Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

İşlem, farenin uyuşturulması ve cerrahi bölgenin hazırlanması ile başlar. Fare daha sonra stereotaksik alete yüzüstü yerleştirilir. Cildin sagital insizyonu oksiputtan daha düşük yapıldı ve orta hattan deri altı doku ve boyun kasları künt olarak ayrıldı.

Daha sonra vücudun arka kısmı, vücut sabit kafa ile 135 derecelik bir açı oluşturacak şekilde yatırılır, CI sternum magna'nın dura materine cam kılcal damar ile girilir ve BOS toplanır. BOS örneklemesinden sonra, kaslar yeniden hizalanır ve cilt dikilir, dehidrasyonu önlemek için deri altına yaklaşık bir mililitre% 0.9 NACL salin enjekte edilir ve fare iyileşene kadar sıcak tutulur. Merhaba, benim adım Liu, Columbia Üniversitesi En İyi Enstitüsü'ndeki Dr.Karen Duff'ın laboratuvarından.

Bugün size farenin sistem mag'inden beyin omuriliği sıvısının nasıl toplanacağını göstereceğim. Bu teknikle, aynı fareden iki ila üç aylık aralıklarla üç defaya kadar seri BOS örnekleri toplayabiliriz. Laboratuvarımızda, Alzheimer hastalığının transgenik fare modellerinin farklı yaşlarında CSFA beta veya tau seviyelerini belirlemek için bu tekniği kullanıyoruz ve bu değerleri beyninkilerle ilişkilendiriyoruz.

Sonunda, hastalığın ilerlemesi için potansiyel biyolojik belirteçler olarak CSFA beta veya tau seviyelerinin potansiyeli ve ayrıca farelerdeki terapötik denemeler için ilgi çekiyoruz. Öyleyse başlayalım. Bu işlem için kılcal damarları mikro pipet polar ile yapmak gerekir.

Burada kullanılan kılcal damarlar, Sutter Instruments'tan BOA silikat cam B 175 10'dur, kılcal damarları, ısı indeksi 300 ve basınç indeksi üç 30 olarak ayarlanmış bir Sutter P 87 alevli mikro pipet poları üzerinde çeker. Cam kılcal damar beş santimetre uzunluğundadır ve konik bir uca sahiptir. Kılcal damarın ucu, iç çapı yaklaşık 0,5 milimetre olacak şekilde makasla kesilir.

Cerrahi prosedür, farenin anestezi sırasında intraperitoneal olarak uygulanan kilogram başına 100 miligram ketamin ve kilogram başına 10 miligram ksilazin ile uyuşturulmasıyla başlar, fareyi 37 derecelik bir inkübatörde sıcak tutar. Hayvanın ayak parmağını kıstırma geri çekilme refleksi ile tamamen uyuşturulduğunu belirledikten sonra, boynu tıraş etmeyi test edin, ardından fareyi David kink'ten gelen bu gibi stereotaksik aletin üzerine yerleştirin. Isıtma yastığı ile doğrudan temas halinde, pedden gelen ısının farenin vücut sıcaklığına göre ayarlanabilmesi için bir rektal sıcaklık probu yerleştirin.

Başı kafa adaptörleri ile sabitleyin, boyun derisini üç kez% 10 povidon iyot ve% 70 etanol ile temizleyin ve başın veya oksiputun arka kısmından daha düşük bir sagital insizyon yapın. Sonraki adımlar künt forseps kullanılarak diseksiyon mikroskobu altında yapılmalıdır. Deri altı dokusunu ve kasları M ventör hizmetleri ve M rectus capita dorsalis major ile ayırın, böylece sternum magna'nın dura maddesi açığa çıkar Kasları ayrı tutmak için bir çift mikro ekartör kullanın.

Son olarak, fareyi başı vücuda 135 derecelik bir açıyla yatırın. Fare artık CSF koleksiyonu için hazırdır. Sternum Magno'dan BOS toplama tekniği daha önce yayınlanmıştı.

C diseksiyon mikroskobu altında bir A şekil. Dura maddesi, medulla oblongata ve büyük bir kan damarının görülebildiği parlak ve net bir ters üçgen olarak görünür. Arteria dural spinella C, şekil bir, B. Medulla ve bitişik BOS boşluğunun dolaşım nabzı görülebilir.

Dura maddesini steril pamuklu çubukla kurulayın, arteria dorsalis spinellerinin yanındaki dura maddesi yoluyla kılcal damarı CI sternum magna'ya nüfuz ettirin. Kılcal damar doğru şekilde yerleştirildiğinde dirençte gözle görülür bir değişiklik olacak ve BOS daha sonra kılcal damara akacaktır. BOS toplandıktan sonra, kılcal damarı dikkatlice çıkarın ve bir milimetre iç çapa sahip polietilen boru kullanarak üç mililitrelik bir şırınga ile bağlayın.

BOS'u 0,5 mililitrelik bir tüpe enjekte edin. Tüpü etiketleyin ve hemen kuru buz üzerinde dondurun. Dondurulduktan sonra, BOS'u eksi 80 santigrat derece dondurucuya aktarın.

Az önce gösterilen örnekleme tekniği son derece naziktir ve sonraki BOS örneklerinin aynı fareden iki ila üç aylık aralıklarla alınmasına izin verir. Bu nedenle, boyundan numune alındıktan sonra, kaslar ve cilt yeniden hizalanmalı ve dikişlerle kapatılmalıdır. İnsizyon dikildikten sonra, fareyi yeniden sulandırmak için deri altına yaklaşık bir mililitre salin solüsyonu% 0.9 NACL enjekte edin.

İyileşene kadar fareyi yaklaşık 37 santigrat derecede sıcak tutun. Ameliyattan sonraki birinci ve yedinci günde kilosunu izleyin. Az önce size farenin sistem mag'inden beyin omurilik sıvısının nasıl toplanacağını gösterdim.

Bu prosedürü yaparken hatırlanması gereken üç önemli nokta vardır. İlk olarak, farenin başını ve gövdesini stereotaktik çerçeveye düzgün bir şekilde yerleştirin, böylece Cy Magna'nın ator'u mümkün olduğunca açıkta kalabilir. İkincisi, durometreye kılcal damarlarla nüfuz ederken kan damarlarından dikkatlice kaçının.

Aksi takdirde, numuneniz kanla kontamine olacaktır. Son olarak, hipotermiyi önlemek için lütfen tüm prosedür boyunca farelerinizi sıcak tutmayı unutmayın. Hipotermi sadece fareleriniz için zararlı olmakla kalmaz, aynı zamanda bir beta üretimini veya uzun hipo fosforilasyon ilişkisini indükleyerek sonuçlarınızı önemli ölçüde etkileyebilir.

Tamam, bu kadar. İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve deneylerinizde iyi şanslar.