October 6th, 2008
Hayvanların serbestçe hareket eden, farklı beyin bölgeleri ekstrasellüler nörotransmitter düzeylerinin izlenmesi nörotransmitter salınımı ve davranış arasındaki bağlantıyı irdeliyoruz. Ve bazal nörotransmisyon farmakolojik veya fizyolojik manipülasyonlar nasıl değiştirdiğini hakkında bilgi; in vivo mikrodiyaliz elektrokimyasal algılama ile birleştiğinde mükemmel anatomik ve kimyasal çözünürlük sağlar.
Merhaba, ben Tufts Üniversitesi Tıp Fakültesi Farmakoloji ve Deneysel Terapötikler Bölümü'ndeki Emmanuel POTO'lar Laboratuvarı'ndan Brenda Geiger. Ve ben Lauren Frank, aynı zamanda laboratuvardan. Bugün kemirgenlerde sağkalım stereotaktik cerrahisini göstereceğiz.
Bu prosedür, aletlerin kurulmasını ve hayvanın ameliyata hazırlanmasını ve ardından stereotaksik cerrahinin gerçekleştirilmesini içerir. Öyleyse başlayalım. Prosedüre başlamadan önce, stereotaksik aleti ve gerekli tüm malzemeleri ayarlayın.
Alanın ve aletlerin temizlendiğinden ve sterilize edildiğinden emin olun. Sonra, hayvanı ameliyat için hazırlayın. Bugünkü ameliyatı 10 haftalık bir Sprague dolly faresi kullanarak göstereceğim.
Ayrıca, özel bir platform adaptörü gerektiren üç aylık sprey dolly fareleri ve iki aylık C 57 siyah altı J fareleri kullanıyoruz. Sıçatanı, kilogram başına 60 miligram, ketamin ve kilogram başına 10 miligram içeren bir kokteylin IP enjeksiyonu ile uyuşturun. Ksilazin. Termostat ayarlı bir ısıtma yastığı kullanarak hayvanı sıcak tutun.
Hayvanın sakinleştirildiğinden ve uygun vücut sıcaklığında stabilize edildiğinden emin olduktan sonra ameliyata devam edin. Ameliyata başlamak için, kulaklardan gözlerin hemen arasına kadar traş edilmiş bir elektrikli tıraş bıçağıyla hayvanın kürkünü tıraş edin. Tıraşlı bölgeye iyot sürün, ancak gözleri ondan koruduğunuzdan emin olun.
Şimdi hayvanı stereotaksik cihaza monte edin. Bunu yapmak için önce bir kulak çubuğunu kulak kanalına takın ve ardından yerinde tutun ve diğer kulak çubuğunu içeri kaydırın, böylece baş yan yana hareket ettirilemez, ancak burun yukarı ve aşağı hareket ettirilebilir. Başın düz olduğundan emin olmak için ağzı Stereotaksik alet kullanıcı cetvelinin ön montajı ile sabitleyin.
Cetvel ile hayvan kafa derisinin ortası arasında 90 derecelik bir açı olmalıdır. Hayvan yerine oturduktan sonra, steril bir neşter ile kafa derisinde ön arka bir kesi yapın. Kesiyeri lambdadan hayvanın gözlerinin hemen arasına kadar uzatın.
Cildi sıkıştırmak ve insizyonu açık tutmak için hemostat kullanın. Açıkta kalan kafatası yüzeyini birkaç pamuklu çubukla kurulayın. Ardından, kılavuz kanülü yuvasına yerleştirin.
Daha sonra kafatasında bgma'yı bulun ve kılavuz kanülü doğrudan bu konumun üzerine yerleştirin. Bgma'dan ön, arka ve yan koordinatları yazın. Probunuzun yerleştirilmesi için gereken doğru koordinatları bulun.
Stereotaktik atlas yardımıyla, kılavuz kanülü bgma ekleyerek veya çıkararak doğru koordinatlara yerleştirin. Kılavuz kanülü kafatasına değene kadar indirin ve ardından bu ventral koordinatı kaydedin. Kafatasının bu yerinde bir kalem işareti yapın.
Burası sondaj yapacağınız yer. Delmeye başlamak için. Kılavuz kanülü çıkarın ve matkap ucunuzu sterilize edin.
Ardından, kafatasının genişliğini geçene kadar kalem işaretinde 0,5 milimetrelik bir delik açın. Yanlara dokunmadan deliği açıp açmayacağını görmek için adam kanülü ile kontrol edin. Kanül deliği düz bir yolda temizleyene kadar delmeye ve kontrol etmeye devam edin.
Meningeal membranlardan veya kan damarlarından geçmemeye dikkat edin. Delik açıldıktan sonra, kılavuz kanülün engelsiz bir şekilde yerleştirilmesine izin vermek için meninksleri nazikçe delmek için steril bir iğne kullanın. Daha sonra, bir el matkabı kullanarak kafatası vidaları için altı delik açar.
Kanül deliğinin iki ön, iki lateral ve iki arkası. Altı paslanmaz çelik kemik vidasını sterilize edin ve sıkıca sabitlenene kadar kafatasının üzerine yerleştirin. Vidaları taktıktan sonra, kılavuz kanülü etanol ile temizleyin ve kurumasını bekleyin, ardından kılavuzu monte edin ve yavaşça uygun ventral koordinata indirin.
Beyne zarar vermemek için kanül yukarı ve aşağı indirilir. Kenarların birbirine değmediğinden ve tamamen dikey olarak girdiğinden emin olun. Ardından kanama durdurucuları çıkarın.
İnce bir sıvı diş çimentosu karıştırın ve kılavuz kanülü, vidaları ve kafatasının geri kalanını ince bir tabaka halinde bir spatula ile örtün. Ardından, ankraj vidasını medialine ve arka kafatası vidalarının arkasına yerleştirin ve cımbızla yerinde tutun. Bu sefer başka bir çimento partisini daha kalın hale getirin ve çimento kalınlaştığında sabitlemek için kanül ve ankraj vidalarını yeterli çimento ile tamamen kapatın.
Ancak katılaşmadan önce, cildi çimento kapağından ayırın ve her tarafının pürüzsüz olduğundan ve cildi tahriş etmediğinden emin olmak için çimento kapağını spatula ile kalıplayın. Daha sonra, kılavuz kanülü güçlendirmek ve kafa montajının geri kalanıyla köprülemek için daha fazla çimento eklenir. Diş çimentosu tamamen kuruduktan sonra, hayvanı cihazdan çıkarın.
Daha sonra yerel antibiyotik basitrasini çimento kapağının etrafına kadar uygulayın. Daha sonra, kas içi bir penisilin enjeksiyonu ve ardından tek bir deri altı salin enjeksiyonu uygulayın. Hayvanı kafesine yerleştirin ve bilinci yerine gelene kadar hayvanı izleyin.
Daha sonra iyileşmesi için hayvanı odasına geri koyun. İyileştikten sonra. Enfeksiyon belirtileri ve ağrı ve sıkıntının değerlendirilmesi için deneyin sonuna kadar hayvanı günlük olarak izleyin.
Hayvan acı çekiyor gibi görünüyorsa, kilogram başına 0.1 ila 0.5 miligram deri altı buprenorfin uygulayın. Ayrıca lokal basitrasin tedavisi ve sistemik penisilin tedavisi uygulanmaktadır. Ameliyat sonrası enfeksiyonlar meydana gelirse, semptomlardan herhangi biri ameliyattan sonra 12 saatten daha uzun sürerse, hayvana ötenazi yapılır.
Biz, az önce size kemirgenlerde hayatta kalabilen stereotaktik cerrahinin nasıl yapıldığını gösterdik. Bu prosedürü yaparken. Ameliyat sırasında steril bir ortamın korunmasını unutmamak ve enfeksiyonu önlemek için ameliyattan sonra hayvanı yakından izlemek ve kılavuz kanülün konumunun doğru olması için hayvanı hava çubuklarına doğru şekilde yerleştirmeyi unutmamak önemlidir.
İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde iyi şanslar.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Bu makale, serbestçe hareket eden hayvanlarda hücre dışı nörotransmitter seviyelerinin izlenmesini, nörotransmitter salınımının davranışı ile bağlantısını tartışmaktadır. Gelişmiş anatomik ve kimyasal çözünürlük için in vivo mikrodiyaliz ve elektrokimyasal tespit kullanımını vurgulamaktadır.
Survivable stereotaxic surgery in rodents enables precise implantation of guide cannulas and microdialysis probes for in vivo measurement of extracellular neurotransmitter levels. This capability is critical for interrogating CNS pharmacodynamics, supporting target validation, and de-risking mechanistic hypotheses in neuropsychiatric and neurodegenerative drug discovery. The approach provides high anatomical and chemical resolution, facilitating translational continuity from early discovery through preclinical research.
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis-driven interrogation of CNS targets and pathways in live animal models.