Name: Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Öğrenin, perinatal hipoksik iskemik ensefalopati modelini sıçan yavrularında mikrocerrahi ve karotid arter ligasyonu kullanarak oluşturmayı. Bu yöntem, yenidoğan beyin hasarı mekanizmalarını incelemek için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Amerikan Kalp Derneği ve March of Dimes tarafından finanse edilmektedir.

Bu protokol, deney hayvanlarının kullanımı için sağlık kuralları Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından, Stanford Üniversitesi ve uymaktadır Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylandı. Yenidoğan Rat HIE modeli <ol><li> Indüksiyonu için% 3-4 ve% 1-2; Post-natal gün (PND) 7 Sprague-Dawley sıçan yavrular (Charles River Laboratuvarları, Inc, Wilmington, MA), (Aerrane, Baxter, Deerfield, IL izofluran ile tam anestezi bakım). </li><li> Küçük bir kesi (Ekstra İnce Iris Makas # 14.088-10, Güzel Bilim Araçlar A.Ş., Foster City, CA), boyun sol karotis arter (CCA) ortaya çıkarmak için yapılır. </li><li> CCA, 5-0 ipek sütür (5-0 ipek, Ethicon, Somer, NJ) ile bağlandı. </li><li> Kesi siyanoakrilat yapıştırıcı (Elmers Products Inc, Columbus, OH) ile kapatılır. Kesi bant ile kaplanmıştır ve anestezi durdurulur. Yavrular baraj döndü ve iyileşmek için 1-2 saat izin verilir. </li><li> Pups sonra% 8, 37, 100 dakika boyunca% 92 azot ile dengeli oksijen içeren bir hipoksik odasına ° C yerleştirilir % 8 oxygen/92% azot gazı (Airgas, Sacramento, CA), plastik bir kapak ile donatılmış fare kafes içine tüp yoluyla akış. Kapak kafesine uygun yapılan ve 2 cm çapında iki delik vardır, biri,% 8 oksijen gaz tankı ve başka bir bağlı tüpü almak için hangi gaz flowout sağlar. Odasının bir su banyosuna yerleştirilir ve kullanmadan önce ısıtılır ve içinde bir termometre 37 ° C hipoksi başlamadan önce kaydetmeniz gerekir. </li><li> Hipoksi 100 dakika sonunda yavrular kurtarma için baraj tekrar iade edilir. </li><li> Hipoksi sona ermesinden sonra 24 saat, yavrular izofluran ile derin anestezi ile ötenazi. Beyin dokusu, tuzlu, pH 7.4 (Sigma Chemical Co, St Louis, MO) tamponlu fosfat soğuk% 1 TTC bir çözüm, soğuk serum fizyolojik ile perfüze. TTC ışıktan koruyarak saklanmalıdır. </li><li> Brain kaldırılır ve 1-2 dakika, buz ve dört koronal bölümler dışında 3 mm (seviye 1-4) soğutulur opticchiasm ve infundibulum bregma 1.8 &#39;e karşılık gelen düzeyde rostrally başlayarak kesilir ~ 2.0 mm seviyesinde yetişkin bir farenin beyin. </li><li> Beyin dilim TTC çözüm dalmış ve% 4 paraformaldehid / gecede PBS fiksasyonu takiben, 8 dakika 37 ° C inkübe. TTC ışığa duyarlı olduğundan, bu süre içinde, ışıktan dilimleri uzak tutun. </li><li> TTC boyanan kesitler taranır ve dijital. Enfarktüs alanı (lekesiz alan), ipsilateral yarımkürede alanında ve kontralateral yarımkürenin alanı: Resim J (NIH, Bethesda, MD), aşağıdaki her seviye için ölçülür. A 1, A 2, A 3, A 4 (infarkt alanı / ipsilateral yarımkürede alan) ya da yüzde dilim ortalama alanı olarak hesaplanır enfarkte. Enfarkt yüzde hacmi toplamı (A 1 + A 2 + 3 + 4) * 3mm olarak hesaplanır. Kortikal veya striatal yaralanma alanları da benzer bir şekilde ayrı ayrı belirlenebilir. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/old/955_2008_9_2_2/955_Fig-01.png" alt="Şekil 1" width="660" height="190" /> Şekil 1. TTC Temsilcisi HIE koronal seviyeleri 1-4 boyandı. TTC lekeli koronal bölümleri infarkt alanı (beyaz) göstermektedir.

<ol><li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of neurology. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, R. C., Vannucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+Hypoxic-Ischemic+Brain+Damage%3A+Evolution+of+an+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Perinatal Hypoxic-Ischemic Brain Damage: Evolution of an Animal Model.</a> Dev Neurosci. 27 (2-4), 81-86 (2005).</li>
<li>Bona, E., Hagberg, H., Loberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+moderate+hypothermia+after+neonatal+hypoxia-ischemia%3A+short-+and+long-term+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Protective effects of moderate hypothermia after neonatal hypoxia-ischemia: short- and long-term outcome.</a> Pediatric research. 43 (6), 738-738 (1998).</li>
<li>Trescher, W. H., Ishiwa, S., Johnston, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hypothermia+and+hyperthermia+on+attentional+and+spatial+learning+deficits+following+neonatal+hypoxia-ischemic+insult+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of hypothermia and hyperthermia on attentional and spatial learning deficits following neonatal hypoxia-ischemic insult in rats.</a> Behavioural brain research. 151 (1-2), 209-209 (2004).</li>
<li>Mishima, K., Ikeda, T., Yoshikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+post-hypoxic-ischemic+hypothermia+markedly+delays+neonatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+development%22%5BJournal%5D)">Brief post-hypoxic-ischemic hypothermia markedly delays neonatal brain injury.</a> Brain development. 19 (5), 326-326 (1997).</li>
<li>Young, R. S., Olenginski, T. P., Yagel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+graded+hypothermia+on+hypoxic-ischemic+brain+damage%3A+a+neuropathologic+study+in+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">The effect of graded hypothermia on hypoxic-ischemic brain damage: a neuropathologic study in the neonatal rat.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 14 (6), 929-929 (1983).</li>
<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Germano, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17 (6), 1304-1304 (1986).</li>
<li>Cai, J., Kang, Z., Liu, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+therapy+reduces+apoptosis+in+neonatal+hypoxia-ischemia+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Hydrogen therapy reduces apoptosis in neonatal hypoxia-ischemia rat model.</a> Neuroscience letters. 441 (2), 167-167 (2008).</li>
<li>Grow, J., Barks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+hypoxic-ischemic+cerebral+injury+in+the+term+infant%3A+current+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+perinatology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of hypoxic-ischemic cerebral injury in the term infant: current concepts.</a> Clinics in perinatology. 29 (4), 585-585 (2002).</li>
<li>Aden, U., Halldner, L., Lagercrantz , H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravated+brain+damage+after+hypoxic+ischemia+in+immature+adenosine+A2A+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Aggravated brain damage after hypoxic ischemia in immature adenosine A2A knockout mice.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 34 (3), 739-739 (2003).</li>
</ol>

Özetlediği serebral hipoksi yenidoğanlarda peri-natal dönemde meydana gelen kemirgen postnatal HIE modeli oluşturulmuş bir model. Kapsamlı histolojik ve immünositokimyasal karakterizasyon çalışmaları 7 gün eski kemirgen, üçüncü trimester insan fetus 7 modeli için analog beyin olgunluğa sahip olduğunu göstermiştir . Kemirgen HIE modeli böyle bir hipotermi gibi müdahaleler 3 valide edilmiş peri-natal hipoksi 2, beyin hasarı mekanizmaları anlamak için çok bilgilendirici olmuştur . Bu model başlangıçta sıçanlard...

<table><tbody><tr><td>Sprague-Dawley Sıçan Yavruları</td><td>Hayvan</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Cerrahi</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%8 Oksijen/ %92 Azot Gazı</td><td>Cerrahi</td><td>Airgas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifenil tetrazolyum klorür</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS) pH 7.4</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr></tbody></table>

perinatal İskemi hipoksik İskemik ensefalopati modeli

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hipoksik-İskemik Ensefalopati (HIE), doğum sırasında oluşan sistemik asfiksi sonucu. HIE olan yenidoğanlarda yirmi beş oranında zeka geriliği, serebral palsi, ve epilepsi dahil olmak üzere, ciddi ve kalıcı nöropsikolojik sekeller gelişir. HIE sonuçları HIE yeni doğanlarda beyin hasarı azaltmak için tedavi stratejileri belirlemek ve geliştirmek için kritik yapma, yıkıcı ve kalıcı değildir. Bu amaçla, hipoksik-iskemik beyin hasarı için yenidoğan sıçan modelinde bu insanlık durumunun model geliştirilmiştir. HIE modeli ilk Vannucci ve ark 1 doğrulanmış oldu ve o zamandan beri yoğun perinatal hipoksi-iskemi 2 kaynaklanan beyin hasarının mekanizmaları belirlemek ve potansiyel terapötik müdahaleler 3,4 test etmek için kullanılır olmuştur. HIE modeli, iki adımdan oluşan bir süreçtir ve hipoksik ortama maruz sol karotis arter ligasyonu içerir. Yarımkürede bağlanan karotis arteri ipsilateral serebral kan akımı (CBF), çünkü Willis daire ile kollateral kan akımı azalması değil; ancak düşük oksijen basıncı ile ipsilateral yarımkürede CBF önemli ölçüde azaltır ve tek taraflı iskemik hasar sonuçları . 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) iskemik beyin dokusu leke ve tanımlamak için kullanımı başlangıçta kemirgen serebral iskemi 5 yetişkin modeller için geliştirilen ve 72 adete kadar erken zaman noktalarında serebral infarctin ölçüde değerlendirmek için kullanılır. iskemik olay 6 saat sonra. Bu video, postnatal sıçan beyin hipoksik-iskemik yaralanma modeli TTC boyama kullanarak infarkt değerlendirilmesi göstermektedir.

Hipoksik-iskemik beyin hasarı için postnatal sıçan modelinde, insan yenidoğan hipoksik iskemik ensefalopati (HIE) köklü bir model. Bu makalede, doğum sonrası sıçan Yavrularda HIE modeli açıklanmaktadır.

Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli

Hipoksik-İskemik Ensefalopati (HİE), doğum sırasında meydana gelen sistemik asfiksinin bir sonucudur. HİE olan yenidoğanların yüzde yirmisi beşi ağır ...

Bu hipoksik ensefalopati iskemi modelini indüklemek için, doğum sonrası yedinci gündeki Sprague Dawley sıçan yavrularına mikrocerrahi uygulanır ve sol ortak karotis arteri ligasyonu gerçekleştirilir. Bir ila iki saatlik toparlanma süresinin ardından, yavrular 100 dakika boyunca 37 °C sıcaklıktaki bir hipoksi kabinine yerleştirilir.Yavrular, ötanazi uygulanana kadar annelerine geri verilir. İki sistemik perfüzyon adımının ardından beyinler çıkarılır ve üç milimetre kalınlığında dilimler halinde kesilir. Enfarkt alanını belirlemek amacıyla dilimler %1 2, 3, 5, trifenil tetrazolyum klorür veya TTC çözeltisi kullanılarak boyanır.Merhaba, ben Stanford Üniversitesi Tıp Fakültesi Nöroloji ve Nörolojik Bilimler Bölümü'ndeki Andre Laboratuvarı'ndan Hi tango. Bugün size neonatal hipoksik iskemik beyin hasarı modeli için bir prosedür göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, nihai hedefi yeni tedaviler geliştirmek olmak üzere, neonatal beyinde hipoksik iskemik ensefalopati mekanizmasını incelemek için kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Prosedüre başlamak için, postnatal yedinci gündeki bir spray dolly sıçan yavrusunu tamamen anestezi altına alın. İndüksiyon için %4, idame için ise %1 ile 2 ara

the-hypoxic-ischemic-encephalopathy-model-of-perinatal-ischemia

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Büyük hayvan modellerinde neonatal asfiksi fizyoloji ve farmakoloji sınavında iyi translasyonel değerlere sahiptir. Yenidoğan domuz kullanarak, sistemik ve bölgesel hemodinami, biyokimyasal ve patolojik yollar ve korelasyon ile oksijen taşınması eğitim avantajlarına sahip neonatal asfiksi taklit etmek için bir deney protokolü geliştirmektir.

Yenidoğan Asfiksi Bir Domuz Modeli

Video, yenidoğan hipoksik-iskemik beyin hasarını incelemek için bir fare modeli oluşturma prosedürünü göstermektedir. Cerrahi olarak iskemiyi indükleme ve beyin hasarını şiddetlendirmek için hayvanı hipoksiye maruz bırakma adımlarını ana hatlarıyla belirtir. Son olarak, ortaya çıkan beyin lezyonlarının nasıl değerlendirileceğini gösterir ve fare modelinin daha fazla bilimsel araştırma için hazırlanmasını sağlar.

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Beyin Hasarının Fare Modelinin Oluşturulması

Kaynak: Jantzie, L. L., et. al. Sıçanlarda Prenatal Hipoksi-iskemi ile İntramniyotik Lipopolisakkarit Kullanılarak Prematüre Ensefalopatisinin Modellenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, uterus kan akışını kısıtlayarak ve LPS enjekte ederek, erken doğum çalışmalarıyla ilgili nöroinflamasyonu ve bozulmuş beyin gelişimini modelleyerek fetal sıçanlarda hipoksik-iskemik ve inflamatuar durumları indüklemek için bir protokol göstermektedir.

Prenatal Sıçanlarda Ensefalopatiyi Modellemek için Hipoksik-İskemik ve İnflamatuar Durumların İndüklenmesi

Perinatal asfiksiyi takiben hipoksik-iskemik ensefalopati hayvan modelleri kullanılarak incelenebilir. Yenidoğan hipoksik-iskemik ensefalopatisinin bir domuz yavrusu modeli oluşturmak için gerekli prosedürleri gösteriyoruz.

Yenidoğan Hipoksik-İskemik Ensefalopati A Piglet Modeli

Tromboembolik inme modelleri, rekanalizasyon tedavisini optimize etmek için hayati araçlardır. Burada, tromboz ve enfarktüsü tetikleyen ve inme hastalarındakine benzer bir terapötik pencerede doku plazminojen aktivatörü (tPA) aracılı fibrinolize olumlu yanıt veren geçici serebral hipoksik-iskemik (tHI) insafa dayalı bir murin trombotik inme modeli sunulmaktadır.

Geçici Serebral Hipoksi-iskemi Dayalı Bir Trombotik İnme Modeli

Prematüre ensefalopatisi, erken doğumdan kaynaklanan yaralanma ile ilişkili merkezi sinir sistemi anormalliklerini kapsar. Bu rapor, koryoamniyoniti taklit eden in utero geçici sistemik hipoksi-iskemi ve intra-amniyotik lipopolisakkarit uygulamasının (LPS) klinik olarak anlamlı bir sıçan modelini ve enfeksiyöz uyaranların ve plasental underperfüzyonun CNS gelişimi üzerindeki ilişkili etkisini açıklamaktadır.

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

Neonatal inme, çalışmayı mümkün kılmak için tutarlı fokal yaralanma paternlerine ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip translasyonel bir model gerektiren erken beyin hasarının önemli bir nedenidir. Bu çalışmada, tam terim eşdeğeri kemirgenlerde hemorajik olmayan, tek taraflı fokal iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturmak için ayrıntılı cerrahi prosedür anlatılmaktadır.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Tek taraflı Karotis arter tıkanıklığı postnatal gününde gerçekleştirilen 7-10 CD-1 fare pups yenidoğan hipoksik-iskemik (hı) model oluşturmak ve HI beyin hasarı etkileri araştırıldı. Neurobehavioral işlevleri olmayan çalışan normal farelere göre bu farelerde görmüştük.

Yenidoğan hipoksik-iskemik beyin hasarı, fare modeli neurobehavioral değerlendirmesi

Yöntem, p17 gelincik iltihabı duyarlı hipoksik-iskemik ve hiperoksik beyin hasarı uzun süreli inflamasyon ve oksidatif beyin hasarı geç preterm bebeklerin bir dizi deneyimli arasındaki karmaşık etkileşimi modellemek için açıklar.

İnflamasyon duyarlıgeç Preterm Hipoksik-iskemik Beyin Hasarı Bir Gelincik Modeli

Bu makalede hipoksi-iskemi geçiren yenidoğan farelerde birden fazla derinlik elektrodu kullanılarak sürekli video EEG kayıtları için bir yöntem açıklanmaktadır.

Yenidoğan Farelerde Hipoksi-İskemi Sırasında Sürekli Video Elektroensefalogram

Öğrenin, perinatal hipoksik iskemik ensefalopati modelini sıçan yavrularında mikrocerrahi ve karotid arter ligasyonu kullanarak oluşturmayı. Bu yöntem, yenidoğan beyin hasarı mekanizmalarını incelemek için değerlidir.

Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli

Daha fazla video keşfet