Name: Işık tam hücreli Kayıtlar Retina Dilim Uyarıcı Synaptic Akımlar Uyarılmış (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-07-02T15:50:00.000+00:00
Duration: 19 min 33 s
Description: Öğrenin tiger salamander retinasında tam hücre voltaj kelepçesi kayıtları yapmayı. Bu yöntem görsel uyaranlara sinaptik akımları incelemek için kullanılır ve retinal fizyoloji araştırmalarında güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çözümler <ul><li> Ganglion hücreleri için intrasellüler çözüm (mM): 100 K-glukonat, 8 KCl, 1 MgCl 2, 1 EGTA, 10 Hepes, 4 ATP, GTP 0,5, 90 mcM Sulforhodamine B (boyama), pH = 7.4 için ayarlanabilir KOH </li><li> Bipolar hücreler (mM) Hücre içi çözüm: 90 K-glukonat, 8 KCl 1 MgCl 2, 10 BAPTA, 10 Hepes, 4 ATP, GTP 0,5, 90 mcM Sulforhodamine B (boyama), pH = 7.4 ayarlanabilir KOH </li><li> Ekstrasellüler Ringer solüsyonu (mM): NaCl 112, 5 Glikoz, 5 Hepes, NaOH ile pH = 7.75 ayarlanabilir 2 KCl, 2 CaCl 2, 1 MgCl 2,. Çözümün oksijenasyon gerekli değildir. </li></ul> Kayıt odaları hazırlayın Bizim kayıt odası, başka bir yapıştırıcı kesip küçük silikon blokları doku dilimleri için istikrarı sağlamak için yerleştirilir iyi hangi bir yapıştırıcı ile bir mikroskop lamı oluşur. Retina dilimleri Hazırlanması Fotoreseptörlerin beyazlatma önlemek için, diseksiyon, kızılötesi veya loş kırmızı ışık yürütülmektedir. Bir çubuk yolu yanıtları kayıt ilgilenen ise, sadece kızılötesi ışık (IR diseksiyon mikroskobu ve hiçbir oda ışığı Ek IR gözlük mikroskop altında yapmadı işlemleri için kullanılmalıdır) kullanılmalıdır. Ağırlıklı olarak, koni ışık yanıtları, loş kırmızı oda ışık veya kırmızı bir flaş ışığı kayıt ilgilenen kullanılabilir. Ancak, mikroskop, hala IR Okülerin olmalıdır. Fotoreseptör giriş deneme için alakasız ise, prosedürleri düzenli bir mikroskop kullanılarak, normal oda ışığında yürütülen olabilir. <ol><li> , Iyi bir yapıştırıcı, silikon ile iki mikroskop slaytlar hazırlayın: (filtre iterek her slaytta silikon gres iki paralel grup (yaklaşık 0,5 cm arayla) ve dikdörtgen bir parça filtre kağıdı slayt bir tarafta yer, hem de yağ bantları geçiş iyi slayt bağlı olduğu, böylece bir jilet parçası olan kağıt) </li><li> Hayvan sonra dekapite ve çift pithed, 30 dakika boyunca bir buz banyosunda yerleştirilir: kurulan protokolleri göre bir semender Kurban. </li><li> Semender kafa göz çıkarın ve bir parça kağıt mendil diseksiyon mikroskobu altında buz gibi soğuk Ringer solüsyonu ile ıslatılmış </li><li> Gözün bağ dokusu çıkarın </li><li> Korneada küçük bir kesi yapmak için jilet kullanın. </li><li> Boyunca makasla göz ekini çıkarırken forseps ile kornea kesmek tutun </li><li> Forseps ile lensi çıkarın </li><li> Forseps ile iris tutun ve iris kaldırmak için ora serrata boyunca kesim </li><li> Göz yuvası iki dikdörtgen parçalar halinde Kes </li><li> (Çok dikkatli bir şekilde aşağı iterken parça düzleştirmek için emin olun) adet Pick up ve filtre kağıdı IT sklera yan yerde </li><li> Yavaşça filtresi kağıt bağlı olması gereken, retina kapalı sklerasına kaldırın </li><li> Hızla de buz gibi soğuk Ringer solüsyonu </li><li> Ikinci parça için de tekrarlayın. </li><li> 200-300μm geniş bir dilim kesmek için özel yapılmış dilimleyici yerleştirilen bir jilet kullanın. </li><li> Forseps bir çift kullanın, filtre kağıdı yan dilim almak için, retina katmanları görünür hale gelir, böylece onları ters çevirin ve vakum gres bantlar yer </li><li> Hasarsız görünüyor ve retina katmanları (büyütme yeterince yüksek değildir katmanları tek bazı katmanlama tanıyabilir ancak dilim genellikle yeterince iyi, bazen diseksiyon mikroskop altında görmek zor gösteren yatay bantlar gösteren bir dilim seçin. dik mikroskop altında incelendi) sonra dilim kullanmak konusunda nihai karar, ancak yapılır. Iki slaytlar arasındaki Zil köprü inşa kayıt odası slayt Move it </li><li> Slice (ganglion hücreleri ve fotoreseptör aynı zamanda odak noktası olmalıdır) eğik olmayacak şekilde filtre kağıdı, kauçuk bloklar kayıt odasında karşı itilir emin olun. </li></ol> Kayıt teçhizat doku yerleştirmek <ol><li> Kayıt slayt mikroskop altında yerleştirilir ve gravite perfüzyon syste yoluyla Ringer çözümleri ile perfüze </li><li> Hazırlık 10x ve 40x suya daldırma hedefi ile dik bir mikroskop ile görüntülenmiştir. </li><li> Yine, biz sadece fotoreseptörlerin beyazlatma önlemek için kızılötesi ışık kullanır. IR kamera, mikroskop yan bağlantı noktası, bir TV ekranında bağlı eklenir. </li></ol> Görsel Uyarım Görsel uyaranlara Psychtoolbox kullanarak Matlab programlanmış ve mikroskop mikroskop görüntüsü enjektör (MBF biyobilim) kullanarak üst bağlantı noktası üzerinden retina yansıtılıyor. A Bit + + Dijital Video İşlemci (Cambridge Araştırma Sistemleri) 14bit parlaklık ölçeği elde Senkron için kullanılır.veri toplama ile uyaran sunum onize. Bu video kullanılan görsel uyaranlar, iki saniye boyunca sabit bir üniforma arka plan (sunuldu% 100 kontrast, parlak veya koyu bar (width = 460μm). Parlaklık = 8 * 10 4 fotonlar / mm / s, boyutu: 1.84 x 1.38mm). Elektrofizyoloji <ul><li> Mikropipet çektirmenin: Patch elektrotlar borosilikat cam (1.5mm ID 84mm. OD) çekti. Ganglion hücreleri için, dirençler 2 ve 4 Mohms arasında. Bipolar hücreler için, 4 ve 8 Mohms arasında yüksek dirençleri kullanılır. </li><li> Gerilim Kelepçe kayıtları Multiclamp 700A (Moleküler Cihazlar), amplifikatör ve Labview programlanmış laboratuar dahili yazılımı kullanılarak yapılmaktadır. </li><li> İlaçlar bir 8-kanal perfüzyon sistemi yoluyla perfüze. Microperfusion elektrot dilim (kapalı perfüzyon açmak ve doku gözle görülür bir şekilde hareket etmelidir, ancak bir ihtiyacı basıncı dilim filtre kağıdı kopuk haline gelebilir, böylece çok güçlü olmadığını dikkatli olmak) yakın yerleştirilir. Microperfusion deneyler sırasında sürekli kayıt perfüzyon açılması ve kapatılması rahatsız etmediğini (Uyuşturucu ihtiyaç vardır perfüze kontrol çözümü) açık olmalıdır. </li></ul>

<ol><li>Cook, P. B., Lukasiewicz, P. D., McReynnolds, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA%28C%29+receptors+control+adaptive+changes+in+a+glycinergic+inhibitory+pathway+in+salamander+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">GABA(C) receptors control adaptive changes in a glycinergic inhibitory pathway in salamander retina.</a> Journal of Neuroscience. 20, 806-812 (2000).</li>
<li>Heflin, S. J., Cook, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Narrow+and+wide+field+amacrine+cells+fire+action+potentials+in+response+to+depolarization+and+light+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Narrow and wide field amacrine cells fire action potentials in response to depolarization and light stimulation.</a> Visual Neuroscience. 24, 197-206 (2007).</li>
<li>Ichinose, T., Shields, C. R., Lukasiewicz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+Channels+in+the+Transient+Retinal+Bipolar+Cells+Enhance+Visual+Responses+in+Ganglion+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci.%22%5BJournal%5D)">Sodium Channels in the Transient Retinal Bipolar Cells Enhance Visual Responses in Ganglion Cells.</a> J Neurosci.. 25, 1856-1865 (2005).</li>
</ol>

Faydaları: <ol><li> Tüm hücre türlerine erişilebilir </li><li> Kolay hücre tiplerinin tanımlanması, özellikle floresan boya elektrot çözüm ise </li><li> Farmakolojik ajanların hedef hücrelere kolaylıkla ulaşabilirsiniz </li><li> Yama klemp tekniği, retina hesaplamaları farklı iyon kanalları rolünü araştırmak için izin verir. Aynı bilgiler, keskin elektrotlar extracelluar başak kayıtları veya kayıtlar yoluyla elde edilemez. </li><li> Bu teknik diğer hayvan modelleri uygulanabilir </li></ol> Dezavantajları...

<table><tbody><tr><td>Multiclamp 700A</td><td>Patch Clamp Amplifikatörü</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SZX9</td><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BX50WI</td><td>Dik Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td>40x, 10x su daldırma objektifi, floresan filtreler ve cıva lambası ile donatılmıştır</td></tr><tr><td>P-97</td><td>Mikropipet Çekici</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lucivid</td><td>Mikroskop görüntü enjektörü</td><td>MBF Bioscience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-kanallı perfüzyon sistemi</td><td>Mikroperfüzyon</td><td>Parker Hannifin Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bits++</td><td>Dijital Video İşlemcisi</td><td>Cambridge Research Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kızılötesi Okülerler</td><td>Diğer</td><td>ITT Visual Information Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yapışkan silikon kuyucuklar</td><td>Diğer</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td></td><td>20mm çap, 1.0mm derinlik</td></tr><tr><td>Membran Filtreler</td><td>Filtre</td><td>EMD Millipore</td><td>HAWPO1300</td><td>.45&amp;#x03BC;m HA</td></tr><tr><td>Borosilikat Cam Kapilerler</td><td>Elektrot camı</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>1B150-4</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga Filtreleri</td><td>Filtre</td><td>Whatman, GE Healthcare</td><td>6789-0402</td><td>4mm filtreler, .2um Naylon Membran, Polipropilen gövde</td></tr><tr><td>Kızılötesi (IR) kamera</td><td>Mikroskoba monte edilmiş kamera</td><td>Sony Corporation</td><td>SPT-M324</td><td>Extrawave HAD, B7W video kamerası</td></tr><tr><td>Picrotoksin</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1675</td><td></td></tr><tr><td>Striknin</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0532</td><td></td></tr><tr><td>İmidazol-4-asetik asit sodyum tuzu</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I7013</td><td></td></tr><tr><td>Larval kaplan semenderleri</td><td>Hayvan</td><td>Charles E. Sullivan</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

işık tam hücreli kayıtlar retina dilim uyarıcı synaptic akımlar uyarılmış

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

Biz sinaptik devre retina temelini görsel bilgi işlem çalışma tüm hücre yama klemp tekniği kullanır. Bu video, retina dilim hazırlanmasında tek tek hücrelerin ışık uyarılmış akımları tüm hücre kayıtları gerçekleştirme süreci boyunca size rehberlik edecektir. Biz bir hayvan modeli olarak su kaplan semender kullanın. Biz göz diseksiyonu anlatarak başlamak ve elektrofizyolojik kayıtlar için dilimleri nasıl monte edilir göstermek. Dilim kayıt odasına yerleştirildikten sonra, biz, tüm hücre gerilimi kelepçe kayıtları nasıl gerçekleştirileceği göstermektedir. Daha sonra ışık uyarılmış akım tepkiler üzerine görsel uyaranlara dilim fotoreseptörlerin proje. 8-kanal perfüzyon sistemi bizi hızla farklı ajanlar arasında geçiş yapmanıza olanak tanır bu sayede kayıt sırasında, farmakolojik ajanların dilim serpmek. Retina dilim hazırlık yaygın bir bütün montaj hazırlanmasında erişilebilir değil amacrine veya bipolar hücreleri, özellikle çalışma retina yama kelepçe kayıtları için kullanılır.

Bu video su kaplan semender retina dilim tam hücreli gerilim kelepçe kayıtları süreci gösterir. Biz yanı sıra retinanın görsel uyarılma sırasında yama kelepçe kayıtları gerçekleştirmek için nasıl dilim hazırlık göstermektedir.

Işık tam hücreli Kayıtlar Retina Dilim Uyarıcı Synaptic Akımlar Uyarılmış

Retinadaki görsel bilgi işlemenin temelini oluşturan sinaptik devreleri incelemek için tüm hücre yama kenetleme (whole-cell patch clamp) tekniğini kullanıyoruz. Bu videoda, ...

Bugün size patch clamp kayıtları için kaplan semenderinden retinal kesitlerin nasıl hazırlanacağını göstereceğim. İlk olarak, iki tür mikroskop lamı hazırlayacağım. Sıvı odacıkları olarak kullanabilmek için üzerlerine yapışkanlı bir kuyu eklenmiş lamlar kullanıyoruz.İlk lamın üzerine, vakum gresiyle iki paralel şerit oluşturuyorum. Ardından biraz filtre kağıdı alıp bunları dikdörtgen parçalar halinde kesiyorum. Şimdi bu parçalardan birini gres raylarının üzerine yerleştiriyor ve lama iyice yapıştığından emin olmak için aşağıya doğru bastırıyorum.Aynı işlemi diğer parça için de yapıyorum. İkinci tür slaytlara küçük kauçuk bloklar yapıştırılmıştır. Şimdilik, blokların arasına biraz vakum gresi ekliyorum; ayrıca doku dilimleyiciye yeni bir jilet parçası yerleştiriyorum.Son olarak, diseksiyon sırasında ihtiyacım olacak olan iki çift pens, bir adet makas ve ışıkla uyarılan akımları kaydetmek için gözü kafadan çıkarmaya yarayan aletleri hazırlıyorum. Diseksiyon IR ışığı altında gerçekleştirilmelidir, ancak gösterim amaçlı olarak şu an ışık altında çalışacağım. İlk olarak gözü çıkarıp, buz gibi soğuk ringer solüsyonu ile nemlendirdiğim bir parça peçete üzerine, mikroskop altında yerleştiriyorum.Ardından, göze zarar vermeyeceğinden emin olmak için göz küresindeki fazla bağ dokusunu temizlerim. Her zaman yüzey boyunca kesim yaparım. Mikroskop altında gördüğünüz şey budur.Sırada, korneada küçük bir yarık açmak için bir jilet kullanıyorum. Bunu yapmak için, jiletin kenarını korneaya doğru bastırırken gözü pensle sabit tutuyorum. Ardından, lensi çıkarmak için makasla lensi alırken korneayı pensle tutuyorum.Pensle lense kolayca erişebilmek için göz çukurunun kenarlarına biraz baskı uyguluyorum. Ardından irisi çıkarıyorum. Sadece göz çukuru kalana kadar aura serato boyunca kesim yaparken irisi pensle tutuyorum.Ardından, I kubbesini iki dikdörtgen parçaya ayırırım. Önce ortadan ikiye bölerim ve ardından üst ile alt kenarları düzeltirim. Şimdi, daha önce hazırladığım lamlardan birini alırım, bir I kubbesi parçasını kaldırır ve retina tarafı aşağı gelecek şekilde filtre kağıdının üzerine yerleştiririm.Ardından, lam üzerinde yalnızca retina kalacak şekilde bu sklerayı yukarı çekerim. Bundan sonra, solüsyonu hızlıca hazneye eklerim. İşlemi ikinci retina parçası için tekrarlayalım.Ancak bu sefer, retinayı filtre kağıdının üzerine yerleştirirken mikroskop altından izleyebilirsiniz. Sklera üzerine dikkatlice bastırmak için sol elimdeki penseti kullanıyorum. Son olarak, retinayı 200 ila 300 mikrometre genişliğinde dilimler halinde kesiyorum.Ardından, deneylerimde kullanmak üzere bir kesit seçiyorum. Uygun bir kesit belirlemek için, retinanın katmanlarını görebilmek amacıyla kesitleri 90 derece döndürmem gerekiyor. Hasar görmemiş görünen ve farklı katmanları belirten belirgin yatay bantlar gösteren bir kesit seçiyorum.Lamları birinden diğerine taşımak için bir Ringer köprüsü oluşturuyorum ve ardından lamları dikkatlice solüsyon üzerinden hareket ettiriyorum. Kesiti yerleştirdiğimde, filtre kağıdının cama karşı dikey konumlanması için onu kauçuk bloklara doğru itiyorum. Artık patch clamp kaydı için hazırım.Hücre içi çözeltiyi, bir günde gerçekte ihtiyaç duyacağımız miktarda çözmek için dondurucuda küçük porsiyonlar halinde saklıyoruz. Elektrotları doldurmadan önce, elektrot ucunu tıkayabilecek küçük partikülleri temizlemek için çözeltiyi filtreliyoruz. Ganglion hücrelerinden kayıt almak için patch elektrotlar borosilikat kapiler camdan çekilmektedir.Elektrot dirençlerini iki ile dört mega ohm arasında oluşturacak bir ayar seçiyorum. Elektrotları doldururken, elektrot ucunda hava kabarcığı kalmadığından emin olmak istiyorum. Parmağınızla cama hafifçe vurmak, kabarcıkların giderilmesine yardımcı olur.Bu, kafa aşamasına bağlı olan elektrot tutucudur. Elektro roller, gümüş klorür tel içerir. Bu, niga köprülü toprak elektrodudur.İşte perfüzyon pipeti. Bu pipet, sekiz kanallı bir mikro perfüzyon sistemine bağlıdır. Ana perfüzyon yerçekimi ile gerçekleşmektedir; bu nedenle sadece wingers ile dolu bir şişe bulunur ve solüsyon bu tüpten geçerek kayıt haznesine akar.Karanlıkta kayıt yapabilmek için mikroskobun yan portuna, bir TV ekranına bağlı olan bir IR kamera yerleştirdim. Üst porta ise retinaya görsel uyaranlar yansıtmamı sağlayan bir görüntü projektörü bağladım. Ve son olarak, patch clamp amplifikatörü.Şimdi retinal kesiti mikroskobun altına yerleştiriyorum ve ana perfüzyonu kurmak için banyoya toprak elektrodunu ekliyorum. Ardından, yer çekimi perfüzyon sisteminden gelen tüpü ekleyin. Diğer taraftaki cam tüp, sıvı seviyesini sabit tutan vakum emişine bağlıdır.Ayrıca, vakum tüpünün elektro-omzağa bağlı olduğundan emin olurum. Ardından, mikroperfüzyon pipetini konumlandırırım. Pipeti, mikroskop objektifi ile birlikte banyonun içine indiririm.Kesite yaklaştığımda, solüsyonun kesite temas etmesi için onu biraz geri çekerim. Perfüzyonu başlattığımda, burada olduğu gibi kesitin hafifçe hareket ettiğini görmem gerekir. Şimdi kayıt yapılacak uygun bir hücre arayalım.Kesitin alt kısmında yer alan ganglion hücrelerini arıyoruz. Şimdi, elektrodu banyoya sokmadan önce hazırlıyorum ve biraz pozitif basınç uyguluyorum. Mikroskop altında elektrodu bulduğumda, bir hücreye patch yapmak için onu kesitin hemen üzerine kadar indiriyorum.40 x objektife geçiş yaptım. Şimdi temel akımı sıfırlıyorum ve elektrot direncini kontrol ediyorum. Sızdırmazlık testi, elektrot ile hücre arasında sıkı bir sızdırmazlık sağlayıp sağlamadığımı görmeme yardımcı olan 10 milivoltluk bir dizi impulstan oluşur.Şimdi elektrodumu hedef hücrenin üzerine indiriyorum. Hücre gövdesinde bir çöküntü gördüğümde, tüpteki pozitif basıncı serbest bırakarak sıkı bir sızdırmazlık sağlıyorum. Direnç şu an o kadar yüksek ki akım izi düz görünmektedir.Küçük sıçramalar elektrottan kaynaklanan kapasitans artefaktlarıdır. Bunlar şu şekilde kompanse edilebilir, böylece artık yoklar. Şimdi hücre içine girmeyi deneyeceğim.Bunu yapmak için, elektrot omuza bağlı tüpe dikkatlice küçük vakum darbeleri uyguluyorum ve eğer her şey yolunda giderse, akım izinin şu şekilde değiştiğini görürsünüz. Şu an gördüğünüz spike'lar membran kapasitansı ile etkileşime girmiştir ve bunlar için telafi işlemi yapılabilir; şu anki preparat karanlıkta hazırlanmış bir preparattır. Işıkla uyarılan yanıtlar kaydedip kaydedemeyeceğimize bakalım.Osiloskopta gördüğünüz iz, -60 mV değerinde voltaj klemplenmiş bir ganglion hücresinin akım yanıtıdır. Kullandığımız ışık stimülasyonları, sabit ve tekdüze bir arka plan üzerinde sunulan parlak ve karanlık çubuklardır. Laboratuvarımızın kullandığı yazılım, tek bir denemenin tüm kaydını göstermektedir.Bunun, karanlık bir çubuğun başlangıcına ve parlak bir çubuğun bitişine yanıt veren bir "kapalı" (off) hücre olduğu görülebilir. Üstteki beyaz çizgi, stimulusun süresini belirtmektedir. Artık farklı farmakolojik ajanların perfüze edildiği deneyler gerçekleştirebiliriz.Örneğin, GABAerjik ve Gly sinerjik inhibisyonu bloke edebiliriz. Bir dakikadan kısa bir süre bekledikten sonra, genellikle ilacın etkilerini burada görmeye başlayabiliriz. Yanıt daha güçlü ve daha uzun süreli hale geldi.Retinal kesit hazırlama yöntemi, retinadaki farklı hücrelerden sinaptik akımların kaydedilmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır ve elektrot çözeltisine floresan bir boya eklenirse, hücre tipi kolayca doğrulanabilmektedir. Anatomik olarak, burada hayvan modeli olarak larval TGA semenderi kullanılmıştır. Semenderlerin soğukkanlı hayvanlar olması ve büyük retinal hücrelere sahip olması avantajlı kayıt koşulları sağlamaktadır, ancak aynı teknik memeli preparatlarına da uygulanabilir.

whole-cell-recordings-light-evoked-excitatory-synaptic-currents

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

İşte biz elektrofizyolojik kayıtlar için fare retina karanlık adapte dilim üretmek için bir prosedür açıklanmaktadır.

Patch Kelepçe bir Karanlık adapte Dilim Hazırlık Fare Retina Nöronlar Kayıtlar

Burada elektrofizyoloji ve Ca2 + görüntüleme için uygun agar-gömülü retina dilim hazırlanması için bir protokol. Bu yöntem, tek presinaptik sinir uçları doğrudan patch-klemp kayıtları kullanarak retina mikrodevreler şerit-tip sinaps bir çalışma sağlar.

Patch-kelepçe Kapasitans Ölçümler ve Ca 2 + Retina Dilimleri Tek Sinir Terminalleri Görüntüleme

Video, fare beyin dilimlerindeki retinogenikülat ve kortikojenikülat sinapsların elektrofizyolojik kaydını açıklar. Dorsal lateral genikülat çekirdeği (dLGN) içeren dilimler bir kayıt odasına yerleştirilir. Retinal ganglion hücrelerini (RGC'ler) uyarmak ve retinogenikülat sinapsları araştırmak için optik kanal üzerine veya kortikal nöronları uyarmak ve kortikogenikülat sinapsları araştırmak için nükleus reticularis talami'ye uyarıcı bir pipet yerleştirilir. Stimülasyon üzerine, RGC'ler ve...

Fare Beyin Dilimlerinde Retinogenikülat ve Kortikogenikülat Sinapsların Elektrofizyolojik Bir Çalışması

Bu video, karanlığa uyarlanmış bir fare retina dokusu dilimi hazırlığında ışıkla uyarılan post-sinaptik yanıtların kaydını göstermektedir. Retina dilimi bir kayıt odasına yerleştirilir ve bir retinal ganglion hücresi ile elektriksel süreklilik sağlamak için bir kayıt pipeti kullanılır. Pipet tarafından kaydedilen ganglion hücrelerinde uyarıcı post-sinaptik potansiyeller oluşturmak için ışık darbeleri uygulanır.

Fare Retina Dilimlerinin Nöronlarında Işık Uyarılmış Postsinaptik Yanıtlar

Bu video, medial prefrontal korteks (mPFC) aksonlarını optogenetik olarak uyararak ve LEC'deki piramidal nöronların yanıtlarını kaydederek lateral entorinal kortekste (LEC) sinaptik verimliliği inceleme prosedürünü göstermektedir. Bu yöntem, sinaptik plastisiteyi incelemek için yama-kelepçe kayıtlarını ışık stimülasyonu ile sinaptik aktivasyon ile birleştirir.

Sıçan Beyin Dilimlerinde Sinaptik Olayların Optogenetik Stimülasyonu ve Elektrofizyolojik Kaydı

Biz su kaplan semender (gelen ince retina dilim hazırlanması...

Bir Amfibi Retina Dilim hazırlanması Fotoreseptörler ve İkinci dereceden nöronlar eş zamanlı tam hücreli Kayıtlar

Fare gözünden retina dilimlerinin nasıl hazırlanacağını ve retina nöronlarında ışık tepkilerinin nasıl kaydedileceğini göstereceğiz. Tüm prosedür karanlığa uyarlanmış koşullarda gerçekleştirilir.

Kayıt Patch Kelepçe Teknikleri Kullanarak Koyu adapte Fare Retina Dilim Hazırlıkları Nöronlar içinde postsinaptik Yanıtları Işık-uyarılmış

Biz retina yüzeyine paralel kesit düzlemi ile erişkin memeli retina yatay dilim hazırlık geliştirdi. nonradially odaklı retinal nöronların dendritik alanları patch-kelepçe ve görüntüleme teknikleri ile sinyal işleme çalışma izin kesilmiş değil.

Elektrofizyolojik Çalışmalar Yetişkin Fare Retina Yatay Dilimleri hazırlanması

Burada, lateral genikulat çekirdeğini içeren akut beyin dilimleri ve retinogeniculate ve kortikogeniculate sinenler fonksiyonunun elektrofizyolojik incelenmesi için protokoller sunuyoruz. Bu protokol, aynı akut beyin dilimleri içinde yüksek salınımı ve düşük salınımı olasılığı ile sinaps incelemek için etkili bir yol sağlar.

Retinogeniculate ve Kortikogeniculate SYNAPSE fonksiyonunun elektrofizyolojik Incelemeleri

Ex vivo beyin dilimleri, uçucu anesteziklerin afferent girdilere uyarılmış yanıtlar üzerindeki etkilerini incelemek için kullanılabilir. Optogenetik, talamokortikal ve kortikokortikal afferentleri primer olmayan neokortekse bağımsız olarak aktive etmek için kullanılır ve sinaptik ve ağ yanıtları izofluran ile modüle edilir.

Beyin Dilimlerinde Afferent Yolakların Optogenetik Aktivasyonu ve Uçucu Anesteziklerle Yanıtların Modülasyonu

Bu çalışma, fotoreseptör hücre gövdelerinin çıkarılmasının daha hızlı antikor difüzyonu ve immünohistokimya, in situ hibridizasyon ve elektrofizyoloji deneyleri için iç retinal nöronlara gelişmiş yama pipet erişimi sağladığı alternatif bir düz montajlı retina preparatı sunmaktadır.

Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina

Öğrenin tiger salamander retinasında tam hücre voltaj kelepçesi kayıtları yapmayı. Bu yöntem görsel uyaranlara sinaptik akımları incelemek için kullanılır ve retinal fizyoloji araştırmalarında güvenilir bir yaklaşım sunar.

Işık tam hücreli Kayıtlar Retina Dilim Uyarıcı Synaptic Akımlar Uyarılmış

Daha fazla video keşfet