Name: Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-06T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 s
Description: Öğrenin kemirgenlerde kurtarılabilir stereotaksik cerrahi yöntemini. Bu teknik in vivo mikrodiyaliz ile nörotransmitter seviyelerini izlemeyi ve davranışsal sonuçları araştırmayı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

DK065872 (AKP), Biyomedikal Araştırma Mükemmellik Smith Aile Vakfı Ödülü (AKP), F31 DA023760 tarafından desteklenir.

Özet Ve xylazine (10 mg; İki aylık ortalama yaş C57BL/6J fareler veya eşdeğer ya da üç aylık eski yaş ortalaması Sprague Dawley rat veya eşdeğeri ketamin (100 mg / kg ip fareler için sıçanlar için 60 mg / kg ip) ile anestezi / kg, türler ya da ip). Sedasyon refleks gösterdiği çekilme yumuşak bir ayak tutam kullanarak izlenir <a href="/index/details.stp?ID=236">. Walantus ve ark</a> (Jüpiter, 6, 2007) ve <a href="/index/details.stp?ID=404">Szot ve ark.</a> (Jüpiter, 9, 2007). Termoregülasyon thermostatregulated bir ısıtma yastığı (ALA Instruments Inc.) Aracılığıyla sağlanan ve bir rektal termometre ile takip edilebilir. Baş kürk traş ve kesi önce iyot ile temizlenmelidir. Cilt kesisi (sıçanlar, fareler için 1 cm uzunluğunda 2 cm uzunluğunda) ve tüm yumuşak doku kafatası yüzeyinden kaldırılması sonra, kılavuz kanül yerleştirilmesi bregma ilgili belirlenir. 6 mm delik kemirgen cerrahi için tasarlanmış bir pille çalışan delici (Güzel Bilim Araçlar, Inc.) Kafatası yoluyla delinmiş. Bakım matkap meningeal zarlarına ya da kan damarları aracılığıyla nüfuz etmez, böylece alınır. Kafatası posterior çekirdek accumbens, dorsal striatum veya prefrontal korteks önde gelen ikili 5 mm 21 gauge paslanmaz çelik kılavuz milleri ile yerleştirilir. Franklin ve Paxinos, 1997 başına stereotaksik koordinatları olarak kurulan (Stereotaksik Koordinatlar Fare Beyin, Academic Press) veya Paxinos ve Watson, 2006 (Academic Press Stereotaksik Koordinatlar, Rat Beyin). İmplantlar, diş çimento tarafından teminat altına alınmıştır. % 0.9 serum fizyolojik bolus Laktatlı Zil sesleri, su kaybını önlemek için cerrahi sonunda (sıçanlarda 5mls SC ve fareler üzerinde yapılan 1 ml SC sıvılar normal vücut ısısı kaynaştı sonra) verilir. Buprenorfin (0.1-0.5mg/kg SC), hayvan acı görünür bir şekilde ihtiyaç duyulan bazında, daha sonra, günde iki kez uygulanan ve. Post-operatif enfeksiyon oluşursa Yerel antibiyotik tedavisi (basitrasin merhem) ve sistemik antibiyotik tedavisi (penisilin 100.000 IU / kg), ilk 48 saat post-op için her 12 saatte bir IM yönetilmektedir. Ameliyatın ardından, hayvanlar tek tek yiyecek ve su ad libitum yerleştirilmiştir. En az bir hafta önce kurtarma mikrodiyaliz ve ötenazi için izin verilir. Cerrahi kurtarma ardından, hayvanlar, bir mikrodiyaliz kafes ve mikrodiyaliz sondalar, ameliyat sırasında kurulmuş kılavuz milleri takılı ve çimentolu aktarılır. Prob kılavuz mili ile, deri, kas ve meningeal doku atlayarak çünkü prob yerleştirilmesi ağrı veya rahatsızlık neden olmaz. Bu nedenle, prob yerleştirilmesi anestezi olmadan yapılır ve nörokimyasal veya davranışı üzerinde herhangi bir anestezi kaynaklı etkiler kaçınılır. Biz deney bağlı olarak başka bir 8-12 saat boyunca her 30 dakikada bir örnekleme probları 12 saat stabilize izin ve. Biz lokomotor fotoseller veya deneyci tarafından hareketinin manuel kayıt yoluyla hayvan davranışlarını izlemek. Microdialysate örnekleri Elektrokimyasal Algılama (HPLC-EC) nörokimyasal algılama ve analiz aracı ile Yüksek Performans Sıvı Kromatografisi içine enjekte edilir. Bazal nörokimyasal ve lokomotor davranışları üzerindeki etkileri için bekliyoruz. Deneyin sonunda hayvanın aşırı dozda sistemik ketamin (200 mg / kg ip) ve xylazine (20 mg / kg, ip) tarafından ötenazi. Daha sonra kalp,% 4 paraformaldehid tarafından takip% 0.9 serum fizyolojik ile perfüze. Beyinleri, dondurulmuş ve doğru prob yerleşimi doğrulamak için mikrodiyaliz prob yolu boyunca kesilir. Prosedür <ol><li> Stereotaksik alet ve gerekli tüm malzemeleri ayarlayın. Alan ve araçların temizlenmesi ve sterilize emin olun. </li><li> Elektrikli tıraş makinesi ile kürk traş ediyorum. Kulakları, gözleri arasında git, kürk alanı etkin bir şekilde temizlemek için farklı yönlere jilet hareket. Povidin / iyot traş alana uygulayın ama o gözleri korumak. </li><li> Hayvan, kulak kanalı içine yerleştirerek ve kulak çubukları yerleştirin sıkma stereotaksik aparat üzerine monte edin. İlk montaj bir kulakta kulak kanalına bar ve yeri ve diğer kulak çubuğu slayt tutun. Kafası artık yan yana hareket ettirilebilir zaman doğru yerde biliyoruz. Stereotaksik ön montaj ile ağız Güvenli ve kafası bir cetvel ile aynı seviyede olduğundan emin olun. Dikey konumda stereotaksik araç platformu ile ilgili bir cetvel yerleştirin ve hayvan kafa derisi cetvel ve orta arasında 90 ° açı). Bu yeteneği sunar stereotaksik aracı ile bunu doğrulamaktadır. </li><li> Lambda sadece hayvanın gözleri arasında uzanan bir steril neşter ile kafa derisi üzerinde bir ön / arka kesi olun. Sterilize hemostat cilt çimdik ve kesi açık tutmak için kullanın. Birkaç steril pamuklu çubuk kullanarak, açıkta kalan kafatası yüzeyi kurulayın. <li> Bu konumu üzerinden kılavuz kanül sağ bregma, kafatası ve pozisyon bulmak, montaj üzerine kılavuz kanül koyun. Anterior / posterior ve lateral koordinatlarda yazınız. Bregma, stereotaksik atlas yardımı ile prob yerleştirilmesi için gerekli olan doğru koordinatları bulabilirsiniz. Bregma gelen ekleyerek veya çıkarılarak doğru koordinatları kılavuz kanül yerleştirin. Sonra bu ventral koordinat kayıt kafatası dokunmadan, kadar kılavuz kanül getirin. Kafatası bu yerde steril bir kalem ile bir kalem işareti olun, bu size sondaj olacak. </li><li> Kılavuz kanül çıkarın ve matkap sterilize edin. Kafatası genişliği üzerinden elde edene kadar dikkatlice kalem işareti de bir delik açın. Kılavuz kanül ile yanlarda dokunmadan delik açık olup olmadığını görmek için kontrol edin. Kanül düz bir yol temizlemek kadar delme ve kontrol edin. Delik yapıldıktan sonra, yavaşça kanül engelsiz ekleme sağlamak amacıyla meninksler yumruk steril bir iğne kullanın. </li><li> Kanül delik ve arka iki taraf için lateral kanül delik, iki iki anterior: Sonra, bir yandan matkap kullanarak, kafatası vidalar için altı delik. Altı vida sterilize ve sıkıca demirlemiş kadar kafatası üzerine koyun. </li><li> Etanol ve serum fizyolojik, montaj kılavuzu kanül temizleyin ve uygun ventral koordine etmek için yavaş yavaş daha düşük. Taraf dokunmadan değildir ve mükemmel bir şekilde dikey olduğunu emin olun. </li><li> Medial ve posterior kafatası vida arkasında çapa vida yerleştirin ve cımbız ile bir yerde tutun. Ince bir parti sıvı diş çimento karıştırın ve kılavuz kanül, vidalar, kafatası ve steril bir spatula ile geri kalanını kapsayacak. Başka bir parti, daha kalın bu kez, tamamen alan ve onu korumak için yeterli kanül ve çapa vida kapağı olun. </li><li> Çimento kalın olur ve katılaşır önce çimento kapağını pürüzsüz ve daha sonra cildi tahriş etmez emin olmak için spatula ile çimento fincan çimento fincan cilt ayrı ve kalıp. </li><li> Diş çimento, hayvan cihazdan çıkarmadan önce tamamen kurumasını bekleyin. Hemostat çıkarın. Basitrasin çimento kap etrafında her şekilde uygulayın. </li><li> Sonra hayvan stereotaksik cihaz kapalı, 1 ml serum fizyolojik SC (subkutan) tarafından takip penisilin IM (kas-içi) 0.25 ml enjekte edilir. </li><li> Hayvan kendi kafesine yerleştirin ve onu kurtarmak için onun odasına dönmeden önce bilinçli hale gelinceye kadar izlemek. </li><li> Onlar, cerrahi ve günlük post-op gün anestezi kurtarmak kadar enfeksiyon ve ağrı / sıkıntı değerlendirilmesi belirtileri, deney sonuna kadar, hayvanlar Monitör. Bu hafta sonları ve tatil günleri içerir. Düşük spontan hareket, taşıma üzerine sıkıntı seslendirme, hunched duruş, ishal, şişkinlik ve headmount alan ve beslenme eksikliği / içme akıntı, ağrı ve sıkıntı tüm işaretler vardır. Buprenorfin (0.1-0.5mg/kg SC) hayvan acı görünmesi durumunda, ihtiyaç duyulan bir bazında, daha sonra günde iki kez uygulandı. Post-operatif enfeksiyon oluşursa Yerel antibiyotik tedavisi (basitrasin merhem) ve sistemik antibiyotik tedavisi (penisilin 100.000 IU / kg), ilk 48 saat post-op için her 12 saatte bir IM yönetilmektedir. Bu belirtilerden herhangi biri buprenorfin yönetimi, ek sıvı ve ameliyattan 12 saat içinde antibiyotik tedavisi sonrasında devam ederse, hayvan ötenazi. </li></ol>

<ol><li>Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+of+dopamine+interpreted+with+quantitative+model+incorporating+probe+implantation+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma.</a> J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).</li>
<li>Chen, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tissue+trauma+on+the+characteristics+of+microdialysis+zero-net-flux+method+sampling+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theor.+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of tissue trauma on the characteristics of microdialysis zero-net-flux method sampling neurotransmitters.</a> Journal of Theor. Biology. 238, 863-881 (2006).</li>
<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li>
<li>Pothos, E. N., Creese, I., Hoebel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restricted+eating+with+weight+loss+selectively+decreases+extracellular+dopamine+in+the+nucleus+accumbens+and+alters+dopamine+response+to+amphetamine%2C+morphine+and+food+intake%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Restricted eating with weight loss selectively decreases extracellular dopamine in the nucleus accumbens and alters dopamine response to amphetamine, morphine and food intake.</a> The Journal of Neuroscience. 15, 6640-6650 (1995).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

In vivo mikrodiyaliz yaşayan bir hayvanın farklı beyin sitelerinde birden fazla nörotransmitter ve metabolitleri ölçmek için tercih edilen bir araçtır. Ancak, sadece ekstraselüler nörokimyasalların seviyeleri izler ve gerçek zamanlı olarak nörotransmitter ekzositoz izlemek için zaman çözünürlüğü sunmuyor. &quot;Net akı&quot; olarak adlandırılan tekniği bir sürümü sayesinde, belirli bir yerinde gerçek bir nörotransmitter konsantrasyonu, plazma zarı taşıyıcıları da ile geri alım, nörotransmitter oranı doğru ölçümler verebilir, hesaplanan olab...

kemirgenler içinde kurtarılabilir stereotaksik cerrahi

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents 

MSS farklı sistemik sorunlar (farmakolojik veya fizyolojik) etkilerinin belirlenmesi için uyanık hayvanların beyin nörotransmitterlerin ekstrasellüler bazal düzeylerini ölçmek için yeteneği sağlar. Örneğin, bir doğrudan hayvanın orta beyin dopamin projeksiyonları d-amfetamin veya doğal yiyecek gibi uyaranlara gibi dopamin serbest ilaçlara cevap nasıl ölçebilirsiniz. Bu video mikrodiyaliz prob eklemek ve implant ve ekstrasellüler düzeylerini ölçmek için elektrokimyasal algılama (HPLC-EC) ile birleştiğinde yüksek performanslı sıvı kromatografi nasıl kullanılacağını nasıl, sıçan beyin belirli siteleri hedef kılavuz kanüller implant nasıl gösterir oksitleyici nörotransmitterlerin ve metabolitleri. Mikrodiyaliz prob aracılığıyla ilaçlar Yerel hassas giriş alana özgü rafine bir iş için bir eylem bileşik s mekanizması sağlar. Bu teknik, mükemmel anatomik ve kimyasal çözümü vardır ama sadece mikrodiyaliz örnekleri gibi mütevazı bir zaman çözünürlük genellikle saptanabilir nörotransmitter düzeylerini sağlamak için her 20-30 dakikada bir işlenir. Tamamlayıcı ex vivo araçları (yani, dilim ve hücre kültürü elektrofizyoloji), gerçek zamanlı nörotransmisyon izleme ile yardımcı olabilir.

Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.

Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

Uyanık hayvanların beyinlerindeki nörotransmitterlerin hücre dışı bazal seviyelerinin ölçülebilmesi, farklı ... etkilerinin belirlenmesine olanak tanır.

Merhaba, ben Tufts Üniversitesi Tıp Fakültesi Farmakoloji ve Deneysel Tedaviler Bölümü'ndeki Emmanuel POTOs Laboratuvarı'ndan Brenda Geiger. Ben de aynı laboratuvardan Lauren Frank. Bugün, kemirgenlerde hayatta kalma odaklı stereotaktik cerrahi işlemini göstereceğiz.Bu prosedür, cihazların kurulmasını, hayvanın cerrahiye hazırlanmasını ve ardından stereotaksik cerrahinin gerçekleştirilmesini kapsamaktadır. Öyleyse başlayalım. İşleme başlamadan önce, stereotaksik cihazı ve gerekli tüm malzemeleri hazırlayın.Alan ve aletlerin temizlendiğinden ve sterilize edildiğinden emin olun. Ardından, hayvanı cerrahi işlem için hazırlayın. Bugün cerrahi işlemi 10 haftalık bir Sprague Dawley sıçan üzerinde göstereceğim.Ayrıca, özel bir platform adaptörü gerektiren üç aylık Sprague Dawley sıçanlar ve iki aylık C57BL/6J fareleri de kullanıyoruz. Sıçanı, kilogram başına 60 mg ketamin ve kilogram başına 10 mg ksilazin içeren bir kokteylin IP enjeksiyonu ile anesteziye alın. Termostatla düzenlenen bir ısıtma pedi kullanarak hayvanı sıcak tutun.Hayvanın sedatize edildiğinden ve vücut sıcaklığının uygun seviyede sabitlendiğinden emin olduktan sonra cerrahi işleme geçin. Ameliyata başlamak için, hayvanın

survivable-stereotaxic-surgery-in-rodents

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Beyin tümörlü hastalarda rutin kranial radyoterapi ve zayıflatıcı bilişsel işlev bozukluğu yararlı, bu tedavi genellikle sonuç. Bu ciddi bir çözülmemiş sorun, şu anda herhangi bir klinik rücu ve radyasyona bağlı bilişsel azaltır kurtarma için kök hücre temelli tedaviler hazırlamak için çabalarımızı tahrik vardır.

Kranial Radyoterapi neden Bilişsel Disfonksiyon Restorasyon Kök Hücre Transplantasyon Stratejileri

Kemirgenler üzerinde stereotaksik cerrahi, ilaçlar ya da uyanık davranmak hayvanlar elektriksel stimülasyon ve kayıtları, hedeflenen yönetim için izin verir. Bu video sunumu biz bu uzun soluklu bir prosedür başarıyla sağkalım oranı ve düşük ameliyat sonrası kilo kaybı son usul ayrıntılandırmaları gösterecektir.

Behavioral Neuroscience Kemirgen Stereotaksik Cerrahi ve Hayvan Refahı Sonuç İyileştirmeler

Stereotaksik koordinatları kullanarak excitotoxin infüzyonu ile belirli beyin bölgesinin Hedefli ablasyonu (ler) tarif edilir. Bu teknik aynı zamanda sıçan beyin içine diğer kimyasalların infüzyon için adapte edilebilir.

Yetişkin Rat spesifik Beyin Alanlarının eksitotoksik Lezyon için Stereotaksik Cerrahi

Bu protokol kemirgen eşzamanlı fonksiyonel manyetik rezonans görüntüleme ve derin beyin stimülasyonu için standart bir yöntem açıklanır. Bu deneysel araçların kombine kullanımı hemen hemen herhangi bir beyin hedefe elektriksel uyarıya tepki olarak küresel alt aktivitesinin araştırılması için izin verir.

Kemirgenler Eşzamanlı fMRI ile derin beyin stimülasyonu

Bu çalışma, mikroelektrot dizilerinin ortak marmoset'e stereotaksik, nöroşirürjik implantasyonu gerçekleştirmek için bir protokol sunmaktadır. Bu yöntem özellikle serbestçe davranan hayvanlarda elektrofizyolojik kayıtları sağlar, ancak bu türdeki diğer benzer nöroşirürjik müdahalelere (örneğin, ilaç yönetimi için kanül veya beyin stimülasyonu için elektrotlar) kolayca adapte edilebilir.

Ortak Marmoset Mikroelektrot Dizileri İmplantasyonu için Stereotaksik Cerrahi (Callithrix jacchus)

Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası kemiklerinden erişimi içerir ve kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Burada, beyin sapı yer işaretlerinin doğrudan görselleştirilmesine dayanan sarnıç magna aracılığıyla kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği hedeflemek için alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz.

Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Bu çalışmada, in vivo FDG-PET ile akut derin beyin stimülasyonunun neden olduğu metabolik nöromodülasyonu değerlendirmek için klinik öncesi deneysel bir yöntem tanımlanmıştır. Bu makale, stereotaksik cerrahiden stimülasyon tedavisinin uygulanmasına ve PET görüntülerinin elde edilmesi, işlenmesi ve analizine kadar tüm deneysel adımları içermektedir.

İn vivo Sıçanlarda Derin Beyin Stimülasyonunun İndüklediği Aktivite Kalıplarını Ortaya Çıkarmak için Pozitron Emisyon Tomografisi

Mevcut protokol, boyalar ve donmuş kesitler kullanarak viral izleme yapmadan önce stereotaksik enjeksiyon koordinatlarının doğrulama adımını hızlandırmak için pratik bir stratejiyi açıklamaktadır.

Kriyoseksiyon Yoluyla Stereotaksik Enjeksiyon Koordinatlarının Ön Doğrulaması

Ortotopik pediatrik beyin tümörü modellerinin geliştirilmesi, kanser hücrelerini hassas bir şekilde implante etmek için stereotaksik bir cihaz kullanarak titiz bir hassasiyet gerektirir. Burada sunulan metodoloji, beyin tümörü hücrelerinin hazırlanması, intrakraniyal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi ve beyin tümörü aşılanmasını değerlendirmek için ameliyat sonrası bir izleme sisteminin uygulanmasında yer alan adımları özetlemektedir.

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

Bu video ve protokol kemirgenlerde bir cam kaplı kafatası pencere nasıl implant göstermektedir. Bu hazırlıklar, kronik in vivo iki ay zaman ölçekleri üzerinde neokorteks foton görüntüleme için kullanılabilir. Optik içsel sinyal görüntüleme gibi diğer görüntüleme türleri için de kullanılıyor olabilir.

Kronik Beyin Görüntüleme Kraniyotomi Cerrahi Prosedür

Öğrenin kemirgenlerde kurtarılabilir stereotaksik cerrahi yöntemini. Bu teknik in vivo mikrodiyaliz ile nörotransmitter seviyelerini izlemeyi ve davranışsal sonuçları araştırmayı sağlar.

Kemirgenler içinde Kurtarılabilir Stereotaksik Cerrahi

Daha fazla video keşfet