Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

Merhaba, ben Tufts Üniversitesi Tıp Fakültesi Farmakoloji ve Deneysel Tedaviler Bölümü'ndeki Emmanuel POTOs Laboratuvarı'ndan Brenda Geiger. Ben de aynı laboratuvardan Lauren Frank. Bugün, kemirgenlerde hayatta kalma odaklı stereotaktik cerrahi işlemini göstereceğiz.

Bu prosedür, cihazların kurulmasını, hayvanın cerrahiye hazırlanmasını ve ardından stereotaksik cerrahinin gerçekleştirilmesini kapsamaktadır. Öyleyse başlayalım. İşleme başlamadan önce, stereotaksik cihazı ve gerekli tüm malzemeleri hazırlayın.

Alan ve aletlerin temizlendiğinden ve sterilize edildiğinden emin olun. Ardından, hayvanı cerrahi işlem için hazırlayın. Bugün cerrahi işlemi 10 haftalık bir Sprague Dawley sıçan üzerinde göstereceğim.

Ayrıca, özel bir platform adaptörü gerektiren üç aylık Sprague Dawley sıçanlar ve iki aylık C57BL/6J fareleri de kullanıyoruz. Sıçanı, kilogram başına 60 mg ketamin ve kilogram başına 10 mg ksilazin içeren bir kokteylin IP enjeksiyonu ile anesteziye alın. Termostatla düzenlenen bir ısıtma pedi kullanarak hayvanı sıcak tutun.

Hayvanın sedatize edildiğinden ve vücut sıcaklığının uygun seviyede sabitlendiğinden emin olduktan sonra cerrahi işleme geçin. Ameliyata başlamak için, hayvanın tüylerini kulaklardan gözlerin hemen arasındaki bölgeye kadar elektrikli bir tıraş makinesiyle tıraş edin. Tıraş edilen bölgeye iyot uygulayın, ancak gözleri iyottan koruduğunuzdan emin olun.

Şimdi hayvanı stereotaksik cihaza sabitleyin. Bunun için önce bir kulak barını kulak kanalına yerleştirin, ardından onu sabit tutarak diğer kulak barını, başın yanlara hareket edemeyeceği ancak burnun yukarı ve aşağı hareket edebileceği şekilde kaydırarak yerleştirin. Başın düz olduğundan emin olmak için ağız kısmını stereotaksik cihaz kullanıcı cetvelinin ön sabitleyicisiyle sabitleyin.

Cetvel ile hayvan kafa derisinin ortası arasında 90 derecelik bir açı olmalıdır. Hayvan sabitlendikten sonra, steril bir skalpel ile kafa derisine anterior-posterior bir insizyon yapın. İnsizyonu lambda'dan hayvanın gözlerinin hemen arasına kadar uzatın.

Cildi sıkıştırmak ve insizyonu açık tutmak için hemostatlar kullanın. Açığa çıkan kafatası yüzeyini birkaç pamuklu çubukla kurulayın. Ardından, kılavuz kanülü yuvasına yerleştirin.

Ardından kafatasındaki bgma noktasını bulun ve kılavuz kanülü doğrudan bu konumun üzerine yerleştirin. bgma noktasından itibaren anterior, posterior ve lateral koordinatları kaydedin. Probun yerleştirilmesi için gerekli olan doğru koordinatları belirleyin.

Stereotaktik atlas yardımıyla, bgma değerine ekleme veya çıkarma yaparak kılavuz kanülü doğru koordinatlara konumlandırın. Kılavuz kanülü kafatasına değene kadar indirin ve ardından bu ventral koordinatı kaydedin. Kafatası üzerindeki bu konuma kurşun kalemle bir işaret koyun.

Burası delme işlemini gerçekleştireceğiniz yerdir. Delme işlemine başlamak için kılavuz kanülü çıkarın ve matkap ucunu sterilize edin.

Ardından, kafatasının genişliğini tamamen geçene kadar kalemle işaretlenen noktaya 0.5 milimetrelik bir delik açın. Kanülün yanlara temas etmeden delikten geçip geçmediğini kontrol edin. Kanül, delikten düz bir hat şeklinde geçebilene kadar delme ve kontrol işlemlerine devam edin.

Meningeal membranları veya kan damarlarını delmemeye dikkat edin. Delik açıldıktan sonra, kılavuz kanülün engelsiz bir şekilde yerleştirilmesini sağlamak için steril bir iğne kullanarak meningesleri nazikçe delin. Ardından, bir el matkabı kullanarak kafatası vidaları için altı adet delik açın.

Kanül deliğinin ikisi ön, ikisi yan ve ikisi arkasına gelecek şekilde. Altı adet paslanmaz çelik kemik vidasını sterilize edin ve sıkıca sabitlenene kadar kafatasına yerleştirin. Vidaları yerleştirdikten sonra, kılavuz kanülü etanol ile temizleyin ve kurumaya bırakın; ardından kılavuzu monte edin ve yavaşça uygun ventral koordinata indirin.

Beynin zarar görmesini önlemek için kanül aşağı yukarı hareket ettirilir. Yanların temas etmediğinden ve kanülün tamamen dikey olarak ilerlediğinden emin olun. Ardından hemostatlari çıkarın.

Sıvı dental çimentodan ince bir karışım hazırlayın ve bir spatula yardımıyla kılavuz kanülü, vidaları ve kafatasının geri kalanını ince bir tabaka halinde kaplayın. Ardından, ankora vidasını medial olarak ve posterior kafatası vidalarının arkasına yerleştirip cımbızla sabit tutun. Bu kez daha kalın bir çimento karışımı hazırlayın ve kanül ile ankora vidalarını, çimento yoğunlaştığında onları sabitleyecek kadar yeterli miktarda çimentoyla tamamen kaplayın.

Ancak donmadan önce, deriyi çimento kapağından ayırın ve çimento kapağını, her yerinin düzgün olduğundan ve deriyi tahriş etmediğinden emin olmak için spatula ile şekillendirin. Daha sonra, kılavuz kanülü güçlendirmek ve onu başlığın geri kalanıyla birleştirmek için daha fazla çimento eklenir. Dental çimento tamamen kuruduktan sonra, hayvanı aparattan çıkarın.

Ardından, çimento kapağının etrafını tamamen kaplayacak şekilde lokal antibiyotik basitrasin uygulayın. Sonrasında, intramüsküler penisilin enjeksiyonu yapın ve bunu bir subkütan salin enjeksiyonu ile takip edin. Hayvanı kafesine yerleştirin ve bilinci yerine gelene kadar izleyin.

Ardından hayvanın iyileşmesi için onu kafesine geri koyun. İyileşme sonrası, deney sonuna kadar hayvanı enfeksiyon belirtileri ile ağrı ve stres değerlendirmesi açısından günlük olarak izleyin.

Hayvan ağrı çekiyor gibi görünüyorsa, ihtiyaç halinde günde iki kez kilogram başına 0,1 ila 0,5 miligram subkütan buprenorfine uygulanır. Buna ek olarak, lokal basitrasin tedavisi ve sistemik penisilin tedavisi uygulanır. Postoperatif enfeksiyonlar gelişirse veya semptomlardan herhangi biri cerrahi işlemden 12 saat sonra hala devam ediyorsa, hayvan ötanize edilir.

Kemirgenlerde nasıl sağkalımlı stereotaktik cerrahi yapılacağını göstermiş olduk. Bu prosedürü uygularken, enfeksiyonu önlemek için cerrahi sırasında steril bir ortamın korunduğunu hatırlamak ve ameliyat sonrası hayvanı yakından izlemek; ayrıca kılavuz kanülün konumunun doğru olması için hayvanı hava barlarına doğru şekilde yerleştirmek önemlidir.

İşte hepsi. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.