Name: Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Öğrenin, transgenik Alzheimer fare modellerinde cisterna magna ponksiyonu ile seri beyin omurilik sıvısı toplama tekniğini. Bu yöntem, Aβ ve tau biyobelirteçlerinin hastalık ilerlemesi boyunca izlenmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışmalarımız NIH hibe NS048447 ve AG017216to KD tarafından desteklenmektedir. Li Liu orijinal protokol gelişimi sırasında Dr. Heikki Tanila (Kuopio Üniversitesi, Kuopio, Finlandiya) onun gözetimi ve desteği için teşekkür etmek istiyorum.

Çekme cam kapiller tüp <ol><li> Cam kapiller tüp Sutter Enstrüman A.Ş. (borosilikat cam, B100-75-10) satın alınmaktadır. </li><li> Kılcal tüpler çekin bir Sutter P-87, 300 ayarlanan ısı indeksi ve 330 olarak belirlenmiştir basınç indeksi, mikropipet çektirmesi Flaming. </li><li> Sivri ucu yaklaşık 0.5 mm iç çapa sahip, böylece cam kapiller tüp ucu makas ile kesin. </li></ol> CSF Cisterna magna ponksiyonu tekniği BOS örnekleri sisterna magna (Şekil 1), daha önce 1 yayımlandı bir yöntem kullanarak alınır. <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_2/960_Figure-01.png" alt="Beyin anatomisi diyagramı: beyincik, cisterna magna, korteks, beyin sapı etiketleri." width="432" height="184" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 1. Fareler Ketamin (100mg/kg) ve xylazine (10mg/kg) intraperitoneal yolla anesthesized. Anestezi indüksiyonu sırasında, fareler 37 o C inkübatör tutulur. 2. Boyun derisi traş ve fare sonra bir ısıtma yastığı doğrudan temas ile stereotaksik alet eğilimli yerleştirilir. Isıtma yastığı tarafından üretilen ısı, vücut ısısı değişikliklerine yanıt olarak ayarlanır, böylece bir rektal ısı probu rektum içine yerleştirilir. Kafa kafa adaptörleri ile güvence altına alınmıştır. 7 0% etanol (3 kez tekrarlamanız), cerrahi sitesi% 10 povidon iyot ile temizlenmesi, ve oksiput aşağı cilt sagital bir kesi yapılır. 3. Diseksiyon mikroskobu altında, subkutan doku ve kasları (m. biventer cervicis ve m. rektus kapitis dorsalis majör) künt diseksiyon forseps ile ayrılır. Microretractors bir çift dışında kaslar tutmak için kullanılır. 4. Fare kafası, gövdesi ile yaklaşık 135 o açı oluşturur, böylece ortaya konulmaktadır . 5. Diseksiyon mikroskobu altında, sisterna magna duramater medulla oblongata ve büyük bir kan damarı (arteria dorsalis spinalis) ve BOS alanı (Şekil 2) görünür olan bir parlak ve net bir ters üçgen gibi görünür. <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_3/960_Figure-02.png" alt="Cerrahi anatomi gösterimi; diseksiyon prosedürü; doku maruziyeti; eğitim amaçlı." width="304" height="307" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 6. Duramater steril pamuklu bir bez ile kuru lekelenen. Arteria dorsalis spinalis (Şekil 2) Lateral duramater, kılcal tüp aracılığıyla citerna magna içine nüfuz ederler. Kılcal boru ekleme direnç farkedilir bir değişikliğin ardından, BOS kılcal tüp içine akar. 7. Kılcal tüp dikkatlice çıkarın ve 1 mm iç çapı olan bir polietilen boru ile 3 ml şırınga bağlayın. BOS önceden işaretli 0.5 ml Eppendorf tüp içine enjekte edilir ve tüp dondurma ve kuru buz üzerinde hemen sonra -80 ° C derin dondurucu içine transfer. 8. BOS örnekleme sonra, kasların yeniden hizalanır ve cilt sütüre edilir (4-0, Ethicon, Johnson &amp; Johnson). Yaklaşık 1 ml% 0.9 NaCl de-hidrasyon önlemek için subkutan enjekte edilir. Fare kurtarır kadar vücut ısısını korumak için inkübatör tutulur; farenin ağırlığı 1 gün ve 1 hafta sonra ameliyat izlenir. Sonuçlar ve Tartışma Biz saptanabilir plazma kirlenme olmadan farelerden alınan BOS seri örnekleme için son derece güvenilir bir protokol nitelendirdi. 1. Tüm prosedür genellikle fare başına 10 dakika (anestezi dahil) alır. BOS elde hacmi fare suşları bağlıdır. P301L (JNPL3) farelerde 3 yaklaşık 10 ul-15 ul verimi verirken, biz 2 PS / APP çift Tg fareler ortalama hacmi, yaklaşık 5 ul (3 7 ul). Seri numune almak için, en fazla 7-8 ul bir güvenle 2-3 ay aralıklarla her zaman olabilir. 2. Ameliyat sırasında, sisterna magna duramater yeterince maruz böylece stereotaksik çerçeve düzgün fare baş ve vücut pozisyonu önemlidir. ApoB 4 immunoblotting BOS örnek izlenebilir plazma proteinlerine, kirlenmeyi önlemek için kapiller tüp ile duramater nüfuz kan damarlarını dikkatle kaçının. 3. Doku kaynama Aşağıdaki örnekleme için predispozan kanama zorluk artışı gibi her ameliyat sırasında doku hasarı en aza indirmek önemlidir. 4. Hipotermi anestezi nedeniyle önemli ölçüde beyin çok hızlı bir şekilde 5 fosforile tau düzeyleri etkileyebilir, çünkü vücut ısısı ameliyat sırasında iyi bir bakıma ihtiyacı vardır. 5. Kullanılan Ab ELISA protokolü ve antikorlar Refolo ark ayrıntılı şekilde tarif edildi. 6. İki PS / APP farelerden alınan BOS ul 1:50-1:60 seyreltilmiş zaman tatmin edici sonuçlar verecektir. Tau ELISA için 4-5 ul P301L (JNPL3) farelerden alınan BOS için yeterli olacaktırtoplam tau tau ​​tespit fosfor treonin az ylated 231 (Bio-Kaynak Kitleri satın alınır). 6. Bu teknik, küçük bir BOS hacmi istenilen deneyleri için tatmin edici olduğu nörolojik hastalıklar, diğer fare modelleri uygulanabilir.

<ol><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+observation+on+CSF+Abeta42+levels+in+young+to+middle-aged+amyloid+precursor+protein%2Fpresenilin-1+doubly+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice.</a> Neurobiol Dis. 17, 516- (2004).</li>
<li>Holcomb, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+Alzheimer-type+phenotype+in+transgenic+mice+carrying+both+mutant+amyloid+precursor+protein+and+presenilin+1+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Accelerated Alzheimer-type phenotype in transgenic mice carrying both mutant amyloid precursor protein and presenilin 1 transgenes.</a> Nat Med. 4, 97(1998).</li>
<li>Lewis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrillary+tangles%2C+amyotrophy+and+progressive+motor+disturbance+in+mice+expressing+mutant+%28P301L%29+tau+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein.</a> Nat Genet. 25, 402- (2000).</li>
<li>DeMattos, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque-associated+disruption+of+CSF+and+plasma+amyloid-beta+%28Abeta%29+equilibrium+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Plaque-associated disruption of CSF and plasma amyloid-beta (Abeta) equilibrium in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neurochem. 81, 229(2002).</li>
<li>Planel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+leads+to+tau+hyperphosphorylation+through+inhibition+of+phosphatase+activity+by+hypothermia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anesthesia leads to tau hyperphosphorylation through inhibition of phosphatase activity by hypothermia.</a> J Neurosci. 27, 3090(2007).</li>
<li>Refolo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cholesterol-lowering+drug+reduces+beta-amyloid+pathology+in+a+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">A cholesterol-lowering drug reduces beta-amyloid pathology in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiol Dis. 8, 890(2001).</li>
</ol>

Biz saptanabilir plazma kirlenme olmadan farelerden alınan BOS seri örnekleme için son derece güvenilir bir protokol nitelendirdi. 1. Tüm prosedür genellikle fare başına 10 dakika (anestezi dahil) alır. BOS elde hacmi fare suşları bağlıdır. P301L (JNPL3) farelerde 3 ul ul-10 15 verim verirken biz used2 PS / APP çift Tg fareler, ortalama hacmi, yaklaşık 5 ul (3 7 ul). Seri numune almak için, en fazla 7-8 ul bir güvenle 2-3 ay aralıklarla her zaman olabilir. 2. Ameliyat sırasında, sisterna magna duramater yeterince maruz böyle...

cisterna magna fare beyin omurilik sıvısı seri toplama tekniği

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse 

Alzheimer hastalığı (AH) patolojik, beta-amiloid peptid (Aβ) ve hyperphosphorylated tau proteininin intraneuronal birikimi ekstrasellüler birikimi ile karakterize ilerleyici bir nörodejeneratif hastalıktır. Beyin omurilik sıvısı (BOS) beynin ekstraselüler boşluk ile doğrudan temas halinde olduğundan, patolojik süreçler yanıt olarak beyindeki biyokimyasal değişikliklerin bir yansıması sağlar. AD hastalardan alınan BOS, bu değişiklikler için sorumlu olan mekanizmalar hala tam olarak anlaşılmış değildir ama 42 amino asit formu Aβ (Aβ42) ve total tau ve hyperphosphorylated tau artışlar bir azalma gösterir. (Tg) AD transgenik fare modelleri Aβ veya tau düzeyleri BOS değişiklik neden ve nasıl hastalık ilerledikçe araştırmak için mükemmel bir fırsat sağlar. Burada, fare BOS örnekleme için rafine bir sisterna magna ponksiyonu tekniği göstermektedir. Bu son derece nazik bir örnekleme tekniği seri BOS örnekleri zamanla ince değişiklikleri tespit etmek mümkün kılan büyük ölçüde, fare Aβ veya tau düzeyleri arasında değişkenlik karıştırıcı etkisini en aza indirir 2-3 aylık aralıklarla aynı fare elde edilecek sağlar. Aβ ve tau ELISA ile birlikte, bu tekniğin AD fare modelleri, beyin, BOS Aβ42 ve tau düzeyleri arasındaki ilişki ve onların metabolizmasını araştırmak için tasarlanmış çalışmalar için yararlı olacaktır. Tg fareler üzerinde yapılan çalışmalar, hastalığın ilerlemesi izlenmesi için biyolojik belirteç olarak kullanılmak üzere BOS Aβ veya tau düzeyleri potansiyel olarak önemli bir doğrulama sağlayabilir ve tedavi edici girişimlerin etkisi izlemek için. , Farelerin feda edilebilir ve beyinlerinde biyokimyasal ve histolojik değişiklikler için incelenecektir gibi, BOS değişikliklerin altında yatan mekanizmaları daha iyi değerlendirilebilir. Bu veriler insan AD BOS değişiklikleri yorumlanması için bilgilendirici olması muhtemeldir.

(Tg) AD transgenik fare modelleri, nasıl ve neden Aβ veya tau düzeyleri BOS değişikliği insan hastalarda hastalık ilerledikçe araştırmak için mükemmel bir fırsat sağlar. Burada, fare seri BOS örnekleme için rafine bir sisterna magna ponksiyonu tekniği göstermektedir.

Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Alzheimer hastalığı (AH), patolojik olarak hücre dışı β-amiloid birikimi ile karakterize edilen ilerleyici bir nörodejeneratif hastalıktır...

Prosedür, farenin anestezi edilmesi ve cerrahi bölgenin hazırlanmasıyla başlar. Ardından fare, stereotaksik cihaza yüzüstü yerleştirilir. Oksiputun alt kısmından cilde sagittal bir insizyon yapılır ve cilt altı dokusu ile boyun kasları orta hat boyunca künt disseksiyonla ayrılır.Ardından, vücudun arka kısmı, gövdenin sabitlenmiş başla 135 derecelik bir açı oluşturacağı şekilde yerleştirilir; CI sternum magna'nın dura materi cam kılcal boru ile delinir ve BOS toplanır. BOS örneklemesi tamamlandıktan sonra kaslar yeniden hizalanır ve deri sütürle dikilir; dehidrasyonu önlemek için deri altına yaklaşık bir mililitre %0,9 NACL steril serum fizyolojik enjekte edilir ve fare iyileşene kadar sıcak tutulur. Merhaba, ben Columbia Üniversitesi The Top Institute'deki Dr. Karen Duff'ın laboratuvarından Liu.Bugün size farenin sistern magna bölgesinden beyin omurilik sıvısı toplamanın nasıl yapılacağını göstereceğim. Bu teknikle, aynı fareden iki ila üç ay aralıklarla üç defaya kadar seri BOS örnekleri toplayabiliriz. Laboratuvarımızda bu tekniği, Alzheimer hastalığının transgenik fare modellerinde farklı yaşlardaki BOS A beta veya tau seviyelerini belirlemek için kullanıyoruz ve bu değerleri be

a-technique-for-serial-collection-cerebrospinal-fluid-from-cisterna

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kaynak: Joshi, K., et al. Farelerde kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği Cisterna magna yoluyla mikroenjekte etmek için stereotaksik cerrahi yaklaşım. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, beyin sapı ve üst omuriliğe hedefli iletim için cisterna magna stereotaksik yaklaşımı göstermektedir. Bu yaklaşım, beyin omurilik sıvısı dolu cisterna magna'ya erişerek, standart stereotaksik yöntemler kullanılarak ulaşılması zor olan bölgelere hassas enjeksiyonlar yapılmasını sağlar.

Bir fare modelinde terapötik uygulama için stereotaksik Cisterna Magna yaklaşımı

Kaynak: Zamboni, M., et al., İntrasisternal Enjeksiyon Yoluyla Leptomeningeal Hücre Modifikasyonunun İndüksiyonu. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magnasına bir indükleyici ilacın verilmesi prosedürünü göstermektedir. Enjeksiyon, floresan görüntüleme ile onaylanan, beyin omurilik sıvısı yoluyla erişilebilen beyin yüzey hücrelerinde seçici olarak floresan işaretleyici ekspresyonunu indükler.

Cisterna Magna Enjeksiyonu ile Bir Fare Modelinde Hedefe Yönelik İlaç Verilmesi

Kaynak: Xavier, A. L. R., et al. Kemirgenlerin Sarnıç Magna'sına Kanül İmplantasyonu. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, anestezi uygulanmış bir farenin cisterna magna'sına bir kanül yerleştirme prosedürünü göstermektedir. Teknik, iğneye monte edilmiş bir kanülün duradan ters üçgen cisterna magna'ya yönlendirilmesini ve beyin omurilik sıvısına hedeflenen iletim için sabitlenmesini içerir.

Bir Fare Modelinde Cisterna Magna'ya Kanül İmplantasyonu

Bu videoda, insan kaynaklı tümör hücrelerini bir farenin beyninin cisterna magnasına verme prosedürünü açıklıyoruz. Ortotopik fare modeli, kanserin kraniyal meninkslere metastatik yayılımını incelemek için kullanılabilir.

Cerrahi Sarnıç Magna Enjeksiyonu: Murin Modelinin Tümör Hücrelerini Doğrudan Merkezi Sinir Sistemine Uygulamak İçin Bir Yöntem

Kaynak: Sweeney, A. M., et al. Floresan Makroskobu Kullanılarak Sağlam Fare Kafatasından Beyin Omurilik Sıvısı Taşınmasının İn Vivo Görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2019)Bu video, floresan görüntüleme kullanarak bir fare beynindeki beyin omurilik sıvısı (BOS) akışını görselleştirme sürecini göstermektedir. Cisterna magna'ya (CM) bir floresan izleyici enjekte edilir ve BOS ile hareketinin subaraknoid ve perivasküler boşluklar boyunca izlenmesine izin verilir. Hızlandırılmış görüntüleme, izleyicinin...

Floresan Makroskobu Kullanılarak Bir Fare Beyninde Beyin Omurilik Sıvısı Taşınmasının İn Vivo Görüntülenmesi

Bu iletişim kuralı beyin-omurilik sıvısı (bos) kan yok kirlenme ile bol topluluğu için geliştirilmiş bir teknik anlatılmaktadır. Daha fazla örnek toplama ve saflık ile daha fazla analiz anlayışımız beyin ve omurilik etkileyen hastalıkların daha fazla için CSF kullanarak gerçekleştirilebilir.

Beyin omurilik sıvısı imzalat fareler gelen topluluğu için geliştirilmiş bir yöntem

Burada Sisterna magna cannulation (CMc), minimal invaziv bir şekilde izleyiciler, yüzeyler ve sinyal molekülleri beyin-omurilik sıvısı (BOS) sunmak için gerçekleştirmek için bir protokol açıklayın. Farklı görüntüleme yöntemleri ile birlikte, CMc glymphatic sistemi ve CSF dynamics değerlendirme yanı sıra çeşitli bileşiklerin beyin çapında teslim sağlar.

Kanül implantasyon Sisterna Magna kemirgenler içine

Transkraniyal optik görüntüleme, canlı fareler korteks içinde sağlam bir kafatası ile beyin omurilik sıvı taşımacılığı geniş alan görüntüleme sağlar.

İçinde vivo beyin omurilik akışkan taşınması floresan Makroskopisi kullanarak bozulmamış fare kafatası aracılığıyla görüntüleme

Yüksek spinal sıvı protein düzeyleri ya değiştirilmiş bir kan-beyin bariyeri veya intratekal sentez arasında plazma proteininin difüzyon sonucu olabilir. Bu makalede, her iki vakanın da ayrımına yardımcı olan ve intrathecally sentezlenmiş proteinlerin nicel ölçümlerini sağlayan optimize edilmiş bir test protokolü sunulmuştur.

Farelerde İntrathecally Sentezlenmiş Proteinlerin Kantitatif Ölçümü

Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası kemiklerinden erişimi içerir ve kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Burada, beyin sapı yer işaretlerinin doğrudan görselleştirilmesine dayanan sarnıç magna aracılığıyla kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği hedeflemek için alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz.

Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Burada, birden fazla nörolojik hastalıkta önemli rol oynayan fare meningeal lenfatik damarlarının (MLV) değerlendirilmesi için bir protokol sunulmaktadır. Bu protokolün amacı, hem izleyici drenajının işlevsel değerlendirmesini hem de dorsal MLV ağının ayrıntılı morfolojik karakterizasyonunu mümkün kılan entegre bir yöntem sağlamaktır.

Meningeal Lenfatiklerin Değerlendirilmesi İçin Entegre Protokol: Cisterna Magna enjeksiyonu, Lenf Düğümleri Görüntüleme, Meningeal Diseksiyon ve Bütün-Montaj Boyama

Öğrenin, transgenik Alzheimer fare modellerinde cisterna magna ponksiyonu ile seri beyin omurilik sıvısı toplama tekniğini. Bu yöntem, Aβ ve tau biyobelirteçlerinin hastalık ilerlemesi boyunca izlenmesini sağlar.

Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Daha fazla video keşfet