Name: Donmuş Hücreler itibaren Kültür: İnsan Embriyonik kök hücrelerin (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: Öğrenin donmuş HuES hücre stoklarından insan embriyonik kök hücre kültürü kurma protokolünü. Bu yöntem nörobilim ve gelişim biyolojisi araştırmalarında tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Donmuş bir stok Çözülme: <ol><li> Tonlar hücreleri çözülme önce zaten hazırladık MEF plaka iyi durumda düzgün bir kaplama olduğunu emin olun. Arzu edilen veya üç gün daha büyük bir plaka, daha az kullanmayı deneyin VERMEYİN. Tüm konik tüpler ve kuyu kullanılan ön-etiket tavsiye edilir. </li><li> 37 ° C&#39;ye kadar ön-sıcak tonlar medya Kısım tonlar medya, her bir hat için, steril bir konik tüpe. -80 Den tonlar flakon / s çıkarın ve hemen batığın 37 ° C su banyosunda tüp alt yarısında. Hücrelerin% 80 (küçük donmuş kısmını sol) çözülmüş önce 45-60 saniye sürer. </li><li> Hızla tüp, laminer akış kaputu getirmek,% 70 alkol ile sprey ve hafifçe önceden ısıtılmış medya hücreleri aktarmak. Tüp Spin, medyayı çıkartın ve uygun bir ses, taze, önceden ısıtılmış tonlar medya olarak tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> MEF medya içine çözülme olacak gibi birçok kuyu olarak aspire edin. Çabuk, önceden ısıtılmış tonlar kısım medya plaka her kuyuya, ekli MEFS rahatsız etmemek için dikkatli olmak. Kaputun kenara plaka ayarlayın. Damla plaka konusunda eşit dağıtılır MEFS olduğu gibi, en iyi sonuçları elde edilir. Tonlar tohum hücreleri MEFS izin gecede 37 ° C inkübatör plaka dikkatle geri. Çözülme ~ 48 saat sonra taze tonlar medya ile değiştirilmesi, ortam değiştirin. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu video, bizim laboratuvarda rutin olarak donmuş bir stok tonlar insan embriyonik kök hücre kültürü nasıl kurulacağını göstermektedir. Bu süreç, bir DMSO çözüm dondurulmuş varsa memeli hücresi ile genel kullanım için tâbidir. Verimli çözülme, donmuş bir stok tonlar hücrelerinin yeni bir kültür oluşturulması için gerekli ve deneysel tutarlılık önemlidir.

Tonlar medya 651,5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6,5 ml glutamin 6,5 ml NEAA 6.5 ml beta-mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Değiştirme 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng / ml son) 0.65 ml

donmuş hücreler itibaren kültür: İnsan embriyonik kök hücrelerin

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Burada bizim laboratuvar donmuş bir stok tonlar insan embriyonik kök hücre hattı kültür başlar nasıl göstermektedir. İlk olarak, yaklaşık bir 1-2 gün eski on cm plaka (iki) milyon ışınlanmış fare embriyonik fibroblast besleyici hücreler artık serum ve hücre enkaz kaldırmak için tonlar medya ile durulanır ve ardından tonlar medya ve hücre içinde denge sağlaması için sol kültür inkübatör. Uzun vadeli sıvı azot depolama ya da bir-80C dondurucu bir donmuş hücreleri flakon hızlı çözülme için 37C su banyosunda kaynaklı ve hızlı bir şekilde batık. Donma medya hücreler daha sonra şişeden çıkarılır ve büyük hacimli tonlar medya yerleştirilir. Tonlarının büyük hacimli ortam aşırı serum ve DMSO kaldırılması, insan embriyonik kök hücrelerin renk tonlarını ayırt neden olabilir kolaylaştırır. Hücreler yavaşça süspansiyon döndü ve daha sonra yeniden askıya sonra tohum MEF plaka için kullanılır taze tonlar medya küçük bir hacim. Nazikçe plaka boyunca eşit olarak dağıtmak için bir damla bilge moda tonlar hücreler ekleyerek MEF plaka tohum için önemli olarak kabul edilir. Medya yerini önce yeni kurulan tonlar kültür plakası 48 saat için inkübatör iade edilir, daha sonra bundan sonra her 24 saatte bir beslenir.

Burada bizim laboratuvar donmuş bir stok tonlar insan embriyonik kök hücre hattı kültür başlar nasıl göstermektedir.

Donmuş Hücreler itibaren Kültür: İnsan Embriyonik kök hücrelerin

Burada, laboratuvarımızın dondurulmuş stoktan bir HuES insan embriyonik kök hücre hattı kültürüne nasıl başladığını gösteriyoruz. İlk olarak, bir ila iki günlük on santimetrelik bir plaka...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada bizim laboratuvar tonlar insan embriyonik kök hücre hatları donuyor nasıl göstermektedir.

Donma İnsan ES Hücreler

James Thomson ve ark, 1998 yılında kültür embriyonik kök izole etmek ve büyümek için bir teknik geliştirdi beri, daha sonra kullanmak üzere hücreleri donmuş bir stok eritme ve genişleyen donma hücreleri rutin embriyonik kök hücre kültürü yapılan önemli işlemler haline gelmiştir. Embriyonik kök hücreleri dondurma ve çözme streslere karşı çok hassas olduğundan, özel dikkat gerekir. Burada embriyonik kök hücrelerin hızla sıvı azot stokları eritme fare embriyonik besleyici hücreler kaplama ve yavaş...

İnsan Embriyonik Kök Hücreler Donma ve Çözülme

Biz retroviral Oct3 / 4, Sox2, Klf4 ve c-myc (OSKM) kodlayan vektörler ve canlı boyama ile doğru yeniden programlanması hiPSC belirlenmesi kullanarak insan kaynaklı pluripotent kök hücreler (hiPSC) Tra-içine insan somatik hücre verimli yeniden programlama için bir protokol sunmak 1-81 antikor.

İnsan İsteyerek Pluripotent Kök Hücre seçme ve ayırma Kolonileri Yetişkin Fibroblastlar gelen reprogrammed

Mevcut iyi üretim uygulamaları (cGMP) yönergelerine uygun olarak hayvansal ürün içermeyen reaktifler kullanarak insan amnion epitel hücrelerini (hAEC'ler) izole etmek ve kültürlemek için bir protokol açıklıyoruz.

İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri

Bu el yazması, koparılmış saçlardan insan keratinositlerinin türetilmesi ve sürdürülmesi ve ardından epizomal vektörler tarafından entegrasyon gerektirmeyen insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin (hiPSC'ler) üretilmesi için adım adım bir prosedür sağlar.

Saç türetilmiş keratinositlerden Kullanarak Entegrasyon serbest İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Bu protokol, ek eksojen takviye veya hPSC'ye özgü sentetik substrat olmaksızın jelatin kaplı bir tabakta yalnızca insan plasentasından türetilen şartlandırılmış ortamı kullanarak insan pluripotent kök hücrelerini (hPSC'ler) çoğaltmak için basit ve etkili bir yol sağlar.

A Novel Kültür Modeli İnsan Pluripotent için Plasenta klimalı Medyada Jelatin üzerinde hücre çoğalma Kök

İnsan derisi dış ortamda karşı savunma ilk satırı olarak davranır. Biz yetişkin cilt üzerinden birincil insan lenfositi izole bir yöntem mevcut. Bu izole lenfositi çok sayıda deneysel kurulumları yararlıdır ve kutanöz Biyoloji vitro. moleküler mekanizmalar çalışmak için son derece uygun bir model...

Oluşturma ve birincil insan lenfositi yetişkin cilt, kültür

Bir protokol olan ve olmayan oligopeptides, biyomalzemeler farklılaşması üzerine sertliği etkisini ve yayılması araştırmak için aşılı değişen sertlik ile polivinil alkol-co-İtakonik asit hydrogels hazırlamak için sunulan kök hücreler. Hydrogels sertliği crosslinking zaman tarafından kontrol ediliyordu.

İnsan Pluripotent kök hücre kültürü ile Xeno-Alerjik koşullar altında değişik sertlik polivinil alkol-Co-İtakonik asit Hydrogels

Bu protokol, bol miktarda yağ asidi, kolesterol, daha düşük sitokin konsantrasyonları ve hipoksi kullanarak kemik iliği mikroçevrimini taklit ederek sessiz insan hematopoetik kök hücrelerinin in vitro olarak korunmasını sağlar.

Sessiz İnsan Hematopoetik Kök Hücrelerini Korumak İçin Bir Kültür Yöntemi

Mevcut protokol, üreticinin talimatlarına uygun olarak yeniden programlanması zor olan hasta örneklerinin periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC) indüklenmiş pluripotent kök hücre (iPSC) türevinin sorun giderilmesi adımlarını detaylandırıyor. Bu protokol donmuş buffy tüy örneklerine özgüdür ancak saflaştırılmış PBMC'lerin yeniden programlanmasına da uygulanabilir.

Donmuş Buffy Tüy Örneklerinden İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücre Hatlarının Yeniden Programlanması

Öğrenin donmuş HuES hücre stoklarından insan embriyonik kök hücre kültürü kurma protokolünü. Bu yöntem nörobilim ve gelişim biyolojisi araştırmalarında tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

Donmuş Hücreler itibaren Kültür: İnsan Embriyonik kök hücrelerin

Daha fazla video keşfet