Name: Donma Çözülme ve Ulaştırma Ambalaj Hücreler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-07-02T15:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Öğrenin, memeli hücrelerini uzun süreli saklama için dondurma ve çözme tekniklerini. Sıvı azotta saklama ve hücre canlılığını koruma yöntemleri araştırmacılara temel beceriler kazandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a class="jove_content" href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri.</a>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

donma Çözülme ve ulaştırma ambalaj hücreler

Freezing, Thawing, and Packaging Cells for Transport

Kültüre memeli hücrelerinin hücre biyolojisi çalışmalarında yoğun olarak kullanılmaktadır. Bu yapı, fonksiyon, davranış, kültür hücre biyolojisi ve korunması için mümkün olması için bir dizi özel beceri gerektirir. Bu video hücreleri ve dondurulmuş stokları nasıl kurtarmak için dondurma ve saklamak için gerekli temel becerileri açıklar.

Kültüre memeli hücrelerinin hücre biyolojisi çalışmalarında yoğun olarak kullanılmaktadır. Bu video hücreleri ve dondurulmuş stokları nasıl kurtarmak için dondurma ve saklamak için gerekli temel becerileri açıklar.

Donma Çözülme ve Ulaştırma Ambalaj Hücreler

Kültürlenmiş memeli hücreleri, hücre biyolojisi çalışmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu hücreleri koruyabilmek için bir dizi özel beceri gerekmektedir...

Hücre kültürleri, çok çeşitli araştırma ve tanı uygulamalarında kullanılmaktadır. Hücreleri korumak, yaşlanmayı önlemek, kontaminasyon riskini azaltmak ve genetik sürüklenme etkilerini en aza indirmek amacıyla hücre hatlarının gelecekteki çalışmalar için saklanması bazen tercih edilir. Hücre hatları, uzun süreli saklama için dondurulabilir.Bu videoda, hem monokatman hem de süspansiyon halinde büyütülen hücrelerin nasıl dondurulacağını ve yeniden büyütülmeleri için nasıl çözüleceğini gösteriyoruz. Merhaba, ben Ricky; Doğu Tennessee'deki Moleküler Patoloji Laboratuvarları Ağının Dr. LAN laboratuvarındayım. Bugün size hücrelerin uzun süreli saklama için nasıl dondurulacağını ve sıvı azottan nasıl çözüleceğini göstereceğim.İnsan adherent hücrelerini dondurmak için, öncelikle onları paketleyecekmiş gibi plakadan ayırarak başlarsınız. Kriyoprezervasyon için büyüme aşamasının log fazında olan hücrelerin kullanılmasının en iyisi olduğunu unutmayın. Hücreler ayrıldıktan ve serum veya serum içeren besiyeri ekleyerek tripsin reaksiyonunu durdurduktan sonra, hücre süspansiyonunu steril bir santrifüj tüpüne aktarın ve iki mililitre ekleyin.Aynı kaynaktan gelen aynı alt kültürün üç veya daha fazla kabındaki serumlu hücreli tamamlayıcı besiyeri tek bir tüpte birleştirilebilir. Hücreleri oda sıcaklığında, 300 ila 350 Gs hızında beş dakika boyunca santrifüjleyin. Santrifüjleme işleminden sonra süpernatantı uzaklaştırın ve peleti 10 ml 4 °C sıcaklıktaki çözeltide yeniden süspande edin.Tam besiyerine, eşit hacimde dört derece dondurma besiyeri ekleyin, hücreleri iyice karıştırın ve ardından tüpü buza yerleştirip hücreleri sayın. Yaklaşık konfluente ulaşmış 25 cm²'lik bir flasktan hücreleri dondurmak için, bir hemositometre kullanarak süspansiyonu, mililitre başına nihai hücre konsantrasyonu 1 milyon veya 10 milyon hücre olacak şekilde daha fazla dondurma besiyeri ile seyreltin. Yaklaşık 3 mL dondurma besiyeri içinde yeniden süspanse edin ve hücre süspansiyonundan 1 mL'lik alikotları etiketli 2 mL'lik kriyoviyallere pipetleyin.Flakonların kapaklarının sıkıca kapatıldığından emin olun. Flakonları bir saat ile bir gece boyunca -80 °C dondurucuda bekletin, ardından sıvı nitrojen depolama dondurucusuna aktarın. Süspansiyon kültüründen hücre dondurma işlemi, prensip olarak monokatman hücre dondurma işlemiyle benzerdir.Temel fark, süspansiyon kültürlerinin öncelikle tripsinize edilmesine gerek olmamasıdır. Hücre süspansiyonunu bir santrifüj tüpüne aktarın ve oda sıcaklığında 300 ila 350 G'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından, süpernatantı uzaklaştırın ve peleti, mL başına 1 milyon ila 10 milyon hücre yoğunluğunda, dört derecelik dondurma mediumunda yeniden süspanse edin.Ardından, hücre süspansiyonundan birer mil'lik alikotları kriyoviyallere aktarın ve dondurun. Monolayer kültürler için yapıldığı gibi, dondurulmuş viyalleri çözmek ve geri kazanmak için önceki Bölüm'de gösterildiği şekilde; öncelikle, hücrelerin bulunduğu viyali sıvı azot dondurucusundan çıkarın ve hemen 37 derece bir su banyosuna yerleştirin.Besiyeri çözünene kadar flakonu sürekli olarak çalkalayın; bu işlem genellikle 60 saniyeden kısa sürer. Çözündükten sonra, açmadan önce flakonun üst kısmını %70 etanol ile silin. Ardından, çözünmüş hücre süspansiyonunu, iki mL sıcak tamamlayıcı besiyeri ve %20 fetal bovine serum içeren steril bir santrifüj tüpüne aktarın ve santrifüjleyin.Bunu oda sıcaklığında 150 ila 200 Gs'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Bu adım, santrifüj sonrası herhangi bir kalıntı DMSO'yu uzaklaştıracaktır; süpernatantı atın ve hücre peletini yaklaşık 1 mL kadar az miktarda komple besiyeri ve %20 FBS içerisinde nazikçe resüspande edin. Bunu, uygun miktarda besiyeri içeren, uygun şekilde etiketlenmiş bir kültür plağına aktarın. Genellikle, 5 ila 20 mL besiyerinde 1 mL hücre süspansiyonu gereklidir.Şimdi, hücreleri büyümeleri için 37 °C'deki bir inkübatöre yerleştirip 24 saat bekletebilirsiniz. Hücrelerin plakaya tutunduğundan emin olun; beş ila yedi gün sonra veya ortamdaki pH indikatörü renk değiştirdiğinde ortamı yenilemeniz gerekecektir. Hücre hattı yeniden kurulana kadar kültürleri %20 FBS içeren bir ortamda tutmalısınız.Eğer geri kazanım oranı aşırı düşükse, orijinal kültürün yalnızca bir alt popülasyonu büyüyor olabilir. Özellikle mozaik olduğu bilinen hücre hatlarıyla çalışırken bu duruma dikkat edin. Kültürlerin gönderilmesi gerekiyorsa, bu işlem hem monolayer hem de süspansiyon kültürleri için kolaylıkla gerçekleştirilebilir.25 santimetrelik doku kültürü balonlarında hücreler, tek tabaka halinde neredeyse konfluen hale gelene kadar veya süspansiyonda istenen yoğunluğa ulaşana kadar büyütülür. Tek tabaka kültürleri için, önce besiyeri uzaklaştırılır ve ardından balon taze besiyeri ile doldurulur. Taşıma sırasında balonların ters dönmesi durumunda hücrelerin kurumasını önlemek için balonun tamamen besiyeri ile doldurulması önemlidir.Süspansiyon kültürleri için, erleni dolduracak şekilde ortam eklenir. Kapak sıkıca kapatılır ve parafilm kullanılarak sabitlenir. Erlen, sızıntıyı önlemek için tasarlanmış sızdırmaz bir plastik torba veya başka bir sızdırmaz kap içerisinde mühürlenir.Balonun hasar görmesi durumunda, ana kap, taşıma sırasında aşırı sıcaklıklardan korumak amacıyla ikincil bir yalıtımlı kaba yerleştirilir. Paketin dışına bir biyotehlike etiketi yapıştırılır. Kültürler genellikle aynı gece veya ertesi gün teslim edilen kuryelerle taşınır.Hem adherent hem de süspansiyon hücreler için insan hücre kültürlerinin nasıl dondurulacağını ve çözüleceğini göstermiş olduk. Hepsi bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, tüm deneylerinizde başarılar dileriz.

freezing-thawing-and-packaging-cells-for-transport

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada bizim laboratuvar tonlar insan embriyonik kök hücre hatları donuyor nasıl göstermektedir.

Donma İnsan ES Hücreler

James Thomson ve ark, 1998 yılında kültür embriyonik kök izole etmek ve büyümek için bir teknik geliştirdi beri, daha sonra kullanmak üzere hücreleri donmuş bir stok eritme ve genişleyen donma hücreleri rutin embriyonik kök hücre kültürü yapılan önemli işlemler haline gelmiştir. Embriyonik kök hücreleri dondurma ve çözme streslere karşı çok hassas olduğundan, özel dikkat gerekir. Burada embriyonik kök hücrelerin hızla sıvı azot stokları eritme fare embriyonik besleyici hücreler kaplama ve yavaş...

İnsan Embriyonik Kök Hücreler Donma ve Çözülme

Yerli yakın eyalette bakteri hücrelerinin ultrastrüktür çalışma elektron cryotomography (EKT) nasıl kullanılacağı "makromoleküler" (~ 4 nm) çözünürlük, burada göstermektedir.

Bakteriyel Hücre Elektron Cryotomography

Dondurma-kurutma genellikle canlı bakteri hücrelerinin kuru ürün elde etmek kolay ve kullanışlı bir yoludur. Sürecin bir sorun hücre hayatta kalabilmek. Burada ayrıntılı dondurarak kurutma esnasında hücre hayatta kullanılan formülasyonunun özelliklerini nasıl etkilediğini araştırmak için bir işlem.

Hücre Survival üzerinde Bakteriler ve Etki Dondurma-kurutma için formülasyonlar

Yüksek kaliteli transmisyon elektron mikroskobu görüntüleri elde etmek, özellikle bol miktarda büyük su dolu vakuollere ve havalandırılmış alanlara sahip bitki hücreleri söz konusu olduğunda zordur. Tandem yüksek basınçlı dondurma ve hızlı dondurma ikamesi, mükemmel ultrastrüktürel korumaya sahip numuneler üretirken TEM için tesis numunelerinin hazırlanma süresini büyük ölçüde azaltır.

Tandem Yüksek basınçlı Donma ve Transmisyon Elektron Mikroskobu için Bitki Doku Hızlı Dondurma Değişiklik

Bu makale, transmisyon elektron mikroskobu ile süspansiyon hücreleri görselleştirme için bir kullanımı kolay ve düşük maliyetli bir cryofixation yöntemini tarif etmektedir.

Dalma Donma: Transmisyon Elektron Mikroskobu içinde Süspansiyon Hücrelerinin ultrastrüktürel ve immünolokalizasyonu Çalışmaları için Aracı

Drosophila hücre hatları temel ve Biyomedikal Araştırma önemli Kimyasalları vardır. Bu makalede çözdürme, subculturing ve araştırmacılar araştırma bu Kimyasalları kullanımı birleşmeyle yardımcı olmak için yaygın olarak kullanılan Drosophila hücre satırları dondurma protokolleri sağlar.

Çözdürme, kültür ve Drosophila hücre hatları Cryopreserving

Burada, kriyo yumuşak X-ışını tomografisinde (SXT) kriyo-korunmuş hücrelerin ultrayapısını 25 nm yarım perde çözünürlükte görüntülemek için gerekli numune hazırlama ve veri toplama adımlarını açıklayan bir protokol sunulmaktadır.

Cryo Soft X-ray Tomografisi ile Hücrenin 3D Kartografik Açıklaması

Burada bakteri, maya, kültürlü hücreler, izole hücreler, hayvan ve insan dokuları ve virüsler de dahil olmak üzere biyolojik örneklerin hızlı donması için sandviç dondurma cihazının nasıl kullanılacağını gösteriyoruz. Ayrıca, hızlı donma işleminden sonra ultra ince kesitler için numunelerin nasıl hazırlanacağını da gösteriyoruz.

Elektron Mikroskopisinde Biyolojik Örneklerin İyi Ultrayapısal Korunması için Sandviç Dondurma Cihazı Kullanılarak Hızlı Dondurma

Burada, kriyo-elektron tomografisi için hücresel numunelerin hazırlanmasına rehberlik etmek için 3D bağıntılı odaklanmış iyon ışını frezeleme için bir boru hattı sunuyoruz. İlgilenilen floresan etiketli proteinlerin 3 boyutlu konumu önce kriyo-floresan mikroskobu ile belirlenir ve daha sonra öğütme için hedeflenir. Protokol memeli, maya ve bakteri hücreleri için uygundur.

Yüksek Çözünürlüklü Kriyo-Elektron Tomografisi için 3D Korbağıntılı Odaklanmış İyon Işını Frezeleme ile Numune Hazırlama

Öğrenin, memeli hücrelerini uzun süreli saklama için dondurma ve çözme tekniklerini. Sıvı azotta saklama ve hücre canlılığını koruma yöntemleri araştırmacılara temel beceriler kazandırır.

Donma Çözülme ve Ulaştırma Ambalaj Hücreler

Daha fazla video keşfet