cancer-specific epigenetic vulnerabilities. Cell Death Dis. 13 (8), 710 (2022).</li>
	<li>Gottesman, M. M., Lavi, O., Hall, M. D., Gillet, J. P. Toward better understanding of the complexity of cancer drug resistance. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 56, 85&#8211;102 (2016).</li>
	<li>Theile, D., Staffen, B., Weiss, J. ATP-binding cassette transporters as pitfalls in selection of transgenic cells. Anal Biochem. 399 (2), 246&#8211;250 (2010).</li>
	<li>Yedier-Bayram, O. et al. Chromatin-focused genetic and chemical screens identify BRPF1 as a targetable vulnerability in Taxol-resistant triple-negative breast cancer. Exp Mol Med. 57 (6), 1294&#8211;1307 (2025).</li>
	<li>Gokbayrak, B. et al. Identification of selective SWI/SNF dependencies in enzalutamide-resistant prostate cancer. Commun Biol. 8 (1), 169 (2025).</li>
	<li>Kala, E. Y. et al. Functional genomic screens reveal RBBP4 as key regulator of cell cycle progression in TMZ-resistant glioblastoma. bioRxiv. doi:10.1101/2025.05.09.653010 (2025).</li>
	<li>Chan, K., Tong, A. H. Y., Brown, K. R., Mero, P., Moffat, J. Pooled CRISPR-based genetic screens in mammalian cells. J Vis Exp. 151, e59780 (2019).</li>
	<li>Yuan, Y. et al. Genome-wide CRISPR screen for unveiling radiosensitive and radioresistant genes. J Vis Exp. 219, e67982 (2025).</li>
	<li>Stewart, C., Manriquez Roman, C., Kenderian, S. S. Performing an in vitro genome-wide CRISPR knockout screen in chimeric antigen receptor T cells. J Vis Exp. 215, e67338 (2025).</li>
	<li>Joung, J. et al. Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening. Nat Protoc. 12 (4), 828&#8211;863 (2017).</li>
	<li>Li, W. et al. MAGeCK enables robust identification of essential genes from genome-scale CRISPR/Cas9 knockout screens. Genome Biol. 15 (12), 554 (2014).</li>
	<li>McDermott, M. et al. In vitro development of chemotherapy and targeted therapy drug-resistant cancer cell lines: practical guide with case studies. Front Oncol. 4, 40 (2014).</li>
	<li>Hart, T. et al. High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities. Cell. 163 (6), 1515&#8211;1526 (2015).</li>
	<li>Meyers, R. M. et al. Computational correction of copy number effect improves specificity of CRISPR-Cas9 essentiality screens in cancer cells. Nat Genet. 49 (12), 1779&#8211;1784 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 mm plate</td><td>Corning</td><td>353003</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>45 &micro;m filter&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLHVM33RS</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>6 well plate</td><td>Corning</td><td>3506</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>96-well black clear bottom plates</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS356259</td><td>CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay için</td></tr><tr><td>Blasticidin</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1113903</td><td>Seçim için</td></tr><tr><td>CellTiter-Glo luminescent cell viability assay</td><td>CellTiter-Glo, Promega</td><td>G7570</td><td>CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay için</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td></td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>PanReac AppliChem</td><td>A3672,0050</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Ham&rsquo;s F12 nutrient mix</td><td>Gibco</td><td>11765054</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>HEK293T cells</td><td></td><td></td><td>Robert Weinberg (MIT, Boston, USA) tarafından sıcak dostluk hediyesi olarak verilmiştir.</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Thermo Fisher</td><td>15630080</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4001-1G</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>LentiCas9-blast</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#52962</td><td>Cas9-stable hücre hattı oluşturma için</td></tr><tr><td>LentiGuide-Puro&nbsp;</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#52963</td><td>gRNA klonlama için omurga</td></tr><tr><td>MN NucleoSpin tissue kit</td><td>Macherey-Nagel</td><td>740952.5</td><td>Genomik DNA ekstraksiyonu için</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>10010023</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>pLentiCRISPR v2&nbsp;</td><td>Addgene&nbsp;</td><td>#52961</td><td>gRNA klonlama için omurga</td></tr><tr><td>Polyethylene glycol (PEG)-8000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2139-500G</td><td>Lentivirus konsantrasyonu için</td></tr><tr><td>Polyethylenimine, linear (PEI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>765090-1G</td><td>Lentivirus üretimi için</td></tr><tr><td>Protamine sulfate (PS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4380-25G</td><td>Lentivirus enfeksiyonu için</td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene&nbsp;</td><td># 12260</td><td>Lentivirus üretimi için</td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1113803</td><td>Seçim için</td></tr><tr><td>SUM159PT adherent cells</td><td></td><td></td><td>Robert Weinberg (MIT, Boston, USA) tarafından sıcak dostluk hediyesi olarak verilmiştir.</td></tr><tr><td>Taxol</td><td>Paclitaxel, Sigma</td><td>PHR1803-200MG</td><td>Res hücre oluşturma ve bakımı için</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>25300054</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Verapamil</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S4202</td><td>Seçim için</td></tr><tr><td>VSV-G</td><td>Addgene&nbsp;</td><td># 8454</td><td>Lentivirus üretimi için</td></tr></tbody></table>

kemodirençli hücrelerde epigenom genelinde crispr-cas9 tabanlı knockout screen'ler

Epigenome-Wide CRISPR-Cas9-Based Knockout Screens on Chemoresistant Cells

Kemodirençli Hücrelerde Epigenom Genelinde CRISPR-Cas9 Tabanlı Knockout Screen'ler

Chemotherapy resistance remains a major challenge in cancer treatment, driven by cancer cells&#39; ability to acquire adaptive properties, rewire ...

CRISPR tabanlı tarama yaklaşımlarını kullanarak, üçlü negatif meme kanserinde kemoresistansa neden olan epigenetik mekanizmaları araştırıyoruz. Başlangıç olarak, yaklaşık 159 PT aderent hücreyi, belirtilen bileşenlerle desteklenmiş Ham's F-12 Nutrient Mix içeren 96 kuyucuklu siyah-şeffaf tabanlı plakalarda, kuyucuk başına 2 × 10³ hücre olacak şekilde ayarlayın. Hücreleri, bir hücre kültürü inkübatöründe 37 °C ve %5 karbon dioksit altında 16 saat boyunca inkübe edin.Ardından, dimetil sülfoksit veya DMSO içinde çözünmüş Taxol stok çözeltisini hazırlayın. Hücreleri işleme tabi tutmak için, kültür ortamında 0.3 nanomolar ile 10 mikromolar arasında değişen seriler halinde Taxol dilüsyonları hazırlayın ve taşıyıcı kontrol olarak tek başına DMSO kullanın. Hücreleri, artan dozlarda 200 mikrolitre Taxol ile üç tekrarlı olarak işleyin.Plakayı 37 °C sıcaklıkta ve %5 karbondioksit içeren bir hücre kültürü inkübatöründe 72 saat bekletin. 72 saatlik ilaç uygulamasının ardından, lüminesans tabanlı bir ATP kantifikasyon testi kullanarak hücre canlılığını değerlendirin. Lüminesansı bir mikroplaka okuyucu ile ölçün ve sonuçları DMSO kontrol değerlerine göre normalize edin.Ardından, uygun bir istatistik yazılımında dört parametreli lojistik doz yanıt modeli ile doğrusal olmayan regresyon kullanarak %10 ve %50 inhibitör konsantrasyon değerlerini hesaplayın. Kemorezistan hücreler oluşturmaya başlamak için, altı kuyucuklu plakaların her kuyucuğuna 2 × 10⁵ adet 159 PT hücresi ekin. Ve 37 °C'de, %5 CO₂ ile gece boyunca inkübe edin.Ertesi gün, hücreleri iki mililitre kültür ortamı içerisinde 72 saat boyunca %10 veya %50 inhibisyon konsantrasyonlarındaki Taxol ile işleme tabi tutun. Hücreler mevcut ilaç konsantrasyonunu tolere ederse, onları iki kuyucuğa bölün. Birini taze ortam içeren yedek kontrol olarak tutun ve diğer kuyucuktaki Taxol konsantrasyonunu iki katına çıkarın.Resistant hücreler üretilirken, kontrol olarak ebeveyn hücreleri DMSO içeren ortamda pasajlayın ve DMSO hacmini, ilgili Taxol tedavisinde bulunan miktarla eşleşecek şekilde ayarlayın. Ebeveyn ve resistant hücre hatları arasında %50 inhibitör konsantrasyon değerlerinde anlamlı bir fark gözlemlenene kadar her üç ila dört haftada bir hücre canlılığını ölçün. Stabil resistant hücreleri, doz artırımı sırasında kullanılan nihai Taxol konsantrasyonunda muhafaza edin.Dirençli hücrelerin karakterizasyonu için, ilaç varlığında RNA dizileme, Western blotting, qPCR ve hücre canlılığı analizleri gerçekleştirin. Bazı 159 PT Taxol-dirençli ve parental hücreleri, kuyu başına 2 × 10³ hücre olacak şekilde, 96 kuyucuklu siyah-şeffaf tabanlı plakalara üç tekrar halinde ekleyin. Hücreleri 37 °C'de, %5 karbondioksit ile gece boyu inkübe edin.Tüm uygulama koşullarında Taxol konsantrasyonunu sabit tutarak, hücreleri 80 micromolar ile 1.25 micromolar arasında değişen, iki katlı seri dilüsyon verapamil ile işleme tabi tutun. 72 saatlik işlemin ardından, lüminesans tabanlı bir ATP kantifikasyon testi kullanarak hücre canlılığını değerlendirin. Dirençli hücrelerde duyarlılığı geri kazandırırken hücre canlılığını koruyan verapamil konsantrasyonunu belirleyin.Verapamil ile kombinasyon halinde kullanılacak puromisin konsantrasyonunu belirlemek için, kuyuk başına 2 × 10³ hücre olacak şekilde bazı 159 PT Taxol-dirençli hücreleri 96 kuyucuklu bir plakaya ekin. Plağı 37 °C ve %5 karbon dioksit ortamında 16 saat inkübe edin. Önceden belirlenmiş verapamil konsantrasyonunu içeren besiyerinde, 40 ile 0,625 µg/mL arasında değişen iki katlı seri puromisin dilüsyonları hazırlayın.Hücreleri uygun puromisin dilüsyonları ile 72 saat boyunca işleme tabi tutun. Canlılık analizinin ardından, verapamil varlığında canlılığı %5 veya daha altına düşüren en düşük puromisin konsantrasyonunu belirleyin. Daha sonra, viral titrasyonu ve enfeksiyon çokluğunu hesaplamak için bazı 159 PT Taxol-dirençli hücreler kullanın.İstenen enfeksiyon çokluğuna (MOI) göre hesaplanan Cas9 lentivirüs hacmini, mililitre başına sekiz mikrogram protamin sülfat içeren kültür ortamındaki hücrelere doğrudan ekleyin. Enfeksiyondan 16 saat sonra viral ortamı taze ortam ile değiştirin. Ertesi gün, kültür ortamını daha önce belirlenen blasticidin konsantrasyonunu içeren ortamla değiştirerek blasticidin seçimi uygulayın.Enfekte olmamış hücreler elimine edilene kadar seçime devam edin. Cas9 aktivitesini, temel genler için kontrol tek kılavuz RNA'lar ile doğrulayın veya nakavt verimliliğini değerlendirmek için GFP'yi bir raporlayıcı olarak kullanın. İstenen kütüphane kapsamına ulaşmak için gereken başarıyla enfekte edilmiş hücre sayısını sunulan denklemle hesaplayın.Her biyolojik replika için bağımsız enfeksiyon karışımları hazırlayın. Daha önce hesaplanan hücreleri ekildikten sonra, mililitre başına sekiz mikrogram protamin sülfat içeren sekiz mililitre tam kültür ortamında, belirlenen bir viral hacim ile enfekte edin. 16 saat sonra, viral ortamı taze ortamla değiştirin ve hücreleri 37 °C'de %5 karbondioksit ile inkübe edin.Bazı 159 PT Taxol-dirençli hücrelerde sg-RNA ile enfekte edilmiş hücreleri zenginleştirmek için, daha önce belirlenen konsantrasyonlarda verapamil varlığında puromisin seçimi uygulayın. Enfekte edilmemiş kontrol plakasındaki tüm hücreler yok olana kadar seçime devam edin. Bu işlem tipik olarak yaklaşık üç gün sürer.Puromisin ve verapamil seçimi tamamlandıktan sonra, hücreleri tripsinizleyin ve transdüksiyon sırasında belirlenen kapsama düzeyine uygun olarak her biyolojik tekrardan başlangıç zaman noktası olan zaman sıfır hücre peletini toplayın. Kapsama düzeyini koruyarak hücreleri deneysel kollara ayırın. Kollardan birini DMSO ile kontrol grubu olarak belirleyin.Diğeri ise Taxol ile uygulanan işlem grubu olarak belirlenir. Kültürleri 14 ila 16 popülasyon katlanmasına kadar sürdürün. Popülasyon katlanma düzeyini belirtilen formülü kullanarak hesaplayın.Her pasajda hücre canlılığını ve büyüme kinetiğini izleyin. Darboğazları önlemek için yeterli hücre sayılarını koruyun. İstenen popülasyon katlanma düzeyine ulaşıldığında, pellet başına kütüphane kapsamını koruyarak her replika ve koşul için final zaman noktası pelletlerini toplayın.Peletleri, sonraki genomik DNA ekstraksiyonuna kadar 80 degrees Celsius'de saklayın. Dirençli hücreler, Taxol uygulamasına rağmen çoğalmaya devam ederken, parental hücreler aynı uygulama altında hayatta kalamamıştır. RNA sekanslama, dirençli hücrelerde en fazla yukarı regüle edilen genlerden birinin ABCB1 olduğunu, onu ABCB4 ve ABCA5 dahil diğer ABC taşıyıcılarının izlediğini belirlemiştir.Dirençli hücrelerde ABCB1 ekspresyonunun artışı, kantitatif PCR ile doğrulanmıştır. Taxol dirençli hücreler, çoklu ilaç direnci fenotipi ile doksorubisin ve vinkristine karşı direnç göstermiştir. Puromisin, ABCB1 aracılı ilaç efluksu yoluyla hücre dışına pompalanabildiği için dirençli hücrelerde puromisin seleksiyonu verimli olmayabilir.Verapamil tek başına hücre canlılığını etkilememiştir. Ancak, kemoterapötik ajanlarla kombine edildiğinde verapamil, bu ajanlara karşı duyarlılığı yeniden sağlamıştır. Verapamilin toksik olmayan dozları, Taxol-dirençli hücrelerde puromisin duyarlılığını da yeniden sağlamıştır.DMSO veya Taxol ile işlem görmüş koşullardan alınan son zaman noktası örnekleri başlangıç zaman noktasıyla karşılaştırıldığında, neredeyse tüm temel genlerin nakavt sonrası tükendiği görülmüş ve bu durum tarama kalitesini doğrulamıştır. Buna karşılık, DMSO ile işlem görmüş ve Taxol ile işlem görmüş bitiş noktası örneklerinin karşılaştırılması, bu genlerin her iki grupta da temel kalmaya devam etmesi nedeniyle temel genlerde bir tükenme göstermemiştir. Bunun yerine, bu karşılaştırma Taxol duyarlılığını artıran epigenetik modifiyeleri ortaya çıkarmaktadır.Taxol-dirençli hücrelerde gerçekleştirilen EPIKOL taramasında, birden fazla pozitif kontrol geni ve epigenetik modifikasyon faktörü önemli ölçüde azalmıştır. ABCB1'i hedefleyen tek kılavuz RNA'lar, Taxol uygulanan grupta spesifik olarak azalmış olup, bu durum ABCB1'in taramadaki Taxol hassasiyeti için pozitif bir kontrol olduğunu doğrulamaktadır. Bu protokol, araştırmacıların kanser modellerinde tedavi direncini incelemelerine ve CRISPR tarama platformlarını kullanarak kemoterapi direncinin epigenetik düzenleyicilerini belirlemelerine olanak tanır.Kemorezistan hücrelerin taranmasında en önemli husus, kütüphane temsilinin korunması ile transkripsiyon ve seleksiyon koşullarının optimize edilmesidir. Gelecek çalışmalar, çoklu ilaç direncine sahip kanser hücrelerinin terapötik zayıflıklarını belirleyecek ve kemorezistansı aşmak için yeni kombinatoryal yaklaşımlar geliştirecektir.

epigenome-wide-crispr-cas9-based-knockout-screens-on-chemoresistant

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu protokol Drosophila göz / antennal hayali diskleri (EAD) floresan işaretli, genetik olarak tanımlanmış klonal tümörleri oluşturmak için nasıl gösterir. Üçüncü evre larvaları ve nasıl görselleştirmek ve gen ifadesi değişikliklerini ve tümör yayılmasını ölçmek için bunları işlemek için EAD ve beyin teşrih açıklamaktadır.

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Tümör hücreleri ayırdetmek için yeni bir yaklaşım sunuyoruz. Biz DNA Floresan -in-situile ayirt kombine-functionalized tıbbi tel CTCs doğrudan hasta kandan zenginleştirici vivo içinde kabil tarafından yakalanan hücre değerlendirmek için hibridizasyon.

Tümör hücrelerinin tümör hücreleri dolaşan yakalamak için tıbbi bir tel kullanarak karakterizasyonu: 3D bir yaklaşım tabanlı ayirt ve DNA balık

Morfolojik bilgi aynı zamanda gerekli olduğunda şu anda, immünfloresan sabit hücreleri üzerinde boyama seçim protein ifade düzeyleri tespiti için yöntemidir. Burada sunulan bu protokolü parafin gömülü hücre bloklar immunocytochemistry alternatif bir yöntem sağlar.

Immunocytochemistry hücre parafin gömülü bloklar tarafından kültürlü hücrelerdeki Protein ifade düzeyinin belirlenmesi

22C 3 antikor konsantre üzerinde yaygın olarak kullanılan kullanır bir tahlil geliştirdiğimiz uygunluk ile pembrolizumab, tedavi için akciğer kanseri hastalarının güvenilir ve tekrarlanabilir bir şekilde değerlendirmek için yetenek laboratuvarları dünya çapında genişletmek için immunohistokimyasal autostainer, biyopsi ve sitoloji örnekleri için.

22C 3 kullanarak Anti-PD-L1 antikor konsantre biyopsi ve küçük hücreli dışı akciğer kanserli hastalarda sitoloji örnekleri

HMCA tabanlı görüntüleme plaka işgali tahlil performans için sunulmaktadır. Bu plaka üç boyutlu (3D) tümör pulcuklarının oluşumu ve hücre dışı matriks (ECM) içine kanser hücre işgalinin ölçüm kolaylaştırır. İstila tahlil miktar yarı otomatik analizi ile elde edilir.

Kanser hücre işgali ve Anti-metastatik uyuşturucu kullanarak hidrojel mikro-odası dizi (HMCA) eleme Analizi-tabak dayalı

Bu el yazması için basit ve ivedi soruşturma akut miyeloid lösemi (AML) hücre çoğalması içinde birden çok aday genlerin rolünün bir kümelenmiş düzenli olarak Interspaced kısa palindromik yineler (CRISPR) CRISPR-Cas9-tabanlı yöntemi açıklar paralel. Bu teknik ölçeklenebilir ve de diğer kanser hücre hatlarında uygulanabilir.

CRISPR-Cas9-tabanlı rekabet deneyleri kullanarak genetik bağımlılıkları incelenmesi

Burada, desenli nöronlar üzerinde glioblastoma (GBM) göçünü analiz etmek için kullanımı kolay bir ortak kültür tahlili sunuyoruz. Nöronlar üzerinde GBM hücre göçünün kolay ölçülmesi için FiJi yazılımında bir makro geliştirdik ve nöronların GBM hücre invaziv kapasitesini değiştirdiğini gözlemledik.

Göç ve Hücresel Etkileşimleri İncelemek İçin Desenli Nöronlarda Glioblastoma Kök Benzeri Hücrelerin Ortak Kültürü

Burada hemodinamik stresin dolaşımdaki tümör hücreleri üzerindeki etkilerini modellemek için süspansiyondaki kanser hücrelerine sıvı kesme stresi uygulamak için bir yöntem gösteriyoruz.

Hemodinamik Stresin Dolaşımdaki Tümör Hücreleri Üzerindeki Etkilerini şırınga ve İğne Kullanarak Modelleme

Bu protokol, çift negatif timositlerin fare timumundan izolasyonunu, ardından daha fazla fonksiyonel analiz için delta benzeri 4 eksprese eden kemik iliği stromal hücre hattı ko-kültür sisteminde (OP9-DL4) retroviral transdüksiyon ve ko-kültürü tanımlar.

T Hücreli Lösemide Onkogenleri İncelemek için Delta Benzeri 4 Eksprese Eden Stromal Hücreler Üzerinde Murin Timositlerinin Ko-Kültürü ve Transdüksiyonu

Bu protokol, immün yetmezliği olan farelerin çekum duvarına hasta kaynaklı kanser hücrelerinin ortotopik implantasyonunu açıklar. Model, ilerlemiş kolorektal kanser metastatik hastalığını özetler ve klinik olarak anlamlı bir akciğer ve karaciğer metastazı senaryosunda yeni terapötik ilaçların değerlendirilmesine izin verir.

Farelerde Hasta Kaynaklı Kanser Hücrelerinin Ortotopik İmplantasyonu, İleri Kolorektal Kanseri Özetliyor

Koç University School of Medicine.  Burada, doz yükseltme yaklaşımıyla kemodirençli hücreler üretmek için bir protokol sunuyoruz; ardından edinilmiş kemodirenç düzenleyicilerini belirlemek için epigenetik modifikatörleri hedefleyen odaklı bir sgRNA kütüphanesi kullanılarak CRISPR/Cas9 tabanlı bir ekran sunuluyor. Protokol ayrıca, kemodirençli hücre modellerine uyarlanmış çoklu optimizasyon noktaları sunar ve direnç mekanizmalarını araştıran ar...

Kemodirençli Hücrelerde Epigenom Genelinde CRISPR-Cas9 Tabanlı Knockout Screen'ler

Daha fazla video keşfet