Name: Üstün Colliculus Yüzey Fluoro-Gold Uygulama Retina Ganglion Hücreleri Retrograd Etiketleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-17T17:19:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Öğrenin üstün colliculus yüzeyine fluoro-gold uygulayarak retina ganglion hücrelerini retrograd etiketleme yöntemini. Bu teknik nöroproteksiyon araştırmalarında hücre ölümünü değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Amerikan Sağlık Yardımcısı Vakfı Ulusal Glokom Programı desteği için teşekkür etmek istiyorum.

<ol><li> Ketamin (80mg/kg) ve xylazine (8mg/kg) (2:1 hacim oranı)-periton içi enjeksiyon yoluyla sıçan uyuşturan. Ameliyat sırasında korneanın kurumasını önlemek için steril göz kayganlaştırıcı merhem uygulayın. </li><li> Tıraş baş kürk (göz kulak seviyesi) ve kesici bar kesiciler kelepçe ve set bir kafa kafa sahnede baş düzeltmek. </li><li> % 70 alkol% 10 povidon iyot çözeltisi ile dezenfekte operasyon alanı. </li><li> Kafatası ve dikişler (sagital, koronal ve transvers sütür) (Şekil 1) maruz cilt ve kasların kesin. Analjezik, bupivakain kesi bölgesine sıçrama (2 mg / kg aşmayacak şekilde) uygulayın. </li><li> Sagital sütürün her iki tarafta bir kafatası deliği (ø 2x2 mm, sagital ve transvers sütür hem de 0.5 mm) Matkap. Meninksler ve dikişlerle altında yatan sinüs rüptürü kaçının. <img src="/files/ftp_upload/old/819_2008_6_18_3/ratSkull.png" alt="Canlı sıçan kafatası özellikleridir." width="469" height="317" /> Şekil 1. Canlı sıçan kafatası özellikleridir. </li><li> Kes, yaylı makas meninksler açmak yırtılmasını önlemek. </li><li> Vakum pompası ve üç kontrol noktaları görülebilir tarafından dikkatle üstün colliculus dorsal yüzey üzerinde yatıyor serebral içerik aspire: <ol><li> , gri, beyaz, gri beyin dokusu değişiklikleri renkli </li><li> renksiz beyin omurilik sıvısı geldiğinde aspire durdurmak </li><li> sarımsı üstün colliculus dura kapsadığı ortaya çıkarmak için dikkatli bir şekilde yatay olarak düşük Emiş düzeyi Ayrıntı </li></ol></li><li> SC dört kenarları doğrudan mikroskop altında görülebilir kadar SC üzerinde beyin içeriği aspire edin. Kaldırılır serebral korteks kısmını, istenmeyen yan etkileri (örneğin, motor disfonksiyon) önlemek için minimum tutulmalıdır. Sinüs dokunmamaya özen gösterin. </li><li> Mümkün olduğunca SC yüzey kuru yapmak için ince steril pamuk şerit ile delik sıvı emerler. Sonra ince bir tabaka jelatin sünger yerleştirmek önceden ıslatılır SC yüzey üzerinde% 6 Fluoro-Altın (FG retina ganglion hücrelerinin akson terminalleri tarafından alınan ve bilateral retina somas retrograd taşınır). </li><li> Gelfoam ile delik doldurun ve dikiş klipler ile deri yara yakın. </li><li> Hayvanların sıcak tutmak için akkor lamba altında kurtarmak için izin verildi. Analjezik, buprenorfin (100mcg/kg), SC etiketleme sonra 5 gün boyunca içme suyu sözlü olarak uygulanır. </li></ol>

<ol><li>Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+double+labeling+of+retinal+ganglion+cells+in+the+newborn+and+adult+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat.</a> Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
<li>Forrester, J., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+fibers+in+the+optic+nerve+of+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nerve fibers in the optic nerve of rat.</a> Nature. 214, 245-247 (1967).</li>
<li>Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanopsin-Expressing+Retinal+Ganglion+Cells+Are+More+Injury-Resistant+in+a+Chronic+Ocular+Hypertension+Model.+Investigative%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative.</a> Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).</li>
</ol>

<ol><li> Neden retina ganglion hücre sayımı için bu cerrahi yöntem kullanılır? Sıçan retina ganglion hücrelerinin yaklaşık% 98 (RGC) kontralateral üstün colliculus (SC) proje olduğu bilinmektedir. Glokomda bu en hassas retina nöron odaklanmak böylece floro-altın SC yüzey üzerine uygulanması, RGCs hemen hemen tüm etiketleyebilirsiniz. 2 gün boyunca transeksiyon optik sinir güdük FG koyarak RGC retrograd etiketleme ile karşılaştırın, RGC hayatta kalma müdahalenin en aza indirilmiştir. Kan damarlarının retina ganglion hücre tabakası l...

Üstün colliculus yüzey fluoro-gold uygulama retina ganglion hücreleri retrograd etiketleme

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells by Application of Fluoro-Gold on the Surface of Superior Colliculus

Retina ganglion hücre (RGC) sayma özellikle glokom retina dejenerasyonu değerlendirmek için esastır. Güvenilir RGC etiketleme, herhangi bir tedavi etkilerini değerlendirmek için esastır. Sıçan, RGCs yaklaşık% 98&#39;i kontralateral üstün colliculus (SC) (Forrester ve Peters, 1967) proje için bilinir. Glokomda bu en hassas retina nöron odaklanmak böylece SC yüzeyinde floro-altın (FG) uygulanması, hemen hemen tüm RGCs etiketleyebilirsiniz. FG retina ganglion hücrelerinin akson terminalleri tarafından alınan ve bilateral retina somas retrograd taşınır. 2 gün boyunca transeksiyon optik sinir güdük FG koyarak RGC retrograd etiketleme ile karşılaştırın, RGC hayatta kalma müdahalenin en aza indirilmiştir. Lekeleri RGCs, amacrine retina ganglion hücre tabakasının kan damarı hücreleri ve endotel, bu etiketleme yöntemi RGC daha özel olduğunu cresyl violet boyama ile karşılaştırın. Bu video FG SC yüzeyine uygulanarak RGC retrograd etiketleme yöntemi açıklanmıştır. SC maruz korteks aspire ve SC tüm dorsal yüzey üzerinde jelatin sünger uygulayarak gösterilir; cerrahi işlemler kafatası delme. SC büyük intrakranial kanama ve aspirasyon önlemek için yararlı ipuçları verilmiştir.

Bu video floro-altın (FG) üstün colliculus (SC) yüzeyine uygulanarak RGC retrograd etiketleme yöntem açıklanır. Tekniği, kafatası delme, korteks aspire ve SC tüm dorsal yüzey üzerinde jelatin sünger uygulayarak içerir.

Üstün Colliculus Yüzey Fluoro-Gold Uygulama Retina Ganglion Hücreleri Retrograd Etiketleme

Retinal ganglion hücresi (RGC) sayımı, özellikle glokomdaki retinal dejenerasyonu değerlendirmek için gereklidir. Güvenilir RGC işaretlemesi, ... için temel teşkil eder.

Merhaba, ben Hong Kong Üniversitesi GOSO Laboratuvarı'ndan Tu. Bugün, sıçan retinal ganglion hücrelerinin nasıl retro-grid ile etiketleneceğini tanıtacağım.Retinal ganglion hücreleri, daha sonra hücre ölümünü veya uygulanan ilacın etkisini değerlendirmek amacıyla düzleştirilmiş retina üzerinde retinal ganglion hücrelerini sayabilmek için, superior colliculus yüzeyine floresan boya uygulanarak retrograd olarak işaretlenecektir. Bu fotoğraf, retinadan superior colliculus'a giden yolu göstermektedir. Floresan boya, optic tract aracılığıyla superior colliculus'tan retrograd olarak taşınabilir.Optik kamanı, gözdeki Retina'ya ulaşacak şekilde optik sinir üzerinden geçirin. Cerrahi işlem için ameliyat mikroskobu kullanıyoruz. Serebral korteksi aspire etmek için vakum pompası, kırmızı şapkayı konumunda tutmak için ise CLE kafa düzeneği kullanılır.Sıyırma işlemi için rat matkabı, okulun açılması için ve glikozsuz yüzeye floresan boya FG uygulamak için emilebilir jelatin sünger kullanıldı. İnce penset, yaylı makas, vakum iğnesi, matkap ucu ve sütur klipsleri dahil olmak üzere tüm aletler operasyondan önce otoklavlandı. Cildi kesmek için kullanılan cerrahi bıçak, ölçüm için cetvel ve pamuklar da steril durumdaydı.Ketamin ve sine gelin tonik enjeksiyonu ile sıçanı analiz ettik. Göz seviyesinden kulak seviyesine kadar olan bölgeyi tıraş ettikten sonra, operasyon alanını povidon iyot ve ardından %70 alkol ile dezenfekte ettik. Daha sonra sıçanı baş sabitleyici üzerinde uygun konuma getirdik.Kafanın orta hattında, göz seviyesinden kulak seviyesine kadar cildi kesin. Böylece koronal sütür, sagital sütür, transvers sütür net bir şekilde görünür hale gelir; burası BMA ve burası Lambda'dır. Transvers sütürün AL ucundan 0,5 ila 1 mm uzaklığa vidayı işaretleyin ve ardından işaretin sütürlerden en az 0,5 mm uzakta olduğundan emin olmak için her iki tarafı tekrar aynalayarak etiketleyin.Ardından, işaretleyici tarafa paralel olarak bir delik açmaya başlayabiliriz; sütün altındaki meninges ve sinüs astarının geniş bir şekilde yırtılması için matkabın hızını ve yönünü kontrol edin. Çap yaklaşık iki milimetreye ulaştığında delmeyi durdurun. Ardından, deliğin doğru boyutta ve doğru yerde olduğundan emin olmak için diğer taraftan tekrar kontrol edin.Meninges'i yaylı makasla kesin, delikteki kemik artıklarını temizlemek için ince pens kullanın. Artık vakum pompasıyla aspirasyona başlayabiliriz. BR'nin ilk tabakası, meningeslerle birlikte kesilen yeşil maddedir.Ardından t-hücresi renginin beyaza döndüğünü görebilirsiniz. Bunlar serebrumun beyaz maddesidir. Aspirasyonu dikkatlice ve yavaşça gerçekleştirin.Böylece gri cevheri tekrar görebiliyoruz. Renk daha az beyaza dönüşüyor. Alt kısmının gri olduğunu görebilirsiniz.Anlıyorum. Burada berrak BOS'un dışarı çıktığını görebilirsiniz. Bu, superior corus'un dorsal yüzeyine ulaştığımız anlamına gelir.Bu seviyede delik tekrar genişletilmiştir. Alt kısımda ise superior colliculus'u örten sarımsı renkli durayı görebiliyoruz. Superior colliculus içeriğini tahrip etmemek için bu seviyede yatay aspirasyon yapılır.Ardından bir bütün olarak başlayabiliriz. Yeşil maddeyi görüyorsunuz. Aslında yeşil renktedir.Ardından beyaz maddeye geliyoruz. Doku rengi beyazdır. Şimdi, BOS'un o gri rengin altından ne kadar düzgün bir şekilde geldiğini görebilirsiniz.Gri maddenin son katmanını kaldırın; ardından sarı dura ortaya çıkacaktır. Ayrı klikerlerin üzerindeki durayı bozarken dikkatli olun ve ardından deliği genişletin. Klikerlerin tüm kenarlarının mikroskop altında gözlemlenebildiğinden emin olmaya çalışın.Kafa düzeneğinin kafa kenetini farklı açılarda tutun ve CLE'nin dört kenarı mikroskop altında doğrudan gözlemlenene kadar son aspirasyonu gerçekleştirin. CLE yüzeyini mümkün olduğunca sağlam hale getirmek için delikteki sıvıyı ince bir pamuk şeridiyle emdirin. Bir parça jelatin alın, %6 fuel gold ile önceden kaplanmış bu parçayı iki parçaya ayırın.İnce bir tabaka haline getirin; boyutu, üst kısmın tüm dorsal yüzeyinden biraz daha geniş olmalıdır. Dikkatlice üst kliklerin yüzeyine, ardından karşı tarafa yerleştirin. Delikleri tamamen kapatacak şekilde, daha fazla püskürtme azalmasıyla beraber deliklerin içine yerleştirin.Son olarak, deri yarasını sütür klipsleriyle kapatın ve ameliyat sonrası yarayı temizleyin, fareyi temiz bir kafese geri koyun ve sıcak ortamda iyileşmesine izin verin. Fare, uyandıktan sonra operasyon sonrası normal davranışlar sergilemektedir.SC etiketlemesinden yedi gün sonra, retinayı diseke edip düz montaj (flat mount) yaparız, ardından UV filtreli epifloresan mikroskop kullanarak retinal ganglion hücrelerini sayarız. Retinal ganglion hücrelerinin %98'i superior kolikuluslara projeksiyon yaptığı için, güvenilir bir ST etiketlemesi, hastalık ilerlemesinin ve ilaç etkisinin değerlendirilmesi için temel teşkil eder. Bu, düz montaj yapılmış bir retinadaki retrograd etiketli retinal ganglion hücrelerine bir örnektir.

retrograde-labeling-retinal-ganglion-cells-application-fluoro-gold-on

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Optik Sinir transeksiyonu yetişkin MSS yaralanma yaygın olarak kullanılan bir model. Retina ganglion hücrelerinin yüzde doksanı (RGCs) olan aksonlar tamamen axotomy sonra 14 gün içinde ölürler (axotomy) transeksiyon. Bu model, deneysel manipülasyonlar kolayca mükellef ve yüksek tekrarlanabilir.

Optik Sinir transeksiyonu: Santral Sinir Sistemi Yetişkin Nöron Apoptoz Bir Model

Optik Sinir transeksiyonu yetişkin MSS yaralanma yaygın olarak kullanılan bir model. Bu model, küresel retina hedef ya da doğrudan hedef, retina ganglion hücrelerinin yaralı nöronal nüfus bir dizi deneysel manipülasyon yapmak için idealdir.

Memeli MSS Optik Sinir transeksiyonu sonra Deneysel İşlemler Yöntemleri

Bu makale, fare izole retinal hazırlanması incelemek ve kaydetmek için nasıl bir açıklama sağlar. Özellikle, floresan etiketli ganglion hücre popülasyonu ışık yanıtlarını kaydetmek ve daha sonra belirlemek ve morfolojisi analiz nasıl açıklar.

Genetik Etiketli Retina Ganglion Hücreleri Işık Tepkisi Record İzole Retina Hazırlık

Fare Retina Ganglion Hücreleri Transfeksiyon tarafından In vivo Elektroporasyon

Floresan boya retrograd taşıma anatomik projeksiyona dayalı nöronların bir alt-nüfus etiketler. Etiketli akson görsel olarak...

Retrograd Floresan Etiketleme Belirlenen Nöronlar gelen Hedefli Hücre dışı Tek ünitesi Kayıt izin verir<em&gt; In vivo</em

Kaynak: İnal, M. A. et. al., Lipofilik Floresan Boyalar Kullanılarak Drosophila Embriyonik Motor Nöronlarının Retrograd İzlemesi. J. Vis. Uzm.  (2020)Bu video, lipofilik boyalar kullanılarak Drosophila motor nöronlarının geriye dönük etiketleme yöntemini göstermektedir. Boya aksona girer, geriye doğru hareket eder ve nöronları yeşil olarak etiketleyerek morfolojilerinin ve projeksiyonlarının konfokal bir mikroskop altında ayrıntılı olarak görselleştirilmesini sağlar.

Floresan lipofilik boyalar kullanılarak Drosophila motor nöronlarının retrograd etiketlenmesi

Kaynak: Laboissonniere, et. al. Retinal Ganglion Hücrelerinin Tanımlanmış Alt Kümelerinin Tek Hücreli RNA-Seq'i. J. Vis. Uzm.  (2017).  Bu video, transgenik bir fare retinasındaki retinal ganglion hücresi (RGC) alt tiplerini tanımlamak için bir floresan izleme tekniğini göstermektedir. İşlem, izole retinanın bir kayıt odasında sabitlenmesini, oksijenli perfüzyon ile hücre canlılığının korunmasını ve izleyicili bir pipet kullanılarak floresan olarak etiketlenmiş RGC'lerin hedeflenmesini içerir.

Fare Retinal Ganglion Hücre Alt Tiplerinin Floresan İzleme ile Tanımlanması

Yetişkin zebra balıklarında retinal ganglion hücrelerini (RGC'ler) geriye dönük etiketlemek için etkili bir yöntem sunuyoruz.

Floresan Boyalar Yetişkin Zebra balığı Retina Ganglion Hücreleri retrograd Etiketleme

Gömme sonrası immünogold yöntemi, spesifik moleküllerin hücre altı lokalizasyonunun yüksek çözünürlüklü analizlerini sağlamanın en etkili yollarından biridir. Burada, retinal şerit sinapslarında glutamat reseptörlerini kantitatif olarak analiz etmek için bir protokol açıklıyoruz.

Retina Şerit Sinapslar at Membran Reseptör Yüksek Çözünürlüklü Sayısal immunogold Analizi

Milyonlarca insan irreversibl körlüğe neden olan retinal dejeneratif hastalıklardan muzdarip. Bu hastalıkların birçoğunun ortak bir unsuru retinal gangliyon hücrelerinin kaybıdır (RGC'ler). Bu ayrıntılı protokol, primer murin RGC'lerin akış sitometrisi ile pozitif ve negatif seçilim yoluyla izole edilmesini açıklar.

Akış Sitometresi ile Primer Sıçan Retinalı Ganglion Hücrelerinin (RGC) İzolasyonu

İkincil dejenerasyonu retina ganglion hücrelerinin (RGCs) yaygın olarak glokom içinde oluşur. Bu çalışmada kısmi optik sinir transeksiyon için yenilikçi bir operatif yaklaşım açıklar. Bu yer-koruma operatif yaklaşım kullanımı modelin uygulama aralığı genişletir ve ikincil yaralanma mekanizmaları keşfi RGCs içinde yeni bir yol sağlar.

Kısmi optik sinir transeksiyon Sıçanlarda: ikincil dejenerasyonu retina Ganglion hücrelerinin değerlendirmek için yeni bir operatif yaklaşım ile kurulan bir Model

Öğrenin üstün colliculus yüzeyine fluoro-gold uygulayarak retina ganglion hücrelerini retrograd etiketleme yöntemini. Bu teknik nöroproteksiyon araştırmalarında hücre ölümünü değerlendirmeye yardımcı olur.

Üstün Colliculus Yüzey Fluoro-Gold Uygulama Retina Ganglion Hücreleri Retrograd Etiketleme

Daha fazla video keşfet