Name: İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Mitokondrial Kompleksi Aktivite araştırmayı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-17T17:21:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerinde mitokondrial solunum zinciri komplekslerinin in-gel aktivite analizi yöntemini. Bu teknik, hücre fizyolojisi ve kök hücre biyolojisindeki mitokondrial fonksiyonları anlamak için araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Teitell laboratuvar İnsan embriyonik kök hücre çalışmaları henüz California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) tohum hibe RS1-00313 tarafından desteklenmektedir. Biz bu ve ek çalışmalar tavsiye ve anlayışlar sağlamak için Dr. Carla Köhler (UCLA) ve Köhler, laboratuvar üyelerine teşekkür ederim.

Mitokondrial Kompleksi için Yüksek Çözünürlüklü Temizle Doğal Jel Electophoresis (hrCNE)-Gel Aktivitesi Tahliller İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC) standart koşullar kullanarak MEF-klimalı ortamda 5 gün sonra Matrigel büyüme geçiş ˠ ışınlanmış veya mitomisin C ile tedavi edilen fare embriyonik fibroblastlar (MEFS), bir tek tabaka üzerinde tutuldu. MEFS kirlenmesine neden kaldırmak için, hESC Matrigel yeniden kaplama ve ek olarak 3 gün boyunca MEF-klimalı ortamda yetişen. Pluripotency belirteçlerinin Ekim-4 ve SSEA-4 İmmünofloresan mikroskopi hESC farklılaşma olmaması onaylamak için kullanılır oldu. <ol><li> , 5 dakika boyunca trypsinization (6 plaka kişi başına 1ml 1x tripsin) takip ılık 1x PBS, pH 7.4, hücreleri yıkayın. </li><li> Taze tripsin inhibitörü eşit hacmi (1x PBS, pH 7.4 1mg/ml) ekleyin. Hasat hücreleri ve 200g az santrifüj, 5 dakika, oda sıcaklığında. </li><li> Taze hazırlanmış 1 &#39;Proteaz İnhibitör Kokteyl; 1.7ml (hücre pelet boyutu dayalı), buz gibi mitokondri izolasyon tamponu (6.6mM imidazol / HCl, pH 7.0 83mm sakkaroz) - 0.8 supernatant ve tekrar süspansiyon pelet hücreleri atın. 10 dakika buz üzerinde inkübe edin. </li><li> Homojenizatör (- 50 vuruş ~ 40) ile hücreler Dounce. Tripan mavisi ile dounced hücrelerinin ışık mikroskobu kullanılarak homojenizasyon tamlığı kontrol etmek için bir kısım Leke. </li><li> 4 10 dakika 20.000 g Santrifüj ° C çekirdek ve daha büyük hücre parçaları da içeren bir ham mitokondriyal pelet elde etmek için. Durusu ve süpernatantı atmak ve çöktürülmüş ham mitokondriyal pelet tartmak. Pelet -80 saklanabilir ° Bu bir durak noktası ise C sıvı azot anlık dondurma. NOT: Diferansiyel santrifüj veya diğer gradyan tabanlı işlemleri saf mitokondriyal membran fraksiyonu yalıtma ve toplamak için kullanılabilir. Bkz. Ürün. 4 Ayrıntılı bilgi için. Bu alternatif bir yaklaşım yerine hücre ağırlığı veya hücre sayısını mg başına karmaşık aktivite mitokondriyal protein mg başına mitokondriyal karmaşık aktivite verecektir. Mitokondriyal proteinlerin konsantrasyonu, bu karşılaştırma yapmak için arıtma sonra tespit edilmesi gerekecektir. Ayrıca bu yaklaşım, farklı bir izolasyon tampon için gerekli olabilir. Saf mitokondriyal membran fraksiyonu çözünürleştirme için, adım 6&#39;da aşağıdaki nota bakınız. </li><li> Buz üzerinde buz çözünürleştirme tamponu (50mm NaCl, 50mm imidazol / HCl pH 7,0, 1mm EDTA, 2mm 6-aminohexanoic asit) ile vorteks ham mitokondriyal pelet çözünür. 6-aminohexanoic asit 1x Proteaz İnhibitör Kokteyl ile değiştirilebilir. 35μl pelet ağırlığı 20 mg başına çözünürleştirme tampon kullanın. % 10 w / v digitonin pelet ağırlığı ve tüp hafifçe vurarak karıştırın 20mg başına 20μl ekleyin. Buz üzerinde 5-10 dakika inkübe. Dodesil-BD-maltoside veya triton X-100 proteinleri çözünür digitonin ikame edilebilir. Deterjan ve miktarı seçim supercomplexes veya mitokondriyal komplekslerinin multimer formları oluşumunu etkileyebilir. Daha fazla bilgi için, ref.1 bkz. NOT: saf mitokondriyal membran fraksiyonu çözünür için gerekli deterjan miktarı, 2-6g / g arasında değişen bir deterjan / protein ağırlık oranına karşılık Mitokondrial membranlar çözünür optimal oranı dodesil-BD-maltoside g / 2.5g için 3g / g triton X-100 ve 6g / digitonin g. </li><li> 15 dakika 4 ° C 100.000 g çözündüğünü pelet Santrifüj Net süpernatant toplayın. </li><li> Son% 5 w / v gliserol ve% 0.01 w / v Ponceau S (% 50 w / v gliserol,% 0.1 w / v Ponceau S yükleme tamponu stok solüsyonu kullanmak) tampon yükleme ekleyin. </li><li> 20-40mg şeritli başına ham mitokondriyal pelet içeren bir hacmi ile jel kuyu yükleyin. % 3.5 jel istifleme ile bir akrilamid gradyan jel (4 -13%) kullanın. NOT: Jel hazırlanması ve elektroforez koşulları: Bisacrylamide akrilamid ve 1.5g (% 49.5 T, T, AA ve bisAA ve C toplam konsantrasyonu% 3 C 48g: jel hazırlanması için, aşağıdaki gibi bir akrilamid / bis-akrilamid (AA / bisAA) 3 karışımı kullanın toplam monomer, çapraz bağlayıcı (bisAA) yüzde olarak). Jel tampon (3): 1.5M 6-aminohexanoic asit; 75mm imidazol, pH 7.0 </li></ol><table style="padding-left: 60px;" border="0"><tbody><tr><td> Gradient jel: </td><td> % 4 </td><td> % 13 </td><td> Jel İstifleme: </td><td> % 3.5 </td></tr><tr><td> AA / bisAA 3 karışımı </td><td> 2 ml </td><td> 6,5 ml </td><td></td><td> 0,6 ml </td></tr><tr><td> Jel tampon 3 &#39; </td><td> 8.3 ml </td><td> 8.3 ml </td><td></td><td> 2.7 ml </td></tr><tr><td> Gliserin </td><td></td><td> 5 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> H 2 O </td><td> 14.7 ml </td><td> 5 ml </td><td></td><td> 4.7 ml </td></tr><tr><td> Toplam hacim </td><td> 25 ml </td><td> 25 ml </td><td></td><td> 8 ml </td></tr><tr><td> 10% APS </td><td> 139 ul </td><td> 125 ul </td><td></td><td> 67 ul </td></tr><tr><td> TEMED </td><td> 14 ul </td><td> 12.5 ul </td><td></td><td> 6.7 ul </td></tr></tbody></table> Anot tampon: 25mm imidazol / HCl, pH 7.0 Katot tamponu: 50mm Tricine, 7.5mm imidazol / HCl,% 0,02 w / v dodesil-BD-maltoside,% 0.05, pH 7.0 w / v deoksikolatın Dökün ve soğuk bir oda (4-7 ° C) jeller çalıştırmak. Kullanılan ilk gerilimi 100V. Örnek istifleme jel girdiğinde, voltaj 15mA (0.15 &#39;14&#39; 14 cm jeller), akım sınırlı 500V yükseltilir. Elektroforez keskin bir çizgi, kırmızı Ponceau S boya jel ön yaklaşımlar 3-4 saat sonra durdurulur. Alternatif olarak, bir jel 70-100V sabit gerilim ile gece çalıştırmak olabilir. <ol><li> Jel aktivite testleri. Protein çözünmüş verimlilik ve iyi ortalama yüklenen malzeme miktarı her bir deney için inkübasyon süresi bağlıdır. I, IV ve V kompleksler genellikle kompleksleri II ve III daha güçlü sinyaller verir. </li></ol> Kompleks I (CI) Birkaç saat oda sıcaklığında jel dilim CI tamponu (2.5mg/ml NBT; 0.1mg/ml NADH 5mM Tris-HCl, pH 7.4) ile inkübe edin. CI tamponu: 5mM Tris-HCl, pH 7.4 100ml başına ekleyin: 0.01g NADH 0.25g NBT 15-45 dakika için% 50 metanol ve% 10 asetik asit jel sabitleyin. Sabit% 10 asetik asit jel korunur. Kompleks II (CII) CII tampon (0.2mm phenazine methasulfate;; 5mM Tris-HCl pH: 7.4; 2.5mg/ml NBT süksinat 20mm sodyum) ile oda sıcaklığında birkaç saat için jel dilim inkübe edin. CII tamponu: 5mM Tris-HCl, pH 7.4 100ml başına ekleyin: 200μl 1M sodyum süksinat 80μl phenazine methasulfate (250mm PMS DMSO içinde çözünmüş) 0.25g NBT Fix gibi Kompleksi için jel Kompleks III (CIII) , Oda sıcaklığında birkaç saat için; CIII tamponu (0.05% 3,3 &#39;-diaminobenzidin tetrahydrochloride (DAB), 50mm sodyum fosfat, pH 7.2) ile jel dilim inkübe edin. CIII tampon: 50mm sodyum-fosfat, pH 7,2 100ml başına ekleyin: 50mg diaminobenzidin tetrahydrochloride Fix gibi Kompleksi için jel Kompleks IV (CIV) Birkaç saat süreyle oda sıcaklığında; CIV tampon (0.05% 3,3 &#39;-diaminobenzidin tetrahydrochloride (DAB), 50μM at kalp sitokrom c 50mm sodyum fosfat, pH 7.2) ile jel dilim inkübe edin. CIV tampon: 50mm sodyum-fosfat, pH 7,2 100ml başına ekleyin: 50mg diaminobenzidin tetrahydrochloride 0.1g at kalp sitokrom c Fix gibi Kompleksi için jel Karmaşık V (CV) Jel dilim CV tampon (35mm Tris-taban, 270mm glisin pH 8.3, 25 ° C, 14mm MgSO 4,% 0.2 w / v Pb (NO 3) 2, 8mm ATP) birkaç saat oda sıcaklığında inkübe CV tampon başına çözüm 100ml eklemek: <table border="0"><tbody><tr><td> Tris-baz </td><td> 0.424g </td></tr><tr><td> Glisin </td><td> 2.026g </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> 0.345g </td></tr><tr><td> Pb (NO 3) 2 </td><td> 0.29g </td></tr></tbody></table> PH (8.3 olmalıdır) ayarlamak gerek yok - asit veya baz kullanmayın. Filtre ve ekle <table border="0"><tbody><tr><td> ATP </td><td> 0.441g </td></tr></tbody></table> 30 dakika süreyle% 50 metanol Fix jel ve su aktarmak.

<ol><li>Wittig, I., Braun, H. -P., Sch˫gger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+native+PAGE%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Blue native PAGE.</a> Nature Protocols. 1, 418-428 (2006).</li>
<li>Wittig, I., Karas, M., Sch˫gger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Resolution+Clear+Native+Electrophoresis+for+In-gel+Functional+Assays+and+Fluorescence+Studies+of+Membrane+Protein+Complexes.++6%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">High Resolution Clear Native Electrophoresis for In-gel Functional Assays and Fluorescence Studies of Membrane Protein Complexes. 6.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 6, 1215-1225 (2007).</li>
<li>Wittig, I., Carrozzo, R., Santorelli, F. M., Sch˫gger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assays+in+high-resolution+clear+native+gels+to+quantify+mitochondrial+complexes+in+human+biopsies+and+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Functional assays in high-resolution clear native gels to quantify mitochondrial complexes in human biopsies and cell lines.</a> Electrophoresis. 28, 3811-3820 (2007).</li>
<li>Castle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Organelles+from+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Protein+Science%22%5BJournal%5D)">Purification of Organelles from Mammalian Cells.</a> Current Protocols in Protein Science. Coligan, J. E., Dunn, B. M., Speicher, D. W., Wingfield, P. T. 4.2, John Wiley & Sons, Inc. New York. 4.2.1-4.2.57 (2007).</li>
</ol>

Bu video, insan embriyonik kök hücreleri, yüksek çözünürlükte net yerli jel elektroforezi (hrCNE) ayrılması, ve jel katalitik etkinlik analizleri ile sonraki analiz mitokondriyal protein kompleksleri çıkarma tarif ettiler. hrCNE mavi yerel jel elektroforezi ile karşılaştırılabilir bir çözünürlükte mitokondrial membran protein kompleksleri giderir ve jel faaliyet deneyleri için üstündür. Bu teknik, mitokondriyal solunum kompleksleri IV ölçmek için değil, aynı zamanda hESC ve bunların türev döl hem de herhangi bir mitokondrial membran protein...

<table><tbody><tr><td>0.5M EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP120-1</td><td>pH değeri NaOH ile 8.0'e ayarlanmalıdır</td></tr><tr><td>1M NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014-500MG</td><td></td></tr><tr><td>1M Sodyum süksinat</td><td>Fisher Scientific</td><td>S413-500</td><td></td></tr><tr><td>0.1M Sodyum fosfat tamponu pH 7.2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP332-1 ve BP329-1</td><td>25 °C'de pH 7.2 değerinde 0.1M sodyum fosfat tamponu hazırlamak için 68.4 ml 1M Na2HPO4 ve 31.6 ml 1M NaH2PO4 karıştırın</td></tr><tr><td>1M Trisin, pH 7.0 (NaOH ile ayarlanmış)</td><td>EMD Millipore</td><td>9010</td><td>4 °C'de saklayın</td></tr><tr><td>1M imidazol/HCl, pH 7.0</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-2399</td><td>4 °C'de saklayın</td></tr><tr><td>1M Tris-HCl, pH 7.4</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP153-1</td><td></td></tr><tr><td>%20 (ağırlık/hacim) dodecyl-b-D-maltoside (DDM)</td><td>Fluka</td><td>44205-500MG</td><td>Suda çözünmüş. 1 ml'lik alikotları &amp;#8211;20 °C'de saklayın.</td></tr><tr><td>%10 (ağırlık/hacim) digitonin (&amp;gt;%50 saflık, yeniden kristallendirme yapılmadan kullanılmış)</td><td>Fluka</td><td>37008-1G</td><td>Suda çözünmüş. 0.1&amp;#8211;1 ml'lik alikotları &amp;#8211;20 °C'de saklayın. Kullanımdan önce 95 °C'ye ısıtılmalıdır.</td></tr><tr><td>2M 6-aminoheksanoik asit</td><td>Fluka</td><td>07260-100G</td><td>4 °C'de saklayın</td></tr><tr><td>10x Ponceau S/gliserol stok çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-3504 ve G6279-1L</td><td>Suda %0.1 Ponceau S, %50 gliserol (ağırlık/hacim).</td></tr><tr><td>%10 a/h sodyum desoksikolat</td><td>Fluka</td><td>30970-25G</td><td>Suda çözünmüş. Işıktan korunmalıdır. pH değeri HCl ile 7.0'e ayarlanmalı, filtrelenmeli ve oda sıcaklığında saklanmalıdır.</td></tr><tr><td>250 mM fenazin metasülfat (PMS)</td><td>TCI America</td><td>P0083</td><td>DMSO içinde çözülmüş ve alikotlanmış. &amp;#8211;20 °C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Nitro-mavi tetrazolyum (NBT)</td><td>Amresco</td><td>0329-1G</td><td></td></tr><tr><td>3,3&amp;rsquo;-diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB)</td><td>TCI America</td><td>D0078</td><td></td></tr><tr><td>Pb(NO3)2</td><td>Fisher Scientific</td><td>L62-100</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP213-1</td><td></td></tr><tr><td>Tris bazı</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>Glisin</td><td>Fisher Scientific</td><td>G45-212</td><td></td></tr><tr><td>Adenozin 5&amp;rsquo;-trifosfat disodyum tuzu (ATP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2383-5G</td><td>Derece I, minimum %99</td></tr><tr><td>beta-nikotinamid adenin dinükleotid (NADH) indirgenmiş form</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N-8129</td><td></td></tr><tr><td>At kalbinden sitokrom c</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2506-250MG</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP220-212</td><td></td></tr><tr><td>100x proteaz inhibitör kokteyli</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8340</td><td>&amp;#8211;20 °C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D128-500</td><td></td></tr><tr><td>Trypan mavi boyası %0.4</td><td>GIBCO, Life Technologies tarafından</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>10x Tripsin (%0.5)</td><td>GIBCO, Life Technologies tarafından</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin İnhibitörü</td><td>GIBCO, Life Technologies tarafından</td><td>17075-029</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan embriyonik kök hücreleri mitokondrial kompleksi aktivite araştırmayı

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

Mitokondri, sitoplazma, hücre metabolizması ve homeostasis birincil rolü var organelleri, hücre sinyal ağının düzenlenmesi, ve programlı hücre ölümü. Mitokondri üretmek ATP, sitoplazmik redoks devlet ve Ca2 + dengesini düzenleyen yağ asitleri catabolize, hem, nükleotidler, steroid hormonlar, amino asitler, sentez ve proteinlerin demir-kükürt kümeleri bir araya yardımcı. Mitokondri, aynı zamanda ısı üretimi önemli bir rolü var. Mitokondriyal genom mutasyonları insan bozukluğunun çeşitli neden olur. MtDNA mutasyonlarının birikmesi, yaşlanma ile ilişkilidir ve kanser gelişiminde önemli bir role sahip şüphelenilen. Tüm hücre tipleri hayati önemli rol nedeniyle, mitokondri fonksiyonu da kök hücreler için kritik öneme sahip olmalıdır. Kök hücre canlılığı, proliferasyon ve farklılaşma kapasitesi anlayışımızın önemli ilerlemeler yapılmıştır. Ancak kök hücrelerin fonksiyonel aktivite, özellikle enerji durumu, henüz detaylı bir şekilde incelenmemiştir değildi. Insan embriyonik kök hücreleri (hESC) ve farklılaştırılmış habercisi döl mitokondriyal özellikleri hakkında neredeyse hiçbir şey bilinir. HESC işlev ve gelişim potansiyeli mitokondri rolünü anlamak ve değerlendirmek için tek yolu doğrudan mitokondriyal solunum kompleksleri aktivitesini ölçmek için. Burada, yüksek çözünürlüklü hESC beş solunum zinciri kompleksleri analiz etmek için bir yöntem olarak jel faaliyet görselleştirme net yerli jel elektroforezi ve sonraki açıklar.

Bu video, insan embriyonik kök hücreleri mitokondriyal solunum zinciri kompleksleri jel faaliyet deneyleri kullanarak nasıl analiz edilebilir size gösterecektir.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Mitokondrial Kompleksi Aktivite araştırmayı

Mitokondriler; hücresel metabolizma ve homeostazda, hücre sinyal ağının düzenlenmesinde ve ... temel rol oynayan sitoplazmik organellerdir.

Mitokondriler, metabolizma ve enerji üretiminden programlı hücre ölümüne ve steroid hormon sentezine kadar hücre fizyolojisinde çok sayıda role sahiptir. Mitokondrilerin hem temel hücresel fonksiyonlardaki hem de hastalıklardaki önemine rağmen, insan embriyonik kök hücrelerinde ve bunların farklılaşmış soyundan gelen hücrelerdeki fonksiyonları hakkında çok az şey bilinmektedir. Bu videoda, insan amry kök hücrelerinin mitokondriyal solunum zinciri komplekslerinin tekil aktivite analizleri kullanılarak nasıl analiz edilebileceğini göstereceğiz.Merhaba, ben University of California Los Angeles, Patoloji ve Laboratuvar Tıbbı Bölümü'ndeki Michael Tetel laboratuvarından Ivan OV. Bugün sizlere insan embriyonik kök hücrelerinde mitokondriyal solunum kompleksi fonksiyonlarının değerlendirilmesine yönelik bir prosedürü göstereceğiz. Bu jel içi aktivite değerlendirme prosedürü; insan embriyonik kök hücrelerinden kaba mitokondriyal pellet izolasyonunu, oksidatif fosforilasyon sisteminin mitokondriyal komplekslerinin yüksek çözünürlüklü berrak doğal poliakrilamid jel elektroforezi ile ayrılmasını ve ardından gelen jel içi aktivite analizini içermektedir.Hadi başlayalım. Bu prosedürdeki ilk adım

probing-for-mitochondrial-complex-activity-human-embryonic-stem

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Parkinson hastalığı yol açan genlerde mutasyon taşıyan hastaların Fibroblastlar kolay erişilebilir bir...

Parkinson Hastalığı Alanında Mitokondriyal Fenotiplerinin İzleme İlköğretim İnsan Fibroblast Kullanımı

Solunum ve oksidatif fosforilasyon ile ve hücre canlılığı üzerindeki ilişkili mitokondriyal fonksiyonları üzerinde, protein kinaz C (PKC), izozimlerinin aktivasyon etkisi tarif edilmektedir. Yaklaşım seçici olarak mitokondriyal işlev ve hücre enerji durumunu belirlemek için birincil hücre kültürü deneyleri ve çeşitli PKC izozimleri overexpress için adenoviral teknik uyum sağlar.

Böbrek Hücreleri aşırı eksprese eden protein kinaz C izozimlerinin Mitokondriyal Fonksiyonlar ve Hücre Canlılık Değerlendirilmesi

Tek hücre gen sentezleme tahlili kök hücre heterojeniteler anlamak için gereklidir.

Kantitatif RT-PCR ile Bireysel İnsan Embriyonik Kök Hücreleri profilleme

Burada, bir (hücre döngüsü) kinazın mitokondriyal lokalizasyonunun nasıl çalışılacağını ve alt mitokondriyal konumunun yanı sıra potansiyel mitokondriyal substratların/hedeflerin nasıl belirleneceğini ana hatlarıyla açıklıyoruz. Proteinlerin mitokondriye zorla ekspresyonu, ilgilenilen bir proteinin mitokondriyal lokalizasyonunun fonksiyonel sonuçlarını incelemek için yararlı bir araç sağlar.

Deneysel Yaklaşımlar Mitokondriyal Yerelleşme ve Nükleer Hücre Döngüsü Kinaz, Cdk1 Fonksiyonu Eğitim için

Bozulmuş mitokondriyal taşıma ve morfolojisi çeşitli nörodejeneratif hastalıklarda rol oynamaktadır. Sunulan protokol, kalıtsal spastik paraplejide mitokondriyal taşıma ve morfolojiyi değerlendirmek için indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı ön beyin nöronlarını kullanır. Bu protokol, aksonların boyunca mitokondriyal ticaretinin karakterizasyonuna ve nörodejeneratif hastalıkların incelenmesini kolaylaştıracak morfolojilerinin analizine olanak sağlamaktadır.

Kalıtsal Spastik Paraplejide İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronlarda Mitokondriyal Taşıma ve Morfolojinin Analizi

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre türevi beyin organoidlerinin üretimi ve mitokondriyal hastalıkların modelinde kullanımları için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz.

Mitokondriyal Hastalık Modellemesi için İnsan Beyni Organoidlerinin Üretimi

Daha önce dondurulmuş arşivlenmiş katı dokulardan mitokondri ile zenginleştirilmiş örneklerin hazırlanması, araştırmacıların çeşitli deneysel yöntemlerde mitokondrilerin hem fonksiyonel hem de analitik değerlendirmelerini yapmalarına izin verdi. Bu çalışma, donmuş kalp dokusundan mitokondri ile zenginleştirilmiş preparatların nasıl hazırlanacağını ve mitokondrilerin analitik değerlendirmelerinin nasıl yapıldığını göstermektedir.

Daha Önce Dondurulmuş Kardiyak Dokudaki Mitokondriyal Elektron Transfer Komplekslerinin Sow'un Yavrularından Ölçülmesi: Egzersize Bağlı Mitokondriyal Biyoenergetik Değişikliklerini Değerlendirmek için Bir Model

Bu çalışma, mitokondriyal hacim, mitokondriyal membran potansiyeli, reaktif oksijen türleri seviyesi, mitokondriyal solunum zinciri bileşimi ve mitokondriyal DNA'daki değişiklikleri tespit etmek için iki floresan muhabir veya antikor ile akış sitometrisine ve çift boyamaya dayalı çoklu mitokondriyal fonksiyonel parametreleri ölçmek için yeni bir yaklaşım sunmaktadır.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerde Multipl Mitokondriyal Parametrelerin ve Nöral ve Glial Türevlerinin Akış Sitometrik Analizi

Burada, memeli hücrelerinde moleküler oksijen tüketme yeteneklerinden bağımsız olarak mitokondriyal fonksiyonu doğrudan ölçmek için bir tahlil derlemesi sunuyoruz.

Memelilerde Mitokondriyal Fonksiyonu Ölçmek için Oksijenden Bağımsız Tahliller

İnsan Embriyonik Kök Hücre (ES) yayılması

Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerinde mitokondrial solunum zinciri komplekslerinin in-gel aktivite analizi yöntemini. Bu teknik, hücre fizyolojisi ve kök hücre biyolojisindeki mitokondrial fonksiyonları anlamak için araştırmacılara değerli bilgiler sunar.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Mitokondrial Kompleksi Aktivite araştırmayı

Daha fazla video keşfet