Name: Memeli Hücreleri Trypsinizing ve alt kültüre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Öğrenin, memeli hücrelerinde trypsinizasyon ve alt kültür tekniklerini kullanarak sağlıklı hücre kültürlerinin nasıl sürdürüleceğini. Bu yöntem, yapışkan ve süspansiyon hücre hatları için hayati önem taşır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri</a> .

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

memeli hücreleri trypsinizing ve alt kültüre

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

Hücreleri confluency ulaşmak, pasajlandı veya geçişli olmalıdır. Sonunda düşük mitotik indeks ve hücre ölümüne altkültürü konfluent hücreleri yapılmaması. Alt kültüre ilk adım trypsinization veya mekanik araçlarla temel kültür geminin yüzey hücreleri ayırmak için. Çıkan hücre süspansiyonu daha sonra bölünmüştür, ya da taze kültürleri içine reseeded. İkincil kültürleri büyüme için kontrol ve periyodik olarak beslenen ve daha sonra üçüncül kültürleri üretmek için pasajlandı olabilir. Hücre Pasajlanması arasındaki zaman hücre hattı ile değişir ve büyüme oranı bağlıdır.

Hücreleri confluency ulaşmak, pasajlandı veya geçişli olmalıdır. Bu video yapışmış ve süspansiyon hücreleri hem de alt kültüre için bir prosedür gösterecektir.

Memeli Hücreleri Trypsinizing ve alt kültüre

Hücreler konfluense ulaştığında, subkültür edilmeleri veya pasajlanmaları gerekir. Konfluens evresindeki hücrelerin subkültür edilmemesi, mitotik indeksin düşmesine ve nihayetinde ... ile sonuçlanır.

Doku kültürü teknolojisi, hücre biyolojisi alanında geniş uygulama alanı bulmuştur. Ancak, kültüre edilmiş hücrelerin sağlıklı kalmaları için düzenli bakıma ihtiyaçları vardır. Hücreler konfluense ulaştığında, alt kültüre alınmalı veya pasajlanmalıdır.Bunun yapılmaması, büyümenin azalmasına ve nihayetinde hücre ölümüne yol açar. Bu videoda, hemlezyonel hem de süspansiyon hücre hatları için doku kültürü hücrelerinin nasıl sürdürüleceğini gösteriyoruz. Merhaba, ben Ricky; Doğu Tennessee'deki Moleküler Patoloji Laboratuvarları Ağının Dr.LAN Laboratuvarındayım.Bugün size süspansiyon ve yapışkan hücrelerin pasajlanması için iki teknik göstermek istiyorum. Bir hücre plağını pasajlamak için, 60 mm'lik bir Petri kabında veya beş mL doku kültürü ortamı içeren 25 cm²'lik bir doku kültürü flaskında konfluense ulaşmış bir primer kültürle başlayacağız.Steril pipet yardımıyla primer kültürdeki tüm besiyerini uzaklaştırarak başlıyoruz. Ardından, bir sonraki adımda eklenecek olan tripsin enziminin etkisini inhibe edebilecek artık fetal bovin serumu kalıntılarını gidermek için, yapışık hücre monokatmanını kalsiyum ve magnezyum içermeyen 37 °C HBSS'nin küçük bir hacmiyle bir veya iki kez yıkıyoruz.Ardından, adherent hücre tabakasını kaplayacak miktarda ılık trypsin EDTA çözeltisini kültüre ekleyin. Daha sonra plakayı bir ila iki dakika boyunca 37 °C sıcaklıktaki bir ısıtma tepsisine yerleştirebilirsiniz. İnkübasyonun ardından, hücreleri yerinden ayırmak için plakanın alt kısmını düz bir yüzeye hafifçe vurun.Hücrelerin yuvarlaklaştığından, yani yüzeyden ayrıldıklarından emin olmak için kültürü ters mikroskop altında kontrol edin. Hücreler yeterince ayrılmamışsa, plakayı bir veya iki dakika daha ısıtma tepsisine geri koyun. Mikroskopla inceleme yaptıktan sonra, kabı tam besiyeri ile durulayın ve süspansiyonu, içinde 2 ml tam besiyeri bulunan 15 ml'lik konik tüpe pipetle aktarın.Hücreleri pelletlemek için santrifüjleyin ve pelletlemi komple ortamda yeniden süspande edin. Şimdi, uygun şekilde etiketlenmiş her bir yeni plakaya eşit hacimde hücre süspansiyonu ekleyin. Alternatif olarak, hücreler bir hemositometre kullanılarak sayılabilir ve her bir plakaya belirli sayıda hücre eklenebilmesi için istenen yoğunluğa kadar dilüe edilebilir.Her plaketi subkültür tarihi ve pasaj numarası ile etiketlediğinizden emin olun. Hücre süspansiyonunu ekledikten sonra, her yeni kültüre 1 mL taze besiyeri ekleyin. Ardından plaketleri nemlendirilmiş 37 °C %5 CO2 inkübatöründe inkübe edin.Hücreleri gece boyunca inkübe ettikten sonra, plakalara taze besiyeri ekleyin ve plakaları tekrar 37 °C'ye yerleştirin. Plaka konfluense ulaştığında, bu prosedürü tekrarlayarak plakayı tekrar pasajlayabilir ve gerektiği şekilde pasajlamaya devam edebilirsiniz. Şimdi size süspansiyon kültüründeki hücrelerin nasıl pasajlanacağını göstereceğiz.Süspansiyon kültüründeki hücrelerin paketlemesi, adherent hücrelere göre daha basittir. Süspansiyon kültürleri paketlenmeden önce, hücreler konfluense ulaşana kadar her iki ila üç günde bir beslenerek sürdürülmelidir; konfluens, hücrelerin süspansiyon içinde topaklandığı ve flask çalkalandığında medyum bulanık göründüğü aşamadır.Bunu yapmak için, flasksa çökmüş olan hücreleri rahatsız etmemeye dikkat ederek süspansiyon hücrelerinin bulunduğu flaskı inkübatörden çıkarın. Aseptik koşullarda flasktaki ortamın yaklaşık üçte birini boşaltıp atın ve yerine 37 °C'de önceden ısıtılmış eşit hacimde ortam ekleyin. Ortamı değiştirdikten sonra flaskı dairesel hareketlerle sallayın ve 37 °C, %5CO2 değerlerine ayarlanmış inkübatöre geri yerleştirin.Eğer flaskta 15 mL'den az besiyeri varsa, hücrelerin besiyeri ile temasını artırmak için flaskı yatay pozisyonda inkübe edin. Aksi takdirde, kültürlerin beslenmediği günlerde flasklar dikey olarak inkübe edilebilir. Hücreleri yeniden süspande etmek için flaskları çalkalayarak kontrol edin.İyi metabolik büyümeye işaret eden ortamdaki renk değişimlerini gözlemlediğinizden emin olun. Kültürler konfluen hale geldiğinde, ki bu yaklaşık mil başına 2,5 milyon hücreye karşılık gelir, onları pasajlayabilirsiniz. Bir kez daha, hem adherent hem de süspansiyon kültürleri için kültüre edilmiş hücrelerin nasıl pasajlanacağını göstermiş olduk.İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkür ederiz, tüm deneylerinizde başarılar dileriz.

trypsinizing-and-subculturing-mammalian-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Mikro-disseke eksplantlar tekniği, iskelet kas kök hücre kaynağı olarak çocuk, yetişkin ya da embriyonik kasları proliferatif iskelet kas hücreleri izole için sağlam ve güvenilir bir yöntemdir. Benzersiz, bu hücrelerin klonal in vivo nakli için kullanılan iskelet kas kök hücre hatları üretmek için türetilmiştir.

Yetişkin ve Embriyonik İskelet, Kas Microexplant Kültür ve İskelet Kası Kök Hücre İzolasyonu

Bu raporda, izole etmek için bir sistem ve fare meme bezi kültür donör hücreleri göstermek ve bu hücrelerin orthotopically nakli stromal analiz etmek için alıcı farelerde meme tümör gelişimi sırasında epitelyal etkileşimler.

C57BL/6J Fare Stromal Cells ve Karsinomu Hücreler Meme Nakli

Bu video, bir fare tümörü ksenogreft modelinde tümöre özgü antikorların in vivo lokalizasyonunu incelemek için bir tekniği göstermektedir. Tümör oluşumu için kanser hücrelerinin farelere deri altına enjekte edilmesinin ardından, tümöre özgü reseptörlere bağlanan floresan etiketli antikorlar enjekte edilir ve görüntüleme yoluyla antikor lokalizasyonunun in vivo olarak değerlendirilmesini sağlar.

Tümöre Özgü Antikorların İn Vivo Lokalizasyonunu Değerlendirmek İçin Bir Teknik

Video, memeli hücrelerinde toplu otofajik sekestrasyon aktivitesini değerlendirmek için bir testi göstermektedir. Laktat dehidrojenaz (LDH) dahil olmak üzere sitozolik proteinleri serbest bırakmak için elektroporasyon kullanır. Sekestre LDH ve toplam hücresel LDH fraksiyonları, LDH sekestrasyonunu değerlendirmek için belirlenir ve genel toplu sekestrasyon aktivitesi hakkında bilgi sağlar.

Memeli Hücrelerinde Toplu Otofajik Sekestrasyon Aktivitesinin Ölçülmesi

Bu video, fare embriyolarının dorsolateral telensefalonundan birincil serebral korteks hücrelerini izole etmek ve kültürlemek için bir protokolü göstermektedir.

Fare Embriyo Dorsolateral Telenefalonlarından Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürlenmesi

Bu teknik, önceki memeli hücrelerinin protozoal enfeksiyonlara karşı doğal ev sahibi hücrelerin önceden yetiştirilir bakteriyel patojenlerin hücre içi büyüme, hasat normalleştirmek ve ölçmek için bir yöntem sağlar. Bu yöntem, sahne emiş hem de hedef hücre tipleri için konukçu hücrelerin geniş bir çeşitliliği için modifiye edilebilir.

Protozoa astarlanmış Bakteriler ile uysal Memeli Hücre Enfeksiyonlar

Biz etiketleme ve yenidoğan farelerin genotiplenmesi ve onlardan birincil nöronal kültürlerin üreten prosedürleri açıklar. genotyping, hızlı, verimli ve güvenilir, ve otomatik nükleik asit ekstraksiyon için izin verir. Bu neonatally öldürücü fareler ve genotipleme önce tamamlanmasını gerektirmektedir kültürleri için özellikle yararlıdır.

Hayvanlar Rapid Genotipleme Beyin Nöronlar İlköğretim Kültürler kurulması izledi

Bu protokolün amacı, moleküler biyoloji, biyokimya, floresan aktif hücre ayrıştırma ve primer in vitro kullanımlar (örneğin, klojenojenik) gibi çeşitli downstream uygulamaları için yetişkin farelerin dorsal deriden epidermal keratinositleri izole etmektir. keratinositler).

Fare Epidermal Keratinositlerin İzolasyon ve In Vitro Klojenik Kültür

Canlı maya ve memeli hücrelerinde formaldehit çapraz bağlama ile çevirisel (protein biyosentez) kompleksleri hızla stabilize etmek için bir teknik sunuyoruz. Yaklaşım, geçici ara maddelerin ve dinamik RNA:protein etkileşimlerinin parçalanarak parçalanmasını sağlar. Çapraz bağlantılı kompleksler, derin sıralama tabanlı profil oluşturma yöntemleri, mikroskopi ve kütle spektrometresi gibi birden fazla aşağı akış uygulamasında kullanılabilir.

Ökaryotik Hücrelerden Çeviri Komplekslerinin Hızlı In Vivo Fiksasyonu ve İzolasyonu

AviTag-spesifik Konum Kısıtlı Aydınlatma Takviyeli Biyotinilasyon (ALIBi), ribozom popülasyonlarının etiketlenmesi ve afinite-affinite-arındırıcı olarak arındırılması amacıyla geliştirilen, sonraki dizileme ve proteomik analiz için geliştirilen yeni bir optogenetik olarak aktive edilmiş yöntemdir.

Rekombinant Peptit Etiketine Özgü Konum Kısıtlı Aydınlatma Güçlendirilmiş Biyotinilasyona Dayalı Subhücresel Ribozom Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Öğrenin, memeli hücrelerinde trypsinizasyon ve alt kültür tekniklerini kullanarak sağlıklı hücre kültürlerinin nasıl sürdürüleceğini. Bu yöntem, yapışkan ve süspansiyon hücre hatları için hayati önem taşır.

Memeli Hücreleri Trypsinizing ve alt kültüre

Daha fazla video keşfet